抗单链DNA单克隆抗体在细胞凋亡检测中的应用研究

随着对细胞凋亡研究的深入，发现凋亡与机体的健康和疾病状态息息相关。因而建立一种简便有效的检测凋亡细胞的生物学方法对于临床与基础研究非常重要。最近研究发现抗单链DNA的特异性单克隆抗体在检测细胞凋亡方面具有其它方法无可比拟的优势，如高度的特异性与敏感性，低廉的费用，故而有着广阔的应用前景。     

抗单链DNA单克隆抗体在细胞凋亡检测中的应用研究

随着对细胞凋亡研究的深入 ,发现凋亡与机体的健康和疾病状态息息相关。因而建立一种简便有效的检测凋亡细胞的生物学方法对于临床与基础研究非常重要。最近研究发现抗单链DNA的特异性单克隆抗体在检测细胞凋亡方面具有其它方法无可比拟的优势 ,如高度的特异性与敏感性 ,低廉的费用 ,故而有着广阔的应用前景     

110 抗单链DNA单克隆抗体在细胞凋亡检测中的应用研究

随着对细胞凋亡研究的深入，发现凋亡与机体的健康和疾病状态息息相关。因而建立一种简便有效的检测凋亡细胞的生物学方法对于临床与基础研究非常重要。最近研究发现抗单链DNA的特异性单克隆抗体在检测细胞凋亡方面具有其它方法无可比拟的优势，如高度的特异性与敏感性，低廉的费用，故而有着广阔的应用前景。     

介绍一种定量检测细胞凋亡的方法

Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ（毛喉萜）为二萜类有机化合物。已证实它能直接激活腺苷酸环化酶。使胞内ｃＡＭＰ浓度升高,导致胞内ＤＮＡ断裂,细胞呈现凋亡［１］。本文采用Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ介导小鼠胸腺细胞凋亡,并采用新的一种定量检测细胞凋亡的方法,呈现与流式细胞术（Ｆ...     

抗BrdU单克隆抗体在凋亡细胞检测中的应用研究

目的 探讨将自制的抗BrdU单克隆抗体（mAb）用于TUNEL法检测凋亡细胞的可能性。方法 分别用TUNEL免疫荧光法和免疫组化技术，检测地塞米松诱导的凋亡胸腺细胞和射线照射的大鼠皮肤组织中的凋亡细胞。结果 用TUNEL免疫荧光法和TUNEL免疫且化法法检测发现，凋亡细胞的细胞核分别呈明显的荧光或酶底物着色，而非凋亡细胞不显示荧光或无酶底物着色。结论 该抗BrdU mAb用于TUNEL法，能够检测单个细胞标本或组织切片中的凋亡细胞，为国内开展凋亡细胞的检测，提供了一种新的方法。     

细胞凋亡检测方法——TUNEL

细胞凋亡是一种主动的、生理性的细胞死亡方式 ,在维持组织稳定中起很大的作用 ,了解细胞凋亡的机制对于那些因细胞的增殖与丢失之间的平衡破坏而引起的疾病提供新的治疗途径 ,为了进行此类研究 ,准确地检测凋亡细胞是必须的 ,本文主要讨论目前比较特异、敏感的细胞凋亡检测方法—— TU NEL ,论述其基本原理、TU NEL 阳性标记细胞形态、TU NEL 的优缺点及其与其它凋亡检测方法的比较     

细胞凋亡的DNA缺口原位检测法

与细胞增殖、分化一样,细胞凋亡在胚胎发育、造血、免疫调节及肿瘤发生等方面发挥重要的作用。为使细胞凋亡的检测既简便易行,又直观可靠,我们参考有关文献［１］,改良了一种ＤＮＡ缺口的末端转移酶原位检测法。材　料　与　方　法一、材料：１－取对数生长期的Ｋ５６２细胞（由北京医科大学人民医院血液病研究所细胞生物室提供）,以含１０％胎牛血清的ＲＰＭＩ１６４０培养液于３７℃,５％ＣＯ２、饱和湿度下培养。２－足叶乙甙为北京医药工业研究所实验药厂产品,终浓度为２０μｇｍＬ,作用时间分别为１２、２４、４８、７２ｈ;…     

