青蒿琥酯对黑素瘤A875细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的观察青蒿琥酯对人皮肤恶性黑素瘤A875细胞增殖和凋亡的影响,并探讨相关机制。方法体外培养A875细胞,分别给予不同浓度的青蒿琥酯(10~80μg/ml)作用细胞48 h,MTT法检测抑制率,流式细胞术检测凋亡率,Western blot法检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的蛋白表达水平变化。结果青蒿琥酯对A875细胞有明显的生长抑制和诱导凋亡的作用(P<0.01),呈剂量依赖性;随药物浓度的增高,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的蛋白表达量逐渐升高(P<0.05)。结论青蒿琥酯可以通过死亡受体途径和线粒体途径诱导A875细胞的凋亡,从而抑制细胞增殖。     

青蒿琥酯对非小细胞肺癌A549放射增敏的初步研究

目的初筛青蒿素及其衍生物联合放射线对非小细胞肺癌A549细胞的放射增敏效应,并以青蒿琥酯为主要研究对象,研究其对A549细胞的体内、外放射增敏效应,初步探讨其对A549细胞的放射增敏作用机制。方法通过MTT法初筛低毒剂量的青蒿素及其衍生物对非小细胞肺癌细胞株A549的放射增敏作用,发现青蒿琥酯具有较强放射增敏效应;采用裸鼠移植瘤模型,观察青蒿琥酯联合β电子线对荷痛裸鼠移植瘤生长抑制作用。同时采用Giemsa染色、流式细胞术,观察青蒿琥酯联合电子线对A549细胞的形态学变化以及细胞周期、凋亡的影响,初步探讨青蒿琥酯联合电子线对肿瘤细胞A549的放射增敏作用机制。结果MTT法得到青蒿素及其衍生物对非小细胞肺癌A549细胞生长抑制的IC10,以IC10为剂量参考,发现青蒿琥酯、双氢青蒿素具有放射增敏效应：联合射线后20rtM和40州的青蒿琥酯对A549细胞有生长抑制作用（p〈0．05）并呈一定量效关系,10μM、20μM和40μM的双氧青蒿素也有一定放射增敏作用（p〈0．05）。体内移植瘤实验结果表明青蒿琥酯（30mg／kg）可显著增加荷瘤裸鼠肿瘤组织B放射线的敏感性,肿瘤生长抑制率达50．90％。体外Giemsa染色结果表明,80μM的青蒿琥酯可以引起A549细胞出现显著的凋亡形态学变化;流式细胞术结果提示,20μM青蒿琥酯可将A549细胞周期阻滞于G2仃订期;凋亡结果分析,20μM青蒿琥酯联合放射线不引起A549细胞凋亡。结论青蒿素衍生物中双氢青蒿素、青蒿琥酯对A549细胞有一定的放射增敏作用。青蒿琥酯联合放射线在体内、外实验中均表现出较强的放射增敏效应,其放射增敏作用机制可能与青蒿琥酯的过氧桥断裂,产生自由基导致细胞周期的延迟以及诱导细胞凋亡相关,其具体机制与青蒿琥酯剂量之间的联系有待进一步研究。     

青蒿琥酯

青蒿琥酯为一种对恶性疟有快速治疗效果的抗疟药，既能口服，又可经直肠和胃肠外给药，因此，成为治疗严重疟疾，包括脑型疟的理想药物。至今没有明显的计算所说明青蒿琥酯治疗的脑型疟病人的的死亡率比标准奎宁疗法要高。     

青蒿琥酯抑制人成纤维细胞增殖的实验研究

目的探讨青蒿琥酯(Art)抑制人成纤维细胞(Fb)增殖的作用及机制。方法取人瘢痕组织,经体外培养及鉴定Fb后,将不同浓度的青蒿琥酯溶液作用于体外培养的成纤维细胞。于倒置显微镜及电镜观察其形态学变化,采用四氮唑盐比色分析法(MTT法)及流式细胞仪观察细胞凋亡,计算增殖抑制率和凋亡指数。结果青蒿琥酯对人瘢痕成纤维有明显抑制作用,且呈浓度依赖性。浓度为240、120 mg/L的青蒿琥酯的凋亡率和坏死率较对照组高(P<0.01)。组织学观察试验组见成纤维细胞呈椭圆性,胞质颗粒增多,甚至可见细胞核浓缩、核碎裂等现象。结论青蒿琥酯可抑制人成纤维细胞的增殖,具体机制需进一步探讨。     

