性激素对SLE患者外周血单一核细胞凋亡的影响及其意义

研究脱氢表雄酮(DHEA)和(或)雌二醇(E2)对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单一核细胞(PBMC)凋亡的影响。应用吖啶橙(AO)染色法检测SLE患者、健康献血员PBMC与生理、病理浓度的DHEA和(或)E2培养48h的凋亡百分率。SLE患者PBMC凋亡率高于健康献血员(P<0.01)。不论生理或者病理浓度的E2对SLE患者、健康献血员PBMC凋亡无影响(P>0.05)。生理浓度的DHEA及DHEA+E2对健康献血员PBMC凋亡无影响(P>0.05),但可显著抑制SLE患者PBMC凋亡(P<0.05);病理浓度的DHEA及DHEA+E2可显著促进SLE患者、健康献血员PBMC凋亡(P<0.05)。DHEA及DHEA+E2对PBMC凋亡的影响,两者间无显著差异(P>0.05)。结果提示,DHEA对SLE患者PBMC凋亡起重要作用;DHEA浓度降低可能导致凋亡加快。     

CGRP对SLE患者外周血单一核细胞凋亡的影响

目的探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单一核细胞(PBMC)凋亡的影响。方法应用流式细胞仪膜联蛋白(Annexin)V/碘化丙啶(prop id ine iod ide,PI)染色法检测SLE患者、健康献血员PBMC与不同浓度的CGRP和(或)CGRP的受体拮抗剂CGRP8-37培养48 h的凋亡百分率。结果SLE患者PBMC凋亡率显著高于健康献血员(P<0.001)。不同浓度(0.5×10-8~1.5×10-8mol/L)的CGRP对健康献血员PBMC凋亡无影响(P>0.05);但可以不同程度的抑制SLE患者PBMC的凋亡(P<0.05~0.001);当CGRP浓度超过1.0×10-8mol/L时,其对SLE患者PBMC凋亡的抑制效应进入平台,增加CGRP浓度并不能进一步显著抑制SLE患者PBMC地凋亡。无论何种浓度的CGRP均不能使SLE患者PBMC的凋亡率降低至正常范围内。CGRP8-37本身对PBMC凋亡无影响(P>0.05),但是可以拮抗CGRP对SLE患者PBMC凋亡的影响。结论CGRP通过受体影响PBMC地凋亡;CGRP浓度地降低在某种程度上可导致SLE患者PBMC地凋亡加快。     

凋亡调控分子BclGL表达与系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞凋亡的研究

【摘要】 目的 探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单一核细胞（PBMC）中凋亡调控分子BclGL的表达及其意义。 方法 流式细胞仪检测20例活动期SLE患者（A-SLE）、18例非活动期SLE患者（I-SLE）以及30例健康对照者PBMC的细胞绝对数;用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶（Annexin V-FITC/PI）细胞凋亡双染试剂盒检测各组PBMC早期凋亡率;荧光定量PCR技术检测各组PBMC中BclGL mRNA的表达量;Western 印迹检测BclGL蛋白表达量;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组血清中干扰素（IFN）-α水平;采用SPSS13.0统计软件进行组间非参数Mann-Whitney或Kruskal-Wallis检验,并使用Pearson相关分析法分析SLE患者PBMC中BclGL表达量与细胞凋亡率及临床指标间的相关性。 结果 A-SLE患者外周血中PBMC细胞绝对数［（0.16 ± 0.06） × 109/L］低于I-SLE［（0.27 ± 0.14） × 109/L］及健康对照［（0.34 ± 0.23） × 109/L］（均P < 0.01）;A-SLE患者PBMC凋亡率（22.6% ± 1.1%）较I-SLE（16.4% ± 0.9%）及健康对照（10.1% ± 0.4%）升高,I-SLE患者也高于健康对照（均P < 0.01）;A-SLE患者PBMC中BclGL表达量高于I-SLE及健康对照（均P < 0.01）;SLE患者外周血血清IFN-α含量［（32.5 ± 2.2） μg/L］较健康对照［（15.5 ± 1.3） μg/L］增高（均P < 0.01）;SLE患者PBMC中上调的BclGL表达与PBMC凋亡率（r = 0.486,P < 0.01）及SLE疾病活动指数（SLEDAI）、抗核抗体（ANA）滴度、IFN-α水平呈正相关（r = 0.496,0.516,0.535,均P < 0.01）,与患者补体C3水平呈负相关（r = －0.515,P < 0.01）。结论 SLE患者PBMC中BclGL分子表达上调可能参与SLE患者PBMC的凋亡异常,从而在SLE发病中起作用。 【关键词】 红斑狼疮,系统性; 外周血单一核细胞; BclGL; 细胞凋亡     