IL-6对沙眼衣原体K血清型诱导细胞凋亡的影响

目的探讨IL-6对沙眼衣原体(Ct)K血清型诱导细胞凋亡的影响。方法用ELISA双抗体夹心法检测衣原体感染细胞分泌IL-6水平变化;用流式细胞仪(FCM)检测凋亡细胞百分率,DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡“梯状带”,观察anti-IL-6抗体拮抗IL-6活性对沙眼衣原体K血清型感染的McCoy细胞凋亡的影响。结果沙眼衣原体K血清型感染细胞分泌IL-6水平明显升高(P<0.05);感染同时加anti-IL-6抗体组在感染36、48、60 h细胞凋亡百分率均显著高于相应的无感染对照组及沙眼衣原体K血清型感染组(P<0.01),且呈时间依赖性(P<0.01)。结论IL-6可部分抑制沙眼衣原体K血清型诱导的McCoy细胞凋亡。     

抗ssDNA单克隆抗体的研制和在检测凋亡细胞中的应用

为了制备抗单链DNA单克隆抗体和建立检测细胞凋亡的新方法 ,采用杂交瘤细胞融合技术用于筛选分泌抗单链DNA抗体的单克隆杂交瘤细胞株 ,并用斑点印迹和竞争ELISA法鉴定单抗的特异性 ,进而结合免疫组织化学和免疫荧光方法用于检测凋亡细胞。通过筛选得到单克隆杂交瘤细胞株B17,其分泌的抗体与单链DNA结合而与双链DNA无交叉反应 ,用此单抗建立的凋亡细胞检测方法能够检测出凋亡细胞 ,区分非凋亡细胞和坏死细胞。实验结果表明 ,成功地获得一株分泌特异性抗单链DNA抗体的单克隆杂交瘤细胞株 ,以此建立的凋亡细胞检测方法特异性高、敏感性强     

线粒体DNA损伤与细胞凋亡

细胞核DNA（nuclear DNA,nDNA）损伤后诱导细胞凋亡的信号转导途径已经逐渐清晰,而线粒体DNA（mitochondrial DNA,mtDNA）损伤与细胞凋亡之间的关系尚有待进一步明确.目前已有研究结果表明：mtDNA断裂、缺失或功能缺陷能够显著影响细胞凋亡发生率;线粒体缺失细胞（p0细胞）同其亲代细胞相比,对多种凋亡诱导因素的反应存在显著差异;ROS的产生并非mtDNA损伤诱导凋亡的必要条件,mtDNA损伤断裂本身可能启动了凋亡的级联反应.但mtDNA的损伤,在细胞凋亡的信号转导途径具体扮演何种角色,还有待深入研究.     

基于微电子阻抗技术实时细胞监测系统在细胞凋亡检测时点选择中的应用

目的 探讨基于微电子阻抗技术的实时细胞监测系统用于确定细胞凋亡最佳检测时间点.方法 应用顺铂诱导胶质瘤细胞U251凋亡,使用实时细胞监测系统连续74 h监测不同药物浓度作用于U251后细胞指数的动态变化,根据药物作用时间与细胞指数关系曲线确定凋亡最佳检测时间点,采用流式细胞仪分析细胞凋亡率.结果 通过实时监测发现,2.5μg/mL、5 μg/mL、10μg/mL顺铂分别在作用49 h、60 h和74 h,U251细胞指数值达到最低;在这些时间点,流式细胞仪检测细胞凋亡率分别达到高峰(15.6±1.4)％,(34.2±7.6)％,(63.9±4.6)％.结论 应用实时细胞监测系统可进行细胞凋亡最佳检测时间点的辅助判断.     

