淫羊藿甙对小鼠T淋巴细胞体外中期和晚期活化的影响

目的:研究淫羊藿甙(ICA)对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T淋巴细胞体外中期和晚期活化的影响.方法:采用流式细胞术(FCM)结合双色荧光抗体染色技术分别检测中期和晚期活化标志CD25和CD71分子的表达; 取中期活化的细胞上清, 利用LuminexTM100分析上清中IL-2、 IL- 4、 IL-10、 TNF-α、 IFN-γ的含量变化.结果:ICA在终浓度0.3、 1.5、 3.0 μmol/L时明显抑制CD25的表达而对CD71没有明显影响; 下调Th2型细胞因子及上调Th1型细胞因子的分泌量, 但没有剂量依赖效应.结论:ICA下调CD25、 IL-2和Th2型细胞因子水平, 抑制T细胞活化, 同时有一定程度的促进细胞免疫反应, 因此ICA可能具有双向调节免疫平衡的作用.     

淫羊藿甙对小鼠腹腔巨噬细胞体外增殖、吞噬和产生NO的影响

无菌分离小鼠腹腔巨噬细胞,制备单细胞悬液,加入不同终浓度的淫羊藿甙孵育4 h后,加入细菌脂多糖LPS(终浓度20 mg/L)48 h后以MTT法检测其增殖;加药孵育4 h后,分别加入直径1μm和2μm的微球(终浓度1×1010/L),5 h后利用流式细胞术(FCM)检测吞噬情况;加入LPS(终浓度20 mg/L)24 h后Griess试剂盒检测巨噬细胞NO的量。结果显示ICA在终浓度1.5、3.0μmol/L时能明显抑制LPS刺激的巨噬细胞增殖(P<0.01)和NO的产生,并促进其吞噬微球的功能。提示ICA可能抑制LPS信号转导从而抑制巨噬细胞增殖,并且通过抑制其活化,下调iNOS有关的炎症因子,使NO减少;对于未活化的巨噬细胞,ICA可能通过上调其吞噬功能,增强固有免疫系统来抵御病原体侵入。     

山奈酚对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响

目的:研究山奈酚(KA)对小鼠T细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨.方法:分离小鼠淋巴结细胞,加入多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)进行刺激,以不同终浓度的KA与T细胞共培养.流式细胞术结合双色荧光抗体染色,检测T细胞早期活化抗原CD69的表达;MTT法检测KA对T细胞增殖的影响;用碘化丙锭(PI)染色分析T细胞的细胞周期.结果:终浓度为10、20和40 μmol/L的KA可以显著抑制ConA刺激的T细胞CD69的表达,由ConA组的(39.11±1.17)%,分别降低为(30.64±0.23)%、(27.95±0.04)%和(5.63±0.37)%(P<0.05);MTT法结果显示,KA对ConA诱导的小鼠T淋巴细胞增殖,具有明显的抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖性;PI染色结果显示,随着KA浓度的增加,均能明显阻止淋巴细胞进入S期和G2/M期.结论:KA可显著抑制ConA刺激下的小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖;它能抑制T淋巴细胞进入细胞分裂期.     

淫羊藿次苷Ⅱ对小鼠脾淋巴细胞体外增殖的影响及其机制研究

目的:研究淫羊藿次苷Ⅱ对正常小鼠脾淋巴细胞体外增殖的影响,并初步探讨其机制。方法:不同浓度的淫羊藿次苷Ⅱ与刀豆素A(Concanavalin A,ConA)体外处理小鼠脾淋巴细胞,观察淫羊藿次苷Ⅱ对细胞增殖的影响,初步确定其发挥作用的最佳浓度;然后以最佳浓度淫羊藿次苷Ⅱ在不同时间点与ConA协同处理细胞,采用细胞增殖-毒性检测试剂盒检测增殖能力;运用流式细胞仪检测细胞周期分布;用荧光定量分析仪检测细胞内游离Ca2+浓度的变化。结果:淫羊藿次苷Ⅱ在10-12～10-9mol/L的浓度范围作用48小时,对细胞增殖有一定的促进作用,呈浓度依赖性。在10-7～10-4mol/L范围出现抑制作用。以10-9mol/L的淫羊藿次苷Ⅱ处理细胞,发现其与ConA在不同时间点促进细胞增殖作用显著优于ConA单独应用;并且促进细胞由G0/G1期进入S与G2/M期,并以第24小时效果更明显;促进细胞内Ca2+浓度升高,效果以第12小时最明显。结论:不同浓度的淫羊藿次苷Ⅱ对小鼠脾淋巴细胞增殖具有促进作用,有浓度、时间依赖性,这种促增殖作用的机制可能与升高细胞内Ca2+浓度,进而加快细胞由G0/G1期进入S与G2/M期有关。     

