黄芪抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的 探讨黄芪对乙型肝炎病毒抗原表达的抑制作用.方法 黄芪作用于体外培养的HepG 2.2.15细胞,观察黄芪对HepG 2.2.15细胞分泌HBsAg,HBeAg的影响及药物的细胞毒性.结果 黄芪作用于HepG 2.2.15细胞12 d后,对细胞的半数毒性浓度(CD50)1 500 ng/ml,对HBsAg和HBeAg抑制的半数有效浓度(ID50)分别为115.4 μg/ml和317.2 μg/ml,黄芪对HBsAg和HBeAg的治疗指数(TI)分别13.00,4.73.结论黄芪在体外细胞培养中对HBsAg及HBeAg的分泌有较好的抑制作用.     

黄芪甲甙体外抗乙型肝炎病毒的作用

目的：探讨黄芪甲甙对乙型肝炎病毒（HBV）的体外抑制作用．方法：以HepG2．2．15细胞株为细胞模型,分别加入不同浓度的黄芪甲甙和拉米夫定,于培养第3,6和9日收集培养上清液．通过MqT法观察药物对HepG2．2．15细胞株的影响,采用ELISA法及荧光定量PCR法,分析药物对细胞培养上清液中HBsAg,HBeAg及HBVDNA含量的影响．结果：黄芪甲甙具有一定程度的抗HBV的作用．黄芪甲甙给药9d,其HBsAg的50％抑制浓度（Ic50）为22．1mg／L,治疗指数（TI）为4．4;HBeAg的IC50为26．2mg／L,TI为3．72;细胞外HBVDNA的IC50为13．2mg／L,TI为7．4．拉米夫定也有抑制HBV的作用,但抑制作用较弱．结论：黄芪甲甙体外对HBV有抑制作用．     

荔枝核总皂苷体外抗乙型肝炎病毒的作用

0 引言 我国属乙型病毒性肝炎高流行区,2004年中国疾病预防控制中心调查显示我国HBsAg感染率高达9．09％．目前,尚没有理想的治疗慢性乙型肝炎的药物．我国有数千年应用中草药治疗疾病的传统和经验,从中已发现了不少抗乙型肝炎病毒（HBV）的药物．荔枝核是无患子科植物荔枝（Litchi chinensis Sonn）的成熟种子,又名荔仁或荔核,味甘、微苦,归肝、肾经,具有行气散结、祛寒止痛的功效．其化学成分包括皂苷、蒜质和脂肪酸等多种物质．研究发现,荔枝核黄酮类提取物对乙肝病毒HBsAg,HBeAg以及HBVDNA有明显的抑制作用．但荔枝核皂苷是否具有抑制HBV的作用,目前尚未见文献报道．我们采用HepG2．2．15细胞为靶细胞,观察不同浓度荔枝核总皂苷体外对HBV的抑制作用．     

MAP30 抗乙型肝炎病毒的体外实验

目的 :探讨MAP30 (momordicaanti HIV proteinof30ku)体外抗乙型肝炎病毒 (HBV)的作用 .方法 :以HBVDNA转染的人肝癌细胞株 (HepG2 .2 .15 )为靶细胞 ,与MAP30共同温育 10d ,观察对细胞的毒性 ;用ELISA、荧光定量PCR和Southern印迹法分别检测培养上清中HBsAg ,HBVDNA和细胞内HBVDNA .结果 :MAP30能显著减少HepG2 .2 .15细胞培养上清液中HBsAg ,HBVDNA的分泌 ,在第 8日时 ,对HBsAg抑制率为 5 0 .4 9% ,HBVDNA定量 <1× 10 7拷贝·mL-1;Southern印迹法显示MAP30能抑制HBV复制中间体及共价环状闭合DNA .MAP30未发现对细胞有毒性作用 .结论 :MAP30具有较强的体外抗HBV作用 ,作为新的抗病毒植物蛋白 ,具有其临床应用价值     

Adefovir抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的在体外细胞培养研究中,观察Adefovir抗HBV的作用.方法以乙型肝炎病毒(HBV)DNA转染的细胞株2.2.15细胞为靶细胞,给药后通过检测细胞培养液中HBsAg、HBeAg和HBV DNA,对Adefovir抗HBV效果进行评价.在2.2.15细胞培养基中分别加入不同浓度的药物,培养数天后检测上清液中HBsAg和HBeAg滴度,细胞DNA抽提液检测HBV DNA;用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色分析法检测药物对细胞的毒性.结果 Adefovir加入细胞培养12d,最大无毒浓度为20μg/ml,对HBsAg抑制率为52.44%,对HBeAg抑制率为54.87%,对HBV DNA抑制率为45.68%,并有剂量依赖效应.结论 Adefovir在体外细胞培养的实验中有抗HBV病毒作用.     

