rhTNF—α联合IL—2对急性髓细胞白血病患者骨髓体外净化的研究

目的 探讨重组人肿瘤坏死因子α（rhTNF-α）联合白细胞介素2（IL-2）对急性髓细胞白血病（AML）骨髓体外净化的作用。方法 rhTNF-α(1000u/ml)和IL-2（500u/ml)联合，对17例AML患者骨髓体外净化培养1-3d，用甲基纤维素半固体培养法测定粒-巨噬细胞集落（CFU-GM）、白血病祖细胞（CFU-L）形成，并以免疫组化法测定CD33、CD38和CD34阳性表达率的变化。结果 （1）rhTNF-α对8例正常人和17例患者的CFU-GM均有明显的抑制作用。而与IL-2联合作用对CFU-GM则无明显影响；（2）单用rhTNF-α或IL-2与患者骨髓共同孵育1d和3d，CFU-L形成率均有所下降，但至孵育3d后，尚残余20%、6%的白血病克隆，不能完全根除CFU-L，而两者联合作用3d后，CFU-L抑制率达100%；（3）17例AML患者骨髓经rhTNF-α、IL-2净化培养3d后，白敌国病细胞CD33、左右8帮CD34阳性表达率发生了明显变化。结论 （1）单用rhTNF-α或IL-2净化效果不理想；（2）rhTNF-α联合IL-2对CD34阳性表达率发生了明显的变化。结论 （1）单用rhTNF-α或IL-2净化效果不理想；（2）rhTNF-α联合IL-2对CFU-L有选择性杀伤作用。而对正常CFU-GM无明显影响。净化效果较好；（3）白血病细胞CD33、CD38、CD34阳性率的变化可间接评价AML骰须净化效果。     

体外高热对急性非淋巴细胞白血病细胞的净化作用

本实验发现正常骨髓细胞经不同温度（３７℃～４３℃）、不同时间（３０ｍｉｎ、６０ｍｉｎ和９０ｍｉｎ）其细胞形态和细胞化学染色均无明显变化。而急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）患者的骨髓白血病细胞随温度增高退化细胞和核溶解细胞增多。正常人骨髓粒单祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）生长仅在加热４３℃才明显减少，而白血病祖细胞（ＣＦＵ－Ｌ）的生长随温度升高呈指数性下降。证明ＣＰＵ－Ｌ对高热的敏感性高于ＣＰＵ－ＧＭ，高热能选择性杀伤白血病祖细胞。４２℃６０ｍｉｎ和４３℃３０ｍｉｎ能尽可能多杀伤ＣＦＵ－Ｌ，而保留较多ＣＦＵ－ＧＭ，不影响正常骨髓造血重建，是清除骨髓ＣＦＵ－Ｌ的最适合温度。但即使加热至４３℃９０ｍｉｎ仍有少量的白血病祖细胞存在，可造成复发，最好与其他方法联合净化骨髓ＣＦＵ－Ｌ，以利自体骨髓移植（ＡＢＭＴ）持久成功。     

白细胞介素—2,γ干扰素净化模拟白血病缓解期骨髓及用PCR检 …

探讨白细胞介素２（ＩＬ－２）、γ－干扰素用于自体骨髓中残留白血病细胞的净化及用聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测净化效果。方法：将ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ与模拟慢性粒细胞白血病缓解解的骨髓在培养体系中分别培养１－６ｄ,通过ＲＴ－ＰＣＲ方法来检测缓解期骨髓中ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ消失情况。     

