牙髓培养细胞特性与牙髓干细胞定位

目的 比较人牙根髓与冠髓培养细胞的特性，探讨牙髓干细胞在牙髓中的定位。方法：用组织块法分别培养人根髓、冠髓细胞，观察并比较两者的培养成功率、细胞贴壁率、细胞活性、增殖特性、细胞形态以及细胞诱导矿化能力，以探讨牙髓干细胞在牙髓组织中的定位。结果：培养的根髓细胞比冠髓细胞具有较高的成功率和贴壁率、较强的细胞活性以及相同的增殖活性，根髓细胞比冠髓细胞的形态更具有原始性，根髓比冠髓更易诱导矿化。结论：牙髓干细胞可能存在于全部牙髓之中，在根髓中比冠髓中具有更高的密度．     

体外培养的人牙髓细胞、牙周韧带细胞几种基质表达和碱性磷酸酶分泌的研究

目的：研究并比较培养的５～７代人牙髓细胞和牙周韧带细胞几种基质表达和碱性磷酸酶分泌的情况。方法：细胞培养、免疫组化、碱性磷酸酶活性分析。结果：两种细胞均在培养的第９天进入生长静止期，两种细胞培养液中碱性磷酸酶活性在增殖期达到高峰，以后活性下降。两种细胞均表达ＦＮ、Ⅲ型胶原、ＢＭＰ。当培养的细胞密度较高时，ＦＮ和Ⅲ型胶原以纤维状结构覆盖于细胞表面。结论：传代的人牙髓细胞和牙周韧带细胞的上述几种基质表达方式、碱性磷酸酶活性相似。     

Balb/c胎鼠下颌突外胚间充质细胞向成骨细胞诱导分化的体外研究

目的：探讨矿化液体外诱导外胚间充质细胞向成骨细胞分化的过程。方法：取妊娠12．5d胎鼠第三代下颌突外胚间充质细胞，培养于含10mmol／L β-甘油磷酸钠、100μg/mL维生素C、10nmol／L地塞米松、150mL／L胎牛血清的DMEM中。相差显微镜下观察细胞的形态变化，免疫组化鉴定细胞性质，碱性磷酸酶染色及活性检测，矿化结节Von Kossa染色。结果：培养14d，细胞形态发生明显变化，呈多边形、立方形，抗I型胶原染色阳性。碱性磷酸酶活性增高，碱性磷酸酶染色阳性，矿化结节形成。结论：矿化液可诱导外胚间充质细胞向成骨细胞分化。     

体外培养的人牙髓细胞,牙周韧带细胞几种基质表达和碱性…

研究并比较培养５－７代人牙髓细胞和牙周韧细胞几种基质表达和碱性磷酸酶分泌的２。细胞培养，免疫组化，碱性磷酸酶活性分析。两种细胞均在培养的第９天进入生长静止期，两种细胞培养液中碱性磷酸酶活性在增殖期达到高峰，以后活性下降。     

组蛋白去甲基化酶FBXL11抑制牙髓干细胞成骨和成牙本质分化

目的 研究组蛋白去甲基化酶FBXL11对牙髓干细胞定向分化能力的影响.方法 成骨分化诱导培养基诱导牙髓干细胞体外成骨/成牙本质分化.逆转录病毒转染构建过表达FBXL11的牙髓干细胞稳定转染细胞,进行FBXL11获得性功能研究.碱性磷酸酶活性实验及碱性磷酸酶染色检测成骨/成牙本质分化早期分化指标-碱性磷酸酶活性.茜素红染色及钙离子定量分析检测牙髓干细胞体外成骨/成牙本质分化能力.实时定量RT-PCR检测FBXL11及成骨/成牙本质分化相关基因-骨涎蛋白、骨桥蛋白和骨钙素的表达.结果 成骨诱导牙髓干细胞抑制FBXL11的表达.过表达FBXL11明显抑制牙髓干细胞的碱性磷酸酶活性、牙髓干细胞体外矿化能力以及骨涎蛋白和骨桥蛋白的表达.结论 组蛋白去甲基化酶FBXL11具有抑制牙髓干细胞成骨和成牙本质分化的潜能.     

IGF-1通过PI3K/AKT信号通路促进牙髓细胞增殖及碱性磷酸酶活性的研究

目的:研究IGF-1对牙髓细胞增殖和碱性磷酸酶(ALP)活性及PI3K/AKT信号通路的影响。方法:采用酶消化法分离培养原代人牙髓细胞。Western blot检测牙髓组织中IGF-1蛋白表达,不同浓度的IGF-1处理牙髓细胞7d,CCK8法检测细胞增殖。用IGF-1(100 μg/L)及LY294002(10 μmol/L)分别单独或同时处理牙髓细胞,培养7 d后MTT实验检测细胞增殖;在培养第3、5、7、14天时检测细胞ALP 活性;在培养第7天时用Western blot检测AKT和p-AKT蛋白表达情况。结果:IGF-1在牙髓炎组织中低表达, IGF-1在20~100 μg/L浓度范围内从作用第3天开始能够显著促进牙髓细胞增殖(P<0.05或P<0.01),且具有剂量和时间依赖效应。LY294002能够抑制牙髓细胞的增殖和碱性磷酸酶活性,具有时间依赖性。IGF-1能促进p-AKT蛋白表达,而 LY294002能减低IGF-1对p-AKT蛋白表达的促进作用。结论:IGF-1可以促进牙髓细胞增殖和碱性磷酸酶活性,且具有浓度和时间依赖性,作用机制可能与PI3K/AKT信号通路相关。[关键词] 牙髓细胞 细胞增殖 碱性磷酸酶     