HAX-1在SLE患者外周血单一核细胞中的表达及其亚细胞定位

目的 检测活动期SLE患者PBMC中抗凋亡基因HAX-1的表达水平，并进行亚细胞定位分析。方法 分别采用半定量PCR以及Western印迹试验从mRNA和蛋白水平上检测活动期SLE患者及正常人对照组PBMC中HAX-1的表达，并通过激光共聚焦显微镜观察HAX-1在SLE患者PBMC中的亚细胞定位。结果 活动期SLE患者PBMC中HAX-1在mRNA水平以及蛋白水平的表达均明显高于健康正常人（P值分别 = 0.000、0.007），且其相对表达水平与SLEDAI之间呈线性正相关；HAX-1在SLE患者PBMC中主要分布于线粒体内及内质网。结论 HAX-1可能通过抗凋亡机制抑制SLE患者体内淋巴细胞凋亡而导致其过度活化，从而参与SLE疾病发生发展过程。     

系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞中白介素18的表达

系统性红斑狼疮(SLE)是一种侵犯多系统的自身免疫性疾病。白介素(IL)18可诱导Th1反应,在各种过敏性疾病、肿瘤、自身免疫性疾病及感染性疾病中起免疫调节作用^[1]。为了探索IL－18在SLE中的变化及临床意义,我们以β肌动蛋白为内参照,用半定量逆转录聚合酶链反应(RT－PCR)法测定了SLE患者及正常人对照外周血单一核细胞(PBMC)中IL-18mRNA水平,观察IL－18与狼疮活动指数(SLEDAI)^[1]、血沉(ESR)的相关性。     

系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞核小体释放水平及其临床意义

目的研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单一核细胞(PBMC)释放核小体的水平变化及其与自身抗体、病情活动度的关系。方法应用ELISA方法检测SLE患者PBMC裂解上清液核小体及其血清自身抗体水平,用SLEDAI积分法评估SLE活动度。结果活动期SLE患者PBMC释放核小体的平均水平为(39.39±25.70)IU/mL,明显高于正常人对照组(11.73±7.87)IU/mL和静止期SLE患者(13.44±8.82)IU/mL,并且与其凋亡率呈显著正相关(r=0.83,P<0.001);SLE患者PBMC的核小体释放水平与SLEDAI积分数、ds鄄DNA抗体水平和补体C3降低水平均呈显著正相关(P值分别<0.01、0.01和0.05)。结论SLE患者PBMC凋亡产生的核小体水平变化与SLE临床病情活动程度密切相关,提示核小体可能是诱导SLE发病的重要抗原之一。     

系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞趋化因子受体2和3 mRNA的表达

目的探讨趋化因子受体(CCR)2及CCR3在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单一核细胞(PBMC)中的表达及与疾病的相关性.方法对93例SLE患者和30名健康对照者,应用半定量逆转录(RT)-PCR方法检测其CCR2、CCR3 mRNA表达水平,并应用SLE疾病活动性指数评分标准(SLEDAI)对SLE患者进行评分.结果①9例SLE患者活动期、非活动期及对照组PBMC CCR2与CCR3 mRNA表达水平分别为2.989±1.595与2.847±2.400、0.388±0.213与0.585±0.219、0.263±0.157与0.602±0.124,活动期与非活动期、对照组相比差异均有显著性(P值分别为0.013,0.004;0.000,0.007);非活动期与对照组相比差异无显著性(P＞0.01).②SLE患者PBMC中CCR2、CCR3 mRNA表达水平与SLEDAI分别作直线相关性分析,CCR2 mRNA、CCR3mRNA水平与SLEDAI均呈正相关.③具有肌炎临床表现的SLE患者其PBMC CCR2、CCR3表达水平较无肌炎表现时降低.血小板减少的SLE患者比不具有相应症状者CCR2 mRNA表达降低.结论SLE患者PBMC CCR2、CCR3表达均增加,且与疾病活动性呈正相关,而CCR2、CCR3为表达于Th2细胞的趋化因子受体,提示SLE患者Th2细胞占优势.CCR2可能参与SLE患者肌炎及血小板减少的发生,CCR3参与肌炎发生.     

