Caco-2细胞单层研究淫羊藿黄酮类成分的吸收转运

目的 研究淫羊藿黄酮类成分在Caco-2细胞模型中的吸收转运.方法 采用超高压液相法测定药物浓度,计算表观渗透系数(Papp),研究淫羊藿黄酮5个主要成分淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、宝藿苷I在Caco-2细胞模型中的双向转运.结果 淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C的吸收渗透系数(P_(AB))较小,分别为5.91×10~(-7)、3.22×10~(-7)、2.76×10~(-7)、4.23×10~(-7) cm/s,宝藿苷I相对较大,为1.46×10~(-6)cm/s;5个化合物的分泌渗透系数(P_(BA))都比其相应的吸收渗透系数要大,其中宝藿苷I的分泌渗透系数是其吸收渗透系数的9.8倍.结论 淫羊藿黄酮类成分的肠道吸收较差,可能存在肠道转运蛋白的外排机制,其中三糖苷(朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C)的吸收要小于二糖苷(淫羊藿苷),二糖苷的吸收要小于单糖苷(宝藿苷I).     

淫羊藿黄酮类主要成分促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞增殖分化作用及机制的影响

目的:探讨淫羊藿黄酮类主要成分朝藿定A,朝藿定B,朝藿定C,淫羊藿苷,淫羊藿次苷对骨髓间充质干细胞(BMSCs)向成骨细胞分化的促进作用,并对其作用机制进行预测。方法:采用全骨髓细胞贴壁法分离纯化SD大鼠BMSCs做原代培养。实验分为朝藿定A+成骨诱导培养基(1×10~(-8)mol·L~(-1))组,朝藿定B+成骨诱导培养基(1×10~(-8)mol·L~(-1))组,朝藿定C+成骨诱导培养基(1×10~(-8)mol·L~(-1))组,淫羊藿苷+成骨诱导培养基(1×10~(-8)mol·L~(-1))组,淫羊藿次苷组+成骨诱导培养基组及成骨诱导培养基组(空白组)6组。加入药物进行干预14 d后,采用定性与定量相结合的方法,通过茜素红染色、细胞骨架染色、碱性磷酸酶定量分析,对淫羊藿5种黄酮类主要成分促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化作用进行药效学评价;在此基础上,基于BATMAN-TCM网络药理学研究平台,对相关靶点和通路进行预测分析,探讨其潜在作用机制。结果:BMSCs在作用浓度为1×10~(-8)mol·L~(-1)的药物浓度作用下诱导14 d,通过细胞骨架染色,各给药组均可明显观察到多角形成骨细胞增多;通过茜素红染色,各给药组可明显观察到大量的矿化结节的形成;通过碱性磷酸酶含量测定,与空白组比较,各给药组碱性磷酸酶含量升高,其中朝藿定C,淫羊藿苷组有显著性差异(P0.05),淫羊藿次苷组具有极显著性差异(P0.01)。同时网络药理学分析表明,5种黄酮类成分在促进增殖和分化方面共得到33个潜在作用靶点,并富集分析得到8条信号通路,其中activation of MAPK activity,estrogen signaling pathway已有实验报道。结论:淫羊藿黄酮类主要成分朝藿定A,朝藿定B,朝藿定C,淫羊藿苷,淫羊藿次苷均具有促进BMSCs向成骨方向分化的作用,其中朝藿定C,淫羊藿苷,淫羊藿次苷的作用效果显著,网络药理学分析结果从整体上阐释了多成分的作用机制,为进一步实验验证提供参考。     

灵芝多糖对血管紧张素Ⅱ诱导的血管内皮细胞衰老的干预研究

目的探讨灵芝多糖保护血管内皮细胞、抑制血管内皮细胞衰老的作用。方法采用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)建立衰老模型,分为对照组、AngⅡ诱导组和灵芝多糖组(给予AngⅡ刺激前1 h先给予100 mg/L灵芝多糖)。采用CCK-8法检测细胞存活率,采用免疫化学染色方法检测衰老相关β-半乳糖苷酶活性,流式细胞术检测细胞周期来反映细胞的增殖能力。结果与对照组比较,AngⅡ诱导组细胞存活率明显下降,β-半乳糖苷酶阳性染色率明显增多,细胞周期多停滞于G0/G1期,S期细胞逐渐减少,表明AngⅡ成功诱导了HUVECs衰老,而给予灵芝多糖干预后上述变化改善。结论灵芝多糖具有抑制内皮细胞衰老、保护血管内皮功能的作用。     

