视网膜色素变性Rd1小鼠眼球中增殖细胞核抗原（PCNA）的表达

目的　探讨增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）在Rd1小鼠视网膜上的表达情况。方法　取出生后14 d、21 d、28 d的Rd1小鼠和C57BL/6J小鼠各5只,摘出眼球进行HE染色,观察视网膜形态学结构变化;免疫组织化学染色与实时荧光定量PCR检测PCNA蛋白和基因在不同鼠龄小鼠中的表达。结果　HE染色结果显示:PCNA蛋白均在两种小鼠视网膜神经节细胞中表达;C57BL/6J小鼠视网膜结构完整;与C57BL/6J小鼠相比,Rd1小鼠视网膜发育随着鼠龄的增加,发生进行性退化。免疫组织化学染色结果显示:PCNA蛋白表达仅局限于视网膜神经节细胞,免疫阳性信号出现在第14天和第21天,而在第28天未检测到。PCR 实验结果显示:与C57BL/6J小鼠相比较,鼠龄21 d时Rd1小鼠PCNA基因表达水平增高,是C57BL/6J小鼠的2.23倍;鼠龄14 d和28 d时 Rd1小鼠PCNA基因表达均低于C57BL/6J小鼠（均为P<0.05）。结论　PCNA基因参与了Rd1小鼠视网膜发育退化过程。     

中性粒细胞在不同品系正常小鼠角膜的分布及其与角膜创伤修复的关系

背景 以往人们通常认为角膜无血管、无髓系来源的免疫细胞存在.C57BL/6J小鼠、BALB/c小鼠和裸鼠是眼科免疫学基础研究的常用模型,这些小鼠的角膜是否存在天然免疫的关键细胞——中性粒细胞是值得关注的问题. 目的 研究实验室常用的C57BL/6J鼠、BALB/c鼠和裸鼠正常角膜的中性粒细胞分布特征及其与角膜创伤修复的关系,为相关研究提供依据. 方法 选取角膜正常、10 ～ 12周龄的SPF级雄性C57BL/6J鼠、BALB/c鼠和BALB/c背景的裸鼠各16只,取3种小鼠各8只制备成中央区相连的4瓣角膜铺片,并以角膜周边血管缘为界向内以3个同心圆分区.分别用Gr-1-FITC抗体和CD31/PECAM-1-PE抗体对角膜中性粒细胞和血管进行免疫荧光染色,用免疫荧光显微镜和AR软件测量角膜血管面积并计数中性粒细胞.选取3种小鼠各8只制备角膜创伤模型,用无菌手术刀片以角膜中央为中心做十字划痕,深度至角膜前弹力层.创伤后即刻（0 h）、12h、24 h用2 g/L荧光素钠点眼,荧光显微镜下以AR软件计算不同时间点的创伤面积.于划痕后24 h取小鼠角膜制备铺片,用Gr-1-FITC抗体和CD31/PECAM-1-PE抗体行荧光染色,比较3种创伤小鼠角膜的血管分布、中性粒细胞的数量和分布情况.实验动物的饲养与使用均遵循美国视觉与眼科研究协会制定的科研动物使用规范. 结果 正常C57BL/6J小鼠、BALB/c小鼠和裸鼠角膜中性粒细胞总数分别为（1 733±237）、（353±96）和（1 601 ±223）个/角膜,BALB/c小鼠角膜中性粒细胞数明显少于C57BL/6J小鼠和裸鼠,差异均有统计学意义（P＜0.01）.3种正常小鼠角膜缘均可见血管分布,BALB/c小鼠角膜缘血管面积明显小于C57BL/6J小鼠和裸鼠,C57BL/6J小鼠角膜缘血管面积明显大于裸鼠,差异均有统计学意义（P＜0.01）.3种正常小鼠中性粒细胞的数量与血管面积均呈明显正相关（C57BL/6J：r=0.936,P=0.001;BALB/c：r =0.939,P=0.001;     

