血红素加氧酶-1和热休克蛋白70在肾移植中的表达

目的 探讨血红素加氧酶-1(HO-1)和热休克蛋白70(HSP70)在大鼠肾移植急性排斥反应中的表达及意义.方法 建立大鼠同种异体肾移植模型.实验分为Ⅰ组(正常对照)、Ⅱ组(同基因移植:SD大鼠→SD大鼠)、Ⅲ组(异基因移植:Wistax大鼠→SD大鼠)、Ⅳ组(异基因移植环孢霉素A干预).用免疫组化法检测移植肾组织中HO-1和HSP70的表达,并观察其与病理学检查的相关性.结果 同基因移植组移植肾中HO-1和HSP70的表达水平在术后无明显变化(P>0.05);异基因移植组移植肾中HO-1和HSPT0的表达在术后第1、3天和第7天逐渐升高(P<0.01),且与病理分级间存在正相关(r=0.911,P<0.01;r=0.869,P<0.01).结论 HO-1和HSP70参与肾移植急性排斥反应,监测HO-1和HSPT0的表达可能为急性排斥反应的早期诊断和治疗提供新的方法.     

平肝潜阳方药对高血压肝阳上亢证大鼠下丘脑组织中Tpx II，HSP27 及ANXA1 表达的影响

目的：观察自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)肝阳上亢证模型下丘脑组织中硫氧还 蛋白过氧化物酶 II(thioredoxin peroxidase II,Tpx II)、热休克蛋白27(heat shock protein 27,HSP27)、膜联蛋白A1(annexin A1,ANXA1)基因在平肝潜阳方药干预下的表达变化,探讨三者在平肝潜阳方药干预的作用。方法：SHR随机分为： 模型组、对照组和治疗组(n=10)。除正常组SD大鼠(n=10)外,其他组大鼠均灌服附子汤复制高血压肝阳上亢证模型。 其中对照组和治疗组分别于复制模型成功后给予依那普利和平肝潜阳方药干预4周。观察大鼠的行为学和血压变化, 采用RT-PCR和Western印迹检测各组大鼠下丘脑组织中Tpx II,HSP27,ANXA1基因和蛋白质表达的变化。结果：与正 常组比较,高血压肝阳上亢证模型大鼠血压、心率和易激惹程度明显升高,而旋转耐受时间降低(P<0.01);平肝潜 阳方药和依那普利能够逆转这种改变。Tpx II和ANXA1基因和蛋白在模型组中的表达较正常组明显升高(P<0.01),而 HSP27基因和蛋白在模型组中的表达较正常组明显降低(P<0.01);Tpx II和ANXA1在对照组及治疗组中的表达较模型组 有明显降低(P<0.05或P<0.01),而HSP27在对照组及治疗组中的表达较模型组有明显升高(P<0.05或P<0.01);对照组与 治疗组比较,Tpx II和ANXA1 蛋白表达明显差异(P<0.05或P<0.01)。结论：平肝潜阳方药不仅能够明显降低血压,而且 能够改善大鼠的宏观表征,其作用可能与调节下丘脑组织中Tpx II,ANXA1及HSP27基因表达有关。     

热休克预处理对严重烫伤大鼠胃黏膜热休克蛋白60、70及iNOS表达的影响

目的 观察热休克预处理对严重烫伤大鼠胃黏膜热休克蛋白(heat shock protein ,HSP)(HSP60、HSP70)和诱生型一氧化氮合酶(induced nitric oxidase synthase,iNOS)表达的影响,探讨热休克预处理对严重烫伤大鼠胃黏膜的保护作用机制.方法 将Wistar大鼠分为烫伤组及热休克预处理后烫伤组2个大组,观察不同处理组大鼠胃黏膜损伤指数(ulcer index,UI)变化.同时应用RT-PCR技术检测各组大鼠胃黏膜HSP70 mRNA表达,免疫组化染色分析胃黏膜组织中HSP60 、HSP70、iNOS表达变化.结果 正常大鼠严重烫伤后iNOS表达显著增强,胃黏膜损害明显,热休克预处理能显著减轻大鼠严重烫伤后急性胃黏膜损害;与烫伤组比较,经热休克预处理后再烫伤大鼠胃黏膜HSP60 和HSP70基因表达水平升高(P＜0.05),尤以HSP70为甚(P＜0.01),而iNOS表达受抑(P＜0.01).结论 热休克预处理对大鼠严重烫伤后急性胃黏膜损害具有保护作用,其保护机制可能与HSP60、70诱导表达增强及iNOS表达受抑等机制有关.     