大鼠内皮祖细胞的分离、培养与定向诱导分化

目的探讨建立一种从大鼠骨髓中分离培养与定向诱导分化内皮祖细胞(EPCs)的稳定、高效方法。方法密度梯度离心法从大鼠骨髓中分离单个核细胞,经差速贴壁结合特殊培养基扩增并向内皮细胞定向诱导分化EPCs。应用免疫荧光和流式细胞技术鉴定内皮细胞系列标志:CD34、CD31、Flk-1和祖细胞标志CD133。并通过检测其对FITC标记的UEA-1的吸附和内吞DiI-ac-LDL来进行细胞功能学的鉴定。对分化细胞行vWF、CD31免疫组化染色鉴定,并与血管内皮细胞合成前列腺素能力进行比较。结果梯度密度离心和贴壁法选择的细胞表达内皮细胞特异性抗原CD34、CD31、Flk-1,部分表达CD133。分离所得细胞经EBM-2专用培养基培养后,第5天可见集落形成,培养第9天CD133阳染细胞减少,CD31阳染细胞增加,细胞可特异性吸附FITC标记的荆豆凝集素并内吞DiI-ac-LDL,约3周左右形成铺路石样内皮细胞特有形态。诱导后的内皮祖细胞的前列腺素合成能力与血管内皮细胞之间无统计学差异(P>0.05)。结论该方法可以同时培养扩增和定向诱导分化内皮祖细胞,效率高,稳定性和重复性好。     

喘可治注射液中朝藿定A,朝藿定B,朝藿定C和淫羊藿苷在大鼠体内的药物动力学研究

研究喘可治注射液肌注给药后朝藿定A,朝藿定B,朝藿定C及淫羊藿苷的体内药动学规律。采用已建立的RRLC-MS/MS法同时测定大鼠血浆中朝藿定A,朝藿定B,朝藿定C及淫羊藿苷,并计算其药动学参数。结果显示,在该分析条件下,各成分在1~1 000μg·L-1线性关系良好;日内精密度RSD5.99%,准确度96.9%~107.5%,日间精密度RSD10.16%,准确度92.3%~105.0%;相对回收率88.1%~101.1%,RSD7.9%,绝对回收率72.0%~86.6%,RSD6.3%。喘可治注射液经肌肉注射给予大鼠后,朝藿定A,朝藿定B,朝藿定C及淫羊藿苷血浆药物浓度迅速升高,在10 min左右达峰,随后迅速消除,达峰时间Tmax分别为0.21,0.19,0.16,0.13 h,平均消除半衰期t_(1/2z)分别为0.60,0.62,0.47,0.49 h。结果表明该法快速、灵敏、特异,适用于大鼠血浆中朝藿定A,朝藿定B,朝藿定C及淫羊藿苷的测定。喘可治注射液中4种淫羊藿黄酮在大鼠体内血药浓度较低,吸收和消除均十分迅速,呈现类似的药动学特征。     

超滤法测定朝藿定C的血浆蛋白结合率

目的:测定朝藿定C与人血浆的蛋白结合率。方法:采用HPLC结合超滤法对朝藿定C与健康人血浆的蛋白结合率进行测定。结果:当朝藿定C质量浓度为10.65,26.62,106.5μg.mL-1时,朝藿定C与人血浆的蛋白结合率分别为(83.24±0.73)%,(85.85±0.74)%,(86.22±1.21)%。结论:体外朝藿定C与人血浆蛋白有较强的结合。     

不同浓度血管紧张素Ⅱ对人脐静脉血管内皮细胞衰老变化的影响

目的:观察不同浓度血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)衰老及细胞存活率的变化情况。方法:体外培养HUVEC,随机分为对照组和含不同浓度AngⅡ组(10-8～10-5mmol/L)共5组,用含不同浓度AngⅡ的培养基孵育细胞48h,β-半乳糖苷酶染色法鉴定内皮细胞衰老状态;流式细胞技术分析细胞周期变化;分别用MTT法和CCK-8法检测细胞存活率变化情况。结果:AngⅡ培养细胞48h后,β-gal阳性染色率随着AngⅡ浓度的增加逐渐增多(P均<0.01);细胞周期多停滞于G0/G1期,S期细胞逐渐减少;细胞存活率明显下降;与对照组相比,10-8和10-7 mmol/L AngII组无明显差异(P>0.05),10-6和10-5 mmol/LAngⅡ组有统计学差异(P<0.05)。结论:AngII诱导HUVEC衰老并呈剂量依赖性的抑制细胞增殖,提示细胞衰老程度随AngII浓度增加而加重。     