青蒿琥酯及其联合2-脱氧-D-葡萄糖对非小细胞肺癌A549细胞的抑制作用

目的 探讨青蒿琥酯(Art)及其联合2-脱氧-D-葡萄糖(2-DG)对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞的抑制作用及可能机制。方法 CCK-8法检测不同浓度Art (20、40、60和80μmol/L)对A549细胞活力的影响,线粒体荧光探针四甲基罗丹明甲酯(TMRM)染色、激光共聚焦显微镜及流式细胞术检测Art 20、40、60μmol/L作用A549细胞的线粒体功能,ATP测定试剂盒和细胞凋亡检测试剂盒分别检测空白对照组(无药物处理)、2-DG 10 mmol/L组、Art 40μmol/L组、Art 40μmol/L+2-DG 10 mmol/L组的相对ATP含量和细胞凋亡。结果 随着Art浓度的升高,其抑制A549细胞活力增强,TMRM染色荧光强度减弱,而细胞内MitoSOX染色荧光强度增强(P<0.05)。与空白对照组相比,2-DG 10 mmol/L组、Art 40μmol/L组和Art 40μmol/L+2-DG 10 mmol/L组相对ATP含量均降低,而凋亡细胞比例均升高(P<0.05),Art 40μmol/L+2-DG 10 mmol/L组相对AT...     

青蒿琥酯对大鼠的毒理病理

青蒿琥酯对大鼠的毒理病理徐在海王翠娥（军事医学科学院微生物学流行病学研究所，北京１０００７１）青蒿琥酯属青蒿素衍生物，具有显著抗疟效果和开发价值．本研究观察青蒿琥酯片剂对Ｗｉｓｔａｒ大鼠亚急性毒理病理，揭示中毒靶器官，病变性质和程度，病变与药物剂量的...     

青蒿琥酯对前列腺癌PC-3细胞的抑制作用

目的:观察青蒿琥酯对前列腺癌细胞株PC-3的体外作用,并探讨其可能作用机制。方法:应用光镜形态学、MTT法、流式细胞仪观察不同浓度青蒿琥酯在体外对前列腺癌细胞系PC-3的作用和对细胞DNA含量的影响。结果:青蒿琥酯对前列腺癌细胞系PC-3有明显的生长抑制作用,并能诱导细胞凋亡和抑制细胞增殖周期。结论:青蒿琥酯对前列腺癌PC-3细胞有明显生长抑制和凋亡诱导作用,提示青蒿琥酯有用于治疗激素非依赖性前列腺癌的可能性。     

青蒿琥酯对结肠癌细胞增殖、凋亡及β-catenin表达的影响

目的　探讨青蒿琥酯对结肠癌细胞增殖、凋亡及β-catenin 表达的影响。方法　取对数生长期的结肠癌HT-29 细胞,用12.5 μg/mL、25 μg/mL、50 μg/mL的青蒿琥酯分别培养24 h、48 h 和72 h。MTT 检测细胞增殖;AnnexinV/PI 双染检测细胞凋亡率;流式细胞术检测细胞周期分布;Western blot 检测β-catenin 蛋白表达。结果　MTT 结果显示,青蒿琥酯能明显抑制结肠癌HT-29 细胞增殖,与对照组（0 μg/mL）相比,差异具有统计学意义（P<0.01）;AnnexinV/PI 检测结果表明,细胞的凋亡率随着青蒿琥酯浓度的增高而逐渐增高,明显高于对照组（P<0.05）;流式细胞仪检测细胞周期变化的结果显示,HT-29 细胞G0/G1 期比例与青蒿琥酯浓度呈反比（P<0.05）,G2/M 及S 期比例逐渐增加（P<0.05）。Western blot 检测结果证实,青蒿琥酯处理细胞后β-catenin 表达随药物浓度升高而降低（P<0.05）。结论　青蒿琥酯可抑制结肠癌细胞增殖,促进细胞凋亡,下调β-catenin 的表达,有望成为临床治疗肿瘤的新型药物。     