系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞中热休克蛋白70表达

国外研究发现狼疮模型小鼠多脏器中有热休克蛋白70(HSP70)表达增高^[1],SLE患者皮损区细胞及外周血单一核细胞(PBMC)中均有HSP70表达增高^[2,3],我们通过检测SLE患者PBMC中HSP70表达水平,旨在探讨HSP70在SLE发病中的作用及其与疾病活动的相关性。一、病例和方法1.病例:我院门诊和住院SLE患者29例,均符合1982年ARA诊断标准,男6例,女23例,平均年龄33.0±9.4岁,采集标本时体温均低于38℃。其中活动期21例,平均年龄31.9±9.9岁,非活动期8例,平均年龄36.0±7.8岁。     

SLE患者外周血单一核细胞CD43基因的表达

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)免疫功能异常与CD43分子基因的关系。方法采用反向聚合酶链反应(RT-PCR)技术,对SLE患者外周血单一核细胞(PBMC)CD43基因的表达进行检测。结果SLE患者与正常人PBMC均检测到CD43基因的表达,且前者的表达水平为0.8662±0.3992,高于后者的0.3451±0.3310,有非常显著性差异(t=7.109,P<0.01)。结论活动期SLE患者PBMC的CD43基因表达水平显著升高,导致淋巴细胞免疫功能异常。     

两种中药方剂对SLE患者PBMC凋亡率的影响

目的探讨中药方1(生药总量共计195g,组分:水牛角、黄芩、生地黄、丹皮、紫草、白花蛇舌草、半枝莲、忍冬藤、防风、秦艽、威灵仙、鸡血藤、甘草)和中药方2(生药总量共计270g,组分:熟地黄、山茱萸、山药、北沙参、麦冬、玄参、生地黄、双花、丹皮、丹参、益母草、丝瓜络、菟丝子、白芍、党参、甘草)对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)的凋亡率水平的影响及意义。方法根据血清药理学制备含药大鼠血清,采用密度离心法分离SLE患者的PBMC,分离的PBMC分别与含有高、中和低剂量的两种中药方剂大鼠血清培养48小时,用AnnexinV-FITC流式细胞仪技术检测PBMC凋亡率的变化。结果与空白对照组比较,中药方1高剂量组PBMC的凋亡率无明显差异(P0.05),而中药方2高剂量组PBMC的凋亡率显著降低(P0.01)。结论中药方1对体外培养的SLE进行期患者PBMC水平无明显影响。中药方2能使体外培养的SLE缓解期患者PBMC的凋亡率降低。     

SLE患者外周血单个核细胞中Aiolos mRNA的表达

目的观察系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中转录因子Aiolo smRNA的表达情况。方法采用SYBR Green实时定量PCR法检测20例SLE患者PBMCs中Aiolos mRNA的表达情况,并与20例正常人作比较。结果 SLE患者的PBMCs中Aiolos mRNA的表达明显低于正常对照组;SLE活动期组和稳定期组也均低于正常对照组;而且活动期组低于稳定期组;以上差异均有统计学意义(P均<0.01)。另外,SLE患者PBMCs中Aiolos mRNA的表达与SLEDAI评分呈负相关(P<0.01)。结论 SLE患者Aiolos基因表达降低,且与SLE活动指数呈一定相关性。     