牙髓细胞的原代培养方法探讨:冠部和根部牙髓的比较

目的 比较并建立冠部和根部牙髓细胞培养的理想方法一方法：自年轻、健康的人牙中取出完整牙髓，分别应用组织块法和组织块酶解法(0.1％I型胶原酶)对冠、根部牙髓进行原代细胞培养，通过对细胞培养成功率、细胞贴壁率和细胞活性的评估，确定用于根、冠髓细胞培养的理想方法一结果：组织块法比组织块酶解法具有较高的成功率．游出细胞具有较高的生长活性和较低的贴壁率.结论 在对根、冠髓细胞的原代培养中，组织块法优于组织块酶解法。本实验建立了冠、根部牙髓细胞原代培养的理想方法.     

神经生长因子对人牙髓细胞增殖与分化作用的研究

目的 研究神经生长因子对体外培养的人牙髓细胞增殖和分化作用的影响。方法 组织块法行人牙髓细胞的原代培养后，采用四唑盐比色法和酶动力学方法，测定不同浓度（1、10、100U／mL）的神经生长因子对体外培养的第5-8代人牙髓细胞增殖及碱性磷酸酶活性的作用。结果 与对照组相比，10U／mL的神经生长因子可显著促进人牙髓细胞的增殖（P〈0．05）；100U／mL的神经生长因子可显著促进碱性磷酸酶的活性（P〈0．01）。结论 不同浓度的神经生长因子可显著促进人牙髓细胞的增殖与分化。     

儿童恒前牙切髓术后根髓组织学研究

目的：牙本质桥的形成是牙髓修复的特征，但至今人们对牙本质桥下方的牙髓组织是否健康仍有争议。本研究目的是观察儿童外伤冠折恒切牙切髓极后根髓的组织学特征，以证实牙髓修复后的牙髓组织变化状况。方法：对16例8－9岁儿童外伤冠折露髓的恒前牙行切髓术，氢氧化钙制剂覆盖牙髓断面，并在牙本质桥形成及根尖发育完成后不同时期行去髓术，将去除的根髓组织固定，常规组织学切片，显微镜观察。结果：术后12－24个月根尖发育完成，此时组织学观察可见牙本质桥下方的根髓组织无明显炎症。至36－48个月，牙髓组织逐渐出现退行性变，例如纤维性变和牙髓钙化等。结论：切髓术后2年内牙本质桥下方的根髓是正常的，而后牙髓逐渐出现退行性变，切髓术可作为儿童前牙冠折露髓的一种暂时治疗方法，当牙根发育完成时，则应采用去髓术。     

矿化液对体外培养的人牙囊细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的：探讨矿化液对体外培养的人牙囊细胞中碱性磷酸酶表达的影响。方法：取12～13岁患者因正畸原因拔除的下颌第三磨牙牙囊，原代培养人牙囊细胞，将第5代细胞加入矿化液培养，应用碱性磷酸酶组织化学方法染色、碱性磷酸酶试剂盒检测人牙囊细胞中碱性磷酸酶的活性。结果：培养的牙囊细胞呈长梭形、不规则多角形。免疫细胞化学染色显示抗波形丝蛋白染色阳性。矿化液诱导7d，碱性磷酸酶染色呈阳性，碱性磷酸酶活性检测第3、5、7d明显升高，与对照组均有显著性差异。结论：矿化液能增强体外培养的人牙囊细胞中碱性磷酸酶的表达。     

人牙髓干细胞体外分选分化的初步实验研究

目的 体外培养人牙髓细胞,分选牙髓干细胞并诱导其分化.方法 选择因正畸目的 而拔除的健康完整双尖牙,酶消化法进行牙髓细胞培养,并进行来源鉴定.单抗Stro-1标记牙髓干细胞、免疫磁珠分选系统进行分选.矿化液定向诱导分选后的牙髓十细胞,比较诱导前后Stro-1染色及改良Gomori钙钴法染色检测碱性磷酸酶(ALP)的改变.结果 体外培养人牙髓细胞呈成纤维细胞样,抗波形丝蛋白染色阳性,抗角蛋白染色阴性.牙髓干细胞Stro-1检测阳性,牙髓细胞中干细胞附性率约为10%.矿化诱导后细胞Stro-1阴性、ALP阳性表达.结论 采用免疫磁珠分选系统分离出人牙髓干细胞,初步验证干细胞分化潜能,为其后续生物学特性研究提供实验基础.     

