克山病患者心肌中肠道病毒VP1抗原的检测

目的为进一步探讨肠道病毒感染与克山病的发病关系.方法应用抗柯萨奇B5病毒的VP1壳蛋白的单克隆抗体,采用免疫组化方法,对黑龙江、山东、云南3省区急型、亚急型、慢性、潜在型克山病患者尸检心肌共83例,风心病10例,冠心病10例,心肌炎21例,扩张型心肌病29例,非病区非正常死亡的正常人10例,病区发病季节非克山病死亡病人13例的尸检心肌进行了检测.结果克山病尸检心肌83例中有74例阳性,阳性率89.2%;风心病、冠心病、非正常死亡健康人的阳性检出率分别为10%,心肌炎,扩张型心肌病的阳性检出率分别为66.7%和70%;病区发病季节非克山病死亡病人心肌阳性检出率为38.5%.结论 3省区各型克山病心肌中均能检出肠道病毒VP1结构蛋白,支持克山病的发生与肠道病毒感染高度相关.     

扩张型心肌病患者心肌肠道病毒抗原VP1及其基因检测

扩张型心肌病(DCM)患心肌组织中发现肠道病毒基因组RNA存在。但有关其表达结构蛋白及两关系的研究很少。本研究旨在探讨DCM心肌组织肠道病毒结构蛋白VP1与其基因RNA的关系及病理意义。     

肠道病毒71型结构蛋白VP1的原核表达及初步鉴定

目的利用大肠杆菌表达系统表达EV71 VP1蛋白并对其抗原性进行初步鉴定;为EV71疫苗研制奠定基础。方法采用PCR扩增EV71 VP1基因2-274aa片段,并将其插入表达载体pET30a（＋）,转化Transetta（DE3）菌株,SDS-PAGE和Western Blot初步分析蛋白表达及抗原性;探讨目的蛋白的最佳表达条件。结果获得相对分子质量约为30 kD的融合蛋白,Western Blot证实其抗原性良好;该蛋白的最佳表达条件是37℃、1.0 mmol/L IPTG、诱导表达4 h。结论表达并鉴定了EV71 VP1抗原;本研究为EV71疫苗研制及检测试剂盒的建立奠定了基础。     

克山病的心肌损伤与肠道病毒感染及细胞凋亡关系的研究

本文对亚急型，慢型克山病各１０例尸检心肌组织切片分别用ＣＶＢ３的ｃＤＮＡ探针作原位杂交和ｏｎｃｏｒ公司的细胞凋亡原位检测试剂进行检测。     

克山病患者心肌组织细胞凋亡及结构蛋白Desmin异常表？…

探讨细胞凋亡及结构蛋白Ｄｅｓｍｉｎ异常表达与亚急型,慢型克山病的关系。方法应用原位末端标记法及免疫组化技术在亚急型和慢型克山病患者心肌石蜡包埋组织切片上进行细胞凋亡及Ｄｅｓｍｉｎ双重荧光染色,并应用共聚焦显微镜观察结果。结果克山病患者心肌组织中可见结构蛋白Ｄｅｓｍｉｎ的异常荧光染色及细胞凋亡。在Ｄｅｓｍｉｎ荧光染色变浅甚至消失,慢型克山病多表现为染色增强,或呈团状聚集于心肌细胞中间,或呈块状附于细     

肠道病毒71型VP1外壳蛋白二级结构及B细胞表位预测

目的预测肠道病毒71型（EV71）外壳蛋白VP1二级结构和B细胞表位,为制备EV71疫苗的研究提供理论基础。方法应用GOR4、HNN、SOPMA、nnPredict等方法预测EV71 VP1二级结构,并结合亲水性、柔韧性、表面可能性和吴氏抗原指数法综合预测潜在的B细胞表位。结果EV71 VP1二级结构以无规卷曲和β-片层为主,含有少量的α-螺旋,少见β-转角;EV71 VP1潜在的B细胞表位很可能位于第67-71位氨基酸残基。结论联合多种生物信息学方法成功预测了EV71 VP1二级结构和B细胞表位;此为制备EV71疫苗的研究提供了理论基础。     

慢型克山病患者心肌受损的心电图表现

克山病是一种原因不明的地方性心肌病。它在黑龙江省流行年代久远 ,危害严重 ,虽近年来一直呈低发趋势 ,但了解其病情变化仍十分重要。在克山病监测中心电图是反映病情活跃程度及其性质的重要指标。现将已往监测中慢型克山病患者心电图分析报告如下。1　资料分析　　本组 32 0例中男性 2 10例 ,女性110例。完全性右束支阻滞有 33例占10 .3% ,均见成人组。完全性右束支阻滞多和室性早搏、左前分支阻滞、左右分支阻滞、心房纤颤和 °房室传导阻滞并存 ,经过临床治疗后 ,少数病例可转为不完全性右束支阻滞。有 6 7例为不完全性右束支传导阻滞 …     

