人脐血造血祖细胞体外培养的研究

应用体外培养方法对人脐血造血祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－Ｅ、ＢＦＵ－Ｅ、ＣＦＵ－Ｆ）数量及其特征进行观察，并与成人外周血及骨髓相比较。结果显示：①脐血中ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－Ｅ、ＢＦＵ－Ｅ数量约相当于成人外周血的７～１８倍；ＣＦＵ－ＧＭ及ＣＦＵ－Ｅ数量与骨髓相比无统计学差异，但ＢＦＵ－Ｅ低于骨髓；②脐血中ＣＦＵ－ＧＭ的集落大小、细胞构成、集落生长曲线明显不同于成人外周血及骨髓；③脐血红系祖细胞生长模式近似于骨髓；④脐血中可培养出ＣＦＵ－Ｆ，其数量约为骨髓的２／５，而外周血中则无ＣＦＵ－Ｆ形成。提示人脐血中富含造血干／祖细胞，而且在数量和特征上明显不同于外周血和骨髓，在移植中可能更具有重建骨髓造血的能力。     

人参总皂甙对人血细胞生成的研究

从人参中提取有效成份人参总皂甙（ＴＳＰＧ），测定它对人骨髓粒单系祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ），红系祖细胞（ＣＦＵ－Ｅ，ＢＦＵ－Ｅ）和多向祖细胞（ＣＦＵ－ＧＥＭＭ）的刺激增殖作用。结果显示：在培养中加入不同浓度的ＴＳＰＧ５．２５，５０，７５，１００ｍｇ／Ｌ，可促进造血细胞增殖，在体外形成集落。在ＴＳＰＧ５－７５ｍｇ／Ｌ时，ＣＦＵ－ＧＭ集落产率均明显高于不加ＴＳＰＧ的对照组浓度的ＴＳＰＧ使集落产率明显高于对     

造血生长因子对长期培养中骨髓造血细胞增殖和分化的影响

应用骨髓长期培养法研究了ＨＧＦｓ联合应用对ＬＴＢＭＣ中造血干／祖细胞的增殖、分化的影响，结果显示，在ＬＴＢＭＣ中，含有ＨＧＦｓ（ＩＬ－２＋ＩＬ－６＋Ｇ－ＣＳＦ＋ＧＭ－ＣＳＦ＋Ｅｐｏ）的扩增组与对照组相比，ＨＧＦｓ能显著地扩增ＨＳＣｓ，在第一周，ＣＦＵ－ＧＭ，ＣＦＵ－Ｅ和ＢＦＵ－Ｅ总数分别扩增１８．０９－１６．５９倍、１０．２６－８．４８和１４．９９－１２．７８倍，而累积扩增倍数分别达３６．１９－６     

脐血中造血细胞的分离与祖细胞培养

目的 通过脐血粒单系造血祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）培养，探讨其临床应用前景与价值。方法 琼脂半固体培养法，比较脐血、骨髓、外周血ＣＦＵ－ＧＭ，比较脐血４℃保存２，４，６天后，ＣＦＵ－ＧＭ回收率。结果 脐血ＣＦＵ－ＧＭ的平均产率接近骨髓，明显高于成人外周血，脐血４℃保存，ＣＦＵ－ＧＭ回收率２天为８５．５％，４天为３５．１％，６天为１０．１％，结论：脐血中富含造血干／祖细胞，为造血细胞移植提供新的来源。脐     

小鼠骨髓基质细胞系QXMSC1促进骨髓移植后的造血重建

目的：观察骨髓基质细胞系ＱＸＭＳＣ１在骨髓移植后早期能否加速造血重建。方法：用脾克隆形成单位测定ＱＸＭＳＣ１对造血干细胞的影响。计数每根股骨有核细胞数，用半固体琼脂克隆形成法测定粒单系祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ），微量甲基纤维素法测定红系祖细胞（ＣＦＵ－Ｅ及ＢＦＵ－Ｅ）。结果：ＱＸＭＳＣ１细胞可明显增加ＣＦＵ－Ｓ克隆数。在骨髓移植后第１０天，ＱＸＭＳＣ１可增加骨髓有核细胞数，增加ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－Ｅ     