TLR7配体Loxoribine抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的 探讨TLR7配体Loxoribine对乙型肝炎病毒的抑制作用。方法 采用MTT法观察Loxoribine药物对体外培养HepG2.2.15细胞的毒性作用,ELISA及荧光定量PCR法分析药物对细胞培养上清液中HBsAg、HBeAg及HBV DNA含量的影响。结果 低浓度Loxoribine对体外培养的HepG2.2.15细胞生长有一定抑制作用,但随着药物浓度增高,对细胞生长并无明显毒性作用。Loxoribine可有效地抑制HepG2.2.15细胞HBV DNA的复制及HBsAg的分泌,并随着药物浓度的增加和作用时间的延长,对HBsAg抑制率增大,而对HBeAg的分泌无抑制作用。结论 Loxoribine在体外具有抗乙型肝炎病毒的作用。     

乙型肝炎病毒对肾小管上皮细胞直接作用的实验研究

目的：探讨乙型肝炎病毒（HBV）在体外对人肾小管上皮细胞（HKC）的直接致病作用。方法：①HBV体外感染HKC：培养的HKC传至6孔板中，接种密度为1×10^6个／ml，孵育24h后分受感染和阴性对照两组。受感染组加入0．5ml HepG2．2．15细胞上清液（含有HBV）；阴性对照组加入0．5ml 10％FCS—DMEM／F—12培养液。两组HKC继续孵育72h，消化，离心沉淀，PBS清洗，实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）检测两组HKC中的HBV DNA含量。②HBV对体外培养的HKC细胞直接作用：HKC细胞传至24孔板中，接种密度为1×10^5个／ml，受感染组分三个亚组，分别加入100μl、200μl和300μl的感染用HepG2．2．15细胞上清液；阴性对照组为接种HKC后加入培养液常规培养；阳性对照组为HepG2．2．15细胞上清液。各组的每孔终体积均为2ml，每组设3复孔。孵育72h后收集各孔上清液，ELISA法检测转化生长因子β1（TGF-β1）的表达。结果：①受感染组HKC的基因组中检测到HBV DNA。②受感染组的三个亚组细胞培养上清的TGF-β1与阴性对照组比较差异均有显著性。结论：HBV可感染HKC并促进其分泌TGF-β1。     

Bay41-4109抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的 观察Bay41-4109对2.2.15细胞分泌乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)和乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)DNA的影响,探讨Bay41-4109的体外抗HBV作用.方法 将一定浓度的Bay41-4109加入培养的2.2.15细胞,通过四甲基偶氮唑...     

仙草抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的：观察仙草体外抗乙型肝炎病毒（HBⅥ的活性。方法：以HepG2．2．15细胞株为模型,用微粒酶免疫测定技术（MEIA）检测细胞培养上清液中FIBsAg、HBeAg含量,用PCR荧光定量技术检测细胞上培养上清液中HBVDNA的变化,以MTT比色法观察药物的细胞毒性。结果：仙草对HepG2．2．15细胞的Tc50为37．45mg／mL,对抑制HepG2．2．15细胞分泌HBsAg和HBeAg的治疗指数分别为14．71和39．42。对HBV—DNA仅有微弱抑制作用。结论：仙草在体外细胞培养中具有直接抗HBV活性。     

乙型肝炎病毒感染正常人肾小管上皮细胞的实验研究

目的探讨正常人肾小管上皮细胞（HKC）对乙型肝炎病毒（HBV）的易感性。方法（1）体外培养的HKC传至6孔板中,接种密度为1×10^6个／ml,孵育24h后分受感染和阴性对照两组。受感染组加入0．5mlHepG2．2．15细胞上清液（已知该体外培养的细胞系可随细胞传代释放HBV病毒颗粒）;阴性对照组加入015mI10％FCS—DMEM／F-12培养液。两组HKC继续孵育72h,消化、离心沉淀,PBS清洗,实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）检测两组HKC中的HBVDNA。（2）将HKC细胞传代并接种至2个6孔板中盖玻片上制作细胞爬片,接种密度为1×10^6个／ml,24h后行HBV感染实验。然后将两个6孔板分别作为：（1）受感染组：往六孔板中加入制备好的感染用HepG2．2．15细胞上清液2ml;（2）阴性对照组：往六孔板中加入2mI10％FCS—DMEM／F－12培养液。将HepG2．2．15细胞分别传代并接种至6孔板中盖玻片上制作细胞爬片,接种密度为1×10^6个／ml,24h后作为阳性对照组：往六孔板中加入2ml10％FCS—DMEM培养液继续孵育72h,原位杂交检测各组中的HBVDNA。结果实时荧光定量聚合酶链反应检测到受感染组HKC的基因组中HBVDNA的存在,受感染组HKC原位杂交检测HBVDNA阳性,呈核型。结论体外培养的正常HKC对HBV易感。     