视网膜变性小鼠视网膜组织中FasL蛋白表达的动态变化

背景 视网膜移植是治疗视网膜变性性疾病的新方法,但如何避免或减少视网膜移植后的免疫排斥反应是亟待解决的问题之一.目前的实验研究中常将正常C57 BL/6小鼠视网膜作为供体,视网膜变性(rd)小鼠作为受体.研究表明视网膜中Fas配体(FasL)蛋白通过FasL/Fas途径诱导Fas+炎症细胞凋亡,推测可能与视网膜移植后的免疫排斥反应密切相关. 目的 探讨FasL蛋白在不同鼠龄C57BL/6小鼠和rd小鼠视网膜中的表达特点,揭示小鼠视网膜的免疫特性,为视网膜移植免疫排斥反应的研究提供参考依据.方法 分别将出生后(PN)-0周(出生日)、PN-1周、PN-2周、PN-3周、PN-4周的正常C57BL/6小鼠和rd小鼠处死制备眼球冰冻切片,采用免疫荧光技术摄片,并经激光扫描共焦显微镜采集图片,用图像分析软件对各鼠龄不同品系小鼠间视网膜中FasL蛋白表达的荧光强度(FI)变化进行半定量分析. 结果 PN-1周C57BL/6小鼠视网膜发育尚不完善,FasL蛋白在视网膜各层均呈阳性表达.PN-2、3、4周C57BL/6小鼠已发育成10层的视网膜结构,FasL蛋白在视网膜色素上皮(RPE)、内节段(IS)、外界膜(OLM)、外丛状层(OPL)、内核层(INL)、内丛状层(IPL)及节细胞层(GCL)呈阳性表达.PN-1周rd小鼠视网膜结构与同龄C57BL/6小鼠接近,FasL蛋白在视网膜各层均呈阳性表达.PN-2周至PN-4周rd小鼠视网膜中外核层(ONL)细胞随着鼠龄增大逐渐减少,FasL蛋白在RPE、OPL、INL、IPL及GCL呈阳性表达;PN-2、3、4周rd小鼠RPE中FasL蛋白表达FI值分别为184.199±16.747、186.797±7.904和184.319±18.795,均明显高于同龄C57BL/6小鼠的160.402±22.851、160.995±22.799和105.787±17.676,差异均有统计学意义(t=-3.360,P=0.002;t’=-4.277,P=O.000;t=-12.175,P=0.000);各周龄rd小鼠与C57BL/6小鼠间视网膜IPL中FasL蛋白表达的FI值差异均无统计学意义(均P＞O.05).结论 rd小鼠随着鼠龄增加视网膜ONL细胞逐渐减少,其RPE内免疫赦免相关抗原FasL蛋白的表达强度明显高于同龄C57BL/6小鼠.     

机械敏感通道蛋白Piezo在眼球组织中的表达分布研究

目的 探索机械敏感通道蛋白Piezo1和Piezo2在眼球的表达分布。设计实验研究。研究对象12周龄的成年雄性C57BL/6N小鼠9只(9眼),成年雄性Piezo 1^td-Tomato小鼠3只(3眼),人眼球石蜡切片1张。方法 通过RNAscope荧光原位杂交实验检测Piezo1和Piezo2 mRNA在C57BL/6N小鼠眼球视神经冰冻切片上的表达;通过实时荧光聚合酶链反应定量实验(qPCR)检测Piezo1和Piezo2 mRNA在C57BL/6N小鼠眼球中的相对表达量;通过免疫印迹实验检测Piezo1和Piezo2蛋白在C57BL/6N小鼠眼球中的表达;通过免疫荧光染色实验检测Piezo1-tdTomato蛋白在Piezo 1^td-Tomato小鼠眼球视神经冰冻切片中的表达;通过免疫荧光染色实验检测人眼球石蜡切片中Piezo1蛋白的表达分布。主要指标相对荧光强度,循环阈值(Ct值)。结果 RNAscope荧光原位杂交实验显示Piezo1 mRNA在角膜、虹膜、睫状体、晶状体上皮、巩膜、视网膜、视盘胶质筛板区的神经组织中表达,Piezo2...     

NOX2基因缺陷对rd1小鼠感光细胞凋亡的保护作用

目的 观察NADPH氧化酶2(NOX2)基因缺陷对遗传性视网膜变性小鼠1(rd1)感光细胞的保护作用。设计 实验研究。研究对象 出生后14天的NOX2基因缺陷rd1小鼠(实验组)6只及同龄NOX2基因缺陷的C57BL/6N小鼠(对照组1)、无NOX2基因缺陷的rd1小鼠(对照组2)、C57BL/6N野生正常小鼠(对照组3)各6只(共24只)。方法 对照组1与对照组2小鼠多次交配获得实验组小鼠并进行基因型鉴定。取该实验鼠及对照组小鼠眼球,对视网膜进行HE染色并测量视网膜外核层厚度,TUNEL染色并计算凋亡细胞占外核层细胞总数百分比、免疫荧光法CD1 1b抗体标记小胶质细胞并检测NOX2主要亚单位gp91^pbox蛋白的表达。主要指标 视网膜外核层厚度,感光凋亡细胞百分比,gp91^pbox蛋白的表达量,小胶质细胞活化情况。结果 与同龄对照组2相比,实验组小鼠视网膜内外核层排列整齐,其外核层厚度(36.18±2.59)μm明显大于对照组2小鼠(21.45±1.33)μm(t=8.77,P=0.001)。实验组小鼠视网膜凋亡细胞主要出现于外核层,但数量...     