D.S和琼脂糖电泳纯化HDL对体外血凝与纤溶系统的作用

本文报道用硫酸葡聚糖(D.S)分离和琼脂糖电泳纯化高密度脂蛋白(HDL),鉴定为聚丙烯酰胺电泳及免疫电泳纯。并观察了HDL对体外血凝与纤溶系统的作用,HDL0.8～1.6毫克范围对体外血凝系统有延缓凝血酶反应时间的作用,对纤溶系统活性有增强作用。HDL的这一生理功能同样有利于防治动脉粥样硬化。琼脂糖电泳纯化的HDL方法简便易行,适用于研究脂蛋白生理功能。     

DNA定量分析检测对胸腔积液的诊断价值研究

目的 探讨细胞DNA定量分析在不明原因胸水诊断中的应用价值。方法 收集本院2015年9月~2016年3月122例胸腔积液患者抽取胸水,标本制片后分别经巴氏染色行脱落细胞学检查,Feulgen染色后行细胞DNA定量分析。结果 122例胸腔积液中有56例恶性胸腔积液,66例良性胸腔积液。细胞学检测恶性胸水敏感度为82.14%,特异性为98.48%,阳性预测值97.87%,阴性预测值86.67%。细胞DNA定量分析检测恶性胸水敏感度为80.36%,特异度为90.91%,阳性预测值88.24%,阴性预测值84.51%。两种方法诊断结果一致性一般（Kappa=0.473,P＜0.001）,差异无统计学意义（P=1.0）。结论 DNA定量分析检测是一种较敏感而特异的肺癌的筛查技术,DNA异倍体有望作为良恶性胸水诊断有价值的标志物。     

图像分析系统在检测生后发育期小鼠肝细胞核多倍体化中的应用

目的　探讨发育期小鼠肝细胞核DNA倍体动态变化规律。方法　本文选取不同发育时期健康雄性小白鼠的肝细胞涂片 ,Feulgen染色 ,TIGER细胞图像分析仪测量单个完整肝细胞核的DNA含量与倍体 ,分析发育时期小鼠不同DNA倍体肝细胞核所占的比率。结果　不同鼠龄小鼠同一倍体的肝细胞核DNA含量大致相同 ;二、四、八、十六倍体的肝细胞核间的比值均接近 2、4、8,它们的CV <9% ;鼠龄 2 - 2 0天的小鼠以二倍体肝细胞核为主 ;35天小鼠具有四种不同DNA倍体的肝细胞核 ,各DNA倍体肝细胞核所占比例依次为 :4C >8C >2C >1 6C ;6 0天小鼠偶见三十二倍体肝细胞核。结论　小鼠肝细胞多倍体化出现的时间比已有实验结果更早、程度更强     

Programmed cell death in the interdigital tissue of the fetal mouse limb is apoptosis with DNA fragmentation

Background: Programmed cell death is an essential event during mammalian morphogenesis which eliminates unnecessary cells to accomplish histogenesis and organogenesis. Cell death in interdigital spaces of the developing limb is a classical example of morphogenetic cell death. We investigated whether classical programmed cell death in the interdigital tissue of the developing limb in mice is apoptosis with fragmentation of nuclear DNA and also examined sequentially the occurrence of programmed cell death and cell proliferation in the developing limb of mouse fetuses to analyze their interrelation. Methods: We examined the occurrence of apoptotic cell death in the developing limbs of mouse fetuses by using Nile blue sulphate staining, agarose gel electrophoresis for detecting DNA laddering, and a cytochemical labeling of DNA fragmentation. We also labeled proliferating cells using BrdU/anti-BrdU immunohistochemistry and examined the interrelation between apoptotic programmed cell death and cell proliferation. Results: DNA ladders, a biochemical evidence of apoptosis, were detected in DNA extracts from the interdigital tissue of day 13 mouse fetuses by agarose gel electrophoresis. Programmed cell death and DNA fragmentation were detected by Nile blue staining and cytochemical labeling of DNA fragmentation, respectively, in the interdigital mesoderm and in the regions of presumptive joints of the digit. BrdU/anti-BrdU immunohistochemistry for identifying proliferating S-phase cells revealed that interdigital mesenchymal cells cease DNA synthesis before programmed cell death and DNA fragmentation begin. Conclusions: We confirmed that both cytological apoptotic alterations and fragmentation of nuclear DNA occur in the interdigital tissue and presumptive joint areas of fetal mouse limbs, and they appear to play a significant role in the separation of digits as well as the formation of joint cavities. © 1995 Wiley-Liss, Inc.     

