CYP450酶抑制效应常用检测技术的研究进展

目的综述细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)酶抑制效应常用检测技术。方法查阅国内外近几年相关文献73篇,对CYP450酶抑制效应常用检测技术进行分析和归纳总结。结果检测CYP450酶抑制效应常用体内及体外两种模型,体内模型主要通过临床实验或动物实验联合高效液相色谱质谱联用或其他检测方法,测定给药前后CYP450酶探针底物代谢产物的变化量,反映药物对酶的抑制效应;体外模型中,常用肝微粒体与药物及相应探针底物共孵育后,检测探针代谢产物变化量初步反应药物对酶抑制效应,再利用药物处理原代或转基因细胞,通过相应检测技术测定细胞内CYP450酶相应的基因及蛋白表达量来研究药物对酶抑制机制。结论 CYP450酶抑制效应检测技术已趋于完善,为药物药代动力学和药效学研究提供了良好的保障。     

白藜芦醇抗蛋白质非酶糖基化和抗氧化活性研究

目的研究白藜芦醇抗蛋白质非酶糖基化和抗氧化活性。方法以儿茶素为对照,利用AGEs抑制剂体外筛选模型及抗氧化体外试验模型,对白藜芦醇的活性进行评价。结果白藜芦醇具有良好的抗蛋白质非酶糖基化和抗氧化活性,且具有剂量依赖性,抗蛋白质非酶糖基化作用优于儿茶素,抗氧化作用略差。结论本试验提示白藜芦醇在与糖基化或氧化作用密切相关的一些疾病的预防和治疗中具有潜在的应用价值,值得进一步研究开发。     

细胞色素P450酶系体外药物代谢研究方法进展

目的 综述细胞色素P450 (CYP 450)酶影响药物代谢的体外研究方法.方法 参考国内外文献,对与药物代谢相关的CYP酶亚型、CYP酶种属差异、CYP酶体外反应体系、药物主要代谢酶的确认方法及体外CYP酶的抑制和诱导,进行分类、归纳和整理.结果与结论 CYP 450在药物代谢中具有重要作用,药物代谢研究是新药评价体系中重要的一部分.     

大鼠肠系膜淋巴管内皮细胞体外培养方法的建立及鉴定

目的　建立分离大鼠肠系膜淋巴管的技术及其内皮细胞的培养方法并证实体外培养的大鼠肠系膜淋巴管内皮细胞具有合成一氧化氮及第Ⅷ因子相关抗原的能力。方法　利用手术显微镜及显微手术器械分离大鼠肠系膜淋巴管,采用植块培养法进行内皮细胞原代培养并传代培养。用免疫组织化学的方法鉴定第Ⅷ因子相关抗原及一氧化氮合酶在体外培养的大鼠肠系膜淋巴管内皮细胞中的表达。测定一氧化氮代谢产物的含量。结果　体外培养的大鼠肠系膜淋巴管内皮细胞呈梭形或多角形,形成单层后呈典型的鹅卵石样或铺路石样排列。第Ⅷ因子相关抗原的免疫过氧化氢酶染色反应阳性,阳性率 98%。一氧化氮合酶表达阳性率为83%,阳性反应产物在细胞核周围呈棕黄色。一氧化氮代谢产物含量(10 26±2 17)mol·L-1 (n=7 )。结论　本实验采用培养方法可行性强,简单可靠,保持了内皮细胞的结构和功能。并证实了体外培养的大鼠肠系膜淋巴管内皮细胞能表达一氧化氮合酶及第Ⅷ因子相关抗原。     

4-哌嗪喹唑啉苯甲酰胺类化合物的设计、合成及抗肿瘤活性研究

目的寻找新型苯甲酰胺类组蛋白去乙酰化酶(HDACs)抑制剂,探讨其初步构效关系。方法以恩替司他(MS-275)为先导结构,对其酶表面识别区、链接区及锌离子结合区进行改造,设计并合成了系列4-哌嗪喹唑啉苯甲酰胺类化合物。以取代4-羟基喹唑啉为原料,经氯代、氨解、水解制备苯甲酸类衍生物,然后与邻苯二胺或4-氟邻苯二胺经缩合反应制备目标化合物7a~7h;经体外组蛋白去乙酰化酶1抑制活性试验及对人结肠癌细胞HCT-116的抗增殖活性试验,进行目标化合物的活性评价。结果与结论共合成8个未见文献报道的新化合物,结构经质谱及核磁共振氢谱确认。体外初步活性试验表明,目标化合物均具有HDAC1酶抑制活性及抗肿瘤细胞增殖活性。与MS-275相比,目标化合物对HDAC1酶抑制活性减弱,但化合物体外对人结肠癌细胞HCT-116的抗增殖活性却优于或相当于MS-275,其中化合物7g对HCT-116抑制作用的IC50值为0.245μmol·L-1,具有进一步研究价值。     

