普乐可复和环孢素A对肝细胞分泌白蛋白作用的影响

目的：研究细胞因子及普乐可复（FK506）和环孢素A（CSA）对肝细胞分泌白蛋白的影响。比较FK506和CSA对IL-6抑制肝细胞分泌白蛋白的作用。方法：分别用IL-6，IL-2和IL-10（0-10μg／L）以及FK506和CSA（1-100μg／L）体外刺激人肝癌细胞株（HepG2）48h；另外用IL-6（5μg／L）刺激HepG2细胞，同时分别加入FK506和CSA（0.1-10μg／L）刺激细胞48h，采用全自动生化仪检测FK506和CSA组细胞上清中乳酸脱氢酶（LDH）的量，采用放射免疫法检测各组细胞上清白蛋白的量。结果：IL-6能明显降低HepG2细胞上清中白蛋白的水平，且在一定范围内呈剂量依赖性，IL-6为5μg／L时白蛋白的分泌量达最低（P〈0.05）。IL-2，IL-10和FK506对HepG2细胞白蛋白的分泌无明显影响，CSA能轻度降低HepG2细胞白蛋白的分泌，且当CSA为10和100μg／L时差异有统计学意义（P〈0.05）。FK506明显减少HepG2细胞释放LDH（P〈0.05），CSA则轻度增加HepG2细胞分泌LDH（但P〉0.05）。另外，FK506能减轻IL-6抑制HepG2细胞分泌白蛋白的作用（P〈0.01），但CSA对此无作用。结论：IL-6而非IL-2和IL-10能明显抑制HepG2细胞分泌白蛋白，FK506而非CSA能减轻肝细胞的损伤，并能减轻IL-6抑制肝细胞分泌白蛋白的作用，这为FK506用于治疗免疫性肾脏病低白蛋白血症提供了的理论依据。     

他克莫斯对树突状细胞分化、成熟和功能的影响

目的:探讨他克莫斯(tacrolimus, FK506)对大鼠骨髓源性树突状细胞(DCs)分化、成熟和免疫学活性的影响.方法:收集大鼠骨髓源性DCs,加入不同浓度的FK506进行培养,采用流式细胞术行DCs表型分析,ELISA法检测培养上清中IL-12 的水平并行体外混合淋巴细胞反应(MLR),观察DCs对同种T细胞的刺激能力.构建大鼠肾移植模型,于移植前7 d输注FK506处理的DCs,观察移植肾存活时间.采用ELISA法检测MLR培养上清和移植大鼠血清中TH1/TH2细胞因子IFN-γ,IL-2,IL-4 和IL-10的表达水平.结果:FK506对DCs表面分子(Iad,CD80和CD86)的表达无明显影响(P＞0.05),而IL-12的分泌水平降低(P＜0.05),并显著抑制DCs对T细胞的激活能力(P＜0.05).大鼠移植肾存活时间分别为对照组(6.3±0.7) d,DCs组(7.2±1.4) d与FK506-DCs组(19.0±2.3) d,对照组与DCs组之间差异无统计学意义,而FK506-DCs组与DCs组之间差异有统计学意义(P＜0.05).在体外MLR和动物实验中,FK506-DCs组与DCs组比较,IL-2,IFN-γ表达水平均显著降低( P＜0.05),IL-4表达水平显著升高(P＜0.05),而IL-10的表达水平在体外显著升高(P＜0.05),但在动物实验中与DCs组差异无统计学意义(P＞0.05).结论:FK506不影响DCs的分化与成熟,对其免疫学功能起负性调节作用.可能机制为FK506通过抑制DCs IL-12的分泌,来促使Th1/Th2亚群分化倾向于Th2方向.     

自体外周造血干细胞移植治疗急性单核细胞白血病1例报告

目的 探讨经自体外周造血干细胞移植治疗急性单核细胞白血病的疗效.方法 1例14岁急性单核细胞白血病患者接受自体外周造血干细胞移植.采用粒细胞集落刺激因子(G-SCF)动员外周血干细胞,预处理选用环磷酰胺(CTX)和马利兰(Myleran).0天回输单个核细胞.观察症状体征变化及造血重建情况.结果 动员获得单核细胞数为4.98×108/kg,+12d粒系植入,+16d巨核系植入.结论 自体外周造血干细胞移植治疗急性单核细胞白血病有效.     