不同波长光照射对rd12和C57BL/6J小鼠视网膜光损伤的对比研究

目的 探讨不同波长光照射对rd12和C57BL/6J小鼠视网膜光损伤的影响.方法 取rd12和C57BL/6J小鼠各32只,随机分成对照组、白光组、中波长光(505 nm)组和短波长光(405 nm)组,各组光照强度为(800±130) Lux,每天照射12h,持续7d.于光照前1d和光照后1、4、7d进行视网膜电流图(ERG)检测,光照7d后通过活体组织氧化应激活性氧(ROS)高质荧光检测ROS水平,免疫荧光法和蛋白质免疫印迹法检测抗过氧化物酶6(PRDX6)的表达,测定半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性.结果 C57BL/6J小鼠ERG反应随光照时间延长振幅逐渐降低,短波长光组下降最明显,光照后1、4、7d各组明视反应b波振幅率比较,差异均有统计学意义(F=4.412,5.082,9.980;P＜0.01).7d时对照组、白光组、中波长光组和短波长光组b波振幅率分别下降至(85±10)％、(70±19)％、(57±22)％、(46±19)％比较,其中,短波长光组与白光组比较,差异有统计学意义(t=3.19,P＜0.01).ROS含量测定显示,rd12小鼠各组ROS相对量比较,差异有统计学意义(F=16.08,P＜0.01),短波长光较其它组明显升高.PPDX表达比较,差异有统计学意义(F=7.214,P＜0.05).短波长光组较其它Caspase-3相对活性检测结果比较,差异有统计学意义(F=7.530,P＜0.05).C57BL/6J小鼠各组ROS含量、PRDX6蛋白及Caspase-3活性测定结果比较,差异均无统计学意义(F=3.625,1.993,1.133;P＞0.05).rd12与C57BL/6J小鼠各组比较,仅短波长光组Caspase-3相对活性检测结果差异有统计学意义(t=5.474,P＜0.05).结论 短波长光照射对小鼠视网膜具有损伤作用,其对rd12小鼠的影响较C57BL/6J小鼠显著.损伤机制可能与氧化损伤有关.     

Toll样受体2调节Th细胞极化对小鼠角膜移植排斥反应发生的影响

目的 探究Toll样受体2(Toll like receptor 2,TLR2)是否通过调节辅助性T细胞(T helper cells,Th)极化影响角膜移植排斥反应的发生.方法 取30只C57BL/6小鼠和30只TLR2基因敲除小鼠为受体,BALB/c小鼠为供体,在受体小鼠右眼行同种异体角膜移植术,分别为野生组和基因敲除组;取19只C57BL/6小鼠右眼行自体角膜移植术,为自体组.术后每周两次裂隙灯下观察植片水肿程度和透明度,参照Sonoda评分标准对排斥指数(reject index,RI)进行评分;术后14 d收集角膜.分别取9只C57BL/6小鼠和TLR2基因敲除小鼠作为野生对照组和基因敲除对照组,行常规HE染色和实时荧光定量PCR检测.结果 术后随时间变化各手术组植片水肿和混浊程度不一,以野生组最为严重.角膜RI评分显示术后7d、14 d、21 d,基因敲除组(0.80 ±0.83、0.90±0.55、1.35±0.99)低于野生组(1.55 ±0.94、2.25 ±0.97、2.55±1.19),差异均有统计学意义(P=0.008、0.000、0.000).HE染色显示,野生组角膜基质层出现水肿和大量炎性细胞;而基因敲除组和自体组炎症反应较轻.PCR检测显示,基因敲除组角膜Th1和Th17细胞因子(IFN-γ和IL-17)mRNA表达(1.94±0.34、2.62±0.30)比野生组(4.27±0.37、3.99±0.40)低,差异均有统计学意义(P=0.000、0.001);Th2细胞因子(IL-4)三组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 敲除TLR2可能通过抑制Th向Th1和Th17极化,降低角膜移植排斥率.     