系统性红斑狼疮外周血单一核细胞Fas和FasL mRNA的表达

目的：探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血淋巴细胞Fas及其相应配体FasL的表达水平及在SLE发病中的作用。方法：应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测34例活动期SLE患者和30例正常人外周血单一核细胞（PBMC）中Fas和FasL mRNA的表达水平。结果：活动期SLE患者PBMC中FasL的阳性检出率为91.18%,明显高于正常对照组（63.30%),差异非常显著（P＜0.01);Fas的阳性检出率与对照组相比无明显差异（P＞0.05)。活动期SLE患者PBMC中Fas和FasL mRNA的平均表达水平均高于正常对照组,差异显著（P＜0.05)。结论：Fas和FasL的高水平表达可能与SLE患者外周血T淋巴细胞活化、凋亡增加有关,Fas介导的淋巴细胞凋亡可能参与了SLE的发病过程。平表达可能与SLE患者外周血T淋巴细胞活化、凋亡增加有关,Fas介导的淋巴细胞凋亡可能参与了SLE的发病过程。     

系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞Caspase-1和Caspase-3mRNA的表达

目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血淋巴细胞Caspase-1和Caspase-3的表达水平及其与淋巴细胞凋亡的关系。方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测34例活动期SLE患者和30例正常人外周血单一核细胞(PBMC)中Caspase-1和Caspase-3mRNA的表达水平。结果 活动期SLE患者PBMC中Caspase-1mRNA的平均表达水平(1.20±0.33)明显高于正常人对照组(0.79±0.25),差异有非常显着性(P<0.01);Caspase-3mRNA的平均表达水平(0.87±0.16)高于正常人对照组(0.66±0.10),差异有显着性(P<0.05).活动期SLE患者PBMC中Caspase-1和Cas-pase-3的阳性表达率与正常人对照组相比差异无显着性(P>0.05).结论 活动期SLE患者外周血淋巴细胞Caspase-1和Caspase-3mRNA表达水平增高,Caspase级联反应可能参与了SLE患者淋巴细胞的凋亡过程。     

系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞Toll样受体4及2mRNA表达的研究

目的 研究系统性红斑狼疮(SLE)患者与正常人外周血单一核细胞Toll样受体4(TLR4)mRNA、TLR2mRNA的表达情况。方法 运用Taqman实时定量PCR方法检测活动期SLE患者28例、稳定期SLE患者13例外周血单一核细胞TLR4、TLR2的mRNA表达水平,并与正常人作对照。结果 活动期SLE患者外周血单一核细胞TLR4mRNA较正常人和稳定期SLE患者表达水平显著升高(P<0.01);其中复发的、经糖皮质激素治疗的活动期SLE患者较未经治疗的初发患者TLR4mRNA升高更明显(P<0.05)。SLE活动期和稳定期患者TLR2mRNA较正常人对照显著降低(P<0.01)。结论 活动期SLE患者TLR4mRNA表达水平升高,尤其是使用过糖皮质激素的患者TLR4升高更为显著,其原因可能与感染作为诱发SLE活动因素之一有关。     

系统性红斑狼疮患者血清催乳素水平和外周血单一核细胞催乳素受体的表达

目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者血清催乳素(PRL)水平和外周血淋巴细胞的催乳素受体(PRLR)的表达与SLE活动性的关系。方法 应用时间分辨免疫发光试验(TrFIA)测定血清PRL,用SLEDAI指数评估了113例SLE患者的病情活动性,并用Logistic多元回归研究临床表现、免疫学指标与高PRL血症的关系;采用放射性受体配基结合试验(RLBA)及RT-PCR研究外周血淋巴细胞PRLR变化。结果 ①63例SLE活动期患者血清PRL水平(14.45±7.25μg/L)显著高于50例静止期患者(11.79±8.08μg/L)和28例正常人对照组(7.08±6.26μg/L);②79.37%的活动期患者血清PRL水平在9~51.2μg/L;③113例SLE患者血清PRL水平与dsDNA抗体、SLEDAI活动指数呈线性正相关;④Logistic多元回归研究发现蛋白尿、低C3和高dsDNA抗体滴度与高PRL血症相关;⑤24例SLE活动期患者外周血单一核细胞(PBMC)的PRLR的特异性结合率(SB,5.03%±2.51%)、总结合率(TB,15.34%±6.98%)和mRNA的表达水平(0.85±0.45)均显著高于22例静止期患者(SB4.18±2.26,TB14.03±6.54%,mRNA0.58±0.43)和15例正常人对照组(SB1.62%±1.05%,TB8.19%±1.47%,mRNA0.20±0.13)。结论 SLE患者血清PRL轻度升高,PBMC的PRLRmRNA高表达以及相应特异性结合率的增加与SLE的病情活动性相关。     

