单克隆乙型肝炎表面抗体的生产及其在检测乙型肝炎表面抗原的酶联免疫吸附试验系统中的应用

ELISA(酶联免疫吸附试验)系统检测HBsAg(乙型肝炎表面抗原)的敏感度与特异性,很大程度上取决于用作酶标记的抗-HBs(乙型肝炎表面抗体)的纯化程度。如用动物免疫血清,要经过饱和硫酸铵双沉淀法以及离子交换层析,获得的IgG(免疫球蛋白G)抗-HBs,再通过HBsAg亲和层析,制备高度纯化     

结核分枝杆菌特异性γ-干扰素化学发光免疫检测体系的建立

目的 建立一种用于便携式检测结核分枝杆菌特异性γ-干扰素的化学发光免疫检测体系,为下一步研制便携式检测试剂盒奠定基础。方法 利用生物素-链霉亲和素系统偶联磁珠和抗体,利用酰胺键结合方式偶联吖啶酯和标记抗体。采用正交实验法,优化结核分枝杆菌特异性γ-干扰素检测试剂盒所需的吖啶酯标记检测抗体及磁珠偶联包被抗体的方法、缓冲液配方、封闭液配方等条件。最后将建立的检测体系与商品化酶联免疫吸附试验(ELISA)参照试剂盒进行比较。结果 建立的检测体系与商品化ELISA参照试剂盒阳性符合率为99.20%,阴性符合率为98.91%,总符合率为99.10%,Kappa值为0.982,最低检出限0.66 pg/mL。结论 建立的便携式结核分枝杆菌特异性γ-干扰素化学发光免疫检测体系与ELISA参照试剂盒相比具有类似的检测能力,可用于临床辅助诊断。     

间接包被ELISA法检测血清游离β-HCG

目的 研制生物素-亲合素间接包被ELISA法定量检测血清游离β-HCG试剂盒。 方法 用生物素化牛血清清蛋白和链霉亲合素包被微孔反应板,生物素化抗游离β-HCG抗体和酶标记抗游离β-HCG抗体检测游离β-HCG,评价试剂盒相关技术参数。 结果 本试剂盒具有较好的稳定性,灵敏度0.1 ng/ml,回收率95.9％~102.5％,批内CV 7.5％~11.1％,批间CV12.5%~18.1%,与FSH、TSH、LH和α-HCG的交叉反应率均<0.1％,检测范围0.1~500 ng/ml,与美国DRG公司试剂盒的相关系数r2=0.789 2,P<0.05。 结论 本方法研制的试剂盒灵敏度高,特异性好,操作方法简便,适于临床常规应用。     

降钙素原生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附分析法的建立

目的建立生物素一链霉亲和素酶联免疫吸附分析（biotin．streptavidinamplifiedELISA,BA．ELISA）法半定量检测人血清中降钙素原含量。方法通过双抗体夹心法,结合生物素一链霉亲和素系统的放大作用,建立降钙素原的半定量检测方法。并对该试剂的各项性能指标进行评价。结果该方法的最低检测限为0．12mg／mE,线性范围为0．12～20ng／mL,回收率为98．59％。分析内和分析间变异系数分别为4．9％～16．8％和7．1％～14．9％。与降钙素原结构类似物及血清中常见的干扰物质特异性良好。通过对73例血清样本进行检测分析,当阈值为0．5ng／mL时,敏感性和特异性分别为100％和96．0％。结论本研究建立的降钙素原生物素一链霉亲和素酶联免疫吸附分析法具有灵敏、简便、准确等特点,具有良好的应用前景。     