阵发性睡眠性血红蛋白尿患者的淋巴细胞对红系和粒-巨噬系祖细胞的影响

为了研究阵发性睡眠性血红蛋白尿（ＰＮＨ）患者的淋巴细胞对红系和粒－巨噬系祖细胞的影响，将ＰＮＨ患者的植物血凝素－淋巴细胞培养液（ＰＨＡ－ＬＣＭ）加入造血祖细胞培养基中，用于红系爆式集落形成单位（ＢＦＵ－Ｅ）和粒－巨噬系集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ）的培养。结果在含有ＰＮＨ患者的ＰＨＡ－ＬＣＭ的培养条件下，ＰＮＨ患者骨髓ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－ＧＭ集落数明显低于含有正常人ＰＨＡ－ＬＣＭ的培养条件下的集落数；正常人骨髓ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－ＧＭ集落数亦明显低于含有正常人的ＰＨＡ－ＬＣＭ培养条件下的集落数。结果表明ＰＮＨ患者淋巴细胞对造血的支持作用减弱。     

RhIL—2对人骨髓CFU—GM,CFU—E和BFU—E的影响

采用甲基纤维素体外半固体培养法证明，５０－１０００Ｕ／ｍｌ ｒｈＩＬ－２单用对人骨髓造血祖细胞的ＣＦＵ－ＧＭ〉ＣＦＵ－Ｅ及ＢＦＵ－Ｅ无直接刺激增生作用；当与ＧＭ－ＣＳＦ联用，１００－４００Ｕ＝ｍｌｒｈＩＬ－２其ＣＦＵ－ＧＭ集落形成率明显高于单用ＧＭ－ＣＳＦ的对照组；当与ＥＰＯ联用时，其ＣＦＵ－Ｅ及ＢＦＵ＝Ｅ集落形成率 于单用ＥＰＯ对照组，而１０００Ｕ／ｍｌｒｈＩＬ－２期 ３咱集落形成数目呈下降趋势     

脐血抗—HPCA—2和Tük3标记的CD34阳性细胞的流式细胞仪比较分析

在标记脐血造血祖细胞表面抗原（ＨＰＣＡ），ＣＤ３４中，比较抗－ＨＰＣＡ－２－ＦＩＴＣ和Ｔｋ３（纯抗体）标记的ＣＤ（３４＋）细胞在流式细胞仪分析中的荧光特征及两种单抗标记的ＣＤ（３４＋）细胞与体外培养的粒单细胞集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ），红系爆发形成单位（ＢＦＵ－Ｅ），和混合集落形成单位（ＣＦＵ－Ｍｉｘ）的相关性。结果发现脐血有核细胞中，抗ＨＰＣＡ－２阳性细胞占１．０５±０．７２％（ｎ＝１３），Ｔｋ３阳性细胞占２．０６±１．２５％（ｎ＝８），差别显著（Ｐ＜０．０５）。每毫升脐血两种抗体标记的细胞分别为９６．５６±５６．６４和２３１．４０±１６３．９３（Ｐ＜０．０５）。尽管ＨＰＣＡ－２阳性细胞与Ｔｋ３阳性细胞数量呈显著正相关（ｒ＝０．８７５，Ｐ＜０．０１），前者与ＣＦＵ－ＧＭ，ＢＦＵＥ，ＣＦＵ－Ｍｉｘ及集落总数ＣＦＵｓ均呈正相关，而后者仅与ＣＦＵ－ＧＭ，ＣＦＵｓ相关。研究提示在检测造血祖细胞时，用抗－ＨＰＣＡ－２－ＦＩＴＣ代替Ｔｋ３可降低假阳性，获得较好的ＯＤ（３４＋）细胞与ＣＦＵ间的线性关系。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿患者的淋巴细胞对红系和粒—巨噬？…

为了研究阵发性睡眠性血红蛋白尿（ＰＮＨ）患者的淋巴细胞对红系和粒－巨噬系祖细胞的影响，将ＰＮＨ患者的植物血凝素－淋巴细胞培养液（ＰＨＡ－ＬＣＭ）加入造血祖细胞培养基中，用于红系爆式集落形成单位（ＢＦＵ－Ｅ）和粒－巨噬系集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ）的培养。结果在含有ＰＮＨ患者的ＰＨＡ－ＬＣＭ的培养条件下，ＰＮＨ患者骨髓ＢＦＪ－Ｅ和ＣＦＵ－ＧＭ集落数明显低于含有正常人ＰＨＡ－ＬＣＭ的培养条件下的集落数     