橙皮素对小鼠T淋巴细胞体外活化与增殖的影响

目的:研究橙皮素(Hes)对小鼠T细胞体外活化和增殖的影响,并探讨其作用机制.方法:用ConA刺激小鼠淋巴结来源的淋巴细胞,以不同终浓度Hes与T细胞共培养,利用荧光标记抗体双染色结合流式细胞术(FCM),检测各药物浓度Hes对ConA诱导的小鼠T细胞表达早期活化抗原CD69的作用;以酶标仪结合MTT比色法检测Hes药物的细胞毒性和对ConA诱导的小鼠淋巴结来源的淋巴细胞增殖的影响;以羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色结合FCM检测Hes对ConA诱导的小鼠T细胞增殖的作用,并应用ModFit软件分析其增殖指数(PI).结果:淋巴细胞的存活率说明0.2 mL/L DMSO和25～75 μmol/L范围内的Hes对小鼠T淋巴细胞无毒副作用;MTT法、CFDA-SE法、双抗体染色法检测Hes对ConA诱导的小鼠T淋巴细胞的增殖和活化结果均显示,终浓度为25、50、75 μmol/L的Hes对ConA诱导的小鼠T淋巴细胞的增殖和活化均有抑制作用且呈剂量依赖关系.结论:有望通过进一步的研究将Hes发展为免疫抑制药物.     

芹菜素对小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖的抑制作用

研究芹菜素(apigenin,AP)对小鼠T细胞体外活化和增殖的影响,探讨其作用机制,以及将其开发为免疫抑制药物的可能。无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度(25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、150μmol/L和200μmol/L)的芹菜素预孵育4 h,用多克隆刺激剂刀豆蛋白A(concanavalin A,ConA)诱导T细胞活化和增殖,并用MTT法检测该药物浓度对T细胞的毒性作用。荧光标记抗体双染色结合流式细胞术,检测各浓度AP对ConA诱导的小鼠T细胞表达早期、中期和晚期活化抗原CD69、CD25和CD71的影响;以二乙酰羧基荧光素-琥珀酰亚胺酯(carboxyfluoresceindiacetate-succinim-idyl ester,CFDA-SE)染色结合流式细胞术,检测各浓度AP对ConA诱导的小鼠T细胞增殖的影响,并应用ModFit软件分析其增殖指数(proliferation index,PI)。结果显示,25~200μmol/L AP对ConA诱导的T细胞CD69、CD25的表达有显著抑制作用(P<0.01),且呈剂量依赖关系;25μmol/L和50μmol/L的AP抑制CD71的表达,但高浓度(大于100μmol/L)才有显著抑制作用(P<0.01)。各浓度AP对ConA诱导的T细胞增殖均有显著抑制作用(P<0.01),且呈剂量依赖关系。表明在一定浓度范围内,AP可显著抑制ConA诱导的小鼠T细胞体外活化及增殖,有望通过进一步研究将其开发成免疫抑制药物。     

MTT法检测淫羊藿甙对几种瘤细胞株增殖的抑制作用

应用ＭＴＴ法检测淫羊藿甙对ＨＬ-６０、Ｈ７４０２和ＷＥＨＩ-３瘤细胞株增殖的抑制作用。结果表明细胞浓度、检测波长和时间均影响Ａ值大小；淫羊藿甙对几种肿瘤细胞表现抑制作用，提示淫羊藿甙是一种有潜力的抗癌中药。     

