胃癌细胞中CD44阳性细胞具有肿瘤干细胞特征

目的:在原位移植瘤模型上验证CD44+胃癌细胞的肿瘤干细胞特性.方法:选取MKN-45胃癌细胞株,通过流式细胞仪分选为CD44+和CD44-两组,以未分选的MKN-45胃癌细胞为对照.体外部分,通过MTT法和克隆形成实验验证CD44+胃癌细胞体外增殖能力,通过Transwell实验验证其侵袭力.体内部分,将上述细胞通过原位移植法接种至裸鼠,同等条件下饲养8周后处死裸鼠,检验其成瘤率;分离肝脏,检测肝转移瘤数目;H-E染色观察胃肿瘤和肝转移瘤形态;通过免疫荧光法检测两处肿瘤CD44+细胞数量.结果:CD44+胃癌细胞相比CD44‘胃癌细胞具有明显增强的细胞增殖力(P＜0.01)和侵袭力(P＜0.01),更容易成瘤且更容易发生转移(P＜0.05),但和MKN-45未分选组相比差异无统计学意义(P＞0.05).不论是在原发肿瘤还是转移瘤中,CD44+胃癌细胞均能产生CD44‘细胞,但后者不能产生CD44+细胞.结论:CD44+ MKN-45胃癌细胞相比CD44-胃癌细胞具备更强的增殖力和侵袭力、更容易成瘤和发生转移,符合肿瘤干细胞部分特征,值得进一步研究.     

沉默乙酰肝素酶基因对胃癌生物学行为的影响

目的 探讨乙酰肝素酶(HPA)沉默对人胃癌裸鼠移植瘤生长、转移和血管形成的影响.方法 利用人胃癌SGC-7901细胞和HPA被沉默的SGC-7901-HPA-细胞,分别建立6只裸鼠皮下移植瘤模型,观察成瘤的时间、肿瘤生长速度和体积.应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法分别检测皮下移植瘤组织中HPA mRNA和蛋白的表达,应用免疫组织化学SP法检测皮下移植瘤组织的微血管密度(MVD).将皮下移植瘤细胞分别注射入6只裸鼠腹腔,建立腹腔转移瘤,并观察成瘤情况.结果 SGC-7901细胞和SGC-7901-HPA-细胞在裸鼠皮下均能生长出移植瘤,分别在接种后第4天后和第7天后出现肉眼可见的肿瘤,接种SGC-7901-HPA-细胞的裸鼠移植瘤生长较慢,MVD为(11.35±1.94)个/高倍视野,明显低于接种SGC-7901细胞组[(20.69±1.20)个/高倍视野,P＜0.05].接种SGC-7901-HPA-细胞与接种SGC-7901细胞的裸鼠皮下移植瘤组织相比,HPA mRNA和蛋白的表达均降低.由SGC-7901细胞皮下移植瘤组织建立腹腔转移瘤的裸鼠,有3只成瘤,在肝脏、大网膜、肠系膜、右肾形成了4处转移灶,且体积较大.而接种SGC-7901-HPA-细胞皮下移植瘤组织的裸鼠,仅有1只在肝脏和右肾形成了转移灶,而且瘤体较小.结论 HPA沉默后抑制了人胃癌在裸鼠体内的生长、转移和血管形成,HPA有可能成为预防和治疗胃癌的一个新靶H点.     

BNX小鼠人胃癌原位移植模型的建立及其生物学特性的观察

目的应用T、B、NK细胞联合免疫缺陷的BNX小鼠建立人胃癌原位移植高转移模型.方法将MKN-45细胞株接种至BNX小鼠皮下,成瘤后将肿瘤组织剪成小块通过手术移植至BNX小鼠的胃壁,观察肿瘤生长与转移情况,8周后对动物进行解剖.结果胃壁原位移植瘤浸润破坏胃壁各层组织结构,并直接扩散至周围脏器.肿瘤的移植成功率为100%(23/23),表现出很高的侵袭和转移特性:原位肿瘤平均体积2837.07±1044.04 mm3,局部和远处淋巴结转移率达83%(19/23),肝转移率为83%(19/23),肺转移率为65%(15/23),膈转移率为39%(9/23),发生腹腔种植与腹水的动物为35%(8/23),此外,还有个别脾转移.结论通过T、B、NK细胞联合免疫缺陷的BNX小鼠建立人胃癌原位移植模型可以更好地模拟人胃癌侵袭与转移本身的自然过程,对人胃癌防治及其转移机理的研究提供一个更为理想的模型.     

