内毒素作用下肺动脉内皮细胞ET—1基因表达与释放

应用斑点杂交、放免测定等方法检测分析了内毒素不同浓度同时相和内毒素同浓度不同时相作用下体外培养的牛肺动脉内皮细胞ＥＴ－１基因表达与释放。结果表明，内毒素具有促进内皮细胞ＥＴ－１基因表达和释放的作用，且该作用有明显的剂量依赖关系的时间效应关系；两组ＥＴ－１基因表达的强弱与释放量的增减均呈显著的正相关。提示内毒素血症时血浆ＥＴ水平升高与ＥＴ合成增加和基础释放量增高有密切关系。     

高速枪弹伤时内皮细胞内皮素释放及mRNA转录的变化

目的：探讨高速枪弹伤时产生的强压力波对血管内皮细胞内皮素（ＥＴ－１）的释放及基因表达的影响。方法：以高速枪弹致伤犬腹部以及高速枪弹压力波致伤培养人脐静脉内皮细胞为实验模型，采用放射免疫及斑点杂交的方法，从整体、细胞、基因不同层次观察内皮细胞ＥＴ－１释放及表达的特点。结果：致伤犬和培养的内皮细胞在压力波作用下，ＥＴ－１释放和基因表达的变化具有相似的趋势，出现即刻和延迟反应，即伤后１０分钟至６小时ＥＴ－１释放明显增加，ｍＲＮＡ（ＥＴ－１）转录增强则出现在伤后４～６小时。结论：压力波是导致ＥＴ－１释放及基因表达紊乱的重要力学因素，ＥＴ－１ｍＲＮＡ转录增强可能是压力波对ＥＴ－１调节的延迟效应的分子病理学基础。     

内毒素作用下肺动脉内皮细胞ET—1基因表达与释放

应用斑点杂交、放免测定等方法检测分析了内毒素不同浓度同时相(A组)和内毒素同浓度不同时相(B组)作用下体外培养的新生牛肺动脉内皮细胞ET—1基因表达和释放的作用,且该作用有明显的剂量依赖关系和时间效应关系,两组ET—1基因,表达与释放。结果表明,内毒素具有促进内皮细胞ET—1基因表达的强弱与释放量的增减均呈显著的正相关。提示内毒素血症时血浆ET水平升高与ET合成增加和基础释放量增高有密切关系。     

内毒素血症时内皮素—1致肝损伤作用的研究

目的：探讨内毒素血症时内皮素－１在肝损伤中的作用．方法：选用Ｗｉｓｔａｒ大鼠９０只，分为对照组、内毒素组和内毒素＋内皮素抗体组（每组３０只）．观察伤后３、６、９、１２和２４小时肝组织中ＥＴ－１ｍＲＮＡ转录表达和活性变化；肝组织中乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）、丙二醛（ＭＤＡ）和三磷酸腺苷（ＡＴＰ）含量的变化．结果：内毒素血症时肝组织中ＥＴ－１含量和ＥＴ－１ｍＲＮＡ相对含量均明显高于对照组．肝组织ＥＴ－１含量与ＡＴＰ呈显著负相关，与ＭＤＡ呈正相关．内皮素抗体能部分拮抗内毒素所致的肝损伤．结论：内毒素是在转录和翻译水平使ＥＴ－１合成和释放增加，ＥＴ－１对肝组织有一定损伤作用．     

一氧化氮损伤内皮细胞的机制研究

体外培养人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ），主要研究：①内毒素损伤内皮细胞过程中一氧化氮（ＮＯ）的作用；②不同浓度ＮＯ供体ＳＩＮ－１对内皮细胞的作用以及ＳＯＤ、ＣＡＴ对内皮细胞的保护作用。结果提示：ＮＯ在内毒素损伤内皮细胞过程中发挥重要作用；高浓度ＳＩＮ－１可严重损伤内皮细胞；ＳＯＤ、ＣＡＴ对内皮细胞的不同保护作用说明ＯＮＯＯ＾－的产生可能是ＮＯ损伤内皮细胞的重要机制。     