小鼠单倍体相合外周血移植模型的建立

目的 建立单倍体相合外周血移植小鼠模型,探讨移植后造血及免疫重建特性.方法 经大剂量全身照射预处理BDF1小鼠后,经尾静脉输注新生第一天DBA/2小鼠的外周全血,移植后动态观察受体鼠的造血重建及急性移植物抗宿主病(GVHD)发生情况,并用流式双染色法进一步检测粒系、淋巴系造血细胞的长期植入水平.结果 移植后小鼠的白细胞、血小板、血红蛋白分别在第18、21、18天明显回升,其中白细胞和血小板分别于第29天和36天恢复正常,而血红蛋白至第50天仍为部分恢复.受体鼠90%长期存活,且不发生明显的GVHD.移植后第50天流式细胞仪检测供鼠来源的造血细胞占总有核细胞的88.81%,其中含供者来源的粒细胞33.92%,T细胞16.83%.结论 单份新生小鼠外周血含有足够的造血干细胞,能重建单倍体相合小鼠的造血及免疫系统而不引起明显的GVHD,并可形成稳定的以供者细胞为主的嵌合体,其中粒细胞为完全嵌合.     

同种异基因小鼠骨髓腔内脐血移植模型的建立及其对造血干细胞植入的影响

[目的]建立同种异基因小鼠骨髓腔内脐血移植模型,研究该技术对造血干细胞(HSC)归巢、植入率、移植后免疫造血重建、移植物抗宿主病(GVHD)等方面的影响.[方法]用C57BL/6胎鼠及新生鼠外周血(FNPB)作供体,以单侧胫骨骨髓腔内注射(IBMI)和尾静脉注射(Ⅳ)两种途径移植经亚致死量60Coγ射线辐照预处理的BALB/c鼠.200只受鼠随机分为4组:骨髓腔内注射组(IBM组);尾静脉注射组(Ⅳ组);放疗对照组;正常对照组,每组50只.用组织冰冻切片和流式细胞术动态了解CFSE标记FNPB在受体内的分布变化,并观察移植后受鼠存活状况、植入水平、造血与免疫功能恢复及GVHD情况.[结果]①荧光标记FNPB体内动力学显示直至输注后72 h,供体FNPB经IBMI后主要积聚于注射侧骨髓腔内,肺部滞留很少.而Ⅳ组及IBM组非注射侧骨髓中的FNPB细胞数显著少于IBM组注射侧,Ⅳ组非造血组织器官如肺部有明显供体细胞滞留.②同种异基因小鼠CBT模型中IBM组造血、免疫功能的恢复明显快于Ⅳ组,无GVHD,移植后90 d存活率达到90%,注射侧胫骨植入水平(29.53±6.64)%,较Ⅳ组有显著改善.③IBM输注侧骨髓中供体HSCs植入水平及造血重建速度明显优于非注射侧骨髓.[结论]成功建立同种异基因小鼠骨髓腔内脐血移植模型,并证实IBMI途径对促进HSCs植入,造血免疫功能重建,提高UCBT效果方面优于Ⅳ途径,多部位IBMI可能更有利于HSC归巢骨髓.     

人脐血CD34~+细胞在NOD/SCID小鼠体内重建体液免疫的实验研究

目的探讨人脐血CD34+造血干细胞(HSC)在NOD/SCID小鼠模型体内体液免疫功能重建的作用。方法从新鲜脐血中分离出单个核细胞(MNC),利用免疫磁珠分选法筛选CD34+造血干细胞,经尾静脉输注入经亚致死剂量照射的NOD/SCID小鼠体内,移植后4、6、8、10周分批处死存活的小鼠,取其脾脏和外周血,分别进行细胞表型分析、体液免疫分析,监测小鼠体液免疫功能重建情况。结果照射2周后,阴性对照组小鼠全部死亡,6周后移植组小鼠存活率为37.5%,空白对照组小鼠存活率为100%。移植4、6、8、10周移植组外周血人CD45+细胞表达(%)分别为4.87±1.23、9.22±2.07、12.34±2.38、8.14±2.36,CD19+B淋巴细胞表达(%)分别为1.07±0.50、2.17±0.95、3.34±0.90、1.67±0.90。移植后10周,在移植组小鼠脾脏可见CD19+B淋巴细胞分布。结论经照射后的NOD/SCID小鼠通过人脐血CD34+细胞植入可建立起人鼠嵌合免疫模型。缺少相应细胞因子刺激,CD34+细胞分化能力随时间减弱。     

