半边旗中二萜类化合物5F诱导胰腺癌细胞凋亡机制的探讨

目的:观察研究半边旗中二萜类化含物5F(11-羟基-15-氧-16-烯-ent贝壳杉烷-19酸)诱导人胰腺痛细胞株PC-3凋亡的效果及其机制.方法:在体外培养的胰腺癌细胞株PC-3中加入8.875umol/L,37.5umol/L,142umol/L浓度的5F孵育24h,RT-PCR分析各组细胞中mRNA-PUMA表达,MTT检测细胞相对存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡.利用Lipofectamine<'TM>2000将人类SiRNA-PUMA转染导入胰腺癌细胞PC-3中抑制PUMA的表达后,观察转染96h后的细胞株PC-3在上述浓度的5F的作用下各组细胞中mRNA-PUMA的表达、细胞凋亡以及细胞生长的变化结果:在5F作用下,细胞mlLNA-PUMA表达提高,细胞存活率随着药物浓度的提高明显降低,细胞凋亡率随着药物浓度的提高而明显提高,且呈量效关系:转染siRNA-PUMA后的细胞在5F作用下,细胞中mRNA-PbMA未见明显表达,细胞存活率和凋亡率与对照组比无显著性改变.结论:5F可能通过上调PUMA基因表达而促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤生长.     

5F对胰腺癌细胞生长的影响及机制

目的:观察研究半边旗中二萜类化合物5F(1la-羟基-15-氧-16-烯-ent贝壳杉烷-19酸)诱导人胰腺癌细胞株AsPC-1凋亡的效果及其机制。方法:用脂质体转染法将PUMA/siRNA导入AsPC-1细胞,G418筛选阳性细胞,获得稳定转染的阳性克隆。将转染载体的AsPC-1阳性克隆细胞和未转染载体的AsPC-1细胞分别暴露于浓度8.875,37.5,142μmol/L浓度的5F中作用72h。RT-PCR检测不同组细胞经5F作用24h后的PUMA表达;MTT检测细胞生长抑制,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡,Ho-echst33258和PI双染色染色了解细胞凋亡的变化。结果:5F促进AsPC-1细胞凋亡,抑制细胞生长,并有明显的剂量依赖性,在细胞凋亡的同时伴有PUMA表达的上调;当PUMA表达抑制后,受5F作用的细胞出现PUMA表达的降低,同时伴有细胞凋亡的抑制及细胞的明显增殖。结论:5F促进体外AsPC-1细胞凋亡,并抑制其生长,其诱导凋亡与上调PUMA有关。     

半边旗提取物5F对人胃癌细胞凋亡的影响及其机制

目的探讨草药半边旗提取物Ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid(5F)对人胃癌SGC7901细胞凋亡的影响及其机制。方法通过生存及细胞凋亡分析检测5F对SGC7901增殖的抑制效果。同时,采用免疫印迹法评价5F对SGC7901细胞Bcl-2及Bax表达的影响。结果 MTT分析证实了5F呈剂量依赖、时间依赖方式抑制SGC7901增殖。Annexin V-EGFP染色及caspase-3活化则确认了5F诱导的细胞凋亡。并且,该凋亡伴随着Bcl-2表达的降低、Bax表达的提高。结论 5F通过激活细胞凋亡线粒体途径诱导SGC7901细胞凋亡。     

半边旗中二萜类化合物的超临界CO2萃取及HPLC-MS分析

目的　建立一种高效准确的提取和分析半边旗中二萜类化合物的方法。方法　以超临界 CO2 与改性剂乙醇组成的复合流体萃取半边旗中二萜类化合物 ,采用正交设计法优化萃取条件 ;建立了 HPL C-大气压化学电离源(APCI) - MS联用的分析方法 ,以选择离子监测 (SIM)方式进行含量测定 ,以选择离子峰面积与总离子流峰面积的比值优选改性剂。主要的二萜类化合物 5 F的准分子离子为 [M- H]- 1。采用 [M- H]- 1为选择监测离子 ,以色谱保留时间和选择监测离子流峰面积定量。结果　超临界流体萃取最佳条件 :2 5 MPa、6 0℃、15 %甲醇、流量 3.0 m L /min;分析条件 :Diamonsil ODS色谱柱 (15 0 mm× 4 .6 mm,5 μm) ,流动相为 CH3CN- 2 mm ol/ L NH4 AC(35∶ 6 5 ) ,流速 1.0 m L / m in,进样 5μL ,线性范围为 0 .0 5～ 2 .5μg,检出限达 0 .4 ng。 5 F的加样回收率为 97.8% (n=3)。结论　本法提取效率高、检测灵敏度高、选择性好 ,可应用于半边旗中二萜类抗癌化合物的深入研究和质量标准的制定。     