自体树突状细胞用于慢性粒细胞白血病骨髓净化的初步研究

目的 考察慢性粒细胞白血病（CML）树突状细胞（DC）刺激自体骨髓T细胞,清除白血病细胞的作用。方法 采用3例CML病人（2例慢性期和1例急变期）外周血,分离单个核细胞（PBMNC）,经塑料贴壁后在含自体血浆、重组人白介素4（rhIL－4)、重组人粒－单集落刺激因子（rhGM－CSF）和重组人肿瘤坏死因子（rhTNFα）的RPMI－1640培养液。37℃CO2孵箱培养10天,或用免疫磁珠从PBMNC分离DC,在含自体血浆、rhGMCSF和rhTNFα的RPMI1640培养液培养3天,收获的细胞即DC加到含rhIL－2的Dexter骨髓长期培养体系,置37℃,5％CO2孵箱培养7天,观察前后骨髓细胞的免疫表型和P210阳性细胞比例。结果 从CML病人外周血获得的DC大多数表达P210。在含rhIL－2的Dexter体系加入DC能进一步增加体系中的T细胞数。在2例慢性期病人体系中的P210。在含rhIL－2的Dexter体系加入DC能进一步增加体系中的T细胞数。在2例慢性期病人体系中的P210阳性细胞减少,但在急性期病例,体系中P210细胞明显增加。结论 CML病人的DC表达P210,能刺激自体骨髓中T细胞增生,在慢性期病人,这些自体DC活化的骨髓T细胞有清除白血病细胞的作用。     

IL-2、IFN-α、lNF-α联合激活正常骨髓细胞净化K 562细胞的研究

目的研究IFN-α、TNF-α和IL-2联合激活正常骨髓细胞对白血病细胞的体外净化作用.方法采用细胞集落形成法和逆转录多聚酶链反应,检测激活的正常骨髓对K562细胞的净化作用.并观察其对正常造血及造血微环境的影响.结果 3种细胞因子均能激活骨髓细胞,以3种同时应用作用最强,且bcr/abl融合基因检测阴性(Rt-PCR法);IL-2+IFN-α作用次之bcr/abl融合基因阳性率41%;其后是IL-2+TNF-α和单独使用IL-2;最后是单用TNF-α,bcr/abl融合基因均阳性.3种细胞因子对CFU-GM的抑制很小,对CFU-F和CFU-Blast有促进作用.结论 IL-2、IFN-α和TNF-α联合应用有助于净化白血病骨髓.     

IL-2并IFNα对老年急性白血病化疗效果的影响

①目的　探讨白细胞介素 2 (IL 2 )并干扰素α(IFNα)对老年急性白血病化疗效果的影响。②方法采用联合化疗治疗老年急性白血病 18例 (Ⅰ组 ) ,化疗联合IL 2、IFNα治疗 14例 (Ⅱ组 ) ,IL 2并IFNα治疗 8例(Ⅲ组 ) ,比较 3组病人治疗后完全缓解率、有效率 ;观察治疗前后外周血白细胞 (WBC)、血小板计数 (BPC)、血红蛋白 (Hb)、骨髓幼稚细胞数的变化。③结果　Ⅰ～Ⅲ组治疗有效率分别为 38.8%、6 4 .2 %、2 5 .0 % ,各组比较无显著性差异 (Hc=4 .2 6 ,P >0 .0 5 ) ;Ⅰ、Ⅱ组治疗后外周血WBC、BPC及骨髓幼稚细胞数均较治疗前明显下降 (t =2 .387～ 6 .0 15 ,P <0 .0 5 ) ;治疗后 3组WBC比较有显著性差异 (F =4 .6 6 ,P <0 .0 5 ) ,Ⅰ、Ⅱ组均较Ⅲ组明显降低(q =3.34、4 .36 ,P <0 .0 5 ) ;其余各项观察指标 3组比较差异无显著性 (F =1.5 6～ 2 .97,P >0 .0 5 )。药物副作用较少。④结论　化疗与IL 2、IFNα联合在老年急性白血病治疗中可能有协同作用。IL 2和IFNα的应用不增加化疗药物对骨髓的抑制作用 ,其副作用可耐受。     

IL—2、IFN—α、INF—α联合激活正常骨髓细胞净化K562细胞的研究

目的 研究IFN-α、TNF-α和IL-2联合激活正常骨髓细胞对白血病细胞的体外净化作用。方法 采用细胞集落形成法和逆转录多聚酶链反应,检测激活的正常骨髓对K562细胞的净化作用。并观察其对正常造血及造血微环境的影响。结果 3种细胞因子均能激活骨髓细胞,以3种同时应用作用最强,且bcr/abl融合基因检测阴性（Rt-PCR法）;IL-2 IFN-α作用次之,bcr/abl融合基因阳性率41%;其后是IL-2 INF-α和单独使用I轼;最后是单用TNF-α,bcr/abl融僵基因均阳性,3种细胞因子对CFU-GM的抑制很小,对CFU-F和CFU-Blast有促进作用。结论 IL-2、TNF-α联合应用有助于净化白血病骨髓。     