当归注射液对正常人和再生障碍性贫血患者造血祖细胞的 …

本文采用体外造血祖细胞集落形成技术，观察了当归注射液对正常人和再生障碍性贫血（再障）患者骨髓红系（ＣＦＵ－Ｅ，ＢＦＵ－Ｅ）、粒系（ＣＦＵ－ＧＭ）的刺激增殖作用。实验结果表明：在正常骨髓培养体系中加入当归注射液后ＣＦＵ－Ｅ、ＢＦＵ－Ｅ、ＣＦＵ－ＧＭ产率均明显提高，以终浓度为５０μｇ／ｍｌ时最佳，以此浓度加入再障患者骨髓常规培养体系中，后者的ＣＦＵ－Ｅ、ＢＦＵ－Ｅ、ＣＦＵ－ＧＭ产率分别提高３６．２％、     

脐血造血干细胞体外培养及其特性研究

应用造血祖细胞体外培养和流式细胞术(FCM),观察了脐血中粒-单系祖细胞(CFU-GM)和红系祖细胞(BFU-E)的数量和特性,并对其细胞增殖周期和骨髓及成人外周血做了比较.结果表明,脐血中含丰富的CFU-GM和BFU-E,其数量低于成人骨髓而大大超过外周血水平;脐血红系祖细胞对促红细胞生成素(EPO)和爆式促进活性(BPA)表现出更高的敏感性,而粒系祖细胞对集落刺激因子(CSF)的敏感性和骨髓比较似无明显差别;脐血S期、G_2+M期及S+G_2M期细胞数均明显低于骨髓,虽略高于外周血各期细胞数,但差别无显著性意义.提示脐血造血干细胞体外培养可以得活性较高的祖细胞.     

儿童再生障碍性贫血骨髓祖细胞的测定和意义

目的通过对再生障碍性贫血 (AA)患儿红系 (BFU E、CFU E)、粒单核系 (CFU GM)及巨核系 (CFU Meg)祖细胞培养 ,了解骨髓祖细胞增殖情况。方法抽取 4 7例AA患儿骨髓分别作四类祖细胞培养 ,在 7、14d测定其集落数。结果 4 7例AA患儿中 ,四类集落数均值与对照组比较均有显著下降 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1) ,且四类集落数均值在AA三种类型中 ,基本上随病情加重均值逐步下降 ,其中四类集落数低于对照组下限的患儿分别为BFU E 36 .17%、CFU E 85 .11%、CFU GM 74 .4 7%、CFU Meg 91.4 9 %。BFU E、CFU GM和CFU Meg随着患儿疾病的加重 ,低于对照组下限的患儿百分比同步上升 ,且三者的表现与外周血三系表现一致 ,而CFU E却未见上述现象。结论在部分AA患儿中存在着四类祖细胞培养集落数的下降 ,且基本上与患儿病情成正比 ;BFU E的变化较CFU E更能代表患儿骨髓红系祖细胞的变化。     

芍药苷对放射线致血虚证小鼠骨髓Epo和G-CSF基因表达的影响

目的:考察芍药苷对放射线致血虚证小鼠的生血作用及对骨髓Epo、G CSF基因表达的影响,为阐明芍药苷补血作用的分子机制提供依据。方法:采用3.5Gy60 Coγ射线全身1次性照射,制备小鼠血虚证模型,检测外周血象,骨髓集落培养观察并计数CFU GM、BFU E、CFU E、CFU mix ,RT PCR观察并检测骨髓Epo和G CSF基因表达。结果:芍药苷显著升高放射线致血虚证小鼠外周血白细胞数量和骨髓CFU GM、BFU E、CFU E、CFU mix数量,上调骨髓Epo和G CSF基因表达。结论:芍药苷具有生血作用,促进骨髓Epo和G CSF基因的表达可能是其生血作用的机制之一。     