小细胞肺癌患者胸水、血清中NSE、 pro-GRP定量分析与免疫组化分析的诊断一致性评价

目的 评价小细胞肺癌（SCLC）患者胸水、血清中NSE、pro-GRP定量分析与免疫组化分析的诊断一致性.方法 采用免疫组化方法对病理标本的NSE、pro-GRP表达进行分析,用化学发光法对血清和胸水NSE、pro-GRP表达水平做定量分析.结果 小细胞肺癌患者血清和胸水NSE、pro-GRP表达水平明显高于非小细胞肺癌（NSCLC）患者.NSE、pro-GRP免疫组化分析与血清和胸水NSE、pro-GRP定量分析诊断阳性率无统计学差异.结论 小细胞肺癌患者手术前缺乏病理组织材料时,可定量分析血清和胸水NSE、pro-GRP表达水平获得与免疫组化分析一致的诊断效果.     

荧光定量PCR技术检测结核DNA在不同类型样本中的应用

目的 探讨荧光定量PCR技术检测结核DNA在不同类型样本中的阳性率。方法 收集2016年1月~2018年3月在我院进行结核DNA检测的9020例患者,运用荧光定量PCR技术检测不同类型的样本。结果 9020例患者中,检测结果阳性1220例,总阳性率13.53%;痰液检测5688例,检测结果阳性741例,总阳性率13.03%;肺泡灌洗液检测1799例,检测结果阳性363例,总阳性率20.20%;脑脊液检测704例,检测结果阳性40例,总阳性率5.68%;胸水检测559例,检测结果阳性35例,总阳性率6.26%;腹水检测62例,检测结果阳性6例,总阳性率9.68%;尿液检测193例,检测结果阳性35例,总阳性率18.13%;心包积液检测15例,检测结果阳性0例,总阳性率0。结论 荧光定量PCR技术检测结核DNA具有特异、灵敏、快速、准确等特点,但临床医生应根据症状体征等选择合适的临床标本进行结核DNA的检测,将进一步提高阳性率,明确诊断。     

用图像分析系统定量研究兔早期缺血心肌细胞超微结构的变化

应用图像分析仪对结扎冠状动脉造成实验性缺血的兔心肌超微结构进行定量检测。结果显示：线粒全和线粒登攀上室的体密度随缺血时间延长而加大，线粒全嵴的体密度随缺血时间的延长而减少，缺血４５ｍｉｎ以后即和正常对照有显著性差别，实践证明，图像分析仪在定量超同结构的变化上，具有高度的精确性，故可早期发现病变。     

循环DNA定量分析在乳腺癌诊断中的应用

目的:检测乳腺癌患者循环DNA含量,探讨其在肿瘤诊断中的价值。方法:收集61例乳腺癌患者、33例乳腺良性病变患者和20例健康志愿者的血浆样本,以SYBRgreenI荧光染色法抽提血浆循环DNA,行DNA定量分析。结果:乳腺癌患者、乳腺良性病变患者、健康志愿者循环DNA浓度分别为65.46士15.31ng/ml、19.29士9.54ng/ml、13.56士7.39ng/ml;乳腺癌患者显著高于乳腺良性病变患者和健康志愿者,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:血浆肿瘤循环DNA定量分析在乳腺癌诊断中有较高的应用价值。