淫羊藿甙对脑缺血再灌损伤小鼠的保护作用

目的：探讨淫羊覆甙对脑缺血再灌损伤小鼠的保护作用及其机制。方法：采用双侧颈总动脉夹闭合并取血降压再灌注的方法建立小鼠脑缺血再灌损伤模型，随机分为假手术组、模型组、淫羊藿甙防治组，检测各组行为学、总抗氧化能力、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、ATPase酶活性的变化。结果：(1)模型组小鼠学习记忆能力减退．淫羊藿甙(10、30、100mg／kg)灌胃可不同程度的提高小鼠学习记忆成绩。     

米诺环素对小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖的影响

研究米诺环素(MNC)对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T细胞体外活化和增殖的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨。以ConA刺激小鼠淋巴结来源的淋巴细胞,以不同终浓度的MNC与T细胞共培养,荧光抗体染色结合流式细胞术,检测T细胞早期活化抗原CD69的表达;用羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰(CFDA-SE)染色结合流式细胞术,并用ModFit软件分析T细胞增殖相关指数。结果:终浓度为10、25和50μmol/L的MNC显著抑制ConA诱导的T细胞CD69的表达,由ConA组的71.20%±1.08%,分别降低为64.43%±1.39%、53.34%±1.26%和33.65%±1.91%;CFDA-SE染色结果显示,培养48 h和72 h的ConA组T细胞的增殖指数(PI)分别为1.57±0.03和2.06±0.02,各浓度的MNC对ConA刺激的T细胞增殖具有明显的抑制作用,以50μmol/L的MNC抑制作用最明显,48 h和72 h的PI分别为1.01±0.02和1.03±0.01,与相应时间的对照组比较,均有统计学意义(P<0.01)。MNC能有效地抑制小鼠T细胞的体外活化和增殖。具有独立于其抗菌活性的抗炎作用。     

银杏内酯B对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖与凋亡的影响

目的银杏内酯B(GB)是已知的天然而强效的血小板激活因子(PAF)受体(PAFR)拮抗剂,本文研究GB对小鼠T淋巴细胞活化、增殖及凋亡3大体外行为的影响,初步探讨其潜在的免疫调节作用与机制,从而为临床应用提供可靠的实验依据。方法分离小鼠淋巴细胞,培养前以不同浓度的GB预孵;以刀豆蛋白A(Con A)诱导细胞的活化与增殖,以荧光抗体双色标记(anti-CD3 mAb-PE/anti-CD69 mAb-FITC、anti-CD3 mAb-PE/anti-CD25 mAb-FITC)结合流式细胞术分别检测T淋巴细胞早、中期活化标志--表面抗原CD69与CD25的表达,以活体荧光染料CFDA-SE标记结合流式细胞术检测细胞增殖并用MTT法佐证;以地塞米松(Dex)诱导细胞的凋亡,以荧光染料双色标记[DiOC6(3)/PI]结合流式细胞术区别凋亡、死亡与活细胞群。结果 Con A刺激后6 h和24 h,T细胞早期活化标志CD69和中期活化标志CD25分别大量表达,Con A刺激后48 h活化的T细胞增殖至第4代,而经终浓度为5、10、20μmol/L GB在Con A刺激前对细胞进行4 h预孵处理可以显著下调T细胞表面抗原CD69、CD25的表达并能有效抑制细胞增殖。Dex诱导后12 h细胞凋亡和死亡群显著增大,而经同样的GB预孵处理可以在一定程度上抑制细胞的凋亡进程,对细胞凋亡显示出一定的保护作用。结论 GB能有效抑制小鼠T淋巴细胞的活化与增殖,并且对细胞凋亡起到一定的保护作用,凭借GB对T细胞此3大行为出色的调节作用,理应将其作为天然的免疫抑制剂候选者进行更深入的研究。     

Caspase在T细胞活化与增殖中的作用

半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶( caspases)是一类同源蛋白酶,主要参与细胞的凋亡过程.近年来的研究表明,该家族部分成员在T细胞活化与增殖中亦发挥重要作用,主要体现在以下3个方面:T细胞活化过程中检测到多种caspases活性;caspase-8失活后导致了人与鼠T细胞免疫的缺陷;体外实验中,caspase抑制剂能够阻断抗CD3单抗及超抗原引起的T细胞的活化与增殖.目前,部分体内实验已经证实了caspase抑制剂抗免疫反应及抗炎症反应的有效性,这为免疫性及炎症性疾病提供了新的治疗思路,为研制新型抗免疫、抗炎药物提供了依据.     

