抗出血性大肠杆菌Ο157∶H7单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备抗出血性大肠杆菌Ο157∶H7(E.coliΟ157∶H7)特异性单克隆抗体(MAbs)。方法福尔马林灭活的E.coliΟ157∶H7免疫BALB/c小鼠,利用细胞融合技术建立分泌抗E.coliΟ157∶H7MAbs的杂交瘤细胞株,对配对较好的6株MAbs用ELISA法测定其免疫球蛋白类及亚类,用ELISA法、凝集法和Westernblot鉴定MAbs的特异性。结果6株MAbs免疫球蛋白均为小鼠IgM。这些MAbs均能与27个E.coliΟ157∶H7菌株发生凝集反应,与部分弗劳地杆菌发生凝集反应,与11株鼠伤寒沙门氏菌、7株伤寒杆菌、2株痢疾杆菌、致病性大肠杆菌、产毒性大肠杆菌、侵袭性大肠杆菌、出血性大肠杆菌Ο26∶H11和Ο111、肠集聚性大肠杆菌、42株非定血清型大肠杆菌、霍乱弧菌Ο1群和Ο139群不发生凝集反应;ELISA结果显示6株MAbs与粪链球菌、变形杆菌、粘质沙雷氏菌、肺炎克雷伯杆菌均无交叉反应;ELISA和Westernblot结果显示,3株MAbs针对E.coliΟ157∶H77酚相脂多糖。结论6株MAbs具有较高的特异性,有可能用于制备检测E.coliΟ157∶H7的病原检测试剂。     

肠出血性大肠杆菌O157：H7实验室诊断技术进展

肠出血性大肠杆菌O157：H7（E．coli O157：H7）是肠出血性大肠杆菌（EHEC）的一个血清型，主要引起人的食源性疾病，以突发性腹痛、腹泻、血便为主要症状，严重时并发肾功能衰竭，病死率高。E．coli O157：H7广泛分布于自然界，在生猪、猪肉、牛及牛肉及其粪便中分离率极高，对公众健康构成严重威胁。因此，早期发现及时治疗和预防是控制该病的关键。E．coli O157：1-17实验室诊断以细菌培养、分离及生化和血清鉴定为主。近年来出现的新型免疫学方法和聚合酶链反应（PCR）对E．coli O157：H7诊断具有较高的敏感性和特异性。本文就E．coli O157：H7检测技术的研究进展综述如下。     

5株产硫化氢大肠杆菌O157的分离鉴定

肠出血性大肠杆菌O157：H7是引起人类出血性肠炎的主要菌型，自1982年在美国首次被分离并确认为食物中毒新型致病菌以来，在世界范围内发生过多次暴发，并造成严重危害。尤其是1996年5～8月日本发生了由E．coli O157：H7引起的人类历史上大规模的暴发流行，引起世界普遍关注。我们自1999年开始开展了大肠杆菌O157：H7的监测，     

福建省家畜,家禽O157大肠杆菌初查

本文检查了7种家畜（包括猪肉砧板）、家禽粪便标本784份。首次从中检出17种O157出血性大肠杆菌，平均检出率为2．17％，其中以猪最高达6．61％．其次为鸡3．64％，鸽子1．25％，还在猪内与砧板上检出此菌。根据检出菌株与O157、H7诊断血清凝集反应及其产生动力的情况将它们分为二类即：O157；H7（8株）及O157：NM（9株）。     

大肠杆菌O157:H7 菌毛hcpA基因产物的小鼠免疫保护试验

大肠杆菌O157:H7的Ⅳ型菌毛与其粘附、定植和致病可能有着密切的关系,但相关报道鲜见。本文选用pET32载体,体外构建hcpA重组菌,在大肠杆菌中进行表达。家兔制备高滴度多克隆抗体,Western blot分析其免疫原性。Balb/c小鼠进行免疫试验,并对临床分离多株EHEC O157:H7进行hcpA基因检测和电镜观察菌毛的表达。成功获得高效表达重组HcpA蛋白,并制备了兔源HcpA多克隆抗体,Western blot分析此抗体能与提取的HCP发生特异性抗原抗体反应。重组HcpA经二免后,Balb/c小鼠较对照小鼠排菌量降低,而且排菌时间缩短。在大肠杆菌中成功克隆表达了hcpA基因,所获重组HcpA蛋白具有良好的免疫原性,可作为研制肠出血性大肠杆菌O157:H7基因工程疫苗或者检测试剂的候选抗原。     

