川楝素诱导K562细胞自噬性死亡的实验研究

目的研究川楝素诱导人慢性髓系白血病K562细胞自噬性死亡的作用及其机制。方法不同浓度川楝素处理K562细胞后,采用MTT法检测K562细胞的增殖情况,瑞氏染色观察细胞形态学,透射电镜观察K562细胞超微结构,免疫细胞化学法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ、Beclin1的表达。结果川楝素对K562细胞有明显增殖抑制作用,呈时间和浓度依赖性,P均<0.01。光镜下可见K562细胞数量减少,胞质出现大量空泡。30、50 nmol/L川楝素处理K562细胞后,透射电镜下可见典型的自噬体。免疫细胞化学法结果显示,K562细胞Beclin1、LC3-Ⅱ蛋白表达较阴性对照组增强,P均<0.01。结论川楝素对K562细胞有显著的增殖抑制作用,川楝素可以诱导K562细胞发生自噬性细胞死亡,其作用机制可能与上调Beclin1、LC3-Ⅱ蛋白有关。     

YB-1抑制三氧化二砷诱导的胃癌细胞自噬机制

目的研究YB-1抑制三氧化二砷(As2O3)诱导人胃癌BGC-823细胞自噬的机制。方法采用脂质体转染siRNA干扰YB-1和腺病毒转染pAd1Easy/YB-1过表达YB-1;实时荧光定量PCR检测Bcl-2和Beclin1基因转录;Western blot检测YB-1、Bcl-2、Beclin1、P62和LC3Ⅱ蛋白的表达;MDC染色、荧光显微镜观察自噬泡。结果与空病毒(AdGFP)组相比,pAd1Easy/YB-1(AdYB-1)组Bcl-2基因表达增高,而干扰质粒(siYB-1)组Bcl-2基因表达水平较空质粒(HK)组降低(P均<0.05),各组Beclin1基因表达比较无统计学差异。与AdGFP和HK组相比,AdYB-1组Beclin1和LC3Ⅱ蛋白减少,Bcl-2和P62蛋白增加(P均<0.01),siYB-1组Beclin1和LC3Ⅱ蛋白增加,Bcl-2和P62蛋白减少(P均<0.01)。与AdGFP组相比,AdYB-1组自噬泡聚集减少,加入Bcl-2抑制剂HA14-1后自噬泡重新聚集,Beclin1蛋白恢复表达,P62降解增加,LC3Ⅱ升高。结论 YB-1可能通过上调Bcl-2、抑制Bec-lin1,实现对As2O3诱导的BGC-823细胞自噬的抑制。     

细胞自噬及相关因子在老年肝外伤中的表达及意义

目的研究细胞自噬及相关因子在老年肝外伤中的表达,探讨在老年肝脏缺血再灌注损伤中诱导老年肝细胞自噬的分子机制。方法选取不同鼠龄的大鼠,建立老年大鼠肝外伤缺血再灌注损伤的模型,通过采用电子显微镜、免疫印迹和荧光显微镜等方法观察细胞自噬与细胞凋亡,研究因子Bcl-2及Beclin 1在细胞自噬/细胞凋亡之间的调控关系。结果 Beclin 1在老年大鼠肝外伤再灌注期表达明显增多,而Bcl-2的表达下调(P0.01),Bcl-2和Beclin 1平衡状态失调,免疫印迹表明Beclin 1阳性细胞百分率(40.8±10.6)%与Bcl-2(17.6±5.2)%比较差异有统计学意义(P0.01),而在中晚期阶段(外伤后3~6月),Bcl-2表达下调的作用减缓,同时也激活Beclin1激活自噬,此时年轻大鼠与老年大鼠的肝功能检测及病理切片检查差异不大(P0.01)。结论 Bcl-2与Beclin 1在老年肝脏缺血再灌注损伤的分子机制中可能发挥着重要作用。     

