内质网应激在乙酰化低密度脂蛋白引起的人单核巨噬细胞凋亡中的作用

目的 观察在脂质引起佛波酯（PMA）促分化后人单核细胞源性巨噬细胞（THP-1）凋亡中有无内质网（ER）应激，探讨巨噬细胞凋亡在慢性肾脏疾病并发加速进展的动脉粥样硬化和心血管事件中的作用。 方法 密度梯度法提取低密度脂蛋白，制备乙酰化低密度脂蛋白（ACLDL）。Hoechst染色定量计数凋亡细胞比例。caspase3,7活性测定检测凋亡。油红O染色观察细胞内脂滴变化。酶学反应法测定细胞内游离胆固醇（FC）和胆固醇酯（CE）的含量。Western印迹和实时定量PCR测定细胞乙酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶（ACAT）、生长停滞及DNA损伤基因（CHOP）和Bcl-2的表达。 结果 ACLDL呈剂量依赖和时间依赖促进细胞凋亡。100 mg/L ACLDL与THP-1巨噬细胞作用24 h，油红O染色下细胞内脂滴显著增多，细胞内FC和CE含量显著增加（P < 0.01）。Western印迹显示，ACLDL 100 mg/L作用3～24 h，ACAT1、CHOP表达较作用前持续升高，Bcl-2表达持续降低。实时定量PCR显示，ACLDL作用12～24 h，较作用前促进CHOP mRNA表达（P < 0.01），抑制Bcl-2 mRNA表达（P < 0.01）；ACLDL作用24 h点，较无ACLDL作用组促进CHOP mRNA表达（P < 0.01），抑制Bcl-2 mRNA表达（P < 0.01），但对ACAT1表达没有影响。 结论 在ACLDL引起的THP-1巨噬细胞凋亡中存在ER应激。     

白细胞介素1β对人肾小球系膜细胞LOX-1和ABCA1表达的影响

目的 研究白细胞介素1β（IL-1β）对人肾小球系膜细胞株（HMCL）植物血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1（LOX-1）以及腺苷三磷酸结合盒转运体A1（ABCA1）表达的影响，及其与细胞胆固醇稳态的关系。 方法 实时定量PCR和Western印迹法检测IL-1β对人肾小球系膜细胞LOX-1、ABCA1表达的影响。 结果 人肾小球系膜细胞表达LOX-1 mRNA和蛋白。IL-1β促进人肾小球系膜细胞LOX-1 mRNA和蛋白表达，5 μg/L IL-1β刺激细胞0~24 h，LOX-1 mRNA表达于6 h达高峰，为对照的6.87倍；LOX-1蛋白24 h达高峰，为对照的1.88倍。IL-1β降低脂质负荷的人肾小球系膜细胞 ABCA1 mRNA和蛋白表达。5 μg/L IL-1β刺激细胞0~48 h，48 h时ABCA1 mRNA和蛋白下降最明显，分别为对照的19.0％和50.62％。 结论 IL-1β促进人肾小球系膜细胞LOX-1表达，抑制ABCA1的表达，导致细胞内胆固醇的失衡，促使其变成泡沫细胞，可能加重肾小球硬化和肾病的进展。     