改良Steel法建立人胃癌动物模型

报道改良Ｓｔｅｅｌ法建立人胃癌大鼠模型的研究结果。经阿糖胞苷预处理后的大鼠接受大剂量γ射线照射，然后皮下接种胃癌细胞，成功地建立了人胃癌动物模型，获得８７．５％的成瘤率。移植瘤保持了原接种癌细胞的病理特点。     

免疫耐受动物人瘤异种移植模型建立的研究——叙利亚仓鼠人胃癌异种移植模型的建立

 给新生24小时内叙利亚仓鼠腹腔和皮下接种2×10⁶人胃癌BGC-823细胞，制备人瘤异种移植模型。终身荷瘤率为66.67%，终身荷瘤存活时间为47.25±8.08天。移植瘤的组织结构和细胞超微结构与原肿瘤标本基本一致，染色体G显带符合人类细胞模型。     

人类胃癌裸鼠原位移植模型的建立

 目的：探讨建立人胃癌裸鼠原位移植转移模型简便易行的方法，比较三种方法的成瘤率。方法：用人胃癌细胞SGC7901悬液接种于裸鼠皮下，形成稳定传代的皮下移植瘤，连续传八代。15只裸鼠随机分为三组，以第八代裸鼠皮下移植瘤组织为移植材料，分别用困扎法、医用OB胶法以及两种联合的方法把皮下肿瘤组织移植裸鼠胃浆膜下形成原位移植肿瘤。结果：6～7周后，处死全部裸鼠，捆扎组、医用OB胶组和联合组成瘤率分别为4／5、3／5和5／5，捆扎联合医用OB组成瘤率最高。结论：应用缝线困扎联合OB胶建立人胃癌裸鼠原位移植模型是一种简便易行的方法，值得推广和应用。     

VEGF-C反义寡核苷酸抑制人胃癌裸鼠移植瘤淋巴管生成的实验研究

目的:探讨VEGF-C反义寡核苷酸(VEGF-C-ASODN)对人胃癌裸鼠移植瘤淋巴管生成的影响。方法:构建人胃癌裸鼠移植瘤模型,反义组在接种部位皮下注射VEGF-C-ASODN,正义组和对照组分别注射VEGF-C正义寡核苷酸和生理盐水,观察移植瘤生长变化。半定量RT-PCR检测移植瘤VEGF-CmRNA表达,酶组织化学方法(5'-Nase-ALPase)染色行淋巴管计数。结果:反义组移植瘤生长缓慢,体积和重量分别为(387.57±166.29)mm³、(1.4±0.7)g,较正义组和对照组显著下降(P<0.01)。反义组VEGF-CmRNA表达的相对系数为(0.35±0.12),淋巴管计数为(14.37±4.21),较正义组和对照组均显著降低(P<0.01)。结论:VEGF-C-ASODN可抑制人胃癌裸鼠移植瘤的生长及淋巴管的生成。     

基于microcarrier 6构建正常免疫小鼠人胃癌移植模型

  目的   基于新型3D微载体（microcarrier 6）复合人胃癌MKN45细胞接种于具有正常免疫功能的小鼠,以期建立新型人胃癌正常小鼠转移瘤模型   方法   将60只雄性C57BL/6小鼠按是否将MKN45细胞接种于支架材料随机分为2D组、对照组和3D组;体外构建三维肿瘤细胞培养模型,采用皮下接种法建立小鼠移植瘤模型,观察小鼠成瘤时间、成瘤率、病理学表现等。   结果   2D组和对照组均未成瘤,3D组成瘤率达80%,成瘤时间早,移植瘤HE染色和免疫组织化学均符合人胃癌特点。   结论   本实验成功基于microcarrier 6复合人胃癌MKN45细胞在正常免疫小鼠中建立人胃癌小鼠移植瘤模型,此模型可以更好地研究和进一步阐明胃癌在免疫功能正常机体中发生、发展机制,同时也为抗癌药物的研发提供了更有价值的动物模型。      