强压力波对血管内皮细胞、血管平滑肌细胞释放内皮素、一氧化氮的影响

目的探讨强压力波对血管内皮细胞及血管平滑肌细胞释放内皮素（ＥＴ）、一氧化氮（ＮＯ）的影响。方法１５只犬高速投射物致伤，检测致伤前后血浆ＥＴ、ＮＯ浓度，并用肠系膜血管内皮细胞（ＶＥＣ）、血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）联合培养，体外检测强压力波致伤前后培养上清中的的ＥＴ－１、ＮＯ浓度。结果高速投射物致伤犬后血浆中的ＥＴ、ＮＯ浓度显著升高。联合培养血管内皮细胞、平滑肌细胞致伤后ＥＴ、ＮＯ浓度在致伤后１０分钟迅速升高，至６小时仍维持在较高水平，且以ＥＴ升高更显著，持续时间更长。结论实验结果提示在血管应激反应过程中，血管组织可能通过局部自分泌、旁分泌方式，释放ＥＴ－１、ＮＯ调节局部血管舒缩功能。在高速投射物致伤的强压力波作用下，由于ＥＴ释放占优势，在血管出现以收缩为主的反应中可能起重要作用     

红细胞生成素3''''-增强子调节缺氧时内皮细胞血栓素合酶基因表达

目的：研究缺氧对人脐静脉内皮细胞珠ＥＣ－３０４ＴＸＳ基因的影响及ＥＰＯ３′增强子在其中的作用。方法：将红细胞生成素（ＥＰＯ）３′－增强子野生片断及点突变片断，借脂质体转入人脐静脉内皮细胞株ＥＣ－３０４，用半定量ＲＴ－ＰＣＲ测定常氧与缺氧条件下培养６小时的细胞血栓素合酶（ＴＸＳ）ｍＲＮＡ。结果：ＥＣ－３０４常氧培养有ＴＸＳ基因表达缺氧６小时ＴＸＳ基因表达明显增强；而细胞导入野生ＥＰＯ３′－增强子片断可阻断缺氧诱导ＴＸＳ基因表达增强，而点突变片断无此作用。结论：在ＴＸＳ基因序列中，可能存在类似ＥＰＯ３′－增强子片断，缺氧诱导ＴＸＳ基因表达增强可能主要通过缺氧诱导因子－１与ＴＸＳ基因序列中类似ＥＰＯ３′－增强子片断结合。     

内毒素对培养人脐静脉内皮细胞的损伤作用

目的研究内毒素对内皮细胞的直接损伤作用，以便对烧伤早期入血的内毒素对血管内皮细胞的影响作出初步评价。方法以培养的原代人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）为模型，加入不同浓度内毒素，观察在不同时相点培养液中乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）活性变化，前列腺环素（ＰＧＩ２）代谢产物６－酮－前列环素Ｆ１ａ（６－酮－ＰＧＦ１ａ）含量和内皮细胞中的Ｆ－肌动蛋白丝（Ｆ－ａｃｔｉｎ）含量与细胞形态学变化。结果ＬＤＨ活性在内毒素达到０．４μｇ／ｍｌ并作用１２小时后才有显著升高（Ｐ＜０．０５），而６－酮－ＰＧＦ１ａ含量在各组内毒素损伤中变化均不显著。内皮细胞中Ｆ－ａｃｔｉｎ含量在各组中均有明显下降（Ｐ＜０．０１），但程度略有不同，细胞形态也有相应变化。结论内毒素直接损伤血管内皮细胞（ＶＥＣ）须较大浓度（＞０．４μｇ／ｍｌ），但在较低浓度下（０．１μｇ／ｍｌ）可直接引起内皮细胞的一些形态学变化和Ｆ－ａｃｔｉｎ含量的变化，初步推测血管内皮细胞可能存在着与通常认识的内毒素—内毒素结合蛋白—ＣＤ１４途径激活细胞不同的分子机制     

肿瘤坏死因子对气道上皮细胞及平滑肌细胞分泌内皮素—1的影响

为进一步探索肿瘤坏死因子－Ａｌｐｈａ（ＴＮＦ－α）与内皮素－１（Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎｔ－１）之间的关系，用ＴＮＦ－α刺激离体培养的气道上皮细胞、平滑肌细胞，测定其分泌ＥＴ－１的变化。结果发现气道上皮细胞本身可分泌ＥＴ－１，在ＴＮＦ－α的刺激下ＦＴ－１的分泌释放量增加；气道平滑肌细胞无分泌（或分泌微量）ＥＴ－１，在ＴＮＦ－α刺激＊后可分泌释放Ｅｔ－１。此方法可能对气道高反应的形成和气道重建有一定的意义。     