慢性肾功能衰竭大鼠主动脉核因子κB活化及泛素通路的调节作用

目的　探讨慢性肾功能衰竭大鼠主动脉泛素（Ub）-NF-κB通路的表达变化规律。 方法　将大鼠随机分为假手术对照组（CON）、肾功能衰竭组（CRF）、肾功能衰竭加 MG-132干预组（CRF+M），观察6个月。采用部分肾动脉结扎加对侧肾切除法复制慢性肾功能衰竭大鼠模型。ELISA法测定血液中炎性因子白细胞介素1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子α (TNF-α)的含量。RT-PCR半定量测定主动脉中NF-κB及Ub mRNA表达。免疫组织化学方法检测主动脉中NF-κB及Ub蛋白表达。Western印迹法测定主动脉泛素化蛋白的含量。凝胶电泳迁移率（EMSA）法测定动脉中NF-κB的活化情况。 结果　与CON组比较，CRF组大鼠术后4～6个月时血清中IL-1β[ (9.02±1.29)比(2.74±0.96) mg/L]和TNF-α[(50.02±9.52)比(14.04±1.29) mg/L]水平显著升高（P < 0.01）；主动脉NF-κB、Ub的 mRNA表达升高1.38倍和1.29倍（P < 0.01）；NF-κB、Ub的蛋白质表达升高 3.75倍和20.5倍（P < 0.01）；NF-κB活性增强1.82倍（P < 0.01），术后6个月各指标均有进一步上升趋势。与CRF组比较，CRF+M组大鼠干预治疗4～6个月后，大鼠血清中IL-1β[(2.94±0.33) mg/L]和TNF-α[(12.80±2.12) mg/L]含量显著下降（P < 0.01）；NF-κB 、Ub的mRNA及蛋白质表达显著减少（P < 0.01）；NF-κB的活性显著降低（P < 0.01），与CON组比较，差异已无统计学意义，而主动脉中泛素化蛋白含量显著升高（P < 0.01）。 结论 慢性肾功能衰竭大鼠主动脉泛素-NF-κB炎性反应信号明显活化，抑制蛋白酶体活性可能是降低主动脉NF-κB活化的重要药物靶点。     

脂蛋白脂酶过表达促进极低密度脂蛋白诱导人系膜细胞的胞内脂质积聚和单核细胞趋化蛋白1表达

目的 通过在人肾小球系膜细胞转染脂蛋白脂酶（LPL）基因，观察LPL在系膜细胞摄取极低密度脂蛋白（VLDL）中的作用并对其介导肾损害的可能机制进行探讨。 方法 以携带野生型人LPL基因（LPLwt）、无活性的突变型人LPL基因（LPL194)和对照人碱性磷酸酶基因（AP）的重组腺病毒转染人肾小球系膜细胞（HMCL）[Ad-LPLwt（活性型）、Ad-LPL194（无活性型）和Ad-AP（对照病毒）]，RT-PCR检测细胞LPL mRNA表达；细胞免疫化学染色检测细胞LPL蛋白表达；放射性核素标记的脂质体底物法检测LPL活性。分别以油红“O”染色和酶法定性和定量检测VLDL诱导的细胞内脂质沉积；MTT法检测VLDL刺激的HMCL增殖；实时荧光定量RT-PCR和ELISA法检测HMCL单核细胞趋化蛋白1（ MCP-1）mRNA和蛋白的表达水平；HMCL与T-H蛋白1(THP-1)单核细胞的共孵育，检测单核细胞向系膜细胞的趋化。 结果 细胞内脂质沉积分析显示，与Ad-AP组相比，Ad-LPLwt组和Ad-LPL194组细胞内三酰甘油的积聚分别增加3.55倍（P ＜ 0.01）和0.52倍（P ＜ 0.05）。细胞增殖实验表明，在40 mg/L VLDL刺激下，Ad-LPLwt组细胞上清较Ad-AP组对HMCL有更强的促增殖作用(0.2282±0.0168比0.1805±0.0254，P ＜ 0.05）。与Ad-AP组相比，Ad-LPLwt组细胞MCP-1 mRNA表达增加0.39倍（P ＜ 0.05），蛋白表达上调1.18倍（P ＜ 0.01）。Ad-LPLwt组THP-1单核细胞向系膜细胞的趋化能力也最强，为Ad-AP组的1.69倍（P ＜ 0.05）。 结论 活性型和非活性型LPL均能促进VLDL诱导的系膜细胞内三酰甘油的积聚，且活性型LPL起主要作用。在高VLDL条件下，LPL促进人系膜细胞转变为泡沫细胞，扩大VLDL对系膜细胞的促增殖效应，上调系膜细胞MCP-1的分泌及增加对THP-1细胞的趋化。LPL可能作为一个重要的因素参与富含三酰甘油的脂蛋白介导的肾损害的发生和发展。     