上海市浦东新区肠出血性大肠埃希菌O157：H7的监测研究

目的 了解上海浦东新区腹泻病人、宿主动物肠出血性大肠埃希杆菌(E. coli )O157:H7携带情况以及市售食品的污染状况,为疾病防治工作提供决策依据. 方法 于2003～2006年的5～10月,在设置的监测点与超市采集家禽和腹泻病人粪便及禽畜肉制品;应用免疫磁珠富集,山梨醇麦康凯平板和Chromager O157显色平板分离培养E. coli O157:H7,生化和血清学反应进行鉴定. 结果 E. coli O157:H7阳性率分别为:腹泻病人粪便0.24%,鸡粪2.95%,鸭粪3.83%,家畜肉15.05%,家禽肉2.25%.检出的67株E. coli O157:H7中,仅1株来自腹泻病人的E. coli O157:H7具有毒力基因. 结论 浦东新区腹泻病人、宿主动物及其肉类食品中存在E. coli O157:H7感染或污染,存在E. coli O157:H7感染流行的潜在危险.     

PCR方法在出血性大肠杆菌O157:H7诊断中的应用

自1982年首次在美国引起出血性肠炎爆发以来,肠出血性大肠杆菌O157:H7(entero-hemorrhagic E.coli O157:H7,EHECO157:H7)已经成为世界性的重要的公共卫生和食品安全问题,曾在日本、美国、加拿大等国造成了暴发流行和大规模食物中毒事件.估计目前在美国每年可造成大约70000人感染.     

多重PCR方法检测大肠杆菌O157:H7的初步研究

目的研究一种快速、特异的检测大肠杆菌O157：H7的多重PCR方法。方法以大肠杆菌O157：H7的O157抗原基因（rfbE基因）、鞭毛H7抗原基因（fliC基因）、粘附素基因（eaeA基因）和志贺样毒素Ⅰ、Ⅱ（SLT-Ⅰ、SLT-Ⅱ基因）为扩增对象，设计能导至目的片段大小不同的5对引物，通过优化条件，建立了可用于粪便检测的大肠杆菌5重PCR。结果在同一扩增体系中，检测了5株不同来源的大肠杆菌O157：H7及27株非大肠杆菌O157：H7细菌。结果表明，该方法能从2株大肠杆菌O157：H7中扩增出rfbE、fliC、eaeA、SLT-Ⅰ、SLT-Ⅱ基因，它们的大小分别为582bp、802bp、487bp、368bp和177bp。而另外3株大肠杆菌O157：H7也能扩增出除eaeA、SLT-Ⅱ基因外的其它3个基因片段。表明该方法可用于检测大肠杆菌O157：H7，还可检测细菌是否含有毒素基因。在检测27株非大肠杆菌O157：H7．除O149出现SLT-Ⅱ扩增产物和01：H7出现flic基因扩增产物外，其它非大肠杆菌O157：H7的扩增结果均为阴性，表明该方法有较高的特异性。当粪便样品经增菌培养12h，用该5重PCR体系能检测出最初接种量为5cfu／g粪便的样品。结论本5重PCR方法具有较高的特异性和敏感性，可迅速、有效地将大肠杆菌O157：H7与其它非大肠杆菌O157：H7相区别，同时还能检测O157：H7中的毒力因子。因此，通过进一步研究，本方法有望应用于临床大肠杆菌O157：H7感染的辅助诊断。     

河南省首次从人体内分离出E.coli O26:H11

目的 研究一株从腹泻病人体内分离出的Ecoli O26：H11。方法 血清凝集采用玻片法，生化鉴定采用VITEK32全自动细菌分析系统GNI 卡进行鉴定，并对该株E．coli O26：H11进行多重PCR鉴定、Vero细胞毒性试验、ESBL试验和21种抗生素的药敏试验，并结合NCCLS标准进行判定。结果 血清凝集反应中O26抗原和H11抗原都呈强凝集，且不自凝；生化反应呈现大肠杆菌的典型反应；rfp O157基因、stx1基因和stx2基因均为阴性，hlyA基因和meA基因为阳性；Vero细胞毒性试验阴性；ESBL，试验阳性；对多种抗生素具有耐药性。结论 该株E．coli O26：H11为一不产类志贺氏菌毒素的菌株，但ESBL阳性，具有多重耐药性。     

O157:H7的分子生物学检测与分型研究进展

肠出血性大肠杆菌（Enterohemorrhagic E．coli．EHEC）O157：H7是一种重要的人兽共患病病原菌．主要通过食物和水源传播，在人类能引起出血性结肠炎（HC）、溶血尿毒综合征（HUS）等严重疾病甚至死亡。自1982年美国首次分离出该菌以来，世界各地不断有散发和暴发的报告，因此快速、敏感、特异的检测与分型方法对于临床诊断和疫情控制是非常必要的。随着分子生物学技术的飞速发展使这种要求成为可能，本文就近年来EHEC O157：H7的分子生物学检测与分型研究进展综述如下。