青光眼动物模型DBA／2J小鼠的眼部特征及组织学观察

目的评价不同月龄DBA／2J小鼠的眼压、眼部特征及组织学变化。方法清洁级DBA／2J小鼠36只,3、5、7、9、11、14月龄各6只,3、9、14月龄的C57BL／6J小鼠各6只为对照。分别对实验鼠行眼前节照相,前房微管法眼压测量。用尼氏染色法对鼠视网膜切片进行染色并在光学显微镜下行视网膜神经节细胞（RGCs）计数,光学显微镜下对视网膜冰冻切片行视盘的形态学观察。结果鼠眼前节检查表明,DBA／2J小鼠从5月龄始逐渐发生虹膜色素播散、虹膜萎缩,虹膜透照可见瞳孔变形。眼压从7月龄开始升高,9月龄眼压升至高峰,14月龄降至对照组水平。各月龄DBA／2J小鼠眼压间的差异有统计学意义（F=27．600,P〈0．05）,各月龄C57BL／6J小鼠眼压间的差异无统计学意义（F=0．249,P=0．781）。DBA／2J鼠RGCs数量从7月龄开始减少,9～11月龄减少明显,各月龄DBA／2J鼠RGCs计数间的差异有统计学意义（F=23．594,P=0．000）,各月龄C57BL／6J小鼠RGCs计数的差异无统计学意义（F=1．816,P=0．211）。DBA／2J小鼠视盘凹陷于9～14月龄开始逐渐加深,而各月龄C57BL／6J小鼠的视盘形态无明显变化。结论随月龄的增长,DBA／2J小鼠眼前节病变逐渐加重,表现出继发性青光眼的相关形态学改变。DBA／2J小鼠是研究青光眼发病机制和视神经保护较好的动物模型。     

高糖环境下Ndufa4线粒体复合体相关蛋白2(Ndufa4l2)对小鼠视网膜感光细胞661W的影响

目的 探讨高糖环境下Ndufa4线粒体复合体相关蛋白2(Ndufa4l2)对视网膜感光细胞661W功能的影响及其相关机制.方法 体内实验:选取C57BL/6J小鼠12只,采用随机数字表法分为糖尿病组和正常组,每组各6只,糖尿病组小鼠采用腹腔注射链脲佐菌素造模,正常组小鼠腹腔注射等体积柠檬酸缓冲液.采用免疫组织化学法检测...     

不同胚期B6-Co小鼠眼睑组织中血清反应因子的表达变化

背景 C57BL/6角膜混浊表型的突变系(B6-Co)小鼠具有出生眼睑闭合不全(EOB)表型,是研究眼睑发育机制的良好动物模型.探讨血清反应因子(SRF)与B6-Co小鼠EOB表型形成的关系可为人类先天性眼睑发育缺陷产生机制的研究提供理论依据.目的 检测SRF在B6-Co小鼠胚胎眼睑发育关键时期的表达.方法 采用肌内注射戊巴比妥钠安乐死术,分别剖取B6-Co母鼠以及表型正常B6母鼠体内胚胎期(E)16.5 d、E17.5 d和E18.5 d小鼠各9只,分离眼睑组织,分别采用实时定量PCR法和Western blot法检测小鼠眼睑组织中SRF mRNA及其蛋白的相对表达水平.取各胎龄的B6-Co小鼠和B6小鼠制作组织冰冻切片,利用免疫荧光技术检测并比较2种小鼠SRF在眼睑组织中的定位和表达强度.结果 B6-Co小鼠E16.5 d和E17.5 d眼睑组织中SRF mRNA的相对表达水平分别为0.41±0.06和0.24±0.17,明显低于B6小鼠的1.03±0.17和1.01±0.09,差异均有统计学意义(P=0.025、0.017);B6-Co小鼠E16.5 d和E17.5 d眼睑组织中SRF蛋白的表达水平分别为0.08±0.01和0.08±0.01,明显低于B6小鼠的0.12±0.03和0.13 ±0.02,差异均有统计学意义(P=0.036、0.024);而2种小鼠间E18.5 d时眼睑组织中SRF mRNA及其蛋白的表达量差异均无统计学意义(P=0.387、0.774).免疫荧光染色显示,SRF蛋白多表达于B6-Co小鼠和B6小鼠眼睑组织的角质层细胞,但B6-Co小鼠眼睑角质形成细胞中SRF蛋白表达的荧光强度明显弱于B6小鼠.结论 SRF在B6-Co小鼠眼睑组织中的表达量明显下调,SRF可能参与眼睑发育缺陷的发生过程.     