严重烧伤后内皮细胞损伤及其在早期脏器损害发病中的作用

３０％Ⅲ度烧伤兔伤后血浆渗透压下降，ＣＥＣ及ＡＣＥ活性升高，血管内皮细胞明显形态学改变，表明伤后内皮细胞受损。缺氧、烧伤血清、ＴＮＦ、内毒素、ＦＰＡＢ及活化粒细胞能损伤培养的人脐静脉内皮细胞。３０％Ⅲ度烧伤大鼠伤后血浆ＥＴ－１明显增多，ＥＴ－１、ＥＴＡ、ＥＴＢ、ｍＲＮＡ于心肺肝肾的表达，于伤后斑点杂交与原位杂交的结果，均表明其明显增强。烧伤内皮素增加，不但使血管收缩，而且增加内皮细胞透性。采用细胞     

内毒素血症时血浆、肝组织内皮素-1和一氧化氮活性变化及相互关系

目的：采用大鼠内毒素血症模型,观察血浆,肝组织内皮素－1（ET－1）和一氧化氮（NO）的浓度的动态变化,探讨两者的相互关系,方法：选用Wisaar大鼠150只,分为对照组,内毒素组,内毒素＋耠基左旋精氨酸组,内毒素＋左旋精氨酸组,内毒素＋内皮素抗体组（每组30只）,观察后3,6,9,12,24h血浆和肝组织ET－1,NO浓度的变化,结果,给予内毒素后3h血浆,肝组织ET－1和浓度均较对照组升高,持续24h,内毒素和NO的合成抑制剂同时给予时,ET－1的浓度高于单纯内毒素组,内毒素和NO的合成底物同时给予时,ET－1的浓度低于单纯内毒素组,内毒素和ET－1抗体同时给予时,NO的浓度高于单纯内毒素组,结论：内毒素可使血管组,内毒素和ET－1抗体同时给予时,NO的浓度高于单纯内毒素组,结论：内毒素可使血管内皮细胞合成并释放ET－1和NO增加,NO部分抑制T－1的合成和释放,ET－1则促进NO的合成和释放。     

缺氧对体外培养的猪肺动脉内皮细胞分泌内皮素和细胞内Ca~（2＋）的影响

目的探讨内皮素的释放机制，为研究防治缺氧性肺动脉高压提供新的线索。方法取体外培养的１２－１７代肺动脉内皮细胞，随机分为低氧１２ｈ组和２４ｈ组，每组分别设常氧对照组。低氧组放入３％Ｏ２、５％ＣＯ２的低氧培养箱，对照组放入２１％Ｏ２、５％ＣＯ２的常氧培养箱，分别于１２ｈ和２４ｈ取出检测细胞内Ｃａ２＋和培养液中内皮素含量的变化。结果常氧条件下不同时间培养液中的内皮素含量有所不同，培养２４ｈ组明显高于１２ｈ组。缺氧过程中，１２ｈ组和２４ｈ组的内皮素含量均明显高于各自的对照组。与此同时，细胞内的Ｃａ２＋无论是缺氧１２ｈ组，还是２４ｈ组也都高于对照组。结论细胞内Ｃａ２＋含量的变化可能参与内皮素的释放机制。     

低氧时蛋白激酶C对内皮细胞表达血管内皮生长因子的调节作用

目的探讨低氧培养大鼠肺动脉血管内皮细胞生长因子 (VEGF)表达变化与蛋白激酶C(PKC)活性的关系。方法培养大鼠肺动脉血管内皮细胞 ,观察低氧 ( 1 %O2 )培养 0、1、3、6、1 2h大鼠肺动脉血管内皮细胞PKC活性和VEGFmRNA水平变化 ;同时对培养液中VEGF蛋白水平进行测定。培养基中加入PKC抑制剂 (staurosporine)后 ,立即进行低氧培养 ,测定低氧培养不同时间点上述指标的变化。 结果低氧培养 1hPKC活性首先明显升高 (P >0 .0 5 ) ,至 3hVEGFmRNA表达明显升高 (P <0 .0 1 ) ,6h培养液中VEGF蛋白水平显著升高 (P <0 .0 1 )。而加入PKC抑制剂后 ,低氧培养的内皮细胞PKC活性与 0h比较明显下降 (P <0 .0 1 ) ,相应各时间点的VEGFmRNA及蛋白水平与 0h比较无明显变化 (P >0 .0 5 )。结论低氧能够刺激大鼠肺动脉血管内皮细胞VEGF表达升高 ,低氧时PKC活性升高是调节VEGF表达升高的重要因素之一     