氦氖激光抗肿瘤作用研究

小鼠的人体移植瘤保持人体肿瘤形态和功能特征，表现型和遗传型都与原发性肿瘤相似，是最接近于人类肿瘤的实验模型，目前已在肿瘤学和免疫学等研究领域中广泛应用。本研究采用人胃癌组织及S；。。腹水瘤细胞接种于小鼠皮下，鼠间传代建立小鼠移植瘤模型，并采用He－Ne激光照射     

天然14肽生长抑素联合5-Fu对胃癌移植瘤的抑制作用

目的 观察14肽生长抑素(SST-14)及其联合5-Fu对BGC-823、MKN-28人胃癌细胞移植瘤生长抑制及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法 构建BGC-823、MKN-28人胃癌细胞移植瘤模型,随机分为对照组、SST-14组、5-Fu组、联合组,腹腔注射药物治疗3周后处死裸鼠获取肿瘤组织。测量瘤体重量,计算抑瘤率;免疫组化及Western blot检测瘤组织VEGF的表达。结果 其他三组较对照组均可抑制肿瘤生长,联合组较SST-14、5-Fu单纯用药组抑制作用显著(P＜0.05)。免疫组化及Western blot结果显示,与对照组相比,其他三组瘤组织VEGF表达下降(P＜0.05);其中联合组较SST-14组、5-Fu组显著下降(P＜0.05)。结论 14肽生长抑素联合5-Fu能够有效抑制不同分化程度胃癌细胞移植瘤生长,且优于单纯用药组,两药具有协同抑制作用,可能通过下调VEGF的表达,抑制肿瘤血管生成。     

蛇葡萄素对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的观察蛇葡萄素(APS)体内抗人胃癌作用。方法采用人胃癌细胞裸鼠移植瘤模型,将裸鼠随机分成5组,APS三个剂量连续灌胃给药10天,观察肿瘤体积、相对肿瘤体积(RTV)、相对肿瘤增殖率（T/C）、瘤重、抑瘤率(IR),以此评价APS的抗肿瘤作用。结果在人胃癌细胞株SGC-7901裸鼠移植瘤的抑瘤实验APS 600mg/kg、300mg/kg、150mg/kg灌胃给药10天,其相对肿瘤增殖率为52.84%、71.12%、62.14%,其抑瘤率分别为38.8%、27.5%、27.3%。结论APS对人胃癌细胞株SGC-7901裸鼠移植瘤有明显的抑制作用。     

二烯丙基二硫对人胃癌细胞裸鼠移植瘤的抗肿瘤作用

背景与目的:既往研究发现二烯丙基二硫(diallyldisulfide,DADS)在体外可抑制多种肿瘤细胞生长,但在体内抗肿瘤作用的研究报道较少。本实验旨在探讨DADS对人胃癌细胞移植瘤在BALB/C裸鼠体内生长的影响。方法:未经药物处理和经30mg/LDADS处理1天的胃癌细胞MGC803接种于裸鼠皮下;观察体外DADS处理MGC803细胞裸鼠移植瘤的成瘤情况和未处理MGC803细胞移植瘤成瘤后腹腔注射DADS对胃癌移植瘤在BALB/c裸鼠体内生长情况的影响。Westernblot检测瘤组织中增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)的表达情况。结果:30mg/LDADS处理的MGC803细胞移植裸鼠体内无一成瘤。荷瘤裸鼠腹腔注射DADS剂量为50、100和200mg/kg时的抑瘤率分别为27.8%、66.1%和73.0%,同时可抑制移植瘤癌细胞PCNA的表达。结论:DADS可明显降低胃癌细胞裸鼠移植瘤的成瘤性,并对移植瘤生长有明显抑制作用。     