长期骨髓培养、白细胞介素2、干扰素α2a体外净化慢性粒细胞白血病骨髓的研究

用长期骨髓培养（ＬＴＢＭＣ）和白细胞介素２（ＩＬ－２,１０００Ｕ／ｍｌ）,干扰素α２ａ（ＩＦＮ－α２ａ,１０００Ｕ／ｍｌ）不同的组合方案,对１０例慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）骨髓进行体外净化培养２周。结果发现：①单用ＬＴＢＭＣ体系其净化效果差;②加入ＩＬ－２后,对ＣＭＬ的ＣＦＵ－ＧＭ以及ｐｈ＇（＋）细胞有明显的杀伤作用（Ｐ＜０．０１,Ｐ＜０．０５）对正常的ＣＦＵ－ＧＭ则无影响;③ＩＦＮ－α２ａ在ＬＴＢＭＣ体系中抑制ｐｈ＇（＋）细胞生长而不影响ＣＭＬ和正常的ＣＦＵ－ＧＭ;④ＬＴＢＭＣ、ＩＬ－２、ＩＦＮ－α２ａ三者净化ＣＭＬ骨髓具有协同作用。结果提示：ＬＴＢＭＣ、ＩＬ－２、ＩＦＮ－α２ａ联合净化效果好,可用于临床净化ＣＭＬ骨髓     

IL-2、IFN-α、INF-α联合激活正常骨髓细胞净化K_(562)细胞的研究

目的 研究IFN_α、TNF_α和IL_2联合激活正常骨髓细胞对白血病细胞的体外净化作用。方法 采用细胞集落形成法和逆转录多聚酶链反应 ,检测激活的正常骨髓对K562 细胞的净化作用。并观察其对正常造血及造血微环境的影响。结果 3种细胞因子均能激活骨髓细胞 ,以3种同时应用作用最强,且bcr/abl融合基因检测阴性 (Rt_PCR法 ) ;IL_2 IFN_α作用次之 ,bcr/abl融合基因阳性率41% ;其后是IL_2 TNF_α和单独使用IL_2 ;最后是单用TNF -α ,bcr/abl融合基因均阳性。3种细胞因子对CFU_GM的抑制很小 ,对CFU_F和CFU_Blast有促进作用。结论 IL_2、IFN_α和TNF_α联合应用有助于净化白血病骨髓。     

长期骨髓培养,白细胞介素2,干扰素α2a体外净化慢性粒细？…

用长期骨髓培养的白细胞介素２（ＩＬ－２,０００Ｕ／ｍｌ）,干扰素α２ａ（ＩＦＮ－α２ａ,１０００Ｕ／ｍｌ）不同的组合方案,对１０例慢性粒细胞白血病骨髓进行体外净休培养２周,结果发现：（１）单用ＬＴＢＭＣ体系其次化效果差;（２）加入ＩＬ－２后,对ＣＭＬ的ＣＦＵ－ＧＭ以及ｐｈ’（＋）细胞有明显的杀伤作用,对正常的ＣＦＵ－ＧＭ则无影响;（３０ＩＦＵ－α２ａ在ＬＴＢＭＣ体系中抑制ｐｈ‘（＋）细胞生长而影响     

白细胞介素-2、γ干扰素净化模拟白血病缓解期骨髓及用PCR检测净化效果

目的:探讨白细胞介素 2(IL-2)、γ-干扰素(IFN-γ)用于自体骨髓中残留白血病细胞的净化及用聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测净化效果.方法:将IL-2、IFN-γ与模拟慢性粒细胞白血病(CML)缓解期的骨髓在培养体系中分别培养 1～6d,通过RT-PCR方法来检测缓解期骨髓中bcr/abl mRNA消失情况.结果:模拟缓解期CML骨髓经与IL-2、IFN-γ 24h、48h和 72h培养后用RT-PCR方法仍可检测到bcr/abl mRNA,而经 6d培养后则已测不到.若将IL-2、IFN-γ合用,经 24和 48h培养的骨髓可检测到bcr/abl mRNA,但经 72h和 6d培养后便检测不到,而对照组在 1～6d培养后仍可检测到该基因.结论:初步实验结果表明IL-2、IFN-γ对缓解期骨髓中的K562白血病细胞系具有净化作用,若两者合用具有协同作用,RT-PCR可作为评估净化效果较为敏感和较为可靠的检测方法.     