脑死亡状态致家兔小肠损伤评估研究

目的:通过建立稳定的兔脑死亡模型,RT-PCR和免疫组化检测各组肺脏的热休克蛋白(HSP)70mRNA及蛋白表达情况及血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-6和IL-8的水平变化,评估脑死亡者进行小肠移植手术的可能性。方法:60只家兔随机均分为两组,即假手术组(n=30)和脑死亡组(n=30)。两组均在脑死亡后2,6,8h采集小肠标本,免疫组织化学法、RT-PCR检测热休克蛋白(HSP)70mRNA表达,并以竞争免疫抑制ELISA法检测血清中IL-1β、IL-6和IL-8的水平。结果:假手术组各时间点小肠受损不明显,脑死亡组小肠损伤随时间点延长而逐步加重。脑死亡组HSP70mRNA随脑死亡时间而增高(P<0.05)。结论:小肠组织受损情况会随脑死亡时间而变化,HSP70mRNA表达量增高。     

低分子量肝素对SAP大鼠肾组织保护的实验研究

目的观察低分子量肝素(LMWH)对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)肾组织热休克蛋白70(HSP70)表达、肾组织的光镜下形态学的改变及血清尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)水平的变化,探讨LMWH对肾组织保护的作用机制。方法选用Wistar大鼠随机分为3组,假手术组(A组)、SAP模型组(B组)、SAP低分子量肝素治疗组(C组),术后24h和72h分别取肾组织,HE染色检测肾组织形态学变化,免疫组化检测肾组织HSP70的表达,并测定大鼠血清BUN和Cr。所有实验数据均采用均数±标准差(x±s)表示,统计学处理用F检验。结果肾组织HSP 70表达:各组肾组织HSP70表达在术后24h比72h多,统计学处理有显著性差异(P<0.05,P<0.01)。A组HSP70表达较少,B组HSP70表达最多,C组HSP70表达明显下调,与B组比较有显著性差异(P<0.01)。光镜下可见:A组大鼠双侧肾脏无明显病理改变;B组肾小管上皮细胞坏死脱落,肾小管水肿;C组肾小管水肿程度较B组明显减轻,未见肾小管上皮细胞坏死,但有红细胞渗出。血清Cr和BUN含量:C组与B组比较,有显著性差异(P<0.01,P<0.015)。结论 LMWH通过下调肾组织内HSP70表达,减轻SAP大鼠肾的损伤,从而起到保护肾组织的作用。     

中药糖微康对糖尿病大鼠肾皮质MMP-9表达的影响

目的:观察糖微康对糖尿病肾病(DN)的治疗作用。方法:以STZ诱导糖尿病动物模型,采用免疫组化和RT-PCR检测方法观察糖微康对糖尿病大鼠肾皮质金属蛋白酶(MMP-9)蛋白、基因表达的影响。结果:糖尿病大鼠肾皮质MMP-9免疫染色强度比模型组大鼠明显增强(P<0.01),MMP-9 mRNA水平比未治疗大鼠明显升高(P<0.01)。结论:糖微康可增强糖尿病大鼠肾皮质MMP-9的表达,预防DN的发生和延缓DN的发展。     

平肝潜阳方药对高血压肝阳上亢证大鼠下丘脑组织中Tpx Ⅱ,HSP27及ANXAⅠ表达的影响

目的:观察自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)肝阳上亢证模型下丘脑组织中硫氧还蛋白过氧化物酶Ⅱ(thioredoxin peroxidase Ⅱ,Tpx Ⅱ)、热休克蛋白27(heat shock protein 27,HSP27)、膜联蛋白A1 (annexin A1,ANXA1)基因在平肝潜阳方药干预下的表达变化,探讨三者在平肝潜阳方药干预的作用.方法:SHR随机分为:模型组、对照组和治疗组(n=10).除正常组SD大鼠(n=10)外,其他组大鼠均灌服附子汤复制高血压肝阳上亢证模型.其中对照组和治疗组分别于复制模型成功后给予依那普利和平肝潜阳方药干预4周.观察大鼠的行为学和血压变化,采用RT-PCR和Western印迹检测各组大鼠下丘脑组织中Tpx Ⅱ,HSP27,ANXA1基因和蛋白质表达的变化.结果:与正常组比较,高血压肝阳上亢证模型大鼠血压、心率和易激惹程度明显升高,而旋转耐受时间降低(p＜0.01);平肝潜阳方药和依那普利能够逆转这种改变.Tpx Ⅱ和ANXA1基因和蛋白在模型组中的表达较正常组明显升高(p＜0.01),而HSP27基因和蛋白在模型组中的表达较正常组明显降低(P＜0.01); Tpx Ⅱ和ANXA1在对照组及治疗组中的表达较模型组有明显降低(P＜0.05或P＜0.01),而HSP27在对照组及治疗组中的表达较模型组有明显升高(P＜0.05或P＜0.01);对照组与治疗组比较,Tpx Ⅱ和ANXA1蛋白表达明显差异(P＜0.05或P＜0.01).结论:平肝潜阳方药不仅能够明显降低血压,而且能够改善大鼠的宏观表征,其作用可能与调节下丘脑组织中Tpx Ⅱ,ANXA1及HSP27基因表达有关.     

