微量免疫法制备兔抗PHA-L抗血清及PHA-L顺行追踪给药条件的探讨

<正> 将PHA-L(Phaseolus Vulgaris-Leucoagglutinin,植物血凝素L)导入中枢神经系统特定部位,在可能投射区作免疫组化染色,可取得理想的顺行标记结果。我们用Vector实验室产PHA-抗原,根据微量免疫法免疫家兔,获得了效价较好的兔抗PHA-L抗血清。成年雄性新西兰纯种兔三只,脚掌皮下注入Freund完全佐剂,待触及鼠膝部或腘窝淋巴结肿大成黄豆至蚕豆大小时,将与Freund不完全佐剂混匀成油色水状态的PHA-L抗原0.1ml注入每例动物肿大之淋巴结。一个月后于每例动物背部皮下多点注入抗原。又一个月重复注射。注射后12天耳缘静脉采血,用琼脂双扩法测抗血清效价,三例动物中,有一例动物效价为1∶32—1∶64。第14天颈动脉放血,分离血清。     

沙鼠IgG兔抗血清的制备及其在IgG抗体检测中的应用

目的用纯化的蒙古沙鼠血清IgG制备相应兔抗血清,并用于幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）疫苗免疫后沙鼠血清中抗原特异性IgG的检测。方法采用饱和硫酸铵沉淀法和Q sepharose high performance阴离子交换层析法纯化蒙古沙鼠血清IgG,免疫日本大白耳兔制备兔抗沙鼠IgG抗血清并进行rProtein A亲和纯化,建立间接ELISA方法用于检测Hp疫苗注射免疫蒙古沙鼠后血清抗原特异性IgG水平。结果以纯化的蒙古沙鼠血清IgG（纯度大于98％）免疫日本大白耳兔获得相应兔抗血清,经亲和层析后其纯度大于90％,回收率约为85％,双扩效价为1：16,ELISA效价为1：320000;ELISA检测结果显示Hp疫苗注射免疫蒙古沙鼠于第2次免疫后产生高水平IgG,第4次免疫后第7天IgG水平达到高峰,随后几周仍然保持高水平。结论所制备的兔抗沙鼠IgG抗体可以用于蒙古沙鼠血清中抗原特异性IgG的检测。     

结核分枝杆菌PPE68蛋白的表达、鉴定及抗血清的制备

目的在大肠杆菌中表达结核分枝杆菌PPE68蛋白,鉴定并纯化重组rPPE68蛋白后免疫新西兰大白兔,制备兔抗PPE68多克隆抗体。方法将已经过鉴定的重组原核表达质粒pET32a(+)-PPE68转化至大肠杆菌BL21中,IPTG诱导大量表达PPE68蛋白。对表达蛋白进行鉴定后利用亲和层析法进行纯化。以纯化后重组rPPE68为免疫抗原,与弗氏不完全佐剂等体积混合,采用皮下多点注射法免疫新西兰大白兔,于第3次免疫后的第7天采血。用凝集实验与Western-blot检测抗血清的特异性,并用双向免疫扩散法测定抗血清效价。结果在大肠杆菌中表达的目的产物经SDS-PAGE分析,在相对分子质量57 000处可见特异性条带,免疫印迹分析证实表达的目的蛋白可与结核分枝杆菌H37Rv株感染小鼠的血清发生反应。纯化的rPPE68蛋白免疫新西兰大白兔后,凝集反应与Western-blot证实了抗血清的特异性,双向免疫扩散法测得血清效价为1∶16。结论已成功表达结核分枝杆菌PPE68蛋白,制备了特异性兔抗PPE68多克隆抗体,对结核病的早期诊断提供了一种新的思路。     