人脐血移植SCID小鼠的实验研究

目的　探讨人脐血造血细胞在严重联合免疫缺陷 (SCID)小鼠体内植入、分化及造血调控。方法　采用流式细胞技术及克隆形成细胞体外培养方法观察了移植后受鼠体内的造血细胞植入情况、造血生长因子对其的影响及移植物抗宿主反应。结果　 1静脉输注 1～ 5× 10 7个脐血单个核细胞 (MNC) /只鼠可使受鼠体内表达嵌合体 ,而经腹腔注射不能建立人 -鼠移植模型。 2人脐血细胞移植 SCID小鼠 :可以重建造血功能并在小鼠骨髓微环境中分化表达 ,其表达水平与外源细胞因子的使用无关 ;可引起受鼠移植物抗宿主反应 ,并与输入细胞剂量有关。结论　脐血造血干细胞不仅可以在受鼠骨髓微环境中存活 ,还可进一步分化为各系特异细胞 ,重建造血。     

IL-33转基因小鼠骨髓造血干/祖细胞向髓系细胞分化的能力增强

目的利用IL-33转基因小鼠研究IL-33对造血干/祖细胞的增殖和分化影响。方法利用流式细胞仪分析IL-33转基因小鼠及同窝野生对照小鼠的外周血、脾脏、骨髓细胞的免疫表型及造血干细胞分化不同阶段细胞的数量变化;利用体外成克隆实验和细胞周期分析研究IL-33对于造血干细胞增殖能力的影响。结果与野生型小鼠相比,IL-33转基因小鼠B细胞和T细胞在外周血中都明显降低,粒细胞在外周血和骨髓中都有明显增加;IL-33转基因小鼠的骨髓造血干细胞和多能祖细胞数量减少,共同淋系祖细胞数量减少,共同髓系祖细胞和粒单系祖细胞数量增加;IL-33转基因小鼠的造血干细胞处于S-G2-M的细胞增多;体外单克隆实验发现IL-33转基因小鼠造血干细胞形成的集落数增加。结论 IL-33转基因小鼠造血干细胞增殖能力增强,更易向髓系细胞分化。     

小鼠单倍体相合外周血移植模型的建立

目的建立单倍体相合外周血移植小鼠模型,探讨移植后造血及免疫重建特性。方法经大剂量全身照射预处理BDF1小鼠后,经尾静脉输注新生第一天DBA/2小鼠的外周全血,移植后动态观察受体鼠的造血重建及急性移植物抗宿主病(GVHD)发生情况,并用流式双染色法进一步检测粒系、淋巴系造血细胞的长期植入水平。结果移植后小鼠的白细胞、血小板、血红蛋白分别在第18、21、18天明显回升,其中白细胞和血小板分别于第29天和36天恢复正常,而血红蛋白至第50天仍为部分恢复。受体鼠90%长期存活,且不发生明显的GVHD。移植后第50天流式细胞仪检测供鼠来源的造血细胞占总有核细胞的88.81%,其中含供者来源的粒细胞33.92%,T细胞16.83%。结论单份新生小鼠外周血含有足够的造血干细胞,能重建单倍体相合小鼠的造血及免疫系统而不引起明显的GVHD,并可形成稳定的以供者细胞为主的嵌合体,其中粒细胞为完全嵌合。     

经门静脉途径输注骨髓细胞后大鼠小肠移植的排斥反应及细胞因子相关改变

目的 经受体大鼠门静脉途径输注供体大鼠的骨髓细胞,观察受体大鼠小肠移植排斥反应状况及生存时间,并分析其细胞因子的改变与病理学改变之间的关系.方法 取雄性BN大鼠30只为供体、雌性Lewis大鼠30只为受体建立异位节段小肠移植模型,随机分为3组:BN-Lewis组(对照组)、BN-Lewis+FK506组(FK506组)、BN-Lewis+BM(P.V.injection)+FK506组(PV组);对各组作生存时间分析,并于术后7、14、30、60和90 d制作移植小肠的病理切片评估排斥反应程度;分别于术后7、14、21、30 d留取受体血清,ELISA法测定血清中IL-2、IL-10水平.结果 与对照组、FK506组相比,PV组受体大鼠存活时间明显延长(P<0.01);对照组大鼠术后第14天即已出现严重的急性排斥反应,而FK506组急性排斥反应发生时间延迟至第30天;PV组在术后30 d之内均未见严重的急性排斥反应.各组移植后受体IL-2浓度均增加,但PV组的IL-2增高幅度明显低于对照组和FK506组(P<0.01);移植后受体大鼠血清IL-10浓度也均增加,但PV组IL-10升高幅度大于对照组和FK506组(P<0.01).结论 骨髓细胞经门静脉输注能明显延长小肠移植物的生存时间,外周血清IL-2、IL-10浓度变化与排斥反应相关.     