肠道病毒71型VP1蛋白二级结构及B细胞表位的预测

目的预测C4基因亚型肠道病毒71型的VP1蛋白二级结构及B细胞表位,为EV71疫苗研制提供理论基础。方法本研究将宁波地区EV71分离株与国内外EV71代表株进行同源性分析和并构建亲缘进化树。以VP1基因序列为材料,应用EX-PASY服务器上的GOR4、SOPMA两种方法分析预测蛋白质二级结构,并结合蛋白质的亲水性、柔韧性、表面可能性等指标综合评价VP1蛋白的B细胞抗原表位。结果同源性分析和亲缘进化分析得出,2010年宁波EV71分离株属于C4a基因亚型,与基因库检索到的C4a基因亚型代表株核苷酸和氨基酸同源性较高,分别为93.6%～99.3%和98.3%～100%。VP1蛋白二级结构以无规则卷曲和β-片层为主,有多处抗原指数较高的区段,结合亲水性、柔韧性、表面可能性等指标,综合预测VP1蛋白的B细胞抗原表位在第39～40、159～167、212～220、287～290位氨基酸残基的可能性较大。结论 EV71VP1蛋白多个区段具有抗原潜力通过生物信息学方法预测VP1蛋白二级结构及B细胞表位为EV71疫苗研制提供理论基础。     

一例胎儿克山病心肌检出肠道病毒RNA及凋亡细胞的探讨

一例胎儿克山病心肌检出肠道病毒ＲＮＡ及凋亡细胞的探讨周令望钟学宽牛美娟于祖熙既往研究报道母亲因患克山病可在其胎儿心肌上检出病变程度和性质相对应的病理改变，称其为胎儿克山病［１］。为探讨胎儿克山病与肠道病毒感染的关系，我们应用柯萨奇Ｂ３病毒的ｃＤＮＡ探...     

克山病患者心肌复极异常的预后意义

我们测定 5 0例克山病体表 12导联心电图 ,以QT间期离散度 (QTd)及QT最长间期 (QTmax)为判断心肌复极变化的指标 ,研究其与克山病远期预后的关系 ,报告如下。对象与方法对象　选择符合克山病诊断标准[1] 的患者 5 0例 ,(男18,女 3 2 ) ,年龄 2 5～ 61岁 ,平均 42 .5岁。心功能Ⅰ级 2 0例 ,Ⅱ级 2 3例 ,Ⅲ级 5例。剔除近 3周使用影响心肌复极的药物 (洋地黄除外 )及电解质紊乱者。 5 0例患者心胸比率 0 .46～ 0 .70 ,大于 0 .5 0者 42例 (占 84% ) ,左室舒张末期内径 47～73mm ,大于 5 5mm者 44例 (占 88% ) ,左室射血分数18%～ 65 % ,其…     

从住院慢型克山病病例特点分析克山病病情态势

目的探讨当前克山病流行特点,以便采取针对性的防治措施,并为病因学研究提供依据。方法收集、统计、分析了１９９３年至１９９７年５年间住院治疗的５６例慢型克山病病人的发病特点、临床表现、物理及器械检查结果,并与８０年代以前的病情做了比较。结果克山病的发病年龄推后,多以自然慢克的形式出现,１９９７年是住院慢克最多的一年。结论病区每年均有新发的潜在型克山病和自然慢型克山病发生,而且,发病的形式已不同于历史了     

双歧杆菌肠道内调控表达肠道病毒71型VP1蛋白的实验研究

目的构建重组肠道病毒71VP1基因双歧杆菌,制成口服疫苗,用于EV71感染预防。方法扩增EV71病毒VP1基因并将其插入到大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pBBAD/Xs中,构建VP1表达载体(pBBADs-VP1),通过Western blot检测VP1蛋白在pBBADs-VP1转化菌中的表达。选取BALB/c小鼠,分为B-VP1组、VP1组、GFP组和生理盐水组,B-VP1组口服pBBADs-VP1-转化双岐杆菌,VP1组腹腔注射大肠埃希菌表达纯化的重组VP1蛋白,GFP组口服pBBADs-GFP转化双岐杆菌,生理盐水组口服生理盐水,观察pBBADs-VP1-转化双岐杆菌口服免疫对EV71感染的免疫反应:包括病毒的中和抗体滴度、抗EV71-VP1抗体以及诱导脾脏和淋巴集结中Th1免疫反应。结果与GFP组及生理盐水组比较,B-VP1组及VP1组中和抗体滴度及抗EV71-VP1抗体水平,均显著增加;口服表达VP1蛋白长双歧杆菌和注射VP1蛋白都会诱导Th1细胞因子免疫反应(P<0.05),表达VP1蛋白长双歧杆菌较易诱导局部肠道的Th1模式,而注射VP1蛋白较易诱导全身性免疫。攻毒试验显示,VPI和B-VP1组新生鼠攻击后第15d(剂量1 000LD50)存活率分别为20.00%和16.67%,对照组无小鼠存活。结论利用长双歧杆菌表达VP1蛋白的口服疫苗可能成功激发针对EV71病毒感染的特异性免疫应答。用表达VP1的重组双歧杆菌免疫母鼠,可以赋予新生小鼠以保护。     