新亲溶酶体剂IHW_2净化白血病骨髓研究

目的观察新亲溶酶体剂IHW_2对白血病骨髓净化效果,并验证该药物的靶向性。方法体外直接作用于L7811白血病细胞;观察该药物对AML患者骨髓白血病祖细胞和正常骨髓造血干细胞的效应;用615小鼠模拟白血病进行净化;电镜观察经药物作用后HL-60细胞超微结构的变化;临床对5名AML自体骨髓移植患者的骨髓进行净化。结果①IHW_2体外有选择性细胞毒作用;当用量为85μg/1×10~7细胞时,IHW_2能杀灭100白血病细胞而同时保留19.4±16.5％的正常造血干细胞;②模拟净化各组小鼠的生存期均超过36天。而未用药物的对照组仅存活15.5±1.5天(P<0.01);③超微结构证实IHW_2的作用靶点系溶酶体;④5例患者中,1例死于移植后ARDS,2例于移植后3、17个月复发,2例无病生存分别为84和86个月。结论IHW_2的作用靶点系溶酶体,是良好的骨髓净化剂,其应用有效和安全。     

急性白血病患儿与血清IL-10、IFN-γ水平的相关性

目的 :探讨急性白血病患儿与血清IL-10、IFN-γ水平的相关性,分析急性白血病可能的免疫逃逸机制。方法 :回顾性分析我院2011年5月至2014年8月期间收治的84例急性白血病患儿的临床资料,所有患儿均采用ELISA法测定其血浆IL-10、IFN-γ水平。结果 :急性白血病患儿血浆中IL-10浓度明显高于对照组,IFN-γ水平明显低于对照组;经化疗后,完全缓解组、部分缓解组、死亡组患儿治疗前血浆中IL-10浓度依次升高,IFN-γ浓度则依次降低。结论 :急性白血病初发患儿体内Th2型细胞占绝对优势,导致肿瘤局部呈现免疫抑制状态,可能是急性白血病的一个免疫逃逸机制。肿瘤局部Th1型细胞因子极度缺乏,而Th2型细胞因子明显增多,说明患儿可能存在预后不良。故临床实践中可通过测定Th1、Th2型细胞因子评估患儿的免疫状态及预后情况。     

IL-2、TNF-α、IFN-α对造血细胞及造血微环境的影响

研究 IL- 2、TNF- α和 IFN- α在激活骨髓细胞抗肿瘤活性的同时对造血细胞和造血微环境的影响。方法和结果 :IL- 2、TNF- α和 IFN- α以不同组合作用于标本 ,发现造血细胞 (CFU- GM)和 CFU- F形成率 :IL- 2组为 6 0 .5 8± 10 .12 ,10 .2 5± 3.89;IL- 2 IFN- α组为 42 .5 8± 8.2 6 ,37.85± 10 .31;IL- 2 IFN- α TNF- α组为 35 .17± 5 .92 ,5 8.31± 19.19;IL- 2 TNF- α为 30 .16± 4.36 ,43.0 0± 13.90 ;TNF- α组为 40 .16± 9.73,41.75± 13.2 8;对照组 70 .33± 12 .92 ,35 .0 0± 11.6 0 ,除 IL- 2 IFN- α组的 CFU- F外 ,P均 <0 .0 1;而基质细胞对 CFU- Blast的支持率分别为 2 0 .33± 7.80 ,2 6 .5 8± 8.5 1,36 .83± 8.49,36 .92± 7.11,33.0 0±6 .78,2 1.90± 7.35 ,除 IL- 2组外 P均 <0 .0 1。结论 :IFN- α、TNF- α对 CFU- GM有一定抑制作用 ,而对 FU- F以及基质细胞对造血的支持作用有一定的促进作用。