L1210细胞表面IL—2受体的表达和以IL—2为导向的免疫？…

目的 证明Ｌ１２１０细胞表面表达ＩＬ－２受体（ＩＬ－２Ｒ）,并以此为基础建立检测以ＩＬ－２为导向的免疫毒素的杀伤细胞活性的体内、体外实验模型。方法 采用免疫荧光染色及流式细胞测定技术,测定Ｌ１２１０细胞表面ＩＬ－２Ｒ。用ＭＴＴ法测定ＩＬ－２与两种由突变改型的绿脓杆菌毒素片段构建的两种融合蛋白（ＩＬ－２－ＰＥＺＮＭ和ＩＬ－２－Ｋ－ＰＥＺＮＭ）的体外杀伤细胞活性;以腹腔注射Ｌ１２１０细胞诱发小鼠腹水瘤     

他克莫司对全血细胞因子分泌的影响

目的研究免疫抑制剂他克莫司(Tacrolimus,FK506)在体外对全血细胞因子分泌的影响。方法健康志愿者全血加入不同浓度FK506,经佛波酯(PMA)和离子霉素(IONO)刺激后,用Bio-Plex悬浮蛋白芯片系统检测上清中细胞因子IL-2、IL-6、IL-12、IL-17、IFN-γ、TNF-α、GM-CSF以及G-CSF的水平。结果同对照组相比,高浓度组FK506(20ng/ml)能显著抑制IL-2、IL-6、IL-12、IL-17、IFN-γ、TNF-α、GM-CSF和G-SCF的分泌(P<0.05);中浓度组FK506(5ng/ml)能有效抑制GM-CSF的分泌,两组之间的差异有显著性(P<0.05)。结论FK506对全血细胞促炎症细胞因子IL-6,IFN-γ和TNF-α的分泌有较强的抑制作用,同时对IL-2,IL-12,IL-17以及集落刺激因子因子GM-CSF,G-CSF也有明显抑制作用。因此FK506发挥免疫抑制功能可能通过抑制免疫细胞分泌各类细胞因子来实现。同时,由于FK506与细胞因子的分泌有剂量依赖关系,有望可以通过FK506浓度水平与细胞因子的抑制水平的依赖关系来评估临床病人FK50...     

白介素—1受体拮抗剂对BXSB狼疮小鼠的治疗作用观察

利用基因工程技术获得高纯度人白介素-1受体拮抗剂（IL－1ra），连续性尾静脉注射4．5月龄雄性BXSB狼疮小鼠，发现其尿蛋白水平和ANA滴度的增加幅度减少，肾脏IgG、C3沉积减轻，血清白细胞介素-6（IL－6）活性和肾脏IL－6蛋白表达减弱。提示IL－1在BXSB狼疮小鼠发病中的病理性作用及IL－1ra对该鼠可能的治疗作用。     

他克莫司联合白藜芦醇对同种异体心脏移植术后T细胞亚群及免疫功能的影响

目的研究他克莫司（FK506）联合白藜芦醇（resveratrol，Res）对同种异体心脏移植术后急性排异反应的抑制作用。方法采用大鼠异体异位移植模型，将心脏移植于腹部。术后分别进行不同免疫治疗，于移植术后第7d检测外周血T细胞亚群分布和血清IL-2含量，同时观察心脏移植术后移植心脏的病理改变。实验分单纯应用FK506组、单纯应用Res组以及联合应用FK506和Res组，以异体异位移植术后不用药为对照组。结果单独用药组与不用药对照组比较，移植心脏病理改变明显减轻，联合用药组又明显轻于单独用药组。各用药组外周血CD4^＋T淋巴细胞明显低于未用药组。结论FK506和Res都可以通过抑制CD4^＋T淋巴细胞增殖而阻止或延缓同种异体心脏移植的急性排异反应。FK506与Res联用具有协同作用。可更有效地产生免疫抑制作用。     