腹膜透析患者肾素血管紧张素Ⅱ水平变化及其在腹膜纤维化中的意义

目的 探讨持续性非卧床腹膜透析（CAPD）患者血浆及腹腔局部肾素血管紧张素系统（RAS）的变化及其在腹膜纤维化中的意义。 方法 选取腹透感染组和非感染组CAPD患者25例，非感染患者根据透析龄分为≥6月组和＜6月组。应用放射免疫法检测CAPD患者腹透透出液和血浆中肾素及血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）的浓度。以不同浓度D-葡萄糖（0.3%、1.5%、2.5%）、甘露醇（1.5%、2.5%）及AngⅡ（0、1、10、100、1000 nmol/L）刺激大鼠腹膜间皮细胞（RPMC），放射免疫法检测细胞上清液AngⅡ浓度变化；实时定量PCR方法观察AngⅡ 1型受体（AT1）、血管紧张素转化酶（ACE）、转化生长因子β1（TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）mRNA的表达； Western印迹法检测TGF-β1及CTGF蛋白的表达；ELISA法检测上清液中TGF-β1的变化。 结果 CAPD患者腹透透出液中未检测到肾素。感染及≥6月组的CAPD患者透出液中AngⅡ的浓度分别为（151.99±114） pmol/L和（14.17±41.5） pmol/L，分别为非感染[（7.98±12.69） pmol/L]及＜6月组[（2.18±5.62） pmol/L]的19倍及6.5倍（P < 0.01或P < 0.05）。高糖腹透液（2.5％）注入4 h后，CAPD患者循环中肾素及AngⅡ浓度分别为[（4.30±8.48）和（54.19±34.43） pmol/L]，是基础水平的4.06倍和1.21倍（P < 0.01）。高糖组（2.5％）RPMC AT1、ACE mRNA和上清液AngⅡ浓度分别为低糖组（0.3％）的2.61、2.62和2.01倍（P <0.05）。AngⅡ可在mRNA和蛋白水平上调RPMC表达TGF-β1与CTGF，呈剂量依赖性，100 nmol/L组TGF-β1 mRNA及蛋白水平分别为对照组的2.8和2.19倍（P < 0.05）；1000 nmol/L组CTGF mRNA及蛋白水平分别为对照组的4.48倍和2.82倍（P < 0.05）。AngⅡ促进RPMC分泌TGF-β1，呈时间依赖性，刺激24 h组TGF-β1的表达量为基础值的3.65倍（P < 0.05）。 结论 CAPD尤其是腹透感染或长期腹透患者存在RAS活化状态。RAS的主要效应因子AngⅡ可通过上调间皮细胞表达和分泌致纤维化细胞因子参与腹膜纤维化。阻断RAS可能成为预防和治疗腹膜纤维化的新靶点。     

大剂量螺内酯对自发性高血压大鼠肾脏纤维化的影响

目的 观察大剂量螺内酯对自发性高血压大鼠（SHR）肾脏纤维化的影响。 方法 8周龄的雄性SHR 24只随机分为低剂量和大剂量螺内酯干预组[分别为20和100 mg&#8226;kg-1&#8226;d-1螺内酯灌胃]和高血压对照组，同时设同源正常对照组京都大鼠（WKY）8只。干预8周，检测收缩压、尿蛋白、血白蛋白、钾、钠、Scr和肾组织及血浆醛固酮水平。肾组织切片分别行HE和Masson染色，以评价肾小球损伤及肾小球内胶原沉积情况。免疫组化SABC法检测肾组织TGF-β1和醛固酮受体蛋白表达。RT-PCR检测肾组织TGF-β1和醛固酮受体mRNA水平。 结果 与高血压组大鼠相比，低剂量螺内酯干预后，尿蛋白减少（P < 0.05），血白蛋白升高（P < 0.05），血浆和肾组织醛固酮水平降低，但差异无统计学意义；大剂量螺内酯干预后，血压没有显著改变，尿蛋白显著升高[（27.3±4.5）比（24.5±3.2） mg/d， P < 0.05]，血白蛋白显著减少[（20.2±4.2）比（22.7±3.5） g/L, P < 0.05]，血浆和肾组织醛固酮水平显著升高[肾组织（28.3±1.5）比（22.2±0.6） ng/g， P < 0.05]。与高血压组比较，低剂量螺内酯干预后，蛋白管型增多、管周炎性细胞浸润均减少（P < 0.05）；大剂量螺内酯干预后，蛋白管型、小管扩张加重，管周炎性细胞浸润明显增多（P < 0.05），肾小球内胶原形成亦明显增多（P < 0.05）。与高血压组大鼠比较，低剂量螺内酯干预后，肾组织醛固酮受体mRNA和蛋白表达均无显著改变，TGF-β1 mRNA和蛋白的表达显著减少（P < 0.05）；大剂量螺内酯干预后，肾组织醛固酮受体及TGF-β1 mRNA和蛋白的表达均显著升高(P < 0.05)。 结论 大剂量螺内酯可以加重高血压肾脏纤维化，可能是通过上调醛固酮及其受体表达实现的。     