c-Jun氨基末端激酶在小鼠T细胞增殖中的作用

目的研究c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)在小鼠T细胞增殖中的作用。方法以活体染料羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)染色,建立了在多克隆刺激剂刀豆蛋白A(Con A)刺激下评价小鼠T细胞增殖的模型,通过流式细胞术分析JNK的一种新的特异性抑制剂SP600125在不同剂量、不同时间对T细胞增殖的影响,并应用CellQuest软件分析增殖细胞各代所占比例和增殖指数(PI)及抑制指数(HI)。采用碘化丙锭染色分析不同剂量SP600125对Con A或佛波醇酯(PDB)加离子霉素(Ion)刺激的小鼠T细胞周期变化的作用。结果随着SP600125浓度从1.0μmol/L逐渐增至16.0μmol/L,Con A对T细胞的促增殖作用逐渐减弱,以8.0～16.0μmol/L的抑制作用最为明显,呈剂最依赖关系(r=0.98,P<0.01);选择最佳剂量8.0μmol/L,SP600125对T细胞增殖的抑制作用随时间从24h递增至96b而逐渐增强;进一步发现SP600125能使PDB加Ion刺激的小鼠T细胞停滞于G_0/G_1期,阻止其进入S期和G_2/M期,且阻止作用随上述浓度的增加而增强,呈明显剂量依赖关系(S期:r=-0.98,P<0.01;G_2/M期:r=-0.88,P<0.05);SP600125也呈剂量依赖性地使Con A诱导的T细胞停滞于G_0/G_1期,阻止其进入S期(r=-0.90,P<0.05)。结论JNK信号通路的活化在小鼠T细胞增殖中可能起着重要作用。     

金银花提取物对小鼠淋巴细胞体外活化与增殖的影响

目的 研究金银花(Flos lonicerae,FL)提取物对小鼠淋巴细胞体外活化和增殖的影响,并初探其免疫抑制作用机制.方法 分离小鼠淋巴结细胞,以荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测FL对刀豆蛋白A(Concanavalin A,ConA)刺激的小鼠淋巴细胞活化的影响;利用羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)染色,分析FL对淋巴细胞增殖情况.结果 细胞活化分析表明,金银花提取物对ConA诱导的小鼠淋巴细胞CD69、CD25和CD71表达均有明显的抑制作用,且这种抑制程度与其药物浓度呈正相关(P＜0.05).CFDA-SE染色分析显示,不同浓度的金银花提取物均能明显抑制淋巴细胞的增殖(P＜0.05).结论 金银花提取物对ConA诱导下的小鼠淋巴细胞体外活化和增殖均有明显抑制作用,是一种有潜在能力的免疫抑制剂.     

连翘提取物对小鼠T淋巴细胞体外活化与增殖的影响

目的:分析连翘(FS)提取物对小鼠淋巴结T细胞的体外活化与增殖的影响,初步探讨其免疫抑制作用机制.方法:无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)进行刺激,利用荧光标记的单克隆抗体(mAb)染色结合流式细胞术(FCM),检测小鼠T淋巴细胞的表达的活化抗原CD69、CD25、CD71的表达情况;以羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)染色,以FCM分析FS对淋巴细胞体外增殖的影响.结果:终浓度为40、80、160 mg/L的FS均对ConA刺激诱导的T细胞CD69、CD25和CD71的表达有降低作用(P＜0.05).CFDA-SE染色分析显示,上述浓度的FS对ConA诱导的小鼠T淋巴细胞增殖具有抑制作用(P＜0.05).结论:FS对ConA诱导的T细胞早、中、后期活化和体外增殖有抑制作用.     

