分子信标技术和毛细管电泳技术结合进行基因检测

近年来疾病与基因的联系已成为医学研究的热点 ,基因水平的分析及评估对疾病的综合防治有深远意义。毛细管电泳技术和分子信标技术都是近几年新兴并逐步走向成熟的现代分子生物学技术 ,这两种技术的结合可以极大地提高基因检测的准确性和灵敏度 ,此方法学的建立为无数需要基因诊断的患者带来希望 :将极大推动医学检验技术、分析化学领域向分子水平、更精确、更灵敏的方向发展     

毛细管电泳技术与分子信标技术结合检测基因

目的：研究毛细管电泳技术和分子信标技术结合进行基因检测，建立一种简便、敏感、特异和快速自动化的基因检测的新方法学。方法：提取胃癌患者的癌组织及癌旁组织DNA，PCR扩增p16基因外显于2，进行琼脂糖电泳检测，SSCP分析，PCR扩增产物与自行设计探针杂交后毛细管电泳检测。结果：有p16外湿子2 PCR扩增产物的癌组织与分子信标探针液相杂交后毛细管电泳仪检测可见检测峰。结论：毛细管电泳技术和分子信标技术结合检测基因产物是在临床及基础研究中可作为一种基因产物检测的实用手段。     

分子信标与毛细管电泳--激光诱导荧光检测联合筛查野生型基因

目的 利用毛细管电泳——激光诱导荧光检测系统(CE—LIF)和分子信标杂交理论，建立一种新的聚合酶链反应(PCR)产物分析方法，以应用于野生型基因的临床筛查。方法 PCR扩增30例胃癌组织DNA的p73基因第3外显子、p53基因第5外显子和p16基因第2外显子，所得PCR产物与分子信标杂交，利用CE—LIF检测杂交产物，检出野生型基因。对照方法为单链构象多态性(SSCP)分析。结果 CE—LIF分子信标法与SSCP分析相比较，测得p73第3外显子野生型百分率分别为100％和100％；测得p53第5外显子野生型百分率分别为60．0％和63．3％(P=0．99)；测得p16第2外显子野生型百分率分别为20．0％和20．0％。结论 利用分子信标与CE—LIF联合检测野生型基因，是一种良好的筛选方法，高效快速、简便、成本低，适宜应用于临床。     

分子信标毛细管电泳技术联合检测哮喘患者白细胞介素13基因多态性

目的　利用分子信标杂交和毛细管电泳理论 ,建立一种新的基因突变检测方法 ,应用于疾病的基因诊断。探讨白细胞介素 (IL) 13外显子 4单核苷酸多态性 (SNP)A2 0 4 4G与中国北方人群哮喘易感性的相关关系。方法　扩增 32例有明显支气管哮喘家族史的患者和 2 0名健康对照者的IL 13exon 4 ,所得PCR产物与分子信标杂交 ,利用毛细管电泳检测杂交产物 ,并进行序列测定。结果分子信标和毛细管电泳 ,联合检测支气管哮喘患者IL 13exon 4第 2 0 4 4位基因型 ,为A的频率是31 2 % ,为G是 6 8 8% ,与测序结果相同。经统计学分析 ,支气管哮喘患者与健康对照者的等位基因频率差异具有显著意义 (χ2 =2 4 3,P <0 0 1)。结论　分子信标毛细管电泳联合技术高效、特异、灵敏 ,可对PCR产物进行分析 ,适用于碱基突变的检测。IL 13 2 0 4 4位A/G多态性与支气管哮喘的发病密切相关。     

多重PCR联合毛细管电泳技术检测碳青霉烯酶基因

目的 建立并评价多重PCR联合毛细管电泳技术(mPCR?CE)同时检测碳青霉烯酶基因blaKPC、blaNDM、blaOXA?48和blaVIM的方法.方法 设计特异性引物,建立多重PCR扩增体系,利用毛细管电泳检测扩增产物.以携带blaKPC、blaNDM、blaOXA?48和blaVIM的细菌作为阳性对照菌株,以携...     