IgA肾病患者血清IgA1与系膜细胞共培养上清诱导足细胞凋亡

目的 探讨IgA肾病(IgAN)患者血清IgA1与系膜细胞共培养上清对足细胞凋亡的影响。 方法 用Jacalin 亲和层析柱和Sephacryl S-200 分子筛纯化蛋白。单体IgA1（mIgA1）热聚合为聚合体IgA1（aIgA1）。实验分为患者上清组、健康上清组和对照组，系膜细胞分别与IgAN患者的aIgA1、健康对照的aIgA1和5%胎牛血清共培养，收集上清，与同步化的足细胞作用。流式细胞仪检测细胞凋亡情况。实时定量PCR 检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Fas和Fas-L表达情况。 结果 患者上清可诱导足细胞凋亡，其凋亡率显著高于健康上清组和对照组[（28.5±5.9）%比（22.5±5.8）%、（20.5±4.5）%， 均P < 0.05]。患者上清可诱导足细胞Fas mRNA 升高，为对照组的1.89倍（P < 0.05）， 而Bcl-2 mRNA下调为对照组的72%（P < 0.05）。患者上清组的AngⅡ和TGF-β1水平均高于健康上清组[（13.2±3.4） ng/L比（8.2±2.3） ng/L，P < 0.05；（15.4±3.4） ng/L比（10.8±3.2） ng/L，P < 0.05]。 结论 IgAN患者血清IgA1与系膜细胞共培养上清可诱导足细胞凋亡，可能参与IgAN的进展。     

1,25(OH)2D3抑制嘌呤霉素氨基核苷酸肾病大鼠足细胞凋亡

目的 观察1，25（OH）2D3对嘌呤霉素氨基核苷酸（PAN）肾病大鼠足细胞凋亡的影响。 方法 72只雄性SD大鼠随机分为健康对照组（NC）、PAN组和1，25（OH）2D3治疗组 [1，25（OH）2D3 0.2 μg·kg-1·d-1灌胃]。一次性尾静脉注射PAN 100 mg/kg体质量建立足细胞损伤的PAN肾病动物模型。于3、7、14、21 d分批处死动物，分别检测不同时间点尿蛋白量（24 h）和肾功能。光镜和透射电镜观察肾组织学改变。TUNEL法检测足细胞凋亡。RT-PCR、免疫荧光、免疫组化分别检测nephrin、TGF-β1 mRNA和蛋白的表达。Western印迹检测磷酸化（p）-Smad2/3的表达。 结果 （1）PAN组各时间点BUN、Scr、尿蛋白量（24 h）[7 d时，（20.26±4.87） mg比（1.01±0.41） mg，P < 0.01]均高于同期的NC组，而肾小球足细胞显著减少[14 d时，(10.9±4.2) 个/肾小球切面比(31.9±6.2)个/肾小球切面，P ＜ 0.01]，且足突增宽融合。1，25（OH）2D3治疗组各时间点尿蛋白量（24 h）[7 d时（9.95±3.82） mg]和BUN、Scr显著低于PAN组（P < 0.05），且肾脏病理改变减轻。（2）PAN组7 d时nephrin mRNA和蛋白的表达显著降低，nephrin由正常的沿毛细血管襻线状分布向颗粒状、团快状改变，足细胞凋亡数显著增加[14 d时，（37.4±7.9）个/肾小球切面]。与PAN组相比，1，25（OH）2D3治疗组各时间段nephrin mRNA和蛋白的表达显著增加，且保持着正常的沿毛细血管襻线状分布，足细胞凋亡数显著减少[14 d时，(21.9±6.2) 个/肾小球切面，P < 0.01]。（3）PAN组TGF-β1 mRNA和蛋白的表达以及p-Smad2/3蛋白的表达均高于NC组（P < 0.01），1，25（OH）2D3治疗组TGF-β1 mRNA和蛋白的表达以及p-Smad2/3蛋白的表达低于PAN组（P < 0.01）。 结论 1，25（OH）2D3能有效地抑制PAN诱导的足细胞凋亡，减少尿蛋白，其对足细胞损伤的保护作用可能与抑制TGF-β1信号通路有关。     