克山病患者红细胞膜C3b受体检测

本文用酵母补体花环形成试验对克山病患者和健康人进行了红细胞膜的 C_3b 受体检测,病人与健康人相比 C_3b 受体检出率明显降低(p<0.001),更有趣的是病区健康人明显低于非病区健康人(p<0.001),提示患者机体清除免疫复合物能力下降,病区存在某种影响 C_3b 受体的因素,有再研究的价值。     

潜慢型克山病患者柯萨奇B组病毒特异性IgM的检测

目的研究柯萨奇Ｂ组病毒（ＣｏｘｓａｃｋｉｅｖｉｒｕｓＢ,ＣＶＢ）感染与克山病发病的关系。方法采用间接酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）对陕西省黄陵县克山病病区潜、慢型克山病患者血清ＣＶＢ１－６ＩｇＭ和ＣＶＢ１－６ＩｇＧ进行检测。结果①潜在型、慢型克山病组血清ＣＶＢ１－６ＩｇＭ抗体阳性率明显高于非病区健康对照组（２８．５７％ｖｓ７．５％,Ｐ＜０．０５）,但明显低于心肌炎组（６０．００％,Ｐ＜０．０５）。②潜、慢型克山病组血清ＣＶＢ１－６ＩｇＧ抗体阳性率明显高于非病区健康对照组（３８．１０％ｖｓ７．５％,Ｐ＜０．０５）,但与心肌炎组比较无明显差异。结论病区潜、慢型克山病患者有ＣＶＢ感染存在     

克山病患者血清细胞间粘附分子1的变化及与柯萨奇B组病毒感染的关系

目的 探讨克山病患者血清可溶性细胞间粘附分子1（sICAM-1）的水平变化及与柯萨奇B组病毒（Coxsackievirus B，CVB）感染的关系。方法 利用酶联免疫吸附法及间接酶联免疫吸附法分别测定22例慢型克山病患者、27例潜在型克山病患者、28例健康对照者血清中sICAM-1和CVB—IgM特异性抗体。结果 潜在型、慢型克山病患者血清中sICAM-1水平均明显高于健康对照者（q值分别为9．00、18、75，P〈0．01），慢型高于潜在型（q=10．15，P〈0．01）。慢型克山病患者心功能越差，血清中sICAM-1水平越高；克山病患者组CVB—IgM阳性率显著高于健康对照组（χ^2=5．13，P〈0．05）；克山病CVB—IgM（＋）患者血清sICAM-1水平显著高于CVB—IgM（-）患者（t=2．87，P〈0．01）。结论 sICAM-1在克山病的发生与发展中起重要作用，其升高可能与柯萨奇B组病毒感染有关：sICAM-1水平可作为评价慢型克山病患者心功能程度的重要指标。     

O型口蹄疫病毒VP1蛋白单克隆抗体的制备与生物学特性鉴定

目的为了获得针对O型口蹄疫病毒的单克隆抗体,本研究采用差速离心、半饱和硫酸铵沉淀和蔗糖密度梯度离心法提纯O型口蹄疫病毒液,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞和SP2/0细胞融合,经ELISA方法筛选和3次亚克隆后获得2株稳定分泌表达的杂交瘤细胞株2C8和5G10,腹水抗体效价分别达到1∶6 400和1∶25 600。经亚类鉴定确定两株单抗均为IgM型,Western-blot、间接ELISA和IFA确定这2株单克隆抗体分别针对O型口蹄疫病毒VP1蛋白不同表位,从而,为研究FMDV的生物学特性和建立快速诊断方法的建立奠定了基础。     

应用PCR-SSOP技术对陕西克山病人HLA-DRB1基因分型的研究

目的 了解陕西克山病人HLA—DRBl基因多态性的特征。方法 应用PCR—SSOP技术对118例克山病人进行HLA—DRBl基因分型。结果 鉴定了克山病人HLA—DRBl位点的10种等位基因，其中高频率分布的有DRl5、DR4、DR9。结论 提供了一套比较完整准确的陕西克山病人DRB1等位基因的基因频率，对群体遗传和疾病关联研究具有参考意义。     

慢型克山病在心电图上的有关项目分析

目的 了解慢型克山病病人在心电图上的有关项目改变，更好的为这类病人的防治管理提供有价值的信息。方法 应用心电图检查慢型克山病，然后测量分析心电图的有关项目。结果 在心电图上的有关项目常见改变是QRS波、V5VAT、Q-T间期时间延长以及对心率的影响，其次是对V1和V5的R波和S波的影响。诊断异常的心电图常见的是室性早搏和室性早搏合并左室大劳损以及束支传导阻滞。合并多种异常的占54．3％，单项异常的占45．7％。被检病人两年中恢复正常的占7．9％(7／76)，死亡的占7．9％(7／76)。结论 占54．3％较重的病人在心电图上表现为QRS波、V5VAT、Q-T间期时间延长和心率的快或慢合并室性早搏和束支传导阻滞，对这些病人加强管理可延长生命但很难恢复其心脏的健康状态。占45．7％较轻的病人只有单项改变，对这些病人加强管理不但可延长生命而且还可以有望恢复心脏的健康状态。