超滤法测定朝藿定C的血浆蛋白结合率

目的：测定朝藿定C与人血浆的蛋白结合率。方法：采用HPLC结合超滤法对朝藿定C与健康人血浆的蛋白结合率进行测定。结果：当朝藿定C质量浓度为10．65,26．62,106．5μg·mL。时,朝藿定C与人血浆的蛋白结合率分别为（83．24±0．73）％,（85．85±0．74）％,（86．22±1．21）％。结论：体外朝藿定C与人血浆蛋白有较强的结合。     

川芎嗪对血管平滑肌细胞增殖及蛋白激酶C通路的影响

目的 观察川芎嗪对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中蛋白激酶C(PKCζ)-细胞外信号调节激酶(ERK1/2)通路的影响.方法 建立AngII诱导的VSMC增殖模型,测定细胞增殖活度,免疫细胞化学法检测PKCζ与ERK1/2表达.结果 与对照组比较,AngⅡ组细胞增殖活度显著增高,PKCζ与ERK1/2表达显著高于对照组(均P<0.01).中、高剂量川芎嗪组的细胞增殖活度明显降低(P<0.05或P<0.01),PKCζ与ERK1/2表达亦明显低于AngⅡ组(P<0.01),与低剂量川芎嗪组相比亦有显著差异,说明川芎嗪的抑制作用具有量-效关系.结论 川芎嗪对AngⅡ诱导的VSMC增殖有显著抑制作用,其机制与抑制PKCζ-ERK1/2通路有关.     

不同产地、不同成熟期淫羊藿叶中淫羊藿苷和朝藿定C含量变化

目的:研究不同产地、不同成熟期淫羊藿叶中淫羊藿苷和朝藿定C的含量变化。方法:采用Elite SinoChromODS-AP色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈(A)-水(B),梯度洗脱(0～8 min,27%A;8～30min,27%～29%A),流速为1mL.min-1,检测波长为270nm。结果:不同产地粗毛淫羊藿的淫羊藿苷、朝藿定C的含量变化较大,依次分别为0.1%～0.44%、0.76%～2.59%;不同成熟期淫羊藿的淫羊藿苷和朝藿定C在嫩叶中的含量均高于老叶数倍。结论:试验结果表明:产地对粗毛淫羊藿中淫羊藿苷和朝藿定C含量影响较大;不同成熟期淫羊藿叶中淫羊藿苷和朝藿定C的含量变化可达2～11倍。     

水培条件下氮素对拟巫山淫羊藿产量和黄酮类成分的影响

采用水培方法研究了不同氮浓度和氮素形态及配比对拟巫山淫羊藿产量和黄酮类成分的影响。氮浓度设7个处理组N0~N6,分别为0,2.5,5.0,7.5,10.0,13.0 mmol·L~(-1);氮形态设5个处理组T1~T5,硝铵比NO3-N/NH4-N依次为5∶0,4∶1,2.5∶2.5,1∶4,0∶5,总施氮量为5 mmol·L~(-1)。结果表明,随氮浓度的增大,拟巫山淫羊藿的生物量和叶干重均显著升高,N5组的生物量和叶干重分别比N0组和N4组高29%,23%和36%,23%(P0.05),但与N6组差别不显著;根,茎干重变化不明显。净光合速率及各光合色素含量在N3~N5组中较高。朝藿定A,B,C,淫羊藿苷及总黄酮含量在N3组最低,N4组突然升高,N4~N6组变化不大,朝藿定C的含量最高的N5组比含量最低的N3组高131%(P0.05)。在不同硝铵比处理组中,生物量,单株叶干重,茎干重在硝铵比为2.5∶2.5时最大,单纯施用硝态氮(T1)和铵态氮处理(T5)最低(二者差异不显著);各光合色素含量和净光合速率在T3和T4组最低,其他3组较高。氮形态对黄酮含量的影响远小于氮浓度的影响。朝藿定C的含量在T1组中最高,但仅比T2~T5组高5%~8%(P0.05),其他4组间差异不明显。朝藿定A,B,淫羊藿苷及总黄酮含量在T1组中均较高,在T2组中最低,T1组分别比T2组高41%,62%,27%(P0.05)。拟巫山淫羊藿为高氮耐受性植物,10.0 mmol·L~(-1)是其生长转向良好的拐点,最适的氮浓度为10.0~13.0 mmol·L~(-1),喜好硝态氮和铵态氮混施,最适的氮形态及配比为2.5 mmol·L~(-1)硝态氮+2.5 mmol·L~(-1)铵态氮。     