高原低氧环境下大鼠肾脏水通道蛋白2的表达及意义

目的 研究高原低氧环境下大鼠肾脏内髓水通道蛋白2（AQP2）mRNA及蛋白的表达。 方法 将40只雄性SD大鼠随机分为24 h、48 h、72 h及1周组，同时设立对照组（西宁地区）。将4个实验组由西宁地区（2260 m）带至青海大学可可西里高原医学研究基地(4600 m)，在不同时间点处死取材。用放射免疫法检测血浆抗利尿激素(AHD)浓度，Western印迹、实时定量PCR、免疫荧光等方法检测AQP2蛋白及mRNA的表达。 结果 暴露于高原低氧环境后，大鼠AHD水平首先呈下降趋势，24 h为（142.46±10.57）；48 h时达到最低水平，仅为对照组的28.5%[（86.94±6.49） μg/L比（302.53±10.48） μg/L]；后逐渐上升，72 h组为（169.65±11.15） μg/L，与对照组差异均有统计学意义（均P < 0.01）；1周时为（306.46±11.14） μg/L达到对照组水平。AQP2 mRNA的表达与AHD水平的变化相一致，初入高原后呈下降趋势，48 h时达到最低水平，后逐渐上升，24 h、48 h、72 h组与对照组差异均有统计学意义（分别为0.04±0.005，0.03±0.002，0.04±0.003比0.09±0.008，均P < 0.01），1周时为（0.09±0.01），达到对照组水平。AQP2蛋白表达与mRNA的表达变化一致。免疫荧光结果显示，对照组及1周组大鼠肾脏荧光强度表达一致，其余各组较低，48 h组荧光强度最低。 结论 在高原低氧环境下大鼠肾脏内髓AQP2 mRNA和蛋白的表达在缺氧早期呈下降趋势，后逐渐上升到正常水平，其改变可能和机体对缺氧的程度和高原低氧的习服过程有关。     

肿瘤坏死因子α介导人脐动脉血管平滑肌细胞成骨样钙化

目的 观察肿瘤坏死因子α（TNF-α）对体外培养人脐动脉血管平滑肌细胞（hUASMC）骨特异性碱性磷酸酶（BAP）、骨桥蛋白（OPN）和骨形成蛋白2（BMP-2）等成骨样分化标志蛋白表达以及细胞外钙盐沉积的影响。 方法 植块贴壁法原代培养人hUASMC。予以TNF-α刺激，甲O-酚酞络合酮方法测定细胞外基质钙盐沉积；Von Kossa法观察钙化染色；实时定量PCR法测定血管平滑肌细胞BAP和OPN mRNA表达水平；免疫印迹法观察血管平滑肌细胞BAP、OPN和BMP-2蛋白表达水平。 结果 一定浓度范围内的TNF-α可促进hUASMC增殖；增加细胞外基质钙盐沉积。TNF-α 50 μg/L刺激可在第3天上调血管平滑肌细胞BAP和OPN mRNA表达水平（BAP mRNA：1.908±0.034比1.000±0.033，OPN mRNA： 3.600±0.073比1.000±0.079，均P < 0.05）。TNF-α 50 μg/L刺激可在第5天上调血管平滑肌细胞BAP、OPN和BMP-2蛋白表达水平（BAP蛋白：3.394±0.083比1.000±0.030，OPN蛋白： 1.967±0.134比1.000±0.070，BMP-2蛋白：2.745±0.289比1.000±0.208， 均P < 0.05）。 结论 一定浓度范围的TNF-α可刺激hUASMC增殖；介导细胞成骨样分化；增加细胞外基质钙盐沉积，从而参与血管钙化的发生发展。     