青蒿琥酯增强吉西他滨的抗胰腺癌活性

目的 探讨青蒿琥酯对吉西他滨化疗胰腺癌的辅助治疗作用并研究其机制。方法 MTT法检测胰腺癌细胞系Capan-2在青蒿琥酯和不同浓度吉西他滨处理下的细胞活力。Western blot检测吉西他滨和青蒿琥酯对Capan-2细胞FOXO1、Noxa、Bim表达水平,细胞色素C、Smac/DIABLO从线粒体中的释放量及caspase-9、caspase-3活化水平的影响。流式细胞术检测Capan-2细胞的线粒体膜电位和凋亡率。结果 青蒿琥酯辅助治疗明显提高吉西他滨对Capan-2细胞的杀伤活性。青蒿琥酯处理能显著促进Capan-2细胞FOXO1的表达,转染FOXO1小干扰RNA （FOXO1 siRNA）后,青蒿琥酯对吉西他滨的辅助治疗效果受到明显抑制。青蒿琥酯联合吉西他滨能显著诱导Capan-2细胞中Noxa和Bim的过表达,线粒体膜电位的降低,细胞色素C、Smac/DIABLO的释放,caspase-9、caspase-3的活化及凋亡的发生。转染FOXO1siRNA后,青蒿琥酯联合吉西他滨对Capan-2细胞的凋亡诱导途径受到显著抑制。结论 青蒿琥酯可上调FOXO1的表达,增强吉西他滨对胰腺癌细胞的凋亡诱导活性。     

尖吻蝮蛇毒抑瘤组分I对人肺癌 A549细胞增殖抑制作用

目的：研究尖吻蝮蛇毒抑瘤组分I（ AAVC-I） 对人肺癌A549细胞增殖抑制及凋亡的作用。方法： 采用MTT法检测不同浓度的AAVC-I对A549细胞的24 h 与48 h 抑制率;应用HE染色、Hoechst33258荧光染色,从形态学观察细胞凋亡;采用免疫组化的方法,检测bax蛋白表达的变化。结果： MTT显示,AAVC-I能抑制A549细胞增殖,呈时间和剂量依赖性;AAVC-I处理24 h 后,镜下可见细胞核固缩,核深染及凋亡小体;免疫组化显示,随药物浓度增加,平均光密度值呈递增趋势,表明bax蛋白表达相应上调。结论：尖吻蝮蛇毒抑瘤组分I对人肺癌A549细胞具有抑制作用,并诱导其凋亡,可能与bax表达上调有关。     

茶黄素双没食子酸酯对肺癌A549细胞生长及VEGF基因表达的影响

目的观察茶黄素双没食子酸酯(TFDG)对肺癌A549细胞株生长的抑制、促凋亡效应及对血管内皮生长因子(VEGF)基因表达的影响。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测TFDG对肺癌A549细胞生长的抑制作用,通过流式细胞术检测TFDG对肺癌A549细胞凋亡的影响,RT-PCR法检测A549细胞VEGF mRNA的表达。实验数据用x±s表示,采用单样本方差分析进行统计分析。结果 TFDG显著抑制A549肺癌细胞生长,具有时间依赖性和浓度依赖性;同时TFDG使A549细胞出现凋亡,凋亡率17.8%(P<0.05);TFDG可降低A549细胞VEGF mRNA表达,且呈浓度依赖性(P<0.05)。结论 TFDG能抑制A549细胞生长,促进其凋亡,抑制VEGFmRNA的表达。     

柚皮素诱导肺腺癌A549细胞凋亡的研究

目的：研究柚皮素对肺腺癌A549细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用。方法应用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）观察柚皮素对A549细胞增殖的抑制作用;Hoechst 33342染色后于倒置荧光显微镜下观察柚皮素对A549细胞形态的影响;通过Annexin V-FITC/PI双染后流式细胞术检测柚皮素对A549细胞诱导凋亡的作用。结果柚皮素可抑制A549细胞的增殖,且呈现时效、量效依赖关系;Hoechst 33342染色倒置荧光显微镜下发现不同浓度柚皮素作用细胞48h后出现细胞核破裂、浓染,呈现明显的凋亡形态学特征;200μM、400μM 柚皮素作用细胞48h 后 A549细胞凋亡率分别为（12.15±2.14）%和（25.26±3.37）%。结论柚皮素可能通过诱导细胞凋亡从而发挥其抑制A549细胞增殖的作用。     