以合成肽为抗原检测人巨细胞病毒抗体的酶联免疫吸附试验的建立及评价

目的以合成多肽为抗原建立用于人巨细咆病毒（HCMV）抗体检测的间接酶联免疫吸附试验（ELISA）。方法以固相多肽合成技术合成了HCMV7个抗原性肽段,并对其抗原性进行了初步评价,选择高抗体反应的肽段为抗原,建立检测HCMV特异性抗体的间接ELISA。结果7个肽段中,抗体反应性较高肽段有4个;以合成多肽为抗原的间接ELISA对HCMV IgG抗体检测的敏感性和特异性分别为90．9％和100．0％,对于IgM抗体检测的敏感性和特异性分为90．0％和100．0％;与国外试剂盒测定结果有良好的符合性;该方法的精密度及稳定性良好。结论合成的HCMV多肽片段可作为抗原用于HCMV的检测,以此多肽为抗原建立的间接ELISA可用于临床HCMV特异性抗体的检测。     

数种检测抗核抗体、抗盐水可提取核抗原抗体方法的对比分析

目的：评价检测抗核抗体和抗盐水可提取核抗原（ENA）抗体的酶联免疫吸附试验（ELISA）的性能。方法：将相关纯化抗原包被的ELISA试剂和间接免疫荧光抗核抗体（IFANA）试验、免疫印迹法（IBT）和对流免疫电泳地（CIE）等用于20份系统性红斑狼疮（SLE）、10份干燥综合征（SS）患者以及30份健康对照血清中自身抗体的检测。结果：ELISA和IFANA抗核抗体筛选试验对结缔组织病诊断的敏感性和特异性差异无显著性（P＞0．05），但5例IFANA阴性ELISA阳性的患者血清经鉴定为抗SS－A和／或dsDNA抗体阳性；1例ELISA阳性则IFANA阴性的正常人血清经证实为ELISA试验假阳性，ELISA、CIE、IBT3种方法检测抗Sm抗体对诊断SLE的特异性均达到100％，敏感性差异无显著性（P值均＞0．05）。ELISA与IBT相比，在抗SS－A抗检检测上更为敏感（P＜0．01）。ELEISA与CIE法相比对抗SS－B抗体的检测也更敏感（P＜0．05）。结论：本研究中所用的ELISA抗核抗体检测试剂敏感性，特异性较好。     

人细小病毒B19IgM抗体间接ELISA检测方法的初步建立

目的：利用原核表达并纯化的人细小病毒B19（HPV B19）结构蛋白VP1初步建立HPV B19 IgM酶联免疫吸附试验（ELISA）的检测方法。方法以纯化的重组蛋白包被酶标板,建立IgM 间接ELISA检测方法,确定Cut-off值,并进行初步的应用。结果建立间接 ELISA方法Cut-off值为0．25,灵敏度为84．60％,特异性为99．70％,与对照试剂盒检测结果符合率为99．47％;用自产试剂盒检测115份孕妇和1700份健康献血志愿者血清中B19 IgM抗体,阳性率分别为12．17％和1．59％。结论通过包被 HPV B19-VP1蛋白建立的间接ELISA检测方法可用于 HPV B19早期感染或急性感染的辅助诊断。     

癌胚抗原化学发光免疫分析方法学研究

目的研制化学发光免疫分析法（CLIA）癌胚抗原（CEA）检测试剂盒。方法采用双抗体夹心法用2种不同的单克隆抗体分别与CEA分子上不同的抗原决定簇发生反应。用1株单抗包被微孔板制成固相抗体,用另1株单抗标记碱性磷酸酶（ALP）制成酶标抗体。在包被微孔中加入CEA校准品或待测血清及酶标抗体,温育后即形成固相抗体-抗原-酶标抗体的复合物,充分洗涤后加入化学发光底物液,于30～90min内测定其发光强度（RLU）,根据标准曲线即可算出标本中CEA的含量。结果该试剂盒其敏感性可达0．058ng／mL;批内和批间变异系数（CV）分别为5．5％～9．3％和10．2％-12．2％。经实验表明,CLIA与免疫放射分析法（IRMA）和酶联免疫吸附试验（ELISA）分别呈高度相关,相关系数（r）分别为0．991、0．984;平均回收率为97．3％。结论新研制的CEACLIA试剂盒各项技术指标均达到了国外同类产品水平。     