半边旗5F对瘢痕成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的通过对天然药物半边旗5F对瘢痕成纤维细胞凋亡作用的研究,以期探寻新的治疗病理性瘢痕的有效药物。方法以四甲基偶氮唑(MTT)法、流式细胞术和原位末端标记技术检测半边旗5F对成纤维细胞增殖和凋亡的影响。结果半边旗5F对成纤维细胞的增殖具有显著的抑制作用,且呈现浓度和时间依赖性。采用流式细胞术和TUNEL法检测凋亡指数,均呈剂量依赖性增高(P<0.05)。结论半边旗5F对瘢痕成纤维细胞的增殖具有显著的抑制作用,并且能够诱导其发生凋亡,为寻找有效治疗增生性瘢痕的药物进行了新的尝试。     

半边旗中二萜类化合物5F对乳腺癌生长和转移的体内抑制作用

为研究半边旗中二萜类化合物5F在体内对乳腺癌生长和转移的影响及其作用机制,以MDA-MB-231乳腺癌原位移植模型观察5F抗乳腺癌的效应。在治疗的同时,观察5F对裸鼠的不良反应。以RT-PCR、Western blot法检测5F对乳腺肿瘤组织血管内皮生长因子(VEGF)、激酶嵌入结构域受体(KDR)mRNA和蛋白表达的影响。结果显示,5F通过减少原发肿瘤体积和肺转移结节数目,显著抑制MDA-MB-231乳腺癌移植瘤的生长和肺转移。这种抑制转移的作用不依赖于其对原发肿瘤的生长抑制作用。5F对裸鼠的肝肾功能无明显的影响。5F抗MDA-MB-231乳腺癌作用机制与5F下调肿瘤组织VEGF、KDR mRNA和蛋白表达水平有关。     

半边旗二萜类化合物5F对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡及Fas蛋白表达的影响

目的　观察中药半边旗二萜类化合物 5F对瘢痕疙瘩成纤维细胞 (keloidfibrolast,KFB)凋亡及对Fas蛋白表达的影响。方法　体外培养KFB ,①收集以浓度为 32 μg/ml的 5F作用 12、2 4、36、4 8h后的细胞 ;②收集分别用浓度为 8、32、6 4、 12 8μg/ml 5F作用 4 8h后的细胞 ,应用流式细胞仪 (FCM )检测成纤维细胞的凋亡率及Fas蛋白的表达。结果　① 5F作用 12～ 4 8h成纤维细胞出现明显的凋亡 (P <0 0 1) ,对照组成纤维细胞未见明显凋亡 ;②随着药物浓度的增大Fas蛋白表达也增高 (P <0 0 1)。结论　 5F可以诱导KFB细胞凋亡 ,促进Fas蛋白的表达。     

半边旗二萜类化合物5F对人翼状胬肉成纤维细胞结缔组织生长因子表达和胶原合成的影响

 [目的]观察半边旗二萜类化合物5F（5F）对体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞（HPF）增殖和胶原合成及结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响.[方法]利用手术切除的人翼状胬肉组织进行原代细胞培养,即得到HPF.将不同质量不同浓度（0、8、32、128）μg/mL的5F作用于HPF 24 h,通过噻唑蓝比色法（MTT）检测5F对细胞增殖的作用;用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹（Western blot）检测5F对细胞中CTGFmRNA及蛋白表达水平的影响;用化学比色法检测5F对细胞胶原蛋白含量的影响.[结果]在HPF中加入不同质量浓度（0、8、32、128）μg/mL的5F作用24 h,各组剂量的5F均可以明显抑制HPF的增殖（P＜0.01）,其半数抑制率（IC50）为32.12μg/mL.在8～128μg/mL的剂量范围内,5F能显著地下调CTGF mRNA（0.69±0.05,0.38±0.06,0.19±0.04,与对照组0.82±0.09比较,P＜0.05或P＜0.01）和CTGF蛋白（82.34±5.16,31.46±4.98,23.28±2.65,与对照组98.12±7.20比较,P＜0.05或P＜0.01）的表达水平,能显著地降低胶原蛋白的含量（13.95±1.49,12.53±0.51,5.89±0.80,与对照组16.19±1.02比较,P＜0.05或P＜0.01）,且均有明显的剂量-效应关系.[结论]半边旗二萜类化合物5F能显著地抑制体外培养的HPF的增殖和胶原蛋白的含量,使细胞的CTGF mRNA及蛋白表达明显下调,并且呈显著的量效关系,表明半边旗5F具有体外抗纤维化作用,这为寻找有效治疗HPF的药物提供了新的思路.     