HO-1抗大鼠肾缺血/再灌注损伤的实验研究

目的探讨诱导血红素氧合酶-1(HO-1)表达能否减轻随后的肾缺血/再灌注损伤(IRI)及其可能的机制。方法采用切除右肾,夹闭左肾动脉50min/再灌注24h的动物模型,30只雄性Wistar大鼠随机均分为3组:假手术组,缺血/再灌注(I/R)组,血晶素处理组(皮下注射血晶素30mg/(kg·d),连续2d),检测肾组织中HO-1蛋白表达及HO-1活力、丙二醛(MDA)含量、总抗氧化能力(TAOC)和血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)含量及组织形态学改变。结果血晶素明显诱导了肾内HO-1表达并使其活力增加,与I/R组比较,P<0.01;与假手术组比较,I/R组Cr,BUN,MDA升高(P<0.05),TAOC降低(P<0.05),组织学损伤严重。在I/R前血晶素诱导HO-1表达可逆转上述病理改变(P<0.05)。结论肾内HO-1的诱导表达可明显改善大鼠随后的I/R性肾损伤,作用机制与其增强机体抗氧化能力有关。     

HSP70在缺血预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤保护作用中的表达及意义

目的　探讨HSP70在缺血预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤中的作用。 方法　 除观察病理组织学变化外 ,用免疫组化方法检测各组中不同灌注时间的热休克蛋白 70 (HSP70 )表达的变化。结果　 病理组织学肾小管评分IPC组均低于IR组 (P <0 .0 5) ,而IPC组和CON组之间无显著性差异 (P >0 .0 5) ;HSP70的表达IPC组明显高于IR组 (P <0 .0 1) ,并且在再灌注 2h和 6h时 ,其在IPC组的表达明显高于CON组 (P <0 .0 1)。结论　 缺血预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用机制与HSP70的诱导合成增多有关。     

热休克蛋白27通过降低内质网应激抑制硼替佐米诱导的骨髓瘤细胞凋亡

目的 探讨多发性骨髓瘤(MM)细胞热休克蛋白27(HSP27)表达对硼替佐米诱导凋亡的影响及机制。 方法 人MM细胞株U266细胞暴露于硼替佐米,实时荧光定量PCR检测HSP27 mRNA,蛋白质印迹法检测HSP27、磷酸化-HSP27(p-HSP27)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶(p-PERK)、活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3/9(cl-Caspase 3/9)表达。收集12例初治和10例复发MM患者骨髓瘤细胞,荧光原位杂交法检测染色体异常,比较HSP27 mRNA和蛋白表达差异。将U266细胞分为观察组和对照组,分别转染HSP27-siRNA和NC-siRNA,流式细胞术检测硼替佐米诱导的细胞凋亡率。慢病毒介导HSP27基因在U266细胞过表达,蛋白质印迹法检测硼替佐米诱导的GRP78和cl-Caspase 3表达。 结果 硼替佐米暴露显著上调U266细胞HSP27 mRNA和蛋白的表达(P<0.01),上调GRP78和p-PERK表达(P<0.05),活化Caspase-3和Caspase-9(P<0.05); 4-苯基丁酸预处理显著抑制硼替佐米诱导的Caspase-3和Caspase-9活化(P<0.01)。复发MM患者HSP27 mRNA和蛋白的表达显著高于初治MM患者(P<0.01)。沉默HSP27表达显著增加硼替佐米诱导的U266细胞凋亡(P<0.01)。慢病毒介导HSP27过表达显著抑制硼替佐米诱导的GRP78表达和Caspase-3活化(P<0.01)。 结论 HSP27负反馈抑制内质网应激,减少硼替佐米诱导的MM细胞凋亡。     