心肌尔康对血管紧张素Ⅱ诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的作用

目的:研究心肌尔康(XJEK)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的作用,并探讨相关的作用机制。方法:体外培养HUVECs细胞,随机分为7组,分别为空白组,AngⅡ(1×10~(-5)mol·L~(-1))组,AngⅡ(1×10~(-5)mol·L~(-1))+心肌尔康不同质量浓度组(0.1,0.2,0.4,0.8,1.6 g·L~(-1)),噻唑蓝(MTT)比色法检测HUVECs的活性;Griess法测定一氧化氮(NO)含量;流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)的水平;钙成像仪测定细胞胞浆内游离钙离子(Ca~(2+))浓度;比色法及TBA法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测内皮型一氧化氮合酶(e NOS)蛋白表达水平。结果:与空白组比较,AngⅡ组内皮细胞活力,NO释放,e NOS蛋白表达及SOD活力明显降低,MDA,ROS含量和内皮细胞胞浆内Ca~(2+)浓度明显升高(P0.05,P0.01);与AngⅡ组比较,心肌尔康可剂量依赖性提高内皮细胞活力,促进NO释放、增加e NOS蛋白的表达;升高SOD活力,抑制MDA,ROS含量和内皮细胞胞浆内Ca~(2+)浓度的升高,各指标差异均具有显著性(P0.05,P0.01)。结论:心肌尔康对AngⅡ诱导的内皮损伤具有明显的保护作用,其可能机制为抑制细胞内Ca~(2+)超载和降低氧化应激水平。     

淫羊藿苷对异丙肾上腺素诱导H9C2细胞心肌重塑模型CYP27B,维生素D受体mRNA表达的影响

目的探讨淫羊藿苷对异丙肾上腺素诱导H9C2大鼠心肌细胞心肌重塑模型CYP27B与维生素D受体mRNA表达的影响。方法将H9C2细胞随机分为6个组:对照组,模型组,淫羊藿苷0.1μmol/L+模型组,淫羊藿苷1μmol/L+模型组,淫羊藿苷10μmol/L+模型组,淫羊藿苷100μmol/L+模型组,利用浓度为80μmol/L的异丙肾上腺素(ISO)进行造模。MTT法观察H9C2心肌细胞增殖活性,Real-Time QPCR法检测CYP27B与维生素D受体mRNA表达。结果 MTT结果显示与对照组相比模型组细胞存活率下降(P0.05),经过淫羊藿苷处理后细胞存活率提高(P0.05)。Real-TimeQPCR显示模型组CYP27B与维生素D受体基因mRNA表达量相对对照组均降低(P0.05),不同浓度淫羊藿苷作用后CYP27B与VDR基因表达量相对模型组则上升(P0.05)。结论淫羊藿苷可以通过调节维生素D轴对异丙肾上腺素诱导的H9C2细胞心肌重塑模型产生保护作用。     

RP-HPLC法测定淫羊藿根中朝藿定C的含量

目的:建立测定淫羊藿根中朝藿定C的含量测定方法。方法:采用安捷伦Eclipse Plus C_(18)色谱柱(4.6mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-水(25∶75),等度洗脱,流速1 m L/min,检测波长270 nm。结果:朝藿定C在0.973~9.729μg内呈良好的线性关系,r=1.0000,方法重复性、精密度等均满足分析要求,方法回收率为102.3%,RSD为0.7%。结论:该方法测定淫羊藿根中朝藿定C的含量,结果准确,重复性、稳定性较好。     