自制枝莲清肝胶囊抑制乙型肝炎病毒活性的体外实验

目的观察枝莲清肝胶囊抑制乙型肝炎病毒（HBV）的活性。方法以HepG2.117细胞为模型,分为3组：空白对照组、枝莲清肝组（1000μg/ml）、拉米夫定组（5μg/ml）,用酶联免疫试验法（ELISA）检测细胞培养上清液中HBsAg、HBeAg的变化,用荧光定量PCR法检测细胞培养上清液中HBV DNA的变化,以MTT比色法观察药物对细胞的毒性作用。结果细胞毒性实验显示,2个药物组与空白对照组比较,OD值差异无统计学意义（P〉0.05）,表明2种药物对HepG2.117细胞的生长无毒性作用。枝莲清肝组24h和72 h对HBsAg的抑制率分别达30.1%和36.3%,对HBeAg的抑制率分别达6.4%和26.7%;PCR检测显示枝莲清肝胶囊能降低HBV DNA水平。除72 h时对HBsAg的抑制率低于拉米夫定组外（P〈0.05）,2组其余指标比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论枝莲清肝胶囊在1mg/ml浓度下有抑制HBV DNA和HBsAg、HBeAg的作用。     

太白楤木总皂苷体外对乙肝病毒HBsAg、HBeAg的影响

目的 观察太白楤木总皂苷体外对乙肝病毒HBsAg和HBeAg的影响.方法 以HepG 2215细胞为靶细胞,分别用不同浓度的太白楤木总皂苷和拉米夫定培养液培养,采用ELISA法测定细胞培养上清HBsAg、HBeAg 含量,评价太白楤木总皂苷对体外HBV的抑制作用.结果 太白楤木总皂苷对体外培养HepG 2215细胞分泌的HBsAg、HBeAg的50％抑制浓度(IC50)分别为0.1、0.09 g/L,治疗指数(therapeutic index TI)分别为6.12、7.51.0.25g/L拉米夫定组和0.4 g/L太白楤木组在第3、6天对体外培养HepG 2215细胞分泌的HBsAg、HBeAg抑制作用差异无统计学意义(P＞0.05).结论 太白楤木总皂苷具有一定的体外抗HBV作用.     

阳离子脂质体对反义寡核苷酸抗乙型肝炎病毒作用的促进

目的 :考察阳离子脂质材料 3β [N (N′,N′ 二甲基胺乙基 )胺基甲酰基 ]胆固醇 (3β [N (N′,N′ dimethylaminoethane) carbamoyl]cholesterol,DC chol)与反义寡核苷酸 (antisenseoligodeoxynucleotide ,asODN)的结合能力及asODN阳离子脂质体的细胞毒性和抗病毒活性。方法 :以DC chol从水相中萃取asODN的萃取率评价不同条件下DC chol与asODN的作用力 ;通过四唑盐比色法检测含DC chol的阳离子脂质体对HepG2 2 .2 .1 5的细胞毒性 ;以酶联免疫法 (ELISA)检测细胞上清培养液中HBsAg和HBeAg的含量 ,考察不同asODN阳离子脂质体的抗病毒活性。结果 :当正负电荷比 >0 .6时 ,DC Chol能有效的从水相中萃取asODN (萃取率 80 %～ 1 0 0 % ) ;碱性条件和强离子 (Na+ /Cl-)的存在不利于DC Chol与asODN的作用 ;DC chol阳离子脂质体具有一定的细胞毒性 ,在低质量浓度时 (0 .84～ 2 6 .94mg·L-1 )脂质体的细胞毒性与DC chol浓度成正比 ;当asODN在 1 .2 5～ 5 .0 0 μmol·L-1时 ,其抗病毒活性与剂量相关 ;脂质体可提高asODN对乙肝病毒的抗病毒活性 ,其中阳离子脂质体对asODN抗病毒活性的促进作用较明显 (从 6 0 %到 95 % )。结论 :表面修饰DC Chol阳离子脂质体能有效地促进asODN的抗乙肝病毒活性。     