酶联免疫吸附试验检测人疱疹病毒7型抗体的研究

目的 建立一种简便、快速、可靠的检测人疱疹病毒7型（HHV7）特异性IgG和IgM酶联免疫吸附试验（ELISA）。方法 应用HHV7标准株Glasgow感染SupT1细胞,制备并纯化细胞工程抗原和重组ppS5抗原;对325份血清HHV7抗体进行检测,建立HHV7特异性IgM和IgG间接ELISA,并与Qiagen公司ELISA试剂盒检测结果进行比较。结果 采用细胞工程抗原和重组抗原制备的HHV7 IgG和IgM ELISA诊断试剂敏感性、特异性、稳定性及重复性[变异系数（CV）〈10％]较好;以Qiagen公司ELISA试剂盒为参比,重组抗原IgG ELISA检测上述标本的敏感性、特异性和符合率分别为98．1％、94．1％和97．8％,IgM ELISA分别为84．6％、99．7％和99．1％;与细胞工程抗原相比,重组抗原诊断试剂的特异性高而敏感性略低。结论 自制HHV7 IgG和IgM ELISA检测试剂敏感特异,可用于临床HHV7感染的诊断及流行病学调查。     

梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验对梅毒筛检的可行性探讨

目的在血液筛捡中选用一种敏感性和特异性均高的检测方法对梅毒抗体进行检测,保证血液质量。方法对检测梅毒抗体的甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）、梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（TP—ELISA）抗原夹心法,被动颗粒凝集试验（TPPA）3种方法进行比较。结果经过统计学处理,TP—ELISA抗原夹心法与金标准法TPPA比较,差异无统计学意义（P〉0．05）,而与TRUST比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论TP—ELISA双抗原夹心法更适宜作为对血液筛检的方法。     

血清妊娠相关蛋白-A在心力衰竭中的诊断和预后价值

目的探讨心力衰竭患者血清妊娠相关蛋白A（Pregnancy-Associated Plasma Protein A,PAPP-A）的变化,及其在诊断和预后中的价值。方法选取72例心力衰竭患者和50名体检人员作为研究对象,用ELISA方法测定血清PAPP-A的水平。结果心力衰竭组血清PAPP—A水平（8．8±2．3ng／mL）显著高于正常对照组（4．7±1．9ng／mL）,且随心功能分级呈进行性增加。血清PAPP—A水平的ROC曲线下面积为0．7782（0．688—0．876）,诊断心力衰竭的灵敏度和特异度分别为86．1％和62．0％。血清高PAPP-A水平的心力衰竭患者的生存率显著低于血清低PAPP-A水平的心力衰竭患者。结论血清PAPP-A的检测在心力衰竭的诊断、评价心力衰竭严重程度及预后中有重要价值。     

四种酶联免疫吸附试验试剂检测梅毒抗体的比较

目的评价国内常用的4种梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂的有效性,为临床选择梅毒诊断试剂提供依据。方法对180例临床血清分别进行快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）、梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）和4种试剂的ELISA（试剂分别为A、B、C、D）。以TPPA结果为参考对照,分别统计各ELISA试剂的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值。结果 180例血清标本中,RPR阳性58例,TPPA阳性84例,两者均阴性95例。TPPA检测阳性率为46.67%（84/180）,A试剂为44.44%（80/180）,B试剂为45.00%（81/180）,C试剂为45.00%（81/180）,D试剂为28.33%（51/180）。D试剂与TPPA及其他3种试剂的检测阳性率差异有统计学意义（P均〈0.01）。D试剂的敏感性最差（57.14%）,而其他几种ELISA试剂的敏感性较好（94.05%~95.24%）。4种ELISA试剂的特异性均较理想（96.88%~100.00%）。结论个别国产ELISA试剂的敏感性差,提示在选择这类试剂时,应以质控血清进行预试验,使用符合要求的试剂。     