ATP结合元件A1与肾间质泡沫细胞形成、小管间质损害及血清胆固醇的相关性

目的 研究肾小球肾病患者肾间质区域ATP结合元件A1（ABCA1）蛋白的表达及其与泡沫细胞形成、肾小管间质损害、血清胆固醇的相关性。方法 选取诊断明确的Alport综合征患者5例、膜增生性肾小球肾炎（MPGN）患者28例、局灶节段性肾小球硬化（FSGS）患者35例、特发性膜性肾病（IMN）患者36例、IgA肾病（IgAN）患者34例为研究对象。采用免疫组织化学法检测患者肾间质区域（除肾小管）ABCA1蛋白的表达;用直线相关分析其与肾间质区域泡沫细胞相对面积、肾小管间质损害积分、血清胆固醇的相关性。 结果 在各类肾小球疾病患者的肾间质区域中,浸润的单核巨噬细胞、泡沫细胞及肾小管上皮细胞均表达ABCA1蛋白。泡沫细胞浸润者肾间质区域ABCA1蛋白的阳性表达量显著高于无泡沫细胞浸润者（P < 0.05）,但ABCA1的阳性表达量与泡沫细胞相对面积无相关。MPGN、FSGS、IMN患者肾间质区域ABCA1表达量与肾小管间质损害积分呈正相关（P < 0.05）。血清胆固醇与肾间质区域ABCA1蛋白的阳性表达量呈正相关（P < 0.05）。 结论 在各种病理类型的肾小球疾病患者中,血清胆固醇可促进肾间质ABCA1的表达;ABCA1对胞内脂质的转运具有双向作用,其与泡沫细胞形成缺乏肯定关联;ABCA1可能参与了肾小管间质的损害。     

Dietary cholesterol and oxidised cholesterol: effects on sperm characteristics,antioxidant status and hormonal profile in rats

Present study was designed to compare the potential effects of high serum levels of LDL and oxidised LDL (OxLDL) on spermatogenesis parameters in male Wistar rats. Animals were allocated into three groups and were fed for 14 weeks with normal, cholesterol‐rich and oxidised cholesterol‐rich diets. Blood lipid profile, sex hormones level, as well as sex organs weight were evaluated. The sex organs weight in oxidised cholesterol‐fed group was significantly reduced (P < 0.05). Spermatozoa count in the group with high serum concentration of OxLDL (64 ± 4.2 × 10⁶) was markedly lower (P < 0.01) than that of normal rats (87 ± 4.1 × 10⁶) and rats with high serum level of LDL (90 ± 6.3 × 10⁶). Similarly, the percentage of viable spermatozoa was significantly (P < 0.001) decreased from 78% to 52% by high level of OxLDL in serum. While, nonoxidised LDL did not have suppressive effects on spermatogenesis and organs weight. Consistent with these effects, the serum concentration of sex hormones including FSH (P < 0.001), LH (P < 0.001) and testosterone (P < 0.01) was significantly decreased only in rats with high level of OxLDL but not in rats with high level of nonoxidised LDL. In conclusion, high OxLDL level showed higher destructive effect on reproductive system compared to the high LDL level.     