黄芪总提物对体外肝细胞损伤的保护作用

目的研究黄芪总提物 (TEA)对体外肝细胞损伤的保护作用及其机理。方法采用Ⅳ型胶原酶灌流法分离大鼠肝细胞进行原代培养 ,用CCl4 和H2O2 体外分别诱导肝细胞损伤 ,检测肝细胞丙二醛 (MDA)、谷胱甘肽 (GSH)含量和谷胱甘肽过氧化物酶 (GSHpx)活性以及培养上清液中天门冬氨酸转换酶 (AST)和/或丙氨酸氨基转换酶 (ALT)水平。结果 (1)TEA(5～80mg·L-1)可明显降低或恢复由CCl4 升高的肝细胞MDA含量及肝细胞培养上清液中AST水平 ,还可使CCl4 降低的肝细胞GSH含量和GSHpx活性升高或恢复 ;(2)TEA(5～80mg·L-1)可使H2O2升高的肝细胞培养上清液中ALT水平和肝细胞MDA含量明显降低或恢复 ,还可使H2O2降低的肝细胞GHS含量和GSHpx活性明显升高或恢复。结论提示TEA对体外肝细胞损伤有直接保护作用 ,该作用可能与其抗氧化作用有关     

蛋白质(或酶)的体外定向技术在药物和疫苗中的应用

蛋白质 (或酶 )的体外定向进化是蛋白质工程的新策略 ,它通过模拟自然进化机制 ,在体外人为地对蛋白质或酶基因进行随机诱变 ,再结合特定的筛选方法定向选择所需性质的突变体 ,短期内在试管中完成在自然界需要几百万年的进化过程。由于该技术具有进化速度快、效率高、操作简便等特点 ,在蛋白质类药物、疫苗研制中具有极大潜力。     

胰酶联合Ⅱ型胶原酶法体外分离培养软骨细胞的分析

目的 通过原代软骨细胞的体外培养和鉴定,探讨胰酶联合Ⅱ型胶原酶法体外分离培养软骨细胞的可行性.方法 分离出兔鼻中隔软骨组织,用胰酶联合Ⅱ型胶原酶的方法进行消化,获取原代软骨细胞.使用倒置显微镜观察软骨细胞的形态及生长情况,并用甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组化及免疫荧光染色进行表型鉴定.结果 软骨细胞原代培养形成单层细胞需要7～8d,传代培养时间约2～3 d,细胞以圆形或类上皮细胞形态为主,甲苯胺蓝染色证实细胞可特异性合成糖胺聚糖,Ⅱ型胶原免疫组织化学染色及免疫荧光染色可证实细胞可特异性分泌Ⅱ型胶原.结论 本研究成功建立了简单易行的胰酶联合Ⅱ型胶原酶法体外分离培养大量纯净的软骨细胞,提高了消化速率,加大了细胞释放率,为组织工程气管软骨种子细胞的获取提供重要的技术支撑.     

兔雪旺细胞的培养方法及形态学研究

采用植块法及酶溶法对兔的坐骨神经组织雪旺细胞进行体外培养。培养获得的细胞经抗Ｓ－１００蛋白抗体ＡＢＬ法染色及形态学比较研究，证实为雪旺细胞。体外培养的雪旺细胞形态上表现为长梭形，胞体较小、突起纤长、核窄长或卵圆，倒置相差显微镜下观察胞体四周有亮边，细胞呈极性生长，常极与极、边与边相连，排列成“扭绳”状、网状或栅栏样。实验中发现植块法获得的雪旺细胞纯度较低，而酶溶法省时，雪旺细胞产量多、纯度高。文中对培养方法做了记述。     

10种黄酮类化合物对糖尿病致病机制中重要通路的抑制作用

目的:观察10种黄酮类化合物对糖尿病致病机制中4条重要通路的多靶点抑制作用,发挥中药多靶点、综合治疗的优势。方法:从正常大鼠脑组织中提取半纯化的蛋白激酶C(PKC)、肾脏组织中提取醛糖还原酶(AR)粗酶,Fenton试剂体外激发正常大鼠脑组织脂质过氧化生成丙二醛(MDA)及体外合成高级糖化终产物(AGEs),将上述酶或合成物与10种黄酮类化合物(终浓度为1 mg.mL-1)作用,观察黄酮类化合物对上述酶或合成物的抑制作用。结果:黄芩苷和灯盏花素对AR,PKC,AGEs及MDA均有不同程度的抑制作用。结论:上述结果提示此两种黄酮类化合物可以通过抑制上述4条通路来预防糖尿病及其并发症的发生,为进一步的机制研究及临床应用提供良好的实验依据。