当归补血汤经TGF-β1/Smad2通路对Ang Ⅱ诱导肥大心肌细胞的保护机制研究

目的:研究当归补血汤对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导H9C2肥大心肌细胞的保护作用及机制,探讨其与转化生长因子β1(TGF-β1)及下游分信号Smad2信号通路的关系。方法:体外培养细胞,用α-actin抗体免疫组化法鉴定心肌细胞;采用10-7mol/L AngⅡ诱导H9C2心肌细胞肥大,通过检测心肌细胞蛋白含量及心钠素(ANF)mRNA表达以验证心肌细胞肥大模型;在模型建立成功的基础上利用逆转录聚合酶链反应RT-PCR法测定不同浓度(5%、10%、15%、20%)当归补血汤含药血清对肥大心肌细胞ANF mRNA表达的影响,选取最佳干预浓度;将心肌细胞分组为空白对照组、10-6mol/L AngⅡ模型组、10-7mol/L AngⅡ模型组和10%含药血清组,镜下观察各组细胞形态,并利用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组TGFβ1/Smad2信号通路相关蛋白TGFβ1、Smad2表达与活化情况。结果:鉴定细胞符合心肌细胞特征;与空白对照组相比,10-7mol/L AngⅡ模型组心肌细胞蛋白含量与ANFmRNA表达均显著增加,说明10-7mol/L AngⅡ诱导H9C2心肌细胞肥大模型建立;10%、15%当归补血汤含药血清浓度组较模型组ANF mRNA表达显著减少,10%当归补血汤含药血清组ANF表达降低更为明显;形态学观察,AngⅡ模型组心肌细胞密度和形态增大,漂浮细胞增多;10-6mol/L、10-7mol/L AngⅡ模型组较空白对照组TGF-β1、Smad2蛋白表达均显著增多,10%当归补血汤含药血清组较10-6mol/L、10-7mol/L模型组TGF-β1、Smad2蛋白表达均显著减少。结论:当归补血汤含药血清具有抗心肌细胞肥大的作用,其保护机制可能与调控心肌细胞TGF-β1/Smad2信号通路有关。     

HPLC法测定淫羊藿中木兰花碱、朝藿定C和淫羊藿苷的含量

目的:建立同时测定淫羊藿中木兰花碱、朝藿定C和淫羊藿苷含量的HPLC方法,研究淫羊藿(Epimedium brevicornu Maxim.)因产地不同带来的质量差异。方法:Venusil C18MP色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),乙腈-1%KH_2PO_4梯度洗脱;流速1 m L/min。结果:木兰花碱、朝藿定C和淫羊藿苷分别在4.0～52.0,6.4～206.0,7.0～242.0μg/m L范围内线性关系良好;回收率分别为97.66%、101.10%、96.76%,RSD分别为2.14%、2.20%、1.58%。结论:本方法适用于同时测定淫羊藿中生物碱和黄酮两种不同类型的成分;不同分布地区淫羊藿中朝藿定C、淫羊藿苷均呈现较大的变化,木兰花碱含量变化大,不适于作为质控成分。     

相同摩尔浓度下淫羊藿苷及朝藿定C单体在斑马鱼骨质疏松模型中的活性研究

目的用泼尼松龙诱导的斑马鱼骨质疏松模型评价相同摩尔浓度下淫羊藿苷和朝藿定C单体的抗斑马鱼骨质疏松作用。方法将受精后4日的斑马鱼胚胎分为S组(0.5%二甲亚砜DMSO)、A组(泼尼松龙25μmol/L,0.5%DMSO)、B组(2IU/L鲑降钙素,泼尼松龙25μmol/L,0.5%DMSO)、C组(淫羊藿苷1.5μmol/L,泼尼松龙25μmol/L,0.5%DMSO)、D组(淫羊藿苷15μmol/L,泼尼松龙25μmol/L,0.5%DMSO)、E组(淫羊藿苷150μmol/L,泼尼松龙25μmol/L,0.5%DMSO)、F组(朝藿定C 1.5μmol/L,泼尼松龙25μmol/L,0.5%DMSO)、G组(朝藿定C 15μmol/L,泼尼松龙25μmol/L,0.5%DMSO)、H组(朝藿定C 150μmol/L,泼尼松龙25μmol/L,0.5%DMSO)。所有培养液均含有0.5%DMSD。将各组幼鱼放置与24孔板中,每日更换培养液,在恒温环境28.5℃培养箱中,培养至第9天处死,以茜素红染色。用显微镜对斑马鱼颅骨腹侧进行观察,定量分析将成像染色区域。结果与S组比较,A组骨矿化累计光密度值降低(P0.01);B组骨矿化累计光密度值升高(P0.01)。而C、D、E组随浓度增加矿化面积呈微弱的递增趋势(P0.05)。与A组比较,B组累计光密度值增高明显,差异有统计学意义(P0.01),C、D组差异无统计学意义(P0.05),而E组明显升高(P0.05)。F、G组随浓度增加,矿化面积呈递增趋势,颅骨染色累计光密度值升高(P0.05),H组内斑马鱼胚胎无存活。E、F、G组间比较,差异无统计学意义(P0.05)。S组斑马鱼头颅骨染色清晰,脊椎骨及两旁鳃骨染色清晰。A组在相同染色区域的强度明显减少。B组在相同条件下呈现骨组织成骨加快,矿化面积明显增多,骨组织深染等特点。C、D、E、F、G组,在染色中颅骨矿化程度逐渐增加,椎骨及两侧腮骨矿化面积及染色强度递增,以椎骨改变最为显著,但均未达到B组的染色强度。结论斑马鱼骨质疏松模型是一种简单、高效的中药成分筛选模型,低浓度朝藿定C在该模型中的活性优于淫羊藿苷,高浓度朝藿定C的可能毒性作用还需要深入研究。     