乙肝病毒父婴传播阻断研究

流行病学研究和分子生物学研究证明存在乙肝病毒父婴传播。传播途径是水平传播和通过精细胞传播。主/被动免疫是现今主要的传播阻断技术,抗病毒核苷类药物也开始试用。     

乙肝病毒感染或携带产妇检测乳汁乙肝病毒DNA结果分析乙肝病毒感染或携带产妇检测乳汁乙肝病毒DNA结果分析

目的：研究乙肝病毒（HBV）感染或携带产妇乳汁中的HBV-DNA含量,探讨HBV携带产妇乳汁的传染性。方法：对86例HBV携带产妇的血清和乳汁进行HBV检测,根据产妇HBV血清标志物分为大三阳组（A组23例）、小三阳组（B组34例）和双抗阳性组（C组29例）,分析各组血清中HBV含量与乳汁中HBV-DNA含量的关系。结果：大三阳组的乳汁HBV-DNA阳性率最高（78.3%）,双抗阳性组的HBV-DNA阳性率最低（10.3%）,经检验大三阳组的产妇乳汁中HBV-DNA阳性率显著高于小三阳组和双抗阳性组（χ2=26.74,P〈0.001）。当HBV-DNA≥106 copies/ml时,乳汁中才能检出HBV-DNA阳性。结论：产妇血清中HBV水平的高低与乳汁中HBV成正相关关系。血清中HBV-DNA检测结果小于106 copies/ml时,乳汁中未检测出HBV-DNA阳性,此时建议对婴儿采取一定的免疫预防措施,可继续母乳喂养。     

某校大学生乙型肝炎血清学标志物检测结果分析

目的了解目前大学生乙型肝炎的感染情况,探讨在大学生中乙肝病毒血清标志物的表现模式及其构成比,不同模式的传染性及流行病学意义。方法采用分层抽样法抽取某校227名在校大学生,用酶联免疫试验方法（ELISA）检测血清乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗体（抗-HBs）,乙肝病毒e抗原（HBeAg）,乙肝病毒e抗体（抗-HBe）,乙肝病毒核心抗体（抗-HBc）,同时配以相应的问卷调查,收集相关的信息。用卡方检验分析乙肝总阳性率与各因素的关系。结果 227份血清标本检共出HBV血清标志物171份,总阳性率为75.3%。其中HBsAg阳性率为3.1%,抗-HBs阳性率为72.2%,HBeAg阳性率为1.3%,抗-HBe阳性率为5.3%,抗-HBc阳性率为11.0%,同时组成9种血清学模式。分析发现与乙肝总阳性率有关的因素有：是否接种过乙肝疫苗（χ2=16.646,P〈0.05）,来自农村还是城市（χ2=4.239,P〈0.05）。结论调查的大学生HBsAg携带率低于全国平均水平,抗-HBs阳性率高于全国平均水平,乙肝疫苗的接种有效地降低了乙肝感染率。     

以S区为靶位的小干扰RNA抗乙型肝炎病毒的实验研究

目的以乙型肝炎病毒（HBV）S基因区为靶位,构建表达siRNA的质粒载体pSilencer3．1-H1hygro,体外观察siRNA抗HBV的效果。方法以HepG2．2．15细胞为靶细胞,利用脂质体Metafectene转染表达siRNA的质粒载体pSilencer3．1-H1hygro于细胞中,用时间分辨免疫荧光分析法（IFMA法）检测细胞上清中HBsAg和HBeAg,用定量聚合酶链反应（FQ—PCR）检测细胞上清DNA,用逆转录（RT）-PCR检测HBV mRNA。结果成功构建了表达siRNA的转录质粒载体,siRNA可抑制HBV的抗原表达和病毒复制,1、2、4μgsiRNA对HBsAg的抑制率分别为75％、82％、89％;对HBeAg的抑制率分别为32％、38％、43％;对HBVDNA的抑制率分别为30％、43％、49％;对HBVRNA的抑制率分别为30％、70％、90％。结论靶向HBVS区的siRNA能抑制HBV的抗原表达和复制;siRNA抑制作用呈剂量依赖性和序列特异性。