频域光学相干断层扫描对C57BL／6小鼠及色素兔眼前后节结构特点的活体观察

背景频域光学相干断层扫描（SD—OCT）可进行活体组织的测量。目前SD—OCT对人眼活体组织测量的研究已有较多报道,但对实验动物眼的活体测量结果少有研究。目的应用SD—OCT活体观察正常C57BL／6小鼠的眼前节结构及色素兔的角膜、视盘及视网膜形态结构。方法利用轴向分辨率为5μm、扫描速度为26000次／s的SD—OCT对4只健康SPF级C57BL／6小鼠8只眼扩瞳前后进行眼前节形态学检查;利用SD—OCT对6只健康SPF级色素兔12只眼进行角膜及视盘、视网膜形态学检查。结果SD—OCT进行眼前节扫描,清晰可见C57BL／6小鼠角膜、虹膜及瞳孔区对应的晶状体结构,而且扩瞳前后晶状体结构形态发生明显改变,角膜SD—OCT扫描断层图与相应的切片图结构相对应,扩瞳前平均中央角膜厚度（CCT）为（96±9）μm,平均前房深度（ACD）为（460-e8）汕m,平均角膜水平直径（wTw）为（2．86±0．41）mm;扩瞳后CCT为（96±8）μm,ACD为（356±20）μm,wTW为（2．87±0．62）mm,C57BL／6小鼠扩瞳前后CCT、wTw测量值的比较差异均无统计学意义（t=0．478,P=0．647;t=0．737,P=0．485）;扩瞳后ACD较扩瞳前明显变浅,差异有统计学意义（t=-13．022,P〈0．001）。色素兔的SD—OCT眼前节检查均可见明显的角膜及视网膜分层,结构分别与相应的组织学切片相对应,扩瞳后角膜最薄点均值为（370±10）μm,视网膜厚度均值为（175：e4）Ixm,水平扫描后手动测量数据视盘深度均值为（1．35±0．51）mm,宽度均值为（4．52±0．82）mm。结论SD—OCT作为一种非接触、非侵人性检查,可清晰呈现C57BL／6小鼠眼前节结构及色素兔相应的角膜和视网膜结构,测量指标可用于实验研究过程中相应组织结构的活体观察。     

CYP1B1基因缺失小鼠在高糖皮质激素环境下对青光眼的易感性

目的观察高浓度糖皮质激素对CYP1B1^-/-小鼠青光眼易感性的影响。方法采用成年CYP1B1^-/-小鼠作为实验模型,以同龄C57BL／6J小鼠作为对照。每3天结膜下注射0．04mL倍他米松,用Tonopen眼压（IOP）笔每周定期测定小鼠IOP,于第一次给药前,给药后4、8、12周分别摘除眼球,制备石蜡切片,光学显微镜下观察小鼠视网膜形态和厚度,采用TUNEL法检测视网膜神经节细胞（RGCs）的凋亡。结果与给药前相比,2组小鼠给药后4、8、12周的IOP均较前升高,差异有统计学意义（P〈0．05）;CYP1B1^-/-小鼠的IOP在给药后8周、12周较C57BL／6J小鼠显著升高,差异有统计学意义（P〈0．05）。随着倍他米松注射时间的推移,2组小鼠视网膜纤维层均变薄,各时间组的总体差异有统计学意义（P〈0．05）;且CYP1B1^-/-小鼠视网膜纤维层厚度在给药后8周、12周较C57BL／6J小鼠显著变薄,差异有统计学意义（P〈0．05）。2组小鼠RGCs凋亡的速度与给药前相比均显著增加,差异有统计学意义（P〈0．05）;且CYP1B1^-/-小鼠与C57BL／6J小鼠相比结果更为显著（P〈0．05）。结论在高浓度糖皮质激素的诱导下,CYP1B1^-/-小鼠对青光眼的易感性增加。     