分子信标法与血清学方法检测肺炎支原体的比较

[目的]建立检测肺炎支原体的分子信标方法并与血清学方法进行比较，探讨其临床应用价值。[方法]建立实时定量分子信标方法，检测150例患者标本，并与不同时期的血清学结果进行比较。[结果]150例呼吸道感染患儿中57例（38％）分子信标法阳性，就诊当日和7d后血清学阳性例数分别为lS（10％）和42（28％），与分子信标法比较，均有显著性差异（P〈0.01和P〈0．05）。[结论]分子信标法检测肺炎支原体的灵敏度显著高于血清学方法，可以应用于肺炎支原体感染的早期诊断。     

分子灯塔技术及其在基因检测研究中的应用

分子灯塔 (Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｅａｃｏｎｓ)是近年兴起的利用核酸杂交技术对核酸分子进行检测的新技术 ,由纽约市公共健康研究协会的Ｔｙａｇｉ等[1] 于 1996年首先建立。因其在与核酸分子互补结合之后荧光素便能开始发光 ,故称为“分子灯塔”。它的建立为研究核酸分子的组成、含量及对ＰＣＲ过程中进行实时监测提供了快速、特异、方便的新方法 ,在基因检测领域有着广阔的应用前景。现试就其构成、原理、热力学特性、优缺点及在基因检测中的应用作一简要综述。一、分子灯塔的构成、原理及热力学特性分子灯塔是具有“发夹”样结构的单链寡…     

PCR结合毛细管电泳技术用于FMR1基因前突变家系分析

目的应用PCR结合毛细管电泳技术检测FMR1基因CGG重复数并对一个前突变家系进行分析。方法采用PCR结合毛细管电泳方法检测FMR1基因前突变家系成员的CGG重复数。结果咨询者CGG重复数为54/55,父亲为56,母亲为32/55,妹妹为33/58,弟弟为54,丈夫为37。结论 PCR结合毛细管电泳技术能快速检测FMR1基因CGG重复数,并能对FMR1基因前突变进行准确诊断。     

微流控芯片电泳技术检测肿瘤患者血浆中p16基因甲基化的应用

p16基因甲基化是癌症诊断的标志物之一。目前检测p16基因甲基化的甲基化特异性聚合酶链反应法（MSP）灵敏度有限，对血浆中脱落肿瘤细胞少的标本易报告为假阴性。而微流控芯片电泳技术具有高灵敏度、成本低、分析速度快等特点。本研究用微流控芯片电泳技术检测肿瘤患者血浆中p16基因异常甲基化，并探讨其临床应用价值。     

毛细管电泳技术检测血和尿百草枯的临床应用

目的应用毛细管电泳技术检测血清和尿液中的百草枯,观察百草枯浓度与病程及预后的关系。方法应用高效毛细管电泳技术,在区带电泳模式下,建立测定血清和尿液中百草枯含量方法。检测连云港市第一人民医院2011年1月至2013年6月收治的35例百草枯中毒患者血、尿液百草枯浓度,动态观察中毒患者灌流前后血、尿百草枯变化,探讨百草枯变化与中毒患者预后的关系,采用Spearman相关分析血、尿百草枯相关性。结果存活组血清和尿液中百草枯含量显著低于死亡组,两组比较差异有统计学意义(P<0.01),在我们观察到的病例中,血液百草枯≥5.1μmol/L全部死亡;无论是血液还是尿液中的百草枯含量均随着灌流次数的增加而迅速降低,但降低程度与死亡发生率无关。血、尿中百草枯含量呈正相关(r=0.716 1,P<0.01)。结论毛细管电泳检测血、尿百草枯方法简单、快速,结果可靠,检测结果对指导临床制订治疗方案及判断预后具有重要价值,是用于临床急诊常规开展较为理想的方法。     