检测体内异种Ⅱ型胶原异体移植引起的细胞毒反应

检测用猪Ⅱ型胶原免疫新西兰大白兔的异种异体细胞免疫反应。用Ⅱ型胶原免疫新西兰大白兔60d，定期抽取血浆检测抗Ⅱ型胶原抗体；第60d取兔的外周血淋巴细胞、兔脾细胞、淋巴结分别分离淋巴细胞，进行体外二次Ⅱ型胶原刺激，检测由此引起的反应性的细胞增殖规律。实验分为二组，第一组加入不同浓度植物血凝素（PHA）作阳性对照，并测定非特异性免疫；第二组加入不同浓度Ⅱ型胶原，检测特异性免疫。正常兔的淋巴细胞在PHA刺激下发生增殖，但对Ⅱ型胶原的第一次刺激不发生增殖，而免疫兔对PHA和Ⅱ型胶原的刺激均能发生显著的增殖。表明异种Ⅱ型胶原在一定浓度下．可以引起免疫兔的抗Ⅱ型胶原抗体的升高。并可引起兔脾、外周血淋巴细胞增殖，异种Ⅱ型胶原能在体内引起细胞免疫反应。     

不同免疫方案制备鼠抗PBP2a多克隆抗体的比较

目的制备针对青霉素结合蛋白（PBP2a）的抗血清，比较不同免疫方案的免疫效果。方法以基因工程重组PBP2a转肽酶区蛋白作为免疫原，采用多种注射途径（足垫、腹腔、足垫＋腹腔、足垫＋皮下）免疫BALB／C小鼠，ELISA和Western-blot法检测所制备的抗血清效价和特异性。结果足垫快速免疫组、腹腔免疫组、足垫和腹腔免疫组、足垫加皮下免疫组的效价依次为1：12800、1：25600、1：51200、1：102400。Western-blot显示所制备的抗血清能有效识别原核表达及耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（MRSA）临床分离株中的PBP2a。结论重组PBP2a蛋白免疫BALB／c小鼠能有效刺激特异性抗体的产生，足垫加皮下多点免疫法是一种值得推崇的免疫方案。     

纯种与杂种家兔的抗体应答能力比较

<正> 应用淋巴结内注射法,将卫氏并殖吸虫成虫生理盐水抗原(A-NS-Ag)以相同剂量免疫新西兰纯种白兔和普通杂种灰兔两组雄性家兔。每组各6只,体重3～5kg。免疫程序是在每只家兔双侧后足垫各注射0.5ml福氏完全佐剂(FCA),10天后,兔     

兔抗人乳酸脱氢酶C4(LDHC4)多克隆抗体制备与应用

目的 制备兔抗人乳酸脱氢酶C4(LDHC4)的多克隆抗体。方法 采用PCR点突变LDHC基因,并将该基因构建到pET-28a载体上,形成pET-28a-LDHC重组表达载体、将重组载体转化至大肠杆菌表达宿主BL21(DE3),诱导表达获得重组人LDHC4蛋白,将重组蛋白作为抗原免疫新西兰兔,3次加强免疫后得到抗血清,采用ELISA检测抗血清效价,采用Western blot法检测抗血清的特异性,采用免疫组织化学法检测人三阴性乳腺癌组织中LDHC4的表达。结果 获得了特异性的兔抗人LDHC4多克隆抗体,抗体效价达1∶51 200,该抗体可用于Western blot法和免疫组织化学法。结论 成功制备了特异性兔抗人LDHC4多克隆抗体。     

用免疫组织化学法检测自制NPY抗体的特异性和敏感性

本实验用戊二醛作偶联剂,将神经肽Y(NPY)偶联到牛血清白蛋白(BSA),制成NPY-BSA免疫原复合物。用它免疫新西兰大白兔,成功地制备了兔抗NPY抗血清。经免疫组織化学检测,其最高使用效价为1:1000～1:2000。替代试验和吸收试验均呈阴性反应。该抗血清能显示胃肠血管壁和脑底动脉管壁的神经纤维以及大鼠脑内的神经纤维及神经元胞体。它们的分布特点与进口NPY所显示的相一致。以上结果表明,该抗血清是对NPY特异性的且有较高使用效价。     