rd11小鼠视锥细胞变性过程中视蛋白的变化特点

背景视网膜变性11（rd11）小鼠是近年来新发现的一种自发突变的视网膜变性小鼠。研究证实,rd11小鼠出生后随着鼠龄的增长出现快速的光感受器变性,且视杆细胞变性早于视锥细胞变性,但对于视网膜不同区域视锥细胞变性的特点还不十分清楚。目的应用视网膜铺片免疫荧光染色技术观察不同鼠龄rd11小鼠M-视蛋白和S-视蛋白在视网膜的表达分布及变化特点,为相关疾病的基因治疗研究提供实验依据。方法取出生后14、28、42d的rd11小鼠各5只,制备视网膜铺片,采用免疫荧光组织化学法分别标记小鼠视网膜后极部颞上、颞下、鼻上和鼻下象限M-视蛋白和S-视蛋白的表达,观察随rd11小鼠鼠龄的变化视网膜各区域M-视蛋白和S-视蛋白的荧光形态和密度,并与相应鼠龄的C57BL／6J小鼠进行比较。结果出生14d的rd11小鼠视网膜M-视蛋白和S-视蛋白的红色荧光形态和密度与C57BL／6J小鼠接近,但出生28d的rd11小鼠视网膜后极部颞上、颞下、鼻上、鼻下4个区域M-视蛋白和S-视蛋白表达密度均明显降低,荧光形态由纺锤形逐渐变为点状,出生42d的rd11小鼠视网膜部分区域M-视蛋白和S-视蛋白表达消失。出生28d的rd11小鼠视网膜后极部颞上、颞下、鼻上、鼻下区域M-视蛋白的表达密度分别为（414±32）、（300±8）、（324±22）和（250±20）个／0．037mm^2,明显低于同龄C57BL／6J小鼠的（484±21）、（442±19）、（459±34）和（436±12）个／0．037mm^2,差异均有统计学意义（t=4．114、15．225、7．505、17．990,均P〈0．05）;上述4个区域S-视蛋白的表达密度下降更明显,分别为（8±4）、（175±16）、（74±13）、（315±20）个／0．037mm^2,明显低于C57BL／6J小鼠的（73±16）、（436±30）、（393±30）和（480±19）个／0．037mm^2,差异均有统计学意义（t=8．555、17．076、21．637、13．498,均P〈0．05）。结论rd11小鼠视锥细胞中的M-视蛋白和S-视蛋白均随着鼠龄的增长而急剧减少,以S-视蛋白更为明显。随着鼠龄的增长,rd11小鼠M-视蛋白变性从视神经周围区向鼻下方,再向颞上方逐渐进展,而S-视蛋白变性由颞上方向鼻下方逐渐进展。     

白细胞介素17中和性抗体对角膜移植排斥反应的抑制作用

背景白细胞介素17（IL-17）是一种促炎性细胞因子,在多种器官移植免疫排斥反应和自身免疫性疾病中发挥致病作用。IL-17拮抗剂在器官移植排斥反应中的作用被广泛研究,但其对角膜移植后排斥反应防治作用的研究较少。目的探讨抗小鼠IL-17单克隆抗体对小鼠角膜移植排斥反应的抑制效果。方法选取8～10周龄C57BL／6小鼠25只和BALB／c小鼠50只,将直径2min的C57BL／6小鼠双眼中央角膜作为供体角膜移植到50只BALB／c小鼠右眼角膜植床上,11,0尼龙线间断缝合8针,建立小鼠角膜移植模型。将建立的40只角膜移植小鼠模型按随机数字表法随机分为2个组,术后腹腔内分别注射小鼠IL-17中和性抗体（IL-17中和性抗体组）或同型对照抗体（同型对照抗体组）,并于术后不同时间点根据Plskova等的标准对受体角膜植片的炎症反应情况进行评分,≥5分为发生排斥反应。应用免疫荧光组织化学法检测受体植片炎性细胞的浸润;用逆转录PCR法对植片中的炎性细胞进行定量;应用ELISA法分析两组受体小鼠Th1、Th2和Th17相关细胞因子在脾脏中的表达情况。结果与同型对照抗体组相比,IL-17中和性抗体可以提高角膜植片的存活率（P〈0．05）。IL-17中和性抗体组受体植片中性粒细胞、CD4＋T淋巴细胞和CD8＋T淋巴细胞mRNA含量分别为2．22±0．10、1．64±0．04、1．32±0．10,明显低于同型对照抗体组的3．61±0．08、2．69±0．06、2．17±0．04,差异均有统计学意义（P=0．000、0．000、0．000）。同型对照抗体组受体小鼠脾脏中γ-干扰素（IFN-γ）、IL-12p40和IL-17质量浓度分别为（741．48±10．51）、（1156．90±69．93）、（366．13±7．93）ng／L,明显高于IL-17中和性抗体组的（529．80±13．83）、（539．58±10．74）、（173．70±8．11）ng／L,差异均有统计学意义（P=0．000、0．001、0．000）。结论中和IL-17的生物学活性可以在一定程度上抑制同种异体角膜移植术后的免疫排斥反应。     