胆囊黏膜ABCA1的表达和胆囊胆固醇息肉发病关系的研究

目的：研究ABCA1在胆囊黏膜的表达及其表达与胆囊胆固醇息肉发病的关系。方法：收集因胆囊疾患而行腹腔镜胆囊切除术病人的胆石、胆汁、胆囊黏膜及胆囊壁全层组织共计42例,其中胆囊胆固醇息肉15例,胆囊胆固醇结石15例,对照组12例（胆囊腺瘤5例,非胆固醇胆囊结石7例）。分别测定胆石胆固醇含量、胆汁胆固醇、胆汁酸、磷脂的浓度;实时PCR定量检测胆囊黏膜ABCA1、LXRα、RXRα的mRNA表达：胆囊壁全层组织做病理切片;免疫组化显示ABCAl蛋白在胆囊黏膜的表达．结果：胆固醇息肉组胆汁胆固醇饱和指数为1．0±0．2,较对照组胆固醇饱和指数0．6±0．3明显增高,其差别有统计学显著性（P〈0．01）。免疫组化显示ABCA1在胆囊黏膜上皮细胞有明显表达。息肉组、结石组和对照组胆囊黏膜ABCAI、LXRa、RXRα mRNA相对表达量比较,各组之间差异无统计学意义。结论：胆囊黏膜ABCA1的表达可能并不是导致胆囊胆固醇息肉发病的重要原因。     

胆固醇对人半月板纤维软骨细胞影响的初步探讨

目的探究胆固醇对人半月板纤维软骨细胞基质合成及降解相关基因表达的影响及其机制。方法获取关节镜手术患者半月板组织并提取纤维软骨细胞,分为对照组(正常细胞不做处理)、阳性对照组(白介素-1β进行退行性病变造模)和15μg/mL组(给予15μg/mL浓度胆固醇处理细胞)、30μg/mL组(给予30μg/mL浓度胆固醇处理细胞)。番红O染色、β-半乳糖苷酶染色和酶法试剂盒分别检测半月板细胞形态及总胆固醇(TCH)含量,免疫荧光和Western blot检测Ⅰ型胶原前体α1(COL1A1)和Ⅱ型胶原前体α1(COL2A1)的蛋白表达,RT-qPCR检测COL1A1、COL2A1、基质金属蛋白酶(MMP)3、MMP9、MMP13,以及胆固醇流出通路相关基因的mRNA表达,如肝脏X受体α(LXRα)、ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)和ABCG1。结果与对照组比较,阳性对照组的人半月板细胞TCH含量无显著变化,差异无统计学意义(P>0.05);当给予胆固醇处理后,即15μg/mL组和30μg/mL组人半月板细胞TCH含量较对照组显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,15μg/mL组和30μg/mL组LXRα、ABCA1和ABCG1的mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,阳性对照组、15μg/mL组和30μg/mL组半月板细胞的密度降低、分布紊乱且细胞特征逐渐减弱,明显老化。与对照组相比,15μg/mL组和30μg/mL组可以降低半月板细胞COL1A1和COL2A1的mRNA表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,15μg/mL组和30μg/mL组半月板细胞的MMP3、MMP9和MMP13的mRNA表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论胆固醇可能通过抑制半月板细胞胆固醇流出通路,进而导致半月板细胞内胆固醇蓄积,最终引起半月板细胞发生退行性病变。     

胆囊结石病人小肠胆固醇吸收相关基因表达的初步研究

目的 该研究通过分析胆石病人小肠胆固醇吸收相关基因的表达情况探讨小肠胆固醇吸收的遗传凶素在胆石病发生中的作用.方法 研究包括10例胆囊结石病人和7例无胆石症的对照.实时定量PCR法测定近段空肠黏膜胆固醇吸收相关基因mRNA的表达量.结果 胆石组小肠胆固醇吸收相关基因的mRNA表达量与对照组没有统计学差异(NPCIL1:1.15±0.60 vs 0.80±0.29;ABCG5:3.11±2.70 vs 1.92±1.38;ABCG8:3.65±2.08 vs 2.85±1.33;ACAT2:0.30±0.25vs 0.20±0.16;MTTP:12.35±8.10 vs 8.22±5.74,P>0.05).结论 胆石病人小肠胆固醇吸收相关基因表达差异不是胆石病发生的主要遗传因素.     