遗传因子和个性化分子检测在心血管疾病中的作用

心血管疾病包括心脏病和血管疾病。目前已有上百个心血管疾病相关基因被检测出来,一些功能基因的突变对心血管疾病的发生有很大影响甚至直接相关。随着研究的深入,越来越多的遗传因子被发现与遗传性心血管疾病有关。在这些心血管疾病中,全基因组扫描、DNA微阵列分析与单核苷酸多态性分析等新兴的高通量分子检测技术的运用在疾病基因筛查、定位上发挥了巨大的作用。本文主要围绕与心血管疾病有关的遗传因子及分子检测方法进行综述,并探讨分子检测运用于心血管疾病临床诊断的前景。     

混合样品中微量SRY基因的毛细管电泳检测

目的建立一种灵敏度高、重现性好的检测混合样品中微量目的基因的方法。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增混合样品中微量男性ＤＮＡ的ＳＲＹ序列，分别通过琼脂糖凝胶电泳和毛细管电泳检测ＰＣＲ扩增产物，比较二者的检测灵敏度。结果毛细管电泳可检测到２０ｐｇ男性模板ＤＮＡ（相当于３～４个细胞中的ＤＮＡ含量）ＰＣＲ扩增产物总量的１／６００，琼脂糖凝胶电泳可检测到７４ｐｇ男性模板ＤＮＡ（相当于１３个细胞中的ＤＮＡ含量）ＰＣＲ扩增产物总量的１／３。毛细管电泳检测微量目的基因扩增产物的综合灵敏度是琼脂糖凝胶电泳的７５０倍。结论毛细管电泳灵敏度高、重现性好，与ＰＣＲ技术结合可广泛用于各种混合样品中微量核酸分子的检测。     

混合样品中微量SRY基因的毛细管电泳检测

建立一种灵敏度高，重现性好的检测混合样品中微量目的基因的方法。方法采用聚合酶链反应扩增混合样品中微量男性ＤＮＡ的ＳＲＹ序列，分别通过琼脂糖凝胶电泳和毛细管电泳检测ＰＣＲ扩增产物，比较二者的检测灵敏度。     

分子信标荧光定量PCR检测结核分枝杆菌的反应体系优化方法对比研究

目的建立分子信标荧光定量PCR检测结核分技杆菌的最佳反应体系,探讨影响分子信标荧光定量PCR扩增结果的多个因素。方法利用单因素法和正交实验法,从MgCl2,引物,分子信标探针,dNTP,Taq DNA聚合酶5种因素对分子信标荧光定量PCR反应体系进行优化,并对这两种方法所得的最优体系进行比较。结果单因素法得到的最优反应体系（25μl）为：4mmol／L MgCl2,上、下游引物各0．3μmol／L,分子信标探针0．1μmol／L,200μmol／L dNTP,2U Taq DNA;正交法得到的最优反应体系（25μl）为：6mmol／L MgCl2,上、下游引物各0．2μmol／L,分子信标探针0．1μmol／L,100μmol／L dNTP,3U Taq DNA聚合酶,正交法得到的最优反应体系的荧光定量PCR扩增曲线形状更好,Q值较小,△Rn较大。结论采用正交法得到的荧光定量PCR反应体系优于单因素法,进行实时荧光定量PCR反应体系优化时,正交实验设计是一条科学、可靠、高效、快捷的途径。     

毛细管电泳法检测多瘤抑制基因p16点突变

多瘤抑制基因 (ＭＴＳ 1/ｐ16 )的突变、缺失广泛存在于多种类型的肿瘤细胞中 ,对该基因的检测可为肿瘤的诊断提供参考。目前 ,大多采用聚丙烯酰胺凝胶电泳 (ＰＡＧＥ)技术进行基因点突变的检测 ,此法存在着操作繁琐费时和非自动检测的弊端。我们将毛细管电泳 (ＣＥ)技术应用于ＭＴＳ 1基因突变的检测之中 ,并对该法检测ＭＴＳ 1基因点突变的可行性进行了初步的验证。一、材料1 标本 :ＭＴＳ 1基因 1,2外显子正常对照 (北京医科大学病理学教研室提供 ) ;乳腺组织标本取自我院 1995～ 1998年病理科保存的蜡块包埋组织 ,所有标本均经临床病理…     