钛离子对T淋巴细胞体外增殖及活化的影响

BACKGROUND: Titanium ions have been proved to stimulate the secretion of bone remodeling-related factors from T lymphocytes; however, the effects of titanium ions on the early activation, intermediate activation, and cell cycle of T lymphocytes remain unclear. OBJECTIVE: To investigate the effects of titanium ions on the proliferation and activation of T lymphocytes in vitro. METHODS: Cell proliferation and cycle test: Jurkat E6-1 T lymphocytes in logarithmic phase were collected and cultured in the medium containing 0 (control), 25 (low concentration), 50 (middle concentration), and 100 μmol/L (high concentration) titanium ions for 24 hours to detect the cell relative proliferation rate and cell cycle. Cell activation trial: Jurkat E6-1 T lymphocytes were divided into two groups that were subdivided into four groups containing 0, 25, 50, and 100 μmol/L titanium ions, respectively with or without phytohemagglutinin (PHA) pre-stimulation. The expressions of CD69 and CD25 were measured after cultured for 24 hours. RESULTS AND CONCLUSION: Titanium ions enhanced T lymphocytes proliferation in a concentration-dependent manner (P < 0.05). Compared with the control group, the percentages of G₀/G₁ phase decreased and the proportions of cells in S and G2/M phase increased significantly in the low, middle and high concentration groups (P < 0.05). The proportion of G₀/G₁-phase cells in the high concentration group was less and the proportion of G₂/M phase cells was higher than those in the middle and low concentration groups (P < 0.05). With PHA pre-stimulation, the expression of CD69 in the high concentration group was higher than that in the middle and low concentration groups (P < 0.05); whereas the difference of CD25 expression was not significant among four subgroups. Titanium ions promoted the expression of CD69 in a concentration-dependent manner (P < 0.05), but there was no CD25 expression in each subgroup without PHA pre-stimulation. To conclude, titanium ions can significantly promote T lymphocyte proliferation and early activation in vitro, and moreover, induce S and G₂/M phase arrest in T lymphocytes.     

Dehydroepiandrosterone and metformin regulate proliferation of murine T lymphocytes

The aim of the present study was to assess the effect of dehydroepiandrosterone (DHEA: 10 microM) and metformin (10 microM and 100 microM) in regulating proliferation of cultured T lymphocytes. T cells were isolated from lymph nodes of prepuberal BALB/c mice. We found that DHEA, metformin and DHEA + metformin added to the incubation media diminished proliferation of T cells. The inhibition by DHEA was higher than that produced by metformin, while the combined treatment showed a synergistic action that allowed us to speculate distinct regulatory pathways. This was supported later by other findings in which the addition of DHEA to the incubation media did not modify T lymphocyte viability, while treatment with metformin and DHEA + metformin diminished cellular viability and increased both early and late apoptosis. Moreover, DHEA diminished the content of the anti-oxidant molecule glutathione (GSH), whereas M and DHEA + metformin increased GSH levels and diminished lipid peroxidation. We conclude that DHEA and metformin diminish proliferation of T cells through different pathways and that not only the increase, but also the decrease of oxidative stress inhibited proliferation of T cells, i.e. a minimal status of oxidative stress, is necessary to trigger cellular response.     

组胺对T细胞IL-2产生及增殖活性影响的实验研究

目的:了解组胺对 CD4 和 CD8 T细胞IL-2产生和细胞增殖活性的影响。方法:密度梯度离心及吸附法分离PBMC和PBLC,采用抗CD4 和CD8 抗体分别制备CD8 和CD4 T细胞进行培养,然后采用ELISA法和MTT比色法测上清液IL-2含量及增殖活性。结果:①组胺 CD4 （CD8 ）培养上清液中IL-2水平及MTT增殖指数与T细胞自然培养孔比较明显降低（P<0.05）。②组胺 CD4 （CD8 ） 西咪替丁培养孔上清液中IL-2水平及 MTT增殖指数明显高于未加西咪替丁孔（P<0.05）。③CD4 T细胞自然培养孔上清液中IL-2水平显著高于CD8 T细胞自然培养孔。结论:组胺可抑制T细胞IL-2产生及增殖。西咪替丁可阻断组胺对T细胞的抑制作用。CD8 T细胞也可产生IL-2,但其功能较 CD4 T细胞为低。