哮喘小鼠模型中IL-25表达及其对肥大细胞IL-6分泌的影响

目的:探讨哮喘小鼠模型中白细胞介素(interleukin,IL)-25的表达,研究其对肥大细胞IL-6分泌的影响?方法:6~8周龄BALB/c小鼠随机分为对照组和哮喘组,分别用等量磷酸盐缓冲液(phosphate buffer solution,PBS)或卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏,检测肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中细胞总数及嗜酸性粒细胞(eosnophils,EOS)计数验证模型的成功建立?两组小鼠肺组织中IL-25 mRNA?BALF及血清中IL-25的表达分别应用逆转录-聚合酶链反应法?酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测?小鼠肥大细胞P815分为对照组和IL-25组,分别予等量培养基和IL-25干预,收集细胞培养上清,用ELISA检测IL-6的水平?结果:哮喘组BALF中细胞总数及EOS计数较对照组显著升高(P < 0.01),小鼠出现呼吸频率加快?烦躁不安等表现,模型建立成功?哮喘组肺组织中IL-25 mRNA?BALF及血清中IL-25表达较正常组显著升高(P < 0.01)?细胞水平的研究发现IL-25组P815上清中IL-6表达较对照组显著升高(P < 0.01)?结论:IL-25在OVA诱导哮喘小鼠模型中表达升高?IL-25刺激肥大细胞分泌IL-6,可能在哮喘的发病中起促进作用?     

IL-12和IL-12受体在刚地弓形虫感染致不良妊娠结局中的作用机制研究

目的探讨IL-12和IL-12受体（IL-12R）在弓形虫感染致不良妊娠结局中的作用机制。方法将24只C57BL/6孕鼠随机分为感染组（n=12）和对照组（n=12）,感染组小鼠于孕8d每只腹腔注射400个RH株刚地弓形虫速殖子,对照组注射等量无菌PBS,所有孕鼠均于孕14d时安乐死,观察胎盘及胎鼠的发育情况,采用流式细胞仪的方法检测小鼠子宫自然杀伤细胞（uNK）表面的IL^-12受体表达水平的高低,用ELISA的方法检测小鼠胎盘分泌的IL-12细胞因子水平的高低。结果在孕14d感染组小鼠的胎盘出血坏死较多,未感染的对照组小鼠胎盘血供丰富。感染组小鼠的死胎率比对照组小鼠显著增加（P〈0.01）。弓形虫感染组孕鼠子宫自然杀伤细胞表面的IL^-12受体表达水平明显高于正常对照组（P〈0.05）,感染组孕鼠胎盘中的IL-12水平明显高于正常对照组（P〈0.05）。结论 IL-12水平升高和IL-12受体的高表达在弓形虫感染致不良妊娠结局中发挥重要作用。     

腺病毒介导黑色素瘤分化相关基因对乳腺癌细胞生长和凋亡的研究

目的 观察腺病毒介导黑色素瘤分化相关基因(mda-7/IL-24)对乳腺癌细胞生长和凋亡的作用.方法 将腺病毒mda-7/IL-24进行病毒的扩增、纯化和滴度测定.将纯化好的腺病毒mda-7/IL-24感染乳腺癌细胞,用Western印迹方法 检测mda-7/IL-24在乳腺癌细胞中的表达.结晶紫和4甲基偶氮唑蓝染色法(MTT)观察腺病毒mda-7/IL-24对乳腺癌细胞生长的影响;Hoechst染色和膜联蛋白(Aanexin)V检测腺病毒mda-7/IL-24对乳腺癌细胞凋亡的影响;并在裸鼠上进行了动物实验研究.结果 腺病毒mda-7/IL-24感染的乳腺癌细胞上清液中可以检测到mda-7/IL-24蛋白的表达;腺病毒mda-7/IL-24能明显地抑制乳腺癌细胞的生长,Hochest染色和Annexin V提示腺病毒mda-7/IL-24促进乳腺癌细胞的凋亡.实验进一步证明了腺病毒mda-7/IL-24可以显著抑制裸鼠乳腺癌荷瘤的生长.结论 腺病毒mda-7/IL-24能显著抑制乳腺癌细胞的生长并诱导乳腺癌细胞的凋亡.     

IL-18对人舌癌移植瘤的抑制作用

目的：观察IL-18对人舌癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法：建立舌癌裸鼠移植瘤模型16只,随机分为IL-18治疗组、荷瘤模型组,每组8只,分别给予IL-18、生理盐水于接种第7日起腹腔注射。观察IL-18对移植瘤体积变化及瘤重的影响。结果：IL-18对小鼠健康状况无明显影响,但对小鼠移植瘤生长有明显抑制作用,肿瘤抑制率为74.7%。结论：IL-18可抑制人舌癌裸鼠移植瘤的生长,其机制值的深入研究。