半边旗提取物5F诱导HepG2细胞凋亡与p53活化及血管内皮生长因子抑制有关

目的 观察半边旗提取物 Ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid (5F) 对人肝癌细胞 HepG2 增殖的影响,并探讨 p53、血管内皮生长因子 (VEGF) 及 Caspase3 在 5F 诱导的 HepG2 细胞凋亡中的作用。方法 采用 MTT 分析检测 5F 对 HepG2 细胞增殖的影响,并通过细胞凋亡检测 ELISA 试剂盒分析经 5F 处理的 HepG2 细胞胞浆核小体片段,以确定5F能否诱导细胞凋亡,采用 Hoechst/PI 分析鉴定凋亡细胞核形态。通过免疫印迹 (Western blotting)分析测定 p53 及 VEGF 蛋白表达水平,并通过 Caspases-3 分光光度法检测试剂盒检测 Caspase-3 活性。结果 通过细胞活性分析证实,5F 对 HepG2 的细胞毒作用随着 5F 质量浓度的升高而增强。5F 诱导 HepG2 产生胞浆核小体片段,并且该诱导作用具有剂量依赖性。5F 处理后,凋亡变化,如染色质浓缩,被 Hoechst/PI 染色所确定。5F 处理后 HepG2 细胞核内 p53 表达水平显著提高,而胞浆 VEGF 表达水平却下降,同时,Caspase-3 活性通过浓度依赖方式增强。结论 5F 所诱导的 HepG2 细胞凋亡与 p53 及 Caspase3 活化、VEGF负调控有关。5F 可能具有抗癌尤其是抗肝细胞癌价值。     

半边旗提取物5F体外抑菌实验

目的：探讨半边旗提取物5F体外抗菌药效。方法：采用纸片扩散法,通过观察药物对实验菌种的抑菌圈大小,来判断药物的抗茵效果。结果：5F对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌均有抑制作用。结论：半边旗提取物5F在体外能抑制金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌生长,本研究为5F的抗菌效用提供了实验依据。     

半边旗二萜类化合物5F对人高转移卵巢癌细胞系HO-8910PM NF-κB(P65)、Smad3蛋白和NF-κB(P65)、ETS-1 mRNA表达的影响

目的研究半边旗二萜类化合物5F(11α-羟基-15-氧-16-烯-对映贝克杉烷-19酸)对人高转移卵巢癌细胞系HO-8910PM细胞内核转录因子κBP65亚基[NF-κB(P65)]、Smad3蛋白及NF-κB(P65)、ETS-1mRNA表达的影响,探讨其抗肿瘤的作用机制。方法MTT法检测5F对HO-8910PM细胞增殖的影响;Westernblot分析NF-κB(P65)及Smad3蛋白的表达;RT-PCR分析NF-κB(P65)及ETS-1mRNA的表达。结果5F能抑制HO-8910PM细胞的增殖,抑制率随剂量的增加而增加,具有剂量依赖性;25～100μmol/L5F作用HO-8910PM细胞24h后,NF-κB(P65)、Smad3蛋白表达水平明显下降,并呈剂量效应关系;5F明显下调NF-κB(P65)mRNA的表达,轻微下调ETS-1mRNA的表达。结论5F抗肿瘤活性与NF-κB(P65)、Smad3蛋白和NF-κB(P65)、ETS-1mRNA的表达有关。     