运动性疲劳大鼠脑组织中一氧化氮合酶和内皮素mRNA表达的变化规律及中药“体复康”的调节作用

作为一种应激 ,运动会引起机体血液供应的重新分配。内皮素 (ET)和一氧化氮 (NO)是一对调节局部组织血液供应的拮抗因素。本实验采用递增强度的跑台运动方式 ,经过 7周训练 ,塑造了运动性疲劳大鼠模型 ;并通过原位杂交的方法 ,结合图像分析 ,观察了运动训练中不同负荷和运动后不同恢复时相的大鼠脑组织一氧化氮合酶 (NOS)和ET - 1mRNA的表达 ,以研究运动时脑组织中NOS和ETmRNA表达的动态变化规律 ,并探讨脑组织的血液供应与运动性中枢疲劳之间的关系以及纯中药制剂“体复康”的调节作用。研究结果表明 ,NOSmRNA在安静对照组大鼠脑组织海马和丘脑等部位均有基础表达 ;进行适量运动的训练对照组与安静对照组无明显差异 ,说明适量运动对大鼠脑组织中NOS活性影响不大 ;强化训练组表达明显减弱 ,说明大负荷运动会使脑组织中NOS活性减弱 ;而同样负荷的强化训练中药组表达明显强于强化训练组 ,说明该中药制剂可提高NOS活性 ;另外 ,在一次大强度的运动后即刻 ,强化训练组NOSmRNA表达明显减弱 ,至运动后 30分钟时略有恢复 ,到运动后 3小时时恢复到接近安静对照组的水平 ;而强训中药组在运动后即刻表达明显高于同时相的强化训练组 ,至运动后 30分钟时与强化训练组相同 ,到运动后 3小时时恢复到接近安静对照组的水?     

烧伤患者血清内毒素对外周血单个核细胞中4种细胞因子的影响

目的探讨烧伤患者血清内毒素对正常机体外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中4种炎性细胞因子的影响。方法以正常人外周血单个核细胞为受试对象,以烧伤患者血清为刺激因素。根据18例烧伤患者与6名健康志愿者血清内毒素水平将其分为对照组(6名健康志愿者,血清内毒素为0 U/mL)、实验组A(6例烧伤患者,血清内毒素为0~0.2 U/mL)、实验组B(6例烧伤患者,血清内毒素为0.2~0.4 U/mL)、实验组C(6例烧伤患者,血清内毒素0.4 U/mL)。用4组血清分别刺激正常人PBMCs不同时间后,用放射免疫分析法测定每组细胞培养上清液中的肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6及IL-12的浓度,并进行数据分析。结果 TNF-α和IL-6在不同时间,被不同浓度血清内毒素刺激后均显著增加;随着刺激时间的延长,IL-1β和IL-12才显著增加。结论 TNF-α和IL-6为内毒素介导的烧伤炎症中重要的炎性介质,其浓度可随着时间的延长或内毒素浓度的升高而增加,但IL-1β和IL-12的浓度不随内毒素剂量的变化而变化,而是随着刺激时间的延长逐渐增加。     

咖啡酸阿魏酸对高血压大鼠的降压作用

目的：研究桂皮酸类化合物咖啡酸和阿魏酸对高血压大鼠的降压作用及作用机理。方法：口服咖啡酸与阿魏酸对DOCH高血压大鼠血压的影响,对DOCA高血压动物血浆ET-l浓度、血压、心血管组甥增生及ET-1、c—fos、HSP70 mRNA基因表达的影响;对ET-1引起的正常大鼠血压上升的对抗作用。结果：咖啡酸和阿魏酸静昧注射能降低ET-1引起的正常大鼠血压上升;咖啡酸和阿魏酸长期口服给药能降低DOCA高血压模型大鼠的血压．对心脏和血管组织增生有明显的抑铽作用,可降低血浆中ET-1的浓度．并可减少ET-1引起的c-fos、HSP70 mRNA基因表达的增加。结论：咖啡酸和阿魏酸可通过拮抗ET-1的作用降低血压。     