再生障碍性贫血患者造血祖细胞及免疫机制的研究

目的探讨再生障碍性贫血(再障)的发病机制。方法采用甲基纤维素及胶原半固体培养法对56例再障骨髓CFU-GM、CFU-E、BFU-E及CFU-M K、BFU-M K进行培养;采用APAAP法及双抗体夹心酶联免疫吸附法(EL ISA)对再障患者外周血T细胞亚群、血清sIL-2R进行检测。结果再障患者CFU-GM、CFU-E、BFU-E及CFU-M K、BFU-M K集落数均低于对照组,且严重型再障集落数减少程度与慢性再障相近;再障患者CD 3亚群细胞无变化,CD 4亚群细胞减低,CD 8亚群细胞增高,CD 4/CD 8降低,重型再障患者血清sIL-2R中水平高于正常对照组与慢性再障。结论骨髓造血祖细胞数量减少是再障发病的重要因素,其减少程度与再障的病情有关;细胞免疫功能异常及造血负调控因子可能在再障发病中起一定的作用。     

The effects of total saponins of panax ginseng on hematopoietic progenitor cells in healthy humans and aplastic anemia patients

Ginseng is said to have beneficial effects on anemia. The proliferation effects of total saponins of Panax ginseng (TSPG) on hematopoietic progenitor cell in healthy individuals and 29 patients with aplastic anemia (AA) were observed through bone marrow cultures of burst forming unit-erythroid (BFU-E), colony forming unit-erythroid (CFU-E) and colony forming unit-granulocyte/macrophage (CFU-GM) in vitro compared with methyltestosterone (MT). The results suggest TSPG might prompt the proliferation of normal progenitor cells at a concentration of 20 μg/ml. The numbers of BFU-E,CFU-E and CFU-GM increased by 37.8±2.9%, 31.4±2.9% and 33.3±4.0% respectively overthe controls; furthermore TSPG was still useful to BFU-E, CFU-E growth without Epo in vitro, although the colony numbers were much lower. Otherwise MT was useless to CFU-GM. Of the 29 patients with AA, 14 who responded to MT showed sensitivity to TSPG in marrow culture (the rising rate of colony formation exceeded 30%), but immune-mediated AA (patient’s peripheral blood mononucleated cell suppressed normal hematopoiesis) and stem cell decreased AA (few of colonies were formed) showed almost no expression for TSPG activity because of the immunological suppression system and the absence of progenitors.     

血小板内皮细胞粘附因子对脐血造血细胞的影响

目的观察ＣＤ３１分子在脐血造血细胞的分布和ＩＰ２８Ａ－ＣＤ３１单抗对造血祖细胞ＣＦＵ－ＧＭ和ＢＦＵ－Ｅ的集落形成的影响,方法应用单克隆抗体结合免疫荧光流式细胞仪技术进行免疫分型和分选脐血造血细胞。结果ＣＤ３１分子分布于所有脐血的ＣＤ３４＋细胞和部分Ｔ、Ｂ、ＮＫ淋巴细胞,ＩＰ２８Ａ－ＣＤ３１单抗在ＳＣＦ、ＧＭ－ＣＳＦ和ＥＰＯ存在下能明显增加脐血ＣＦＵ－ＧＭ和ＢＦＵ－Ｅ的集落产率。结论ＣＤ３１分子广泛分布于脐血造血细胞,并对脐血造血细胞有正调控作用。     

川芎嗪对辐射致血虚证小鼠骨髓细胞蛋白质表达的影响

目的:观察川芎嗪对辐射致血虚证小鼠骨髓细胞蛋白质表达的影响,探讨川芎嗪补血作用的分子机制。方法:采用3.5 Gy60Coγ射线全身1次性照射,制备小鼠血虚证模型;骨髓集落细胞培养,观察并计数粒系-巨噬细胞集落生成单位(CFU-GM)、爆增型红细胞集落生成单位(BFU-E)、红细胞集落生成单位(CFU-E)、混合集落生成单位(CFU-mix)集落数;利用蛋白质组学寻找差异表达蛋白质。结果:辐射后小鼠骨髓CFU-GM、BFU-E、CFU-E、CFU-mix集落数明显减少,川芎嗪能使其显著回升并部分逆转辐射后蛋白质表达的变化,使小鼠骨髓细胞5种蛋白质表达回升,5种回落。结论:川芎嗪可促进辐射致血虚证小鼠骨髓造血祖细胞增殖,调节多种骨髓细胞蛋白质的表达,后者可能是川芎嗪促进造血细胞生长和增殖的重要机制之一。     