Changes in Serum and Tissue Carcinoembryonic Antigen with Growth of a Human Gastric Cancer Xenograft in Nude Mice

We established a human gastric cancer xenograft which, when inoculated into nude mice, showed a positive correlation between tumor growth and the serum level of carcinoembryonic antigen (CEA). Serum CEA levels in the mice rose continuously with increasing tumor weight after inoculation, showing a correlation coefficient of 0.96. A positive correlation was also observed between the tissue CEA level and tumor weight, the former increasing along with the latter. Furthermore, the level of serum CEA closely paralleled that of tissue CEA. The serum CEA level fell after tumor extirpation, with a half-life of approximately 86 h. These results suggest that the elevation of serum CEA is attributable to the gain in tumor weight as well as the increase of CEA production in the tumor tissue. Thus, human gastric cancer xenografts in nude mice are a good model for examining the biological role of CEA.     

Changes in serum and tissue carcinoembryonic antigen with growth of a human gastric cancer xenograft in nude mice

We established a human gastric cancer xenograft which, when inoculated into nude mice, showed a positive correlation between tumor growth and the serum level of carcinoembryonic antigen (CEA). Serum CEA levels in the mice rose continuously with increasing tumor weight after inoculation, showing a correlation coefficient of 0.96. A positive correlation was also observed between the tissue CEA level and tumor weight, the former increasing along with the latter. Furthermore, the level of serum CEA closely paralleled that of tissue CEA. The serum CEA level fell after tumor extirpation, with a half-life of approximately 86 h. These results suggest that the elevation of serum CEA is attributable to the gain in tumor weight as well as the increase of CEA production in the tumor tissue. Thus, human gastric cancer xenografts in nude mice are a good model for examining the biological role of CEA.     

血管内皮生长因子的表达和血管生成与人胃癌移植瘤生长的关系

探讨血管内皮生长因子的表达与肿瘤血管生成的关系。方法 :将VEGF165正、反义RNA表达载体导入人胃癌细胞 ,观察接种VEGF高表达和低表达胃癌细胞裸鼠移植瘤的生长情况 ,并对移植瘤进行组织学检查 ,检测其血管密度、组织增生及坏死程度等变化。结果 :VEGF正义转染细胞所致移植瘤的生长速度明显快于反义转染细胞所致的移植瘤 ;组织学检查发现 ,正义转染细胞移植瘤的血管密度显著高于反义转染细胞所致的肿瘤。结论 :血管内皮生长因子通过启动血管生成而促进肿瘤的生长 ,阻断血管内皮生长因子的产生可以抑制肿瘤的生长。     

CH50多肽真核表达载体pCH510的构建、表达及体内趋化和抑瘤作用

目的：探讨血管内皮生长因子的表达与肿瘤血管生成的关系。方法：将VEGF165正、反义RNA表达载体导入人胃癌细胞,观察接种VEGF高表达和低表达胃癌细胞裸鼠移植瘤的生长情况,并对移植瘤进行组织学检查,检测其血管密度、组织增生及环死程度等变化。结果：VEGF正义转染细胞所致移植瘤的生长速度明显快于反义转染细胞所致的移植瘤;组织学检查发现,正义转染细胞移植瘤的血管密度显著高于的转染细胞所致的肿瘤。结论：血管皮生长因子通过启动血管生成而促进肿瘤的生长,阻断血管内皮生长因子的产生可以抑制肿瘤的生长。     