人牙髓干细胞体外分选分化的初步实验研究

目的体外培养人牙髓细胞,分选牙髓干细胞并诱导其分化。方法选择因正畸目的而拔除的健康完整双尖牙,酶消化法进行牙髓细胞培养,并进行来源鉴定。单抗Stro-1标记牙髓干细胞、免疫磁珠分选系统进行分选。矿化液定向诱导分选后的牙髓干细胞,比较诱导前后stro-1染色及改良Gomori钙钴法染色检测碱性磷酸酶（ALP）的改变。结果体外培养人牙髓细胞呈成纤维细胞样,抗波形丝蛋白染色阳性,抗角蛋白染色阴性。牙髓干细胞Stro-1检测阳性,牙髓细胞中干细胞阳性率约为10％。矿化诱导后细胞stro-1阴性、ALP阳性表达。结论采用免疫磁珠分选系统分离出人牙髓干细胞,初步验证干细胞分化潜能,为其后续生物学特性研究提供实验基础。     

成体人牙髓干细胞的分离与鉴定

目的从成体人牙髓组织中分离培养牙髓干细胞，初步探讨其分化潜能。方法选取年轻患者因正畸或阻生拔除的健康第三磨牙，取出牙髓，采用酶消化及过滤法得到单细胞悬液，有限稀释法原代培养。扩大培养细胞克隆，检测STRO-1的表达。体外诱导分化后对各克隆从碱性磷酸酶(ALP)活性、矿化结节形成、牙本质涎蛋白(DSP)表达、Oil Red—O染色、PPARr2基因表达等方面进行检测。结果克隆来源细胞STRO-1表达阳性。在矿化液诱导下，克隆细胞呈现明显高的ALP活性；能够形成矿化结节；可以分泌表达DSP，已向成牙本质细胞方向发生了分化。成脂肪诱导后，Oil Red—O染色阳性，可检测到PPARr2基因表达。结论从成体人牙髓组织中可以分离培养出干细胞，在体外能有效增殖并保持低分化状态。     

1,25（OH）2维生素D3矿化液对人牙髓干细胞成骨方向诱导作用的研究

目的研究维生素D3矿化液对人牙髓干细胞的成骨方向诱导是否有促进作用。方法从恒牙牙髓中分离培养成纤维样细胞并测试其间充质干细胞的特异性标记物Stro-1阳性率,用一定浓度的1,25（OH）2维生素D3、抗坏血酸、β-甘油磷酸钠的矿化液诱导牙髓干细胞,通过倒置相差显微镜、碱性磷酸酶染色、Vonkossa染色及骨钙素、Ⅰ型胶原基因表达观察和检测矿化液诱导后细胞形态变化及矿化基质分泌情况,以未诱导组为对照。结果维生素D3矿化液连续诱导21d后,诱导组的细胞碱性磷酸酶染色阳性、Ⅰ型胶原和骨钙素的基因表达阳性,并可见明显钙结节形成。结论维生素D3矿化液可以诱导人牙髓干细胞向成骨样细胞分化并促进其产生矿化基质。     

碱性成纤维细胞生长因子对体外培养人牙髓细胞迁移和碱性磷酸酶活性的影响

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对体外培养人牙髓细胞迁移和碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。方法:以组织块培养法体外获得人牙髓细胞,采用Transwell培养法和ALP活性检测法,观察10 ng/mL bFGF对体外培养人牙髓细胞迁移和分化能力的影响。结果:bFGF可显著诱导体外培养牙髓细胞迁移,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),并能抑制细胞ALP活性(P<0.05),随着培养时间延长,该抑制作用更加显著(P<0.05)。结论:bFGF能促进牙髓细胞迁移,抑制ALP活性,在牙本质牙髓复合体修复中可能发挥重要作用。     

促红细胞生成素对人牙髓细胞增殖和成骨分化的影响

目的：探讨促红细胞生成素（EPO）对体外培养的人牙髓细胞（hDPCs）增殖和成骨分化的影响。方法：体外培养鉴定人牙髓细胞。使用 EPO 对在成骨诱导培养基中培养的牙髓细胞进行刺激,CCK-8检测 EPO 对牙髓细胞增殖的影响;20 U ／ml EPO 培养 hDPCs 7 d 和14 d,采用碱性磷酸酶活性（ALP）检测和茜素红染色观察 EPO 对牙髓细胞矿化的影响;利用 Real-time PCR 检测加入 EPO 后牙髓细胞成牙本质向分化相关基因的表达情况。结果：EPO 以时间和剂量依赖性方式促进牙髓细胞的增殖;20 U ／ml 的 EPO 后作用,牙髓细胞碱性磷酸酶活性显著提高（P ＜0．05）,钙结节形成明显增多;成牙本质向分化相关基因 DSPP、OCN、OSTERIX、RUNX2的表达明显上调（P ＜0．05）。结论：EPO 能促进人牙髓细胞的增殖和分化。