单分子ELISA技术检测的临床应用

近年来,蛋白质和核酸的检测方法发生很大突破,超微量反应体系能很大程度地提高检测方法的敏感度。单分子ELISA技术是一种有潜力的蛋白质检测方法,其通过分离单分子进行测量,实现精准定量,而不是进行整体测量反映平均水平。与传统ELISA相比,单分子ELISA技术具有高分辨率、灵敏、低背景信号、低样本量、分析时间短等优点,能在复杂样本中进行低浓度蛋白质的检测,能广泛应用于监测HIV早期感染、癌症化疗切除后复发、神经系统疾病以及炎性疾病的发生、发展等方面。     

嗜吞噬细胞无形体的分子检测技术研究进展

嗜吞噬细胞无形体(AP)主要引起人类经蜱叮咬传播的人粒细胞无形体病(HGA)。快速、准确的针对HGA的检测技术能够有效地控制其爆发,减少死亡病例。目前AP感染的诊断方法有临床诊断、血清学诊断、形态学诊断、分子生物学诊断等。其中AP分子检测技术特异性高、操作简便,快速,是目前对AP感染诊断的常用方法。针对AP分子检测主要方法包括巢式PCR(nested PCR)、实时定量荧光PCR(real time PCR)、环介导等温扩增技术(LAMP)等。三类分子检测技术各有优缺点,应根据具体情况选用适当的检测手段,提高AP感染的早期诊断准确率。     

多重RT-PCR联合毛细管电泳法检测BCR-ABL融合基因

目的建立多重逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)联合毛细管电泳法检测BCR-ABL融合基因,以期应用于慢性粒细胞白血病(CML)辅助诊断。方法采用重叠延伸法构建BCR-ABL融合基因阳性模板,设计并优化检测BCR-ABL融合基因的多重RT-PCR联合毛细管电泳体系,对检测体系进行初步的性能评估。结果多重RT-PCR技术检测BCR-ABL融合基因(e1a2、e13a2和e14a2)的最低检测限在102~103拷贝/μL;50例临床确诊CML的患者应用该法检测BCR-ABL融合基因的阳性率为86.0%,其中e13a2型(20.0%),e14a2型(66.0%);本方法与骨髓细胞培养染色体核型分析相比,阳性符合率为97.6%,阴性符合率为75.0%,总符合率为94.0%,2种方法具有较高的一致性(Kappa=0.765,P0.05)。结论成功建立检测BCR-ABL融合基因的多重RTPCR联合毛细管电泳方法。该方法操作简单快捷、特异性好、灵敏度高,适合于临床上CML的辅助诊断和分子分型。     

肿瘤基因检测与分子靶向治疗

近年来,随着肿瘤相关基础研究进展和一些技术方法的成熟和应用,如分子遗传、信号转导、生物信息学、蛋白质组学、基因组学、DNA重组、杂交瘤技术和生物芯片技术等,肿瘤分子靶向治疗进展迅速。自1997年11月美国食品药物管理局(FDA)批准利妥昔单抗用于非霍奇金淋巴瘤的靶向治疗以来,     

查菲埃立克体分子检测技术研究进展

查菲埃立克体(Ehrlichia chaffeensis,EC)主要引起人单核细胞埃立克体病(human monocytic ehrlichiosis,HME),该病无特异的临床症状而容易误诊,延误治疗可使病情加重甚至造成患者死亡,故对HME实现早期诊断很重要。该文从临床诊断、血清学诊断、病原学诊断到分子生物学诊断等方面对HME的诊断方法进行总结,并着重介绍操作简单、敏感且高效的分子生物学诊断技术。