酶联免疫法检测间甲肾上腺素类物质在嗜铬细胞瘤诊断中的应用

目的：探讨间甲肾上腺素类物质（MNs）用酶联免疫法（ELISA）检测在嗜铬细胞瘤诊断中的价值。方法检测疑似嗜铬细胞瘤患者63例及健康人30例（作对照）血MNs,包括甲氧基肾上腺素（NMN）、甲氧基去甲肾上腺素（MN）水平,嗜铬细胞瘤以术后病理诊断为标准。结果63例临床上疑为嗜铬细胞瘤患者中32例经组织学诊断为嗜铬细胞瘤,其中ELISA检测NMN的特异性95%、敏感性91%,MN特异性92%、敏感性72%,NMN和MN二者合并检测特异性97%、敏感性93%。结论血浆游离MNs是诊断嗜铬细胞瘤的有效生化指标,ELISA法作为一种便捷可靠的检测方法,在诊断嗜铬细胞瘤中有着较高的特异性和敏感性。     

乙型肝炎表面抗原酶联免疫法检测试剂的性能评价

目的对我室使用国产乙型肝炎表面抗原酶联免疫法（ELISA）检测试剂进行性能评价。方法用ELISA法使用国产试剂检测国家参考品（n=33）、临床科研血清盘（n=40）及临床标本（n=270）,判断其是否符合国家检定标准,并分析其真实性、可靠性和收益指标。结果检测国家参考品的阴性符合率为100%（20/20）,阳性符合率为100%（3/3）,三种亚型的最低检出量均为0.5ng/mL;其真实性指标：灵敏度、特异性、粗一致性和约登指数（Youden）分别为96.88%、99.45%、98.39%和0.96;可靠性指标：变异系数（CV）和Kappa值分别为5.2%和0.96;收益指标：阳性预测值与阴性预测值分别为99.20%和97.84%。结论国产试剂性能评价结果优质,适用于临床标本检测。     

胶体金法粪便隐血检测试剂的性能检测及初步临床应用评估

目的评价胶体金法粪便隐血检测试剂的性能及临床应用价值。方法随机选择150例住院患者粪便样本,分别用试验试剂[胶体金法,梅里埃(上海)生物制品有限公司生产]和对照试剂(胶体金法,上海凯创生物技术有限公司生产)对样本进行检测,并对结果进行统计。同时结合患者临床资料,对检测结果的符合程度进行综合分析,初步评估其临床应用价值。结果试验试剂敏感性可达到40 ng/mL,特异性和重复性均符合要求,与对照试剂结果基本相符,且检测结果与临床病情相符合。结论胶体金法粪便隐血检测试剂方法简便,结果可靠,可进一步应用于临床。     

新型ELISA检测戊型肝炎病毒IgM抗体的敏感度与特异度评价

目的 评估基于戊型肝炎病毒（HEV）主要免疫表位多肽及其截短多肽的新型ELISA检测抗HEV IgM的敏感度与特异度.方法 根据抗HEV抗体与主要免疫表位多肽的高反应性以及与截短多肽的不反应性,分别以两种多肽为包被抗原,建立新型ELISA法,检测2007-2012年收集的612例可疑HEV感染者血清抗HEV IgM,并与万泰HEV IgM抗体诊断试剂盒检测结果比较,结果不一致血清用免疫印迹法（Western blotting）确认,χ^2检验比较两种试剂灵敏度和特异度.结果 抗HEV IgM检测中,新型ELISA阳性326例,阴性286例;万泰试剂阳性370例,阴性242例;两种试剂同时阳性320例,同时阴性236例.在万泰试剂阳性而新型ELISA阴性的50例中,Western blotting证实阳性21例,阴性29例;在万泰试剂阴性而新型ELISA阳性的6例中,Western blotting显示阳性与阴性各3例.以两种试剂同时阳性或Western blotting阳性为标准,万泰试剂与新型ELISA灵敏度分别为99.1％（95％ CI：0.972-0.998）和93.8％（95％ CI：0.907-0.961）,差异有统计学意义（χ^2=13.988,P＜0.001）;特异度分别为89.2％（95％ CI：0.847-0.925）和98.9％（95％ CI：0.965-0.997）,差异有统计学意义（χ^2=22.466,P＜0.001）.结论 与万泰试剂相比,新型ELISA检测抗HEV IgM敏感度略低,但特异度较好,可减少抗HEV IgM检测中的假阳性.     