维甲酸与人参皂甙-Rh2或半边旗二萜类化合物5F协同诱导肝癌细胞凋亡的研究

目的 观察维甲酸与人参皂甙-Rh2或半边旗二萜类化合物5F协同诱导肝癌细胞凋亡及对FaS蛋白表达的影响.方法 体外培养肝癌细胞,设RA、GS-Rh2、5F、RA+GS-Rh2、RA+5F 3个实验组和对照组,分别收集其药物作用24和48 h后的培养细胞,应用流式细胞仪(FCM)检测肝癌细胞的凋亡率及Fas蛋白的表达.结果 肝癌细胞药物作用48 h时,RA+GS-Rh2组、RA+5F组与RA组或GS-Rh2组或5F组比较凋亡细胞数和Fas蛋白的表达有显著增高(P<0.05),但在24 h时,RA+Gs-Rh2组、RA+5F组与RA组比较"亚G1峰"差异无显著性(P>0.05).结论 维甲酸与人参皂甙-Rh2或半边旗二萜类化合物5F协同作用可以增强诱导肝癌细胞凋亡,促进Fas蛋白的表达.     

半边旗5F对人病理性瘢痕动物模型生物性状的影响

目的 观察5F对人病理性瘢痕裸鼠模型瘢痕组织生物性状的影响.方法 以人病理性瘢痕移植于裸鼠建立动物模型,分别用不同浓度5F作用于动物模型,观察其形态学、组织学、瘢痕组织中TGF-β1及Ⅰ型胶原含量的改变.结果 5F能使动物模型瘢痕体积缩小,组织结构向普通瘢痕转化,降低瘢痕中TGF-β1及Ⅰ型胶原含量.结论 5F能明显抑制瘢痕动物模型组织的生长,在病理性瘢痕的治疗中可能有潜在的应用价值.     

PsL5F诱导人未分化甲状腺癌FRO细胞凋亡的机制研究

目的 研究半边旗5F(PsL5F)对人未分化甲状腺癌FRO细胞的凋亡诱导及其分子机制.方法 用PsL5F处理FRO细胞,MTT法测定其对FRO细胞的生长抑制作用;Annexin V-FITC/PI标记法与流式细胞术联用检测PsL5F对FRO细胞的凋亡诱导;用CM-H2DCFDA和DiOD6(3)标记在流式细胞仪上分析PsL5F对FRO细胞内活性氧(ROS)水平和线粒体膜电位(MMP)的影响;Western blot方法分析Bax、Cyto C、凋亡诱导因子(AIF)及截断PARP的水平变化;Caspase-3活性用Caspase-3比色分析试剂盒测定.结果 PsL5F对FRO细胞具有显著的生长抑制作用,且呈现剂量和时间依赖性;PsL5F可诱导FRO细胞凋亡,表现出在100 mg/L浓度下,磷脂酰丝氨酸(PS)外翻细胞的比例呈时间依赖性逐渐增加;用100 mg/L PsL5F处理FRO细胞,在1 h时细胞内ROS水平即明显升高,ROS抑制剂还原型谷胱甘肽(GSH)可抑制PsL5F诱导的细胞内ROS水平升高和细胞凋亡;100 mg/L PsL5F处理可使FRO细胞MMP逐渐降低,GSH可抑制PsL5F诱导的MMP降低;同时,线粒体膜蛋白组分中Bax和细胞液蛋白组分中Cyto C、AIF逐渐增加;PsL5F处理使FRO细胞Caspase-3活性逐渐升高及其作用底物PARP断裂.结论 PsL5F对人未分化甲状腺癌FRO细胞的生长抑制作用是通过诱导细胞凋亡进行的.其中,细胞内ROS水平升高起到了非常重要的第二信使作用,线粒体是其作用的重要靶点.细胞凋亡是通过Bax转位到线粒体膜、引起MMP降低、Cyto C和AIF释放到细胞液、激活Caspases级联反应而进行的.     

半边旗有效成分5 F对腹膜炎小鼠血清NO和细胞因子的影响

目的：研究半边旗有效成分贝壳杉烷型二萜类化合物5F对腹膜炎小鼠血清一氧化氮（NO）和细胞因子IL-6、IL-10、TNF-α、MCP-1的影响。方法预先给予50和100 mg·kg-15F溶液3 d后,腹腔注射50 mg·kg-1酵母多糖建立腹膜炎模型,Griess法测一氧化氮含量,流式细胞术检测IL-6、IL-10、TNF-α和MCP-1的水平。结果与模型组比较,5F可以降低腹膜炎小鼠血清一氧化氮水平（ P﹤0.05）,减少IL-6、IL-10、TNF-α和MCP-1含量（P﹤0.05或P﹤0.01）。结论5F可以有效减少酵母多糖诱导的腹膜炎小鼠血清一氧化氮、TNF-α、IL-6、IL-10和MCP-1含量。     