姜黄素对肺腺癌A549细胞凋亡的影响及其机制

目的观察姜黄素对肺腺癌细胞A549生长的抑制作用,并探索其机制。方法四氮唑蓝法测定姜黄素作用于肺腺癌细胞A549的吸光值,计算细胞抑制率;流式细胞仪测定40μmol.L-1姜黄素或空白对照培养液的肺腺癌细胞凋亡率与凋亡相关蛋白Caspase-9表达;比色法测定凋亡相关蛋白Caspase-3,Caspase-8表达;观察加用Caspase-9抑制剂后Caspase-3的表达。结果姜黄素对肺腺癌A549细胞有抑制作用,存在剂量依赖(r=0.619;P<0.01)与时间依赖(r=0.618;P<0.01);姜黄素对肺腺癌A549的凋亡率(30.25%)明显高于对照组(1.32%)(P<0.001);姜黄素组肺腺癌细胞A549的凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9表达明显高于对照组(P<0.001);姜黄素组加用Caspase-9抑制剂后Caspase-3表达明显下降,仍高于对照组(P<0.001)。结论姜黄素诱导肺腺癌A549细胞凋亡可能与激活Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3有关。     

Synergistic anticancer effects of andrographolide and paclitaxel against A549 NSCLC cells

Context: Paclitaxel (PTX) is widely used in chemotherapy for cancer treatment; however, it has some serious side effects. Andrographolide (Andro) is a potential cancer therapeutic agent isolated from Andrographis paniculata (Burm. f.) Nees (Acanthaceae).

Objective: The objective of this study is to evaluate the effects of PTX combined with Andro against A549 cells.

Materials and methods: The effects of 24–48?h treatment with 0.48–60.75?nM PTX and 5.10–328.0?μM Andro on cellular proliferation, apoptosis, cell cycle and intracellular reactive oxygen species (ROS) were determined by sulphorhodamine B assay, Annexin V-FITC/PI apoptosis detection, PI staining and ROS assay, respectively. Synergy was determined using combination index. The antitumour efficacy of 20?mg/kg PTX with 100?mg/kg Andro was studied in a xenograft murine model.

Results: IC₅₀ value of the PTX combined with Andro against A549 cells was 0.5–7.4?nM, which was significantly lower than that of PTX (15.9?nM). PTX with 10?μM Andro caused (1.22–1.27)-fold apoptosis and 1.7-fold ROS accumulation compared with PTX alone. N-Acetylcysteine, a ROS scavenger, blocked this synergy in vitro. In contrast, G2/M phase cell cycle arrest resulting from PTX was not potentiated by Andro. Moreover, PTX in combination with Andro inhibited the growth of A549 transplanted tumours by 98%.

Discussion and conclusion: The results indicate that the combination of PTX and Andro exert significant synergistic anticancer effect on A549 cells in vitro and in vivo. The synergy may be the result of the accumulation of ROS. The combination of Andro and PTX represents a potential strategy for the treatment of A549 cells.     

阻断Notch信号途径能有效抑制A549细胞增殖

目的 Delta-like 4(DLL4)是Notch信号通路的配体之一,是近年新发现的血管生长调控因子,研究表明DLL4的高表达与肺腺癌转移预后密切相关。该文旨在研究DLL4在A549细胞中的表达,以及DLL4基因表达对人A549细胞增殖与凋亡的影响。方法 (1)体外培养A549细胞,免疫细胞化学法检测DLL4在A549细胞中的表达及定位;(2)设计并化学合成靶向DLL4基因的siRNA序列,lipofectamineTM2000介导DLL4 siRNA转染A549细胞,RT-PCR进行DLL4-mRNA定量,Western blot分别检测A549细胞DLL4蛋白的改变;(3)四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞的存活和生长变化;(4)激光共聚焦显微镜检测Annexin V-FITC标记的A549细胞的细胞凋亡比率。结果 (1)A549细胞表达DLL4蛋白,且定位于胞浆中;(2)DLL4-mRNA和DLL4蛋白的表达在对照组与干扰组之间有显著差异(P0.05);(3)MTT检测显示抑制DLL4表达对A549细胞的增殖有抑制作用,DLL4干扰组细胞增殖抑制率为43.85%,未处理组细胞增殖抑制率为23.81%;(4)抑制DLL4基因表达,A549细胞的凋亡比率明显升高,DLL4干扰组细胞凋亡率为(25.01±4.32)%,未处理组细胞凋亡率为(14.24±0.98)%。结论 DLL4在A549细胞表达。特异性阻断DLL4/Notch信号途径能有效抑制A549细胞增殖,促进细胞凋亡。     