人参皂甙Rg1对体外微环境诱导人骨髓间充质干细胞成血管内皮样细胞分化的影响

目的 探讨人参皂甙Rg1在体外微环境诱导分化人骨髓间充质干细胞（human mesenchymal stem cells, hMSCs）成血管内皮样细胞的影响。 方法 采用模拟体内微环境的半透膜隔离非接触共培养的方法 体外诱导hMSCs向内皮细胞表型分化, 通过RT-PCR检测内皮细胞标志物血小板内皮黏附分子-1（CD31）、血管性血友病因子（vWF）、血管内皮钙黏蛋白（VE-cadherin）mRNA的表达,免疫荧光染色检测CD31蛋白和血管内皮黏附分子-1（VCAM1）的表达。透射电镜观察诱导后细胞的超微结构鉴定诱导细胞的特征,并通过流式细胞仪检测诱导细胞CD31表达百分比。 结果 与成熟内皮共培养的骨髓基质干细胞具有微环境依赖性向内皮分化的能力。细胞培养第2周,开始出现形态学改变,胞体回缩,呈多角形改变。细胞培养第3周,细胞增殖速度明显加快,形态学上呈卵圆形或“铺路石”样改变;在基因水平上,RT-PCR显示经典内皮细胞标志物CD31、vWF、VE-cadherin mRNA的高表达;在蛋白水平上,免疫荧光染色CD31     

球松素查尔酮对C3H10T1/2细胞成脂分化的影响

查尔酮类化合物是一种广泛存在于多种药用植物中的黄酮类化合物,具有抑制细胞成脂分化的作用。为研究山核桃叶中提取分离得到的球松素查尔酮对小鼠胚胎间充质干细胞(C3H10T1/2)成脂分化的影响,该实验利用MTS[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium,内盐]法检测细胞增殖情况;油红O染色和异丙醇萃取法检测细胞成脂分化情况;GAP-PAP酶法检测细胞中甘油三酯含量;分别采用荧光RT-PCR和Western blot检测成脂分化关键转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ),CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)和分化标志物脂肪型脂肪酸结合蛋白(FABP4)mRNA和蛋白表达。结果显示当球松素查尔酮浓度小于等于50μmol·L~(-1),对C3H10T1/2细胞的增殖活性无影响;油红O染色和异丙醇萃取法及GAP-PAP酶法检测结果表明球松素查尔酮能明显减少C3H10T1/2细胞成脂分化和甘油三酯含量;荧光RT-PCR和Western blot检测表明球松素查尔酮能下调FABP4,PPARγ和C/EBPαmRNA和蛋白的表达(P0.05或P0.01)。结果提示,球松素查尔酮能够明显抑制C3H10T1/2细胞成脂分化。     

白藜芦醇对过氧化氢诱导的人脐静脉血管内皮细胞损伤的保护作用

目的 研究白藜芦醇(Res)对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)损伤及凋亡的保护作用及机制.方法体外培养第4～6代HUVECs,分为空白对照组、H2O2损伤组(300μmoL)、Res低浓度(5 μmoL/L)、中浓度(10 μmoL/L)、高浓度(20 μmoL/L)预处理1 h加H2O2损伤组.用噻唑蓝比色法检测HUVECs活力,试剂盒检测丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)量、超氧化物歧化酶(SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)活性,流式细胞仪分析细胞凋亡率,western blot检测caspase-3的表达.结果 与空白对照组比较,H2O2损伤模型组细胞活力显著降低、MDA和LDH量显著增加、SOD和GSH活性显著下降、细胞凋亡率和caspase-3表达显著增加(P＜0.01).结论 Res通过降低与凋亡过程直接相关的caspase-3表达,抑制H2O2诱导内皮细胞凋亡,减轻H2O2对内皮细胞的损伤作用,从而产生保护血管内皮细胞的作用.