胰腺癌细胞凋亡相关基因的研究进展

细胞凋亡是一种特殊的细胞死亡方式,参与肿瘤的发生发展,在胰腺癌组织中,多种基因参与了胰腺癌细胞的凋主恨过程.随着其机制的进一步阐明,从基因水平上诱导细胞凋亡有望成为综合治疗胰腺癌的一个重要内容.     

半边旗提取物5F对高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞增殖的影响及作用机制的实验研究

目的:探讨半边旗提取物5F(简称5F)对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞增殖的影响及其作用机制.方法:以MTT法检测5F对HO-8910PM细胞增殖的影响;流式细胞术分析5F对HO-8910PM细胞周期的影响;Western blot分析NF-κB(P65)、焦点粘附激酶(focal adhesionkinase,FAK)的表达及FAK酪氨酸磷酸化水平.结果:不同浓度的5F分别处理细胞24 h后,对HO-8910PM细胞增殖有明显的抑制作用;使G0/G1期的细胞减少,阻断细胞于G2/M期;5F可使NF-κB(P65)的表达下调,上调FAK的表达,并下调FAK酪氨酸磷酸化水平.结论:5F通过影响HO-8910PM细胞周期、下调NF-κB(P65)表达及促进FAK的表达来抑制细胞生长.     

半边旗提取物5F对乳癌细胞MDA-MB-231培养物诱导的HUVEC血管生成潜能的影响

目的:研究半边旗提取物5F对乳癌细胞MDA-MB-231培养物(乳癌细胞培养物)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)血管生成潜能的影响及其作用机制。方法:MTT法检测不同浓度5F对乳癌细胞培养物诱导的HUVEC增殖的抑制作用;Transwell小室法检测不同浓度5F对乳癌细胞培养物诱导的HUVEC穿膜能力和趋化性运动能力的影响;细胞-基质黏附实验检测5F对乳癌细胞培养物诱导的HUVEC黏附能力的影响;RT-PCR、Western blot法检测不同浓度5F对乳癌细胞培养物诱导的HUVEC KDR、Flt-1 mRNA和蛋白表达的影响。结果:不同浓度5F处理6、24 h后对乳癌细胞培养物诱导的HUVEC的增殖有一定程度的抑制作用(F组间=64.852,F时间=131.393,P<0.001)。20、40、80μmol/L 5F可抑制乳癌细胞培养物诱导的HUVEC体外穿膜能力、趋化性运动能力和黏附基质能力(F=48.206、147.613、22.081,P均<0.001)。不同浓度5F作用于乳癌细胞培养物诱导的HUVEC 24 h后,下调HUVEC KDR、Flt-1 mRNA和蛋白的表达(mRNA:F=86.381、79.175;蛋白:F=36.621、127.910,P均<0.001)。结论:5F抑制乳癌细胞培养物诱导的HUVEC体外增殖、穿膜能力、趋化性运动能力和黏附基质能力,其机制可能与下调细胞KDR mRNA和蛋白的表达水平有关。     

白藜芦醇诱导胰腺癌细胞凋亡通路的实验研究

目的:探讨白藜芦醇对人胰腺癌细胞凋亡的诱导作用及其凋亡通路.方法:运用细胞培养、Western blot分析、MTT方法和流式细胞仪,对一系列胰腺癌细胞株进行白藜芦醇敏感性筛选,同时对其毒性进行评估.结果:白藜芦醇并不能有效地诱导人胰腺癌细胞capan-1、Bxpc-3、Miapaca-2细胞凋亡,但能够有效地诱导colo357及capan-2细胞的凋亡,其机制是通过诱导caspase-3的激活而促进capan-2和colo357凋亡.白藜芦醇对colo357及capan-2细胞株的增殖有抑制效应.白藜芦醇对正常胰腺导管上皮细胞HPDE无明显毒性作用.结论:白藜芦醇通过诱导细胞周期抑制性的蛋白上调和细胞周期的阻滞而在细胞水平上有效地诱导特定胰腺癌肿瘤细胞的凋亡.