HCV 多中和抗原表位嵌合病毒样颗粒免疫获得血清内中和抗体评价

目的:纯化的HCV 多中和抗原表位及HCV 包膜蛋白E2 嵌合的HBV S 抗原病毒样颗粒免疫新西兰兔,测定免疫血清内的中和抗体。分析中和抗体对HCVpp 感染Huh7.5 的中和作用。方法:纯化的HCV 多中和抗原表位及包膜蛋白E2 嵌合的HBV S 抗原病毒样颗粒(VLPs-MEpS、VLPs-E2S)10 滋g 皮下接种新西兰兔,间隔2 周共免疫3 次,采集不同时间免疫兔血清,ELISA 方法测定血清内的抗体,PBS 组作为对照;制备1b 型HCVpp,观察血清抗体对HCVpp 感染Huh7.-5 的中和作用,对免疫血清保护性进行初步评价。结果:免疫后血清中产生一定水平的中和抗体,血清中和抗体测定VLPs-MEpS 明显高于VLPs-E2S(P<0.05)。VLPs-MEpS 与VLPs-E2S 组均显著高于对照PBS 组(P<0.01)。对HCVpp 抑制作用,VLPs-MEpS 高于VLPs-E2S 组(P<0.05),最高中和率可达61.49%,二者均高于对照组(P<0.01)。结论:嵌合病毒样颗粒免疫新西兰兔后产生一定水平中和抗体,该中和抗体具有保护作用,为研发中和抗体表位疫苗奠定基础。     

微量免疫法制备小鼠抗人补体C9抗血清

目的　建立一种简便有效的免疫方法 ,制备抗人补体C9抗血清。方法　将鉴定好纯度的免疫原稀释至恰当浓度 ,以硝酸纤维素膜吸附抗原 ,将之埋入小鼠背部皮下 ,并再次免疫 1～ 2次。间接ELISA法鉴定抗血清效价 ,免疫印迹实验鉴定抗血清的免疫反应特异性。结果　间接酶联免疫吸附实验滴定抗血清的效价约为 1× 10 -5,抗血清对正常人血清成分进行的免疫杂交实验得到特异性的C9蛋白条带。结论　以硝酸纤维素膜吸附抗原的微量免疫方案获得特异性和效价均佳的免疫效果。     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

Modes of Inheritance of Errors of Refraction

Eighteen families in which both parents had refractions within the range of +4·0 D to −4·0 D and axial lengths seen in emmetropia (22·3-26·0 mm) showed coefficients of correlation of the order 0·5 indicative of polygenic inheritance. Such coefficients were seen for axial length (0·407) and for the cornea (0·487), but not for the lens (which is known to be yoked to the axial length). No such coefficients were seen in 19 families in which one of the parents had axial length outside the emmetropic range (nine families with long axes and 10 with short axes).

The pattern of polygenic inheritance for emmetropia (completely correlated optical components) and errors of refraction up to 4·0 D (inadequately correlated components: correlation ametropia) follows that seen in stature and other measurable characters. In contrast the high refractive errors with their abnormal axial lengths (component ametropia) are—like the extremes in stature—pathological anomalies with monofactorial inheritance.

     

Aspects of the problem of direct introduction of Standards of International Organizations

Editorial note. This article is published as part of a discussion. Particular issues of the article are disputable. First of all, this concerns the so-called “folder” method of introduction of international standards for medical devices to domestic medical practice (i.e., by direct translation of the standards and their publication as standardizing documents). Nevertheless, at least one of the problems, the problem of coordination between domestic state standards for medical devices and international recommendations of ISO and IEC, is undoubtedly of topical importance. Advancement of new health service legislation which is to be approved by law-makers will definitely introduce corrections into the present situation. The Editorial Board of Meditsinskaya Tekhnika believes this article will lessen these problems and to be welcomed by readers.