Gz对大鼠血浆和肾脏内皮素含量的影响

目的为了解＋Gz暴露对血浆及肾脏内皮素（ET－1）含量的影响。方法将48只雄性Wistar大鼠随机分成A、B、C、D4组（n＝12）。A：地面未受离心机＋Gi暴露；B：＋1Gz；C、D：＋10Gz。每次暴露3min，共3次，每次间隔40min。B、C组在＋Gz暴露后10min，D组在＋Gz暴露后24h，留取血液及肾组织标本。用放射免疫法测定血浆和肾脏匀浆中的ET－1含量。结果＋10Gz暴露组较＋1Gz暴露组血浆ET-1含量增加，但未获统计学支持。肾组织ET－1含量明显下降（p＜0．01）。＋10Gz暴露后24h肾脏ET-1含量恢复到＋1Gz水平。结论＋Gz暴露后，大鼠肾组织ET－1含量下降，血浆ET－1含量增加不明显。     

高气压暴露对大鼠血浆内皮素-1含量、血清一氧化氮含量、一氧化氮合酶活性的影响

目的 探讨高气压暴露对大鼠血浆内皮素-1(endothelin-1,ET-1)含量、血清一氧化氮(nitric oxide,NO)含量、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)活性的影响.方法 40只SD大鼠随机分为5组.A组为对照组,B组0.7 MPa空气暴露后缓慢减压,C组0.7 MPa空气暴露后快速减压,D组0.147 MPa纯氧暴露后减压,E组0.250 MPa纯氧暴露后减压.各组暴露时间均为60 min.采用放射免疫方法测定血浆ET-1含量,硝酸还原酶法测定血清NO含量,比色法测定血清NOS活性.结果 与对照组相比,安全减压组和高压氧组的血浆ET-1含量明显升高(P<0.05),原因可能与高分压氧有关(PO2=0.147 MPa/0.250 MPa);快速减压组血清NO含量、NOS活性明显升高(P<0.05),与血浆ET-1含量升高的3个组相比,血清NO、NOS升高得更为显著(P<0.01).结论 NO与ET-1在机体对高气压暴露的反应中呈拮抗关系.高气压与高压氧暴露导致血浆ET-1的释放增加,但快速减压刺激血管内皮细胞产生更多的NO,这种机制可能是通过提高血浆中的NOS活性实现的,这个现象可能是血管内皮系统对血管内气泡产生的应激性反应之一.     

高气压暴露对大鼠血浆内皮素-1含量、血清一氧化氮含量、一氧化氮合酶活性的影响

目的 探讨高气压暴露对大鼠血浆内皮素-1(endothelin-1,ET-1)含量、血清一氧化氮(nitric oxide,NO)含量、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)活性的影响.方法 40只SD大鼠随机分为5组.A组为对照组,B组0.7 MPa空气暴露后缓慢减压,C组0.7 MPa空气暴露后快速减压,D组0.147 MPa纯氧暴露后减压,E组0.250 MPa纯氧暴露后减压.各组暴露时间均为60 min.采用放射免疫方法测定血浆ET-1含量,硝酸还原酶法测定血清NO含量,比色法测定血清NOS活性.结果 与对照组相比,安全减压组和高压氧组的血浆ET-1含量明显升高(P<0.05),原因可能与高分压氧有关(PO2=0.147 MPa/0.250 MPa);快速减压组血清NO含量、NOS活性明显升高(P<0.05),与血浆ET-1含量升高的3个组相比,血清NO、NOS升高得更为显著(P<0.01).结论 NO与ET-1在机体对高气压暴露的反应中呈拮抗关系.高气压与高压氧暴露导致血浆ET-1的释放增加,但快速减压刺激血管内皮细胞产生更多的NO,这种机制可能是通过提高血浆中的NOS活性实现的,这个现象可能是血管内皮系统对血管内气泡产生的应激性反应之一.