地塞米松抑制人卵巢癌细胞HO-8910增殖的分子机制:RhoB信号通路的作用

目的 观察地塞米松（Dex）对人卵巢癌细胞HO-8910增殖的影响,探讨小G蛋白RhoB信号通路在其中的作用.方法四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）和软琼脂实验检测细胞的增殖;RT-PCR法检测RhoB mRNA的表达;Western印迹检测RhoB及其上下游信号分子磷酸化Akt（p-Akt）、p21^cip1/waf1和p27蛋白质的表达;报告基因技术检测p21^cip1/waf1基因的转录.结果Dex可以明显抑制HO-8910细胞锚依赖性和非依赖性方式的增殖,100 nM Dex处理细胞6 d,抑制率为31%.100nM Dex处理细胞可以明显上调RhoB mRNA和蛋白质的表达（为对照的2.5倍）;同时伴有p-Akt蛋白质表达的降低（24 h时约为对照的50%）、p27蛋白质表达的增加（36 h时比对照增加了3.3倍）以及p21^cip1/waf1转录和蛋白质表达增多（24h时约为对照的1.7倍）.RhoB过表达可以降低细胞的生长速度,并能增强Dex的增殖抑制作用（100 nM Dex处理6 d,抑制率为44%）;而RhoB表达阻断后可逆转Dex的这一效应（抑制率约为13%）.结论Dex抑制HO-8910细胞增殖的机制可能与抑制PI3K/p-Akt信号,从而上调RhoB蛋白质,使RhoB下游信号分子p21^cip1/waf1和p27蛋白质表达增加有关.     

脑干热休克蛋白70的表达与实验性脑损伤猝死的相关性

目的了解脑损伤后热休克蛋白 ７０（Ｈｅａｔ－ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎ ７０, ＨＳＰ７０）蛋白质及 ｍＲＮＡ在脑干局部的改变,及其对维持 脑干生命中枢功能的作用。方法用头颅打击器制成大鼠脑损伤猝死模型,免疫组化法分别测定损伤组损伤前和损伤 后 １、３、６、１２ ｈ及损伤摔死组脑于 ＨＳＰ７０的数量和分布变化;逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测各组相应部位 ＨＳＰ７０ ｍＲＮＡ水平。结果在脑损伤 １５ ｍｉｎ后脑干 ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ水平显著升高, ＨＳＰ７０蛋白质需 ３～６ ｈ才大量表达;损伤后 猝死的鼠脑中仅见 ＨＳＰ７０ ｍＲＮＡ升高,ＨＳＰ７０蛋白质与对照组无差异。结论脑损伤后 ＨＳＰ７０合成迅速增加,清除损伤 因素,维持自稳状态;当损伤严重时,应激蛋白质的合成障碍,抗损伤的保护机制不能发挥,脑干生命中枢的功能紊 乱,生命丧失。因此, ＨＳＰ７０ ｍＲＮＡ－蛋白质分离可作为神经细胞致死性损伤的标志。     

灵芝多糖硫酸酯对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制

目的：对灵芝多糖（GLP）进行硫酸酯化分子修饰,观察灵芝多糖硫酸酯（GLPS）对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用,初步探讨其作用机制。方法：硫酸酯化修饰GLP,得到GLPS;将100只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、GLP组（40mg·kg^-1·d^-1）、GLPS组（40 mg·kg^-1·d^-1）和尼莫地平组（1 mg·kg^-1·d^-1）,每组20只。采用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型,观察脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能缺损评分和脑组织含水量,检测大鼠脑组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）水平,ELISA法检测脑组织中匀浆中核因子kappa B（NF-κB）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1（IL-1）和白细胞介素6（IL-6）水平,Western blotting法检测大鼠脑组织中热休克蛋白70（HSP-70）和磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（p-Akt）表达水平。结果：与模型组比较,GLP和GLPS组大鼠神经功能评分降低（P<0.01）,脑组织含水量减少（P<0.05或P<0.01）,SOD活性升高（P<0.05或P<0.01）,MDA水平降低（P<0.05或P<0.01）,NF-κB、TNF-α、IL-1和IL-6水平降低（P<0.05或P<0.01）,且GLPS组变化较GLP组明显（P<0.05）;Western blotting检测,与模型组比较,GLP组和GLPS组大鼠脑组织中p-Akt蛋白表达水平升高（P<0.05）,GLPS组大鼠脑组织中HSP-70蛋白表达水平升高（P<0.01）,而GLP组HSP-70蛋白表达水平升高效果不明显。结论：硫酸酯化修饰可以明显改善GLP对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用,其作用机制可能通过调控HSP70/PI3K/Akt信号通路,抑制再灌注后继发的炎症反应,从而发挥对神经细胞的保护作用。     

Correlation between heat shock protein 70 expression in the brain stem and sudden death after experimental traumatic brain injury