融合穿膜肽的HSP70基因联合CIK细胞对裸鼠胃癌移植瘤的治疗效果

观察融合穿膜肽的HSP70基因联合CIK细胞对裸鼠胃癌移植瘤的治疗效应。方法：采用编码11个精氨酸（11R）的穿膜肽序列融合HSP70基因序列,构建重组腺病毒载体AdCMV-HSP70s、AdCMV-HSP70（无穿膜肽对照）和AdCMV-EGFV（空载体对照）。Western blotting、ELISA法检测重组腺病毒介导的HSP70基因在胃癌SCG-7901细胞中的表达,MTT检测重组腺病毒感染后HSP70分泌性表达对胃癌细胞的抑制作用。裸鼠移植瘤模型的抗瘤实验检测HSP70基因联合CIK细胞对胃癌移植瘤的抗瘤效应。结果：与AdCMV-HSP70感染细胞比,AdCMV-HSP70s感染细胞的HSP70表达量明显增加[胃癌SGC-7901细胞：（360.72±20.89） vs（121.01±15.94）ng/ml,P<0.05 ;胃黏膜上皮GES-1细胞：（188.62±10.82） vs（135.00±13.96） ng/ml,P<0.05]。融合11R的HSP70蛋白能够穿膜并分泌到细胞外后对胃癌细胞产生一定的增殖抑制作用[MOI=100 pfu/cell时,细胞存活率（66.33±4.33）% vs（101.33±7.64）%,P<0.01]。AdCMV-HSP70s+CIK联合治疗对胃癌移植瘤的抑制率显著高于AdCMV-HSP70+CIK组[（66.5±7.3)% vs (43.6±5.6)%, P<0.05],该组移植瘤组织间质中CD3+T细胞浸润数量也明显多于后者。结论：融合穿膜肽可明显促进HSP70蛋白的表达和分泌,和CIK细胞联合治疗能增强抗瘤免疫效应,从而显著抑制裸鼠胃癌移植瘤。     

Effects of cimetidine on tumor growth and immune function in nude mice bearing human ovarian carcinoma

The effects of cimetidine on the growth of a human ovarian cancer cell line inoculated into BALB/c nude mice were examined. The cell line, designated "KK," was derived from a cystadenocarcinoma of the ovary. The passage number was about 40, and its tumorigenicity in nude mice was 100% even when 10(5) cells were inoculated. About 2 weeks after inoculation, the KK cells formed palpable tumors, and the tumor volume reached 2.29 cm3 on day 36. Conversely, the nude mice given cimetidine (100 mg/kg/day) orally with drinking water had about one-third the tumor volume (0.81 cm3) of that in untreated nude mice on day 36. The natural killer activity against the YAC-1 (a T-cell lymphoma) cell line in spleen cells of the nude mice challenged with human xenogeneic tumor (KK cell line) was not affected by treatment with cimetidine while inhibiting the tumor growth. The capacity to lyse the KK cells did not exist in the spleen cells of nude mice challenged with the KK cell xenograft and not treated with cimetidine. The cimetidine-treated spleen cells acquired the capacity to lyse the KK cells on day 14. Thereafter, the capacity was maintained at the same level as long as cimetidine was administered, whereas that in untreated nude mice remained undetectable.     

^I31I标记抗胃癌单克隆抗体3G9在荷瘤裸鼠体内定位的研究

3G9 is one of murine monoclonal antibodies against human gastric cancer produced by immunization of multiple human gastric cancer cell lines in sequence in our institute. In vitro 3G9 had a high specific binding capacity with human gastric cancer tissues and cell lines. 131I-labeled 3G9 and 125I-labeled normal murine IgG were injected into nude mice bearing xenograft or cells M85 and MGC803 of human gastric cancer in order to compare the differences between 3G9 and IgG distributions in tumor and various normal tissues. The distribution of radioactivity in vivo suggested that 131I-3G9 had a good ability of localization in tissues of gastric cancer. The tumor/blood, tumor/liver, tumor/stomach and tumor/muscle ratios were 1.23, 4.72, 7.25 and 10.28, respectively. The localization index of tumor was 2.62 at 48 hr and 4.13 at 96 hr. The radioactivity of 125I-IgG in tumor was much lower than that of 131I-3G9 and tended to decrease with time. The results of scintigraphy showed that there was distinct radioactivity in the tumor. In this group of nude mice, the minimum weight and diameter of tumor was 83 mg and 4 mm, respectively. The method of scintigraphy to analyse variation of radioactivity in tumor-bearing nude mice was established. The results showed that monoclonal antibody 3G9 could be useful in localization and treatment of human gastric cancer.