超抗原活化的耐受性淋巴细胞防治高危角膜移植免疫排斥反应的实验研究

目的检测超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B（SEB）体外活化的小鼠淋巴细胞的免疫耐受功能,探讨该细胞对小鼠高危角膜移植免疫排斥反应的防治作用。设计实验研究。研究对象14只BALB／C小鼠作为供体,28只C57BL/J小鼠作为受体。方法无菌取C57BL/J小鼠脾脏淋巴细胞,制备成5×10^6／ml的混悬液,分别与SEB和刀豆蛋白A（ConA）体外共培养,MTF法测定细胞增殖。用流式细胞仪测定SEB和ConA体外活化的淋巴细胞在第0、6天时的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞和CD3＋NK1．1＋NKT细胞百分比。以BALB／c小鼠为供体,C57BL,J小鼠为受体,建立小鼠高危角膜移植动物模型,术后分为实验组、对照组,并分别结膜下注射0．05ml培养6天的SEB活化的淋巴细胞悬液（浓度1×10^＋个细胞／m1）及相同体积的生理盐水,术后观察记录植片的存活状况,并进行组织病理学检查和免疫组织化学检测。主要指标角膜植片平均存活时间,组织病理学及免疫组织化学染色检查淋巴细胞浸润情况。结果SEB、ConA与淋巴细胞共培养前OD570cm值均为0．15±0．01（n=6）,共培养后第3天为0．25±0．07和0．59±0．06,第6天为0．43±0．07和0.35±0．05。SEB组培养后的淋巴细胞中CD3^＋NK1．1＋NKT细胞由0天时的（1．21±0．19）％升高到（5．67±0．25）％,CD4^＋CD25＋调节性T细胞由（0．37±0．06）％升高到（0．98±0．12）％。活化淋巴细胞结膜下注射后小鼠角膜植片平均存活（28．60±3．75）天,而生理盐水组为（22．13±4．91）天,两者比较差异有统计学意义（P=0．006）。HE染色显示对照组植片中度水肿,角膜基质纤维板层结构排列紊乱,有炎性细胞浸润,植片中可见新生血管。而实验组植片仅轻度增厚,基质板层纤维排列规则,未见炎性细胞浸润及新生血管长人。免疫组织化学染色显示治疗组小鼠角膜植片中CD4^＋和C     

Apolipoprotein E modulates establishment of HSV-1 latency and survival in a mouse ocular model

PURPOSE: To evaluate and compare the neuroinvasiveness and neurovirulence after ocular HSV-1 infection in ApoE knockout (ApoE-/-) and control C57BL/6 (ApoE+/+) mice. METHODS: Age-matched (14 weeks of age) C57BL/6J (ApoE+/+) female mice and female ApoE knockout (ApoE-/-) mice were inoculated by corneal scarification with HSV-1 strain 17Syn+. Analysis of HSV-1 replication in the mouse cornea was assessed through infectious virus assays of ocular (tear film) swabs at 1 to 5 days postinoculation (PI), slit-lamp examination (SLE) of corneas at PI days 1 to 7, and survival of infected mice. The contribution of apoE to the efficient establishment of latency was measured by real-time PCR quantitation of the latent viral genome in the trigeminal ganglia (TG) of infected mice. RESULTS: These studies showed that HSV-1 strain 17Syn+ replicates efficiently in the eyes, regardless of the host ApoE genotype. Neither the scoring of corneal pathology via SLE nor the infectious virus assay of the tear film resulted in any statistical differences between ApoE knockout (-/-) mice or the C57BL/6 (ApoE+/+) mice. In mice latently infected with HSV-1, our real-time PCR data showed significantly lower viral copy numbers of HSV-1 DNA in ApoE knockout (ApoE-/-) mice compared with C57BL/6 (ApoE+/+) mice. C57BL/6 (ApoE+/+) mice are more susceptible to the neurovirulence of HSV-1 strain 17Syn+ than female ApoE knockout (-/-) mice, as demonstrated by the fact that 50% (7/14) of the female C57BL/6 (ApoE+/+) mice inoculated with 17Syn+ died, as opposed to none (0/14) of the age- and sex-matched ApoE knockout mice. CONCLUSIONS: These data indicate that age (14 weeks) and sex-matched (female) wild mice with an ApoE null background (ApoE-/-) are more resistant and less efficient in the establishment of latency compared with ApoE+/+ mice in the C57BL/6 background.     