Themechanismoffatalbraintraumaisofgreatsignificanceindeterminingthefatalityoftraumaticbraininjury,implementinglife-savingemergencypro-cedures,andmakingforensicdecision.Itisgenerallyperceivedthatbraindeathistheresultwhenthephysi-ologicalactivitiesinthevitalcenterofbrainstemceases.Asthevolumeofthebrainstemisrelativelysmall,itslesionsarenoteasilydetected,andthereforethecriteriaforidentifyingfatalbraintraumaticinjuryhavenotbeenwelldefined.Inrecentyears,reports[1－3]havebeenavailableaddressingtheen…     

vAd-HSP70表达对低氧-复氧损伤后神经细胞生长影响

目的 探讨重组腺病毒介导的热休克蛋白70 (HSP70)表达对低氧-复氧损伤后神经细胞生长的影响.方法 用携带全长HSP70基因的重组腺病毒vAd-HSP70感染体外原代培养的神经细胞,RT-PCR和Wes-tern blotting方法 检测靶细胞中外源性HSP70基因表达.实验分为vAd-HSP70感染组、vAd-...     

血液光量子疗法影响热休克蛋白表达的研究

目的 探讨血光量子疗法对细胞ＨＳＰ７０表达的影响及血液光量子半法治疗作用的机理。方法 利用不同剂量紫外线（ＵＶ）照射体外培养的小鼠巨噬细胞,进行ＨＳＰ７０表达的Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析。;并用不同剂量ＵＶ照射大鼠血液后回输进行ＨＳＰ７０合成的Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析。结果 小剂量ＵＶ（３０秒钟）对照后细胞内ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ稍有增多,增大剂量（１分钟）后其表达明显增多;ＵＶ照射血液回输可引起大鼠肺、     

急性心肌梗死猝死者心肌细胞hsf1和HSP70改变的意义

目的探讨急性心肌梗死猝死者梗死区心肌细胞内热休克转录因子1(hsf1)和热休克蛋白70(HSP70)改变的临床意义。方法分别用RT-PCR和免疫组化法检测(IHC)18例急性心肌梗死猝死者(研究组)和15例心脏正常因车祸快速死亡者(对照组)心肌细胞中hsf1和HSP70基因的mRNA和蛋白表达量。结果急性心肌梗死猝死者心肌细胞hsf1和HSP70的mRNA表达量都显著高于正常对照组(P<0.01),且hsf1和HSP70 mRNA的表达量之间呈显著的正相关关系(P<0.001)。急性心肌梗死猝死者心肌细胞hsf1和HSP70蛋白在细胞浆和细胞核表达较对照组显著增强(P<0.01),其中hsf1蛋白主要在心肌细胞核内表达,HSP70蛋白主要在心肌细胞浆内表达。结论急性心肌梗死猝死者心肌细胞内hsf1和HSP70可能共同参与了急性心肌梗死的病理生理过程,这一过程可能是热休克反应的另一调节途径。     

HSP27基因的克隆与表达

目的构建热休克蛋白27(Heat shock protein 27,HSP27)真核表达质粒以用于肾脏缺血预适应(ischemia Preconditioning,IP)的作用及机制研究.方法利用乳腺癌细胞系MCS-7,用RT-PCR方法扩增HSP27全长基因,将HSP27基因克隆到真核表达载体pAAV-MCS中.重组质粒转染NIH3T3细胞,Western blot法鉴定重组质粒HSP27/pAAV-MCS能在哺乳动物细胞中正确表达.结果RT-PCR方法正确地扩增出全长HSP27基因.限制性内切酶酶切和测序结果证实HSP27基因克隆完全正确.重组质粒转染哺乳动物细胞系NIH3T3后,ECLWestern blot法证实了目的基因能在其中正确表达.结论成功地克隆真核表达重组质粒HSP27/pAAV-MCS,为下一步研究HSP27对肾脏缺血预适应的作用及其机制打下了基础.     

热休克蛋白在肺腺癌细胞及组织中的表达

目的:探讨热休克蛋白(heat shock proteins, HSPs)在肺腺癌A549细胞及组织中的表达情况.方法:分别以正常人支气管上皮(human bronchial epithelium,HBE)细胞和正常肺组织为对照,采用免疫印迹及RT-PCR的方法,从细胞水平和组织水平观察HSP86,HSP70及aB晶状体蛋白在肺腺癌A549细胞及组织中的表达情况.结果:与HBE细胞及正常肺组织比较,A549细胞及癌组织中HSP86,HSP70及aB晶状体蛋白的mRNA与蛋白质表达均显著增加(P＜0.05),其中以HSP70的增加最为显著(P＜0.01).结论:肺腺癌细胞及组织中HSPs的表达量高于HBE细胞及正常肺组织,其中以HSP70的增加最为显著.