PPAR agonists protect mesangial cells from interleukin 1beta-induced intracellular lipid accumulation by activating the ABCA1 cholesterol efflux pathway

Previous studies have demonstrated that inflammatory cytokines such as interleukin-1beta (IL-1beta) promote lipid accumulation in human mesangial cells (HMC) by dysregulating the expression of lipoprotein receptors. Intracellular lipid accumulation is governed by both influx and efflux; therefore, the effect of IL-1beta on the efflux of lipid from HMC was investigated. IL-1beta was shown to inhibit (3)H-cholesterol efflux from HMC and increase total intracellular cholesterol concentration, probably as a result of reduced expression of the adenosine triphosphate (ATP) binding cassette A1 (ABCA1), a transporter protein involved in apolipoprotein-A1 (apo-A1)-mediated lipid efflux. To ascertain the molecular mechanisms involved, expression of peroxisome proliferator-activated receptors (PPAR) and liver X receptoralpha (LXRalpha) were examined. IL-1beta (5 ng/ml) reduced PPARalpha, PPARgamma, and LXRalpha mRNA expression. Activation of PPARgamma with the agonist prostaglandin J2 (10 micro M) and of PPARalpha with either bezafibrate (100 micro M) or Wy14643 (100 micro M) both increased LXRalpha and ABCA1 gene expression also and enhanced apoA1-mediated cholesterol efflux from lipid-loaded cells, even in the presence of IL-1beta. A natural ligand of LXRalpha, 25-hydroxycholesterol (25-OHC), had similar effects; when used together with PPAR agonists, an additive effect was observed, indicating co-operation between PPAR and LXRalpha in regulating ABCA1 gene expression. This was supported by the observation that overexpression of either PPARalpha or PPARgamma by transfection enhanced LXRalpha and ABCA1 gene induction by PPAR agonists. Taken together with previous data, it appears that, in addition to increasing lipid uptake, inflammatory cytokines promote intracellular lipid accumulation by inhibiting cholesterol efflux through the PPAR-LXRalpha-ABCA1 pathway. These results suggest potential mechanisms whereby inflammation may exacerbate lipid-mediated cellular injury in the glomerulus and in other tissues and indicate that PPAR agonists may have a protective effect.     

Sepsis syndrome stimulates proximal tubule cholesterol synthesis and suppresses the SR-B1 cholesterol transporter

BACKGROUND: Previous studies demonstrate that renal cortical/proximal tubule cholesterol accumulation is part of the renal "stress response." The present study was performed to help define underlying mechanisms, using experimental sepsis as a test model. METHODS: Male CD-1 mice and female low-density lipoprotein receptor (LDLR) knockout mice were injected with a heat-killed Escherichia coli suspension. Renal cortex and serum were obtained from these and control mice either 4, 6, or 18 hours later. Tissues samples were assayed for free cholesterol (FC), cholesteryl esters (CE), HMG CoA reductase (HMGCR) mRNA, and SR-B1 [the high-density lipoprotein (HDL) receptor/cholesterol transporter]. Statin effects on renal cortical HMGCR mRNA and FC/CE levels also were assessed. Finally, the impact of serum from septic versus normal mice on cultured proximal tubule (HK-2) cell cholesterol levels was assessed. RESULTS: Sepsis induced approximately 30% and 300 to 500% increases in renal FC and CE content, respectively. Cholesterol accumulation was not blunted in LDLR-/- mice versus their controls. Statin therapy also did not alter sepsis-induced renal FC/CE accumulation. However, statin treatment exerted no discernible intra-renal activity (for example, no rise in renal HMGCR mRNA), despite significant extra-renal activity (25% reduction in serum cholesterol; 400% increase in hepatic HMGCR mRNA). HK-2 cells exposed to septic serum sustained a 40% cholesterol increase, compared to cells exposed to control serum. This response was completely statin inhibited, proving that de novo synthesis was involved. Sepsis markedly suppressed renal levels of SR-B1 (an FC efflux protein). Renal HMGCR mRNA did not fall despite sepsis triggered cholesterol loading, indicating a failure of negative feedback activity. CONCLUSIONS: Sepsis-induced renal cholesterol accumulation is not simply an intrinsic renal response, since it can be enhanced by circulating "stress factors" that drive HMGCR activity. Sepsis also down-regulates SR-B1. Thus, decreased cell FC efflux, coupled with increased synthesis, may synergistically induce the post-sepsis cholesterol overload state.