杨梅酮对人肺腺癌A549细胞凋亡和细胞周期的影响

目的检测杨梅酮对体外人肺腺癌细胞A549细胞凋亡和细胞周期的影响。方法采用流式细胞仪分别检测各组的细胞早期凋亡率和细胞周期百分率。结果杨梅酮能显著增加A549细胞早期凋亡率和G0/G1期的细胞比例,并且细胞凋亡率与杨梅酮浓度具有较好的量效关系。结论杨梅酮能显著增加体外人肺腺癌细胞A549细胞早期凋亡率,并可使A549细胞周期阻滞在G0/G1期。     

Inhibitory effects of anti-miRNA oligonucleotides (AMOs) on A549 cell growth

MicroRNAs (miRNAs) are a new class of non-protein-coding, endogenous small RNA molecules of 18–24 nt in size. miRNAs can specifically down-regulate gene expression involved in proliferation, apoptosis, and differentiation in cancer cells. Our purpose was to identify several functional miRNAs as potential drug targets by using specific antisense-microRNA oligonucleotides (AMOs), and to study the inhibitory effects of these AMOs on A549 cell growth. miR-16, miR-21, miR-214, and miR-181a were selected as target candidates, based on which specific AMOs were designed, synthesized, and transfected into A549 cells. The viable cells were counted by using trypan blue dye exclusion assay. Apoptosis of A549 cells were determined flowcytometrically, and miR-21 expression levels in A549 cells were determined by real-time PCR. The results showed that AMO-miR-21, AMO-miR-16, and AMO-miR-181a inhibited A549 cell growth by inducing apoptosis and S-phase arrest. These inhibitory effects increased with dose and time. It was found that AMO-miR-21 down-regulated miR-21 expression in A549 cells. We conclude that miR-21, miR-16, and miR-181a are potential targets for lung cancer therapy, and specific AMOs can be a powerful technique for miRNA inhibition.     

苦瓜蛋白对A549肺癌细胞的抑制作用及其对MAPK信号通路的影响

目的:观察苦瓜蛋白对非小细胞肺癌A549细胞的生长抑制及促凋亡作用;探讨苦瓜蛋白对A549细胞p42/44-MAPK及其磷酸化p42/44-MAPK蛋白表达水平的影响及其作用分子机制。方法:以不同浓度梯度的苦瓜蛋白处理A549细胞,分别作用不同时间,CCK-8检测其对细胞生长抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡。提取苦瓜蛋白不同作用时间点的全细胞蛋白,westernblot检测p42/44-MAPK及p-p42/44-MAPK信号分子的变化。结果:苦瓜蛋白对A549细胞生长具有明显抑制作用,可显著地诱导A549细胞凋亡。与阴性对照比较,苦瓜蛋白可以不同程度下调p42/44-MAPK及p-p42/44-MAPK信号分子的表达(P<0.05)。结论:苦瓜蛋白对非小细胞肺癌A549细胞具有明显地抑制作用及抗肿瘤作用,其作用可能通过诱导A549细胞凋亡来实现;苦瓜蛋白可以不同程度地下调p42/44-MAPK和磷酸化p42/44-MAPK的表达;MAPK信号通路可能部分参与了苦瓜蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制,驱使肿瘤细胞发生凋亡。     

青蒿琥酯诱导人早幼粒白血病细胞HL60凋亡的线粒体机制

目的 :探讨青蒿琥酯 (artesunate ,Art)诱导人急性早幼粒白血病细胞HL6 0凋亡的线粒体机制。方法 :用Art处理HL6 0细胞 ,通过MTT比色法检测细胞增殖抑制的效果 ;透射电镜、DNA凝胶电泳技术观察细胞的凋亡 ;流式细胞术 (flowcytometry ,FCM)进行细胞周期分析和线粒体膜电位 (mitochon drialmembranepotential ,MMP)水平的检测 ;比色法检测半胱 天冬氨酸蛋白酶 3(cysteinecontainingas partate,Caspase 3)活性。结果 :Art呈浓度和时间依赖性的抑制HL6 0细胞的增殖 (P <0 .0 5 )。Art诱导后HL6 0细胞出现典型的凋亡形态学变化和生化改变 ,G2 M期细胞比例增高 ,S期减少 ,凋亡率上升 (P <0 .0 5 ) ,线粒体膜电位降低 (P <0 .0 5 ) ,Caspase 3活性增强 (P <0 .0 5 )。结论 :Art可能通过线粒体 半胱 天冬氨酸蛋白酶 3特定途径诱导HL6 0细胞凋亡。