小鼠睁眼前后角膜神经纤维长度与密度的变化及其意义

背景 目前已有许多关于哺乳动物发育阶段角膜神经分布的研究,但是尚无对睁眼前后这几个时间段角膜神经分布的研究.目的 了解小鼠睁眼前后角膜神经纤维长度与密度随着年龄增长的变化规律,为进一步的实验和临床研究提供依据.方法 SPF级C57B L/6小鼠分为出生后1 d(P1 d)、P7d、P13 d(睁眼前1d)、P14 d(半睁眼)、P17 d(完全睁眼后1d)和P23 d(完全睁眼后7d),各组均5只鼠10只眼.采用β-微管蛋白Ⅲ抗体进行整张角膜铺片免疫荧光染色,使用Delta Vision Core拍摄角膜背鼻侧、背颞侧、腹鼻侧和腹颢侧的神经纤维图像,根据体视学测量线性结构的原理,运用Image-Pro Plus 5.1软件中的“手动测量-建立多边形特征”计算角膜面积,并且使用LnsgRand.grd曲线(间距为53 μm)分别计算各组小鼠的角膜面积、神经纤维总长度以及各分区的神经纤维密度.结果 C57/BL6小鼠P1、P7、P13、P14、P17、P23 d的角膜面积分别为(0.404±0.007)、(1.362±0.154)、(1.573±0.080)、(1.603±0.046)、(1.847±0.052)、(2.445±0.798)mm2,神经纤维总长度值分别为(3.718±1.044)、(19.065±3.350)、(23.687±0.907)、(27.309±2.477)、(31.989±3.976)、(41.214±1.573)mm,神经纤维密度分别为(9.592±1.138)、(14.506±1.908)、(15.088±1.241)、(16.772±1.897)、(16.821±2.102)、(17.660±1.216)mm/mm2,均随鼠龄的增长而增加,差异均有统计学意义(F=22.906、0.424、2.375,P=0.000),角膜面积和神经纤维长度之间呈正相关(r=0.983,P＜0.01).角膜4个分区的神经纤维密度随年龄的增长而增加(背鼻侧区:F=0.159,P=0.000；背颢侧区:F=2.172,P=0.001；腹鼻侧区:F=1.998,P=0.000；腹颞侧区:F=2.352,P=0.000).其中从P13 d到P14 d,背鼻侧区的神经纤维密度减少了6.0％,差异无统计学意义(t=0.589,P=0.572)；而且从P14 d到P17 d,背颞侧区、腹鼻侧区和腹颞侧区的神经纤维密度分别减少了4.6％、5.5％和0.1％,差异均无统计学意义(t=0.549,P=0.596:t=0.701,P=0.501；t=-0.100,P=0.919).结论 小鼠睁眼过程对整个角膜或角膜各分区神经纤维的发育都有不同程度的影响.从P17 d开始,小鼠角膜神经纤维呈追赶性增长,恢复增长趋势.     

Variation in the number of sites of latency of herpes simplex virus in trigeminal ganglia of inbred mice

Following uniocular topical corneal inoculation with herpes simplex virus type 1 (HSV), 176-fold more virus was recovered by 14-day cultivation in vitro from latently infected ipsilateral trigeminal ganglia (TG) of BALB/c mice than from TG of C57BL/6 mice (p = 0.002). Since these quantitative differences may reflect a difference in the number of latently infected cells or a difference in the ability of virus to replicate in secondarily infected cells during cultivation in vitro, experiments were designed to estimate the actual number of sites of latency. Two to four months after topical corneal inoculation, when no active ocular disease was present, minced TG were digested with 2% collagenase. The dissociated cells were placed on monolayers of vero cells, incubated at 31 degrees C, and observed for cytopathic effect (CPE) for 14 days. Ipsilateral TG from BALB/c mice produced five-fold more foci of infection than TG from C57BL/6 mice (p = 0.007). The number of foci of infection was also dependent upon the dose of virus used to infect the eye. Following infection with high doses of HSV, virus was reactivated from contralateral TG, but in lower numbers than from ipsilateral TG. In vitro studies showed that the replication of virus in ganglia from BALB/c mice was 3-8-fold greater than that in ganglia from C57BL/6 mice. These data support the hypothesis that host genetic factors and the number of infectious particles inoculated influence the number of latently infected cells in the trigeminal ganglion after corneal infection with HSV.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)