系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞早期凋亡的初步研究

目的 通过对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血淋巴细胞(PBL)早期凋亡率测定,探讨其在SLE发病中的作用及相关性。方法 应用最新的Annexin Ⅴ试剂盒及流式细胞仪对SLE患者及年龄、性别相匹配的正常人PBL进行早期凋亡细胞的检测;并运用免疫印迹法检测SLE患者组自身抗体谱及应用免疫浊度法检测补体C3含量。结果 SLE活动期患者PBL早期凋亡率(13.46±4.13)明显高于稳定期患者(5.29±2.74)及正常人对照(5.14±2.33);稳定期患者与正常人对照差异无显著性(P>0.05);活动期患者中初发病组与已用皮质类固醇或免疫抑制剂治疗组差异无显著性(P>0.05)。SLE患者中,能测定出两种以上自身抗体阳性者凋亡率(13.44±4.40)明显高于至多有一种自身抗体阳性者凋亡率(6.72±3.86);且活动期患者PBL凋亡率与补体C3含量呈高度负相关(r=-0.86,P<0.01)。结论 SLE患者PBL凋亡率明显高于正常人,可能通过释放过量自身抗原的方式诱导一系列自身抗体的产生,从而参与SLE的发生。     

系统性红斑狼疮患者内皮祖细胞数量及功能变化与病情的相关性

目的观察系统性红斑狼疮患者外周血内皮祖细胞(EPCs)数量和功能的变化,及其与病情活动的相关性。方法选取系统性红斑狼疮患者及健康志愿者各30例,取外周血,采用密度梯度离心法分离单个核细胞,以CD133/CD34,CD133/VEGFR2双荧光标记鉴定细胞,CD34/CD133/VEGFR2三荧光标记流式检测EPCs数量;采用MTT比色法、millicell小室和黏附能力测定实验观察EPCs的增殖、迁移和黏附能力;分析系统性红斑狼疮疾病活动指数(SLEDAI)评分与EPCs数量及功能的相关性。结果系统性红斑狼疮患者外周血EPCs数量较健康对照明显下降(P<0.01),其增殖、迁移、黏附能力均有所下降(P均<0.01)。结论系统性红斑狼疮患者外周血EPCs数量减少、功能受损;EPCs数量及功能与病情评分负相关。     

糖皮质激素对SLE患者Th1/Th2类细胞因子mRNA表达及产生的影响

目的 探讨糖皮质激素治疗对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单一核细胞(PBMC)中Th1/Th2类细胞因子mRNA表达及产生的影响.方法 采用逆转录-聚合酶链反应和酶联免疫吸附试验检测糖皮质激素治疗前后SLE患者PBMC中Th1类细胞因子干扰素γ(IFN-γ)和Th2类细胞因子白介素4(IL-4)、白介素10(IL-10)mRNA表达和产生的变化.结果 经糖皮质激素治疗后SLE患者PBMC产生IFN-γ,IL-4和IL-10水平分别为(74.08±15.85)pg/mL,(246.43±45.25)pg/mL,(549.52±67.00)pg/mL;mRNA平均表达水平分别为0.3298±0.2181,0.4951±0.2938,0.8671±0.6620.治疗前IFN-γ,IL-4和IL-10水平分别为(113.5±27.6)pg/mL,(272.97±33.78)pg/mL,(625.32±104.61)pg/mL;mRNA平均表达水平分别为1.4094±0.6317,0.6872±0.4713,1.1758±0.6255;治疗后各细胞因子水平均较治疗前显著降低(P<0.01);但IFN-γ较IL-4,IL-10降低更为显著.结论 糖皮质激素可通过影响SLE患者细胞因子mRNA表达和产生,调节Th1/Th2类细胞因子网络平衡,可能为糖皮质激素治疗SLE的机制之一.