苦参抗白血病作用及其机制

By using CFU-GM/CFU-L colony assay, NBT/MTT reductant test and DNA fragmentation analysis, we studied the effects of Sophora flavescens (SF) on CFU-GM proliferative ratio in human normal bone marrow/umbilical cord blood and on proliferation, differentiation and apoptosis in human acute myelogenous leukemia HL-60 cells. The results showed that 5, 10, 15, 20 micrograms.microliter-1 of SF significantly inhibited proliferation and induced apoptosis in the HL-60 cells in a dose-dependent fashion. Fifteen micrograms.microliter-1 of SF also induced differentiation in HL-60 cells. Furthermore, cytotoxic activity of SF(5-15 micrograms.microliter-1) was not apparent on human normal hematopoietic progenitors(CFU-GM). The results indicate that an appropriate concentration of SF has a selective antileukemic effect. Thus, these are important impetuses for further research of SF as an anticancer agent.     

电离辐射对胎鼠皮肤间充质干细胞支持骨髓粒系造血作用的影响

目的：观察不同剂量的X射线照射对体外培养的胎鼠皮肤间充质干细胞(MSCs)支持造血细胞增殖作用的影响,为提高造血干细胞体外扩增效率提供一种更为有效的方法,进而为造血干细胞移植提供一个新的途径。 方法：分别用不同剂量的X射线照射培养的胎鼠皮肤MSCs层,然后将骨髓细胞种植于该细胞层上,扩增后不同时间(0~12 d)进行骨髓CFU-GM集落培养,同时取经X射线照射的皮肤MSCs的上清液进行骨髓CFU-GM、CFU-E及BFU-E培养,观察射线对胎鼠皮肤MSCs造血支持作用的影响。 结果：6、8和10 Gy剂量X射线照射胎鼠皮肤MSCs与骨髓细胞共同作用7 d时,骨髓祖细胞集落显著增加,其中6 Gy组增加最为明显,CFU-GM是0 Gy组的2.17倍。6、8和10 Gy剂量X射线照射培养皮肤的上清液体外亦可刺激骨髓CFU-GM、CFU-E、BFU-E的生长,与0 Gy组比较差异均有显著性(P<0.05)。其中6 Gy组增加最为明显,分别达0 Gy组的1.81倍、3.94倍和3.51倍,集落亦明显加大。 结论：一定剂量X射线照射胎鼠皮肤MSCs,其体外支持造血的作用增强,无论照射后的单纯MSCs细胞层还是上清液都可使骨髓细胞集落数增多。     

CD34+干细胞的分化及其在人工血管内皮化中的应用

目的:探讨外周血、骨髓和脐血中CD34 细胞作为人工血管内皮化的种子细胞来源问题.方法:采集犬外周血和骨髓及人脐血,经免疫磁珠分离出内皮细胞祖细胞,内皮细胞生长因子(VEGF)诱导分化为内皮细胞并扩增,光镜、扫描电镜和免疫细胞化学鉴定;将培养细胞种植于人工血管,扫描电镜观察.结果:经流式细胞仪测定,分离后的细胞中CD34 细胞:外周血(26.30±2.42)% 、骨髓(41.84±3.65)%、脐血(74.62±4.46)%,骨髓和脐血中CD34 细胞数量明显多于外周血,且增殖、分化能力强;CD34 细胞培养2周细胞长满瓶底并达到增殖高峰,细胞呈"铺路石"状排列.Ⅷ因子,CD31免疫细胞化学染色均为阳性,透射电镜细胞胞浆内可见W-P小体;扫描电镜下,内皮细胞平铺于人工血管表面,成单层排列,细胞排列无轴向性.结论:外周血、骨髓和脐血经免疫磁珠分离系统可分离出CD34 细胞,CD34 细胞经VEGF诱导可定向分化为内皮细胞.骨髓和脐血CD34 细胞可作为人工血管内皮化的种子细胞来源.