一种血浆肿瘤型M2-丙酮酸激酶检测方法——酶联免疫吸附试验的临床评价

目的评价一种血浆肿瘤型M2-丙酮酸激酶（TUM2-PK）检测方法——酶联免疫吸附试验（ELISA）的测定性能和临床适用性。方法对新的自主开发的TU M2-PK检测方法进行偏倚测定、不精密度测定、回收试验以及对371例临床标本进行测定。结果TU M2-PK检测方法有良好的准确度（偏倚〈5 U/mL）和精密度[变异系数（CV）〈10%]。371份临床标本的TUM2-PK水平测定结果与＂金标准＂病理结果对照,TUM2-PK的敏感性和特异性分别为69.7%（106/152）和86.8%（190/219）,准确度达到80.0%（296/371）。此外,该试剂盒所测得的恶性肿瘤患者的TU M2-PK水平明显高于良性肿瘤患者及正常对照者,差异具有统计学意义（P均〈0.01）。结论TU M2-PK ELISA测定性能良好,具有较好的临床应用价值。     

妊娠相关蛋白-A及C反应蛋白对不稳定型心绞痛的诊断意义

目的探讨妊娠相关蛋白-A(PAPP-A)和C-反应蛋白(CRP)对不稳定型心绞痛(UA)的诊断意义。方法分别采用双抗体夹心酶联免疫吸附法和双抗体放射免疫法检测23例UA患者、21例稳定型心绞痛(SAP)患者和18名健康对照者的血浆PAPP-A和CRP浓度。结果UA组CRP和PAPP-A浓度明显高于SAP组和健康对照组(P<0.05)。SAP组和健康对照组CRP和PAPP-A浓度比较无明显差异性(P>0.05)。结论PAPP-A和CRP是UA的炎性标记物,可能是预测冠心病的危险程度的重要指标。     

孕中期孕妇血清sEng、sFlt-1联合检测预测子痫前期的探讨

目的 探讨联合检测孕妇孕中期血清可溶性内皮因子（sEng）、可溶性血管内皮生长因子受体1（sFlt-1）对子痫前期的预测.方法 选择孕25～28周的子痫前期孕妇29例作为子痫前期组,另选择同期妊娠结果正常的42例孕妇作为对照组,采用酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒检测血清sEng、sFlt-1水平,并将检测结果与子痫前期的发病进行相关性分析.结果 子痫前期组孕妇血清sEng、sFlt-1水平分别为（10.4±1.5）ng/mL、（1 020.3±115.1）ng/L,高于对照组[分别为（2.3±0.6） ng/mL、（289.4±142.3）ng/L],差异有统计学意义（P〈0.01）.sEng与sFlt-1联合检测的敏感性、特异性分别为95.7%、90.9%.结论 血清sEng、sFlt-1的联合检测可有效预测子痫前期的发生.     

定量测定硫酸软骨素的双抗体夹心ELISA的建立

目的建立定量测定硫酸软骨素（CS）的双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）,并对其应用价值进行初步评价。方法以CS为抗原分别免疫Balb/c小鼠和日本大耳白兔,制备2种动物的多克隆抗体。用鼠抗体包被微孔板,兔抗体为第2抗体,辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗兔抗体为标记抗体,建立双抗体夹心ELISA,并对线性范围、精密度、回收率和方法学比较进行了评价。结果本研究建立的ELISA线性范围为2～500 mg/L,批内和批间精密度分别为4.48%和5.97%,回收率在99.52%～101.77%之间,与间苯三酚分光光度法测定结果具有良好的相关性（r=0.999 0,P〈0.05）。结论建立的定量测定CS的双抗体夹心ELISA具有敏感性高、重现性好等优点,适合检测应用。