大鼠脊髓损伤后自噬相关蛋白Beclin1和LC3表达的变化

目的探讨大鼠脊髓损伤(SCI)后自噬相关蛋白Beclin1、LC3的表达变化对自噬发生的影响。方法构建大鼠脊髓横断损伤模型,分别于损伤后0、4、12 h及1、3、5、7 d通过BBB评分评定SCI大鼠的行为学变化,同时经Western印迹检测自噬相关蛋白Beclin1、LC3的表达;并通过腹腔注射自噬抑制剂3-MA和自噬促进剂Rapamycin于SCI小鼠模型,分别于上述时间点通过Western印迹进行Beclin1、LC3的检测,初步探讨自噬抑制剂和自噬促进剂在SCI后对自噬相关蛋白表达变化的作用。结果随着大鼠SCI时间的延长,运动逐渐消失,SCI后3 d大鼠出现无运动现象,之后随着大鼠SCI时间的延长行为逐渐恢复;自噬相关蛋白Beclin1和LC3的表达量随着SCI时间的延长逐渐升高,于3 d左右表达量显著升高(P<0.01)达到峰值;随后其表达量随SCI时间的延长呈现下降的趋势;Rapamycin作用大鼠后Beclin1和LC3的表达量与对照组相比显著增高,于3 d达到极显著水平(P<0.001);3-MA作用大鼠后Beclin1和LC3的表达量与对照组相比显著降低(P<0.001)。结论 Rapamycin能够促进SCI后自噬相关蛋白Beclin1和LC3的表达,最终引发自噬的发生,而3-MA能够抑制Beclin1和LC3的表达,阻止SCI后自噬现象的发生。     

外源性睾酮通过诱导自噬致大鼠肾脏损伤

目的 探索外源性睾酮(TP)致大鼠肾脏损伤的作用及可能机制.方法 SD雄性大鼠48只,随机分为6组(每组8只):control组、TP组、TP+氯喹(CQ)组、TP+甘草甜素(Gly)组、CQ(自噬抑制剂)组、Gly〔高迁移率族蛋白(HMG)B1抑制剂〕组.各组大鼠处理21 d后,测量其体重、肾脏湿重、计算肾脏指数;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肾脏组织病理形态学变化;免疫组化法和Western印迹印迹法分析大鼠肾脏组织自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ、Beclin1、P62、HMGB1的定位和表达情况.结果 与control组比较,TP组大鼠肾脏湿重、肾脏指数无明显变化(P>0.05);肾小球毛细血管襻多呈分叶状改变,肾小囊间隙变窄,肾小管上皮细胞水肿,管腔变窄;肾脏组织LC3B-Ⅱ、Beclin1和HMGB1蛋白表达水平上调(P<0.05),联合给予TP与CQ后,仅见少数肾小体血管球呈分叶状改变,肾小管水肿明显减轻;Beclin1、LC3B-Ⅱ和HMGB1蛋白表达水平均下调(P<0.05);TP+Gly组大鼠肾脏组织病理学改变及自噬相关蛋白表达水平结果 与TP+CQ组类似.结论 外源性TP可能通过上调细胞自噬致大鼠肾脏组织损伤的发生,HMGB1可能参与此过程自噬水平的调节.     

FOXO3a蛋白对脑缺血损伤大鼠细胞自噬的影响研究

目的研究FOXO3a蛋白对脑缺血损伤大鼠细胞自噬的影响。方法选取20只Wistar大鼠,经过1周饲养时间后,随机分为正常组和脑缺血组,其中正常组10只,脑缺血组10只,采用四动脉结扎法构建脑缺血模型。采用免疫组化法检测FOXO3a蛋白、Bax蛋白及B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达水平,采用双盲法测定神经功能评分,采用Western Blot检测细胞自噬相关蛋白Beclin-1、LC3细胞自噬功能的改变,用倒置荧光显微镜观察细胞自噬现象的产生。结果脑缺血组大鼠FOXO3a蛋白表达高于正常组(P0.05);脑缺血组大鼠Bax蛋白表达高于正常组,Bcl-2蛋白表达低于正常组(P0.05);脑缺血组大鼠神经功能评分高于正常组(P0.05);脑缺血组细胞自噬相关蛋白Beclin-1、LC3及细胞自噬率高于正常组,均具有统计学意义(P0.05)。结论 FOXO3a蛋白在大鼠脑缺血损伤中高表达,Bax蛋白在大鼠脑缺血损伤中高表达,Bcl-2蛋白在大鼠脑缺血损伤中低表达,对细胞自噬具有诱导作用。     

环磷腺苷葡胺诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化后对自噬的影响及机制

目的:探讨环磷腺苷葡胺(MCA)诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌细胞分化后对自噬的影响及作用机制。方法:通过全骨髓培养法建立体外培养体系,取P3代细胞通过流式细胞仪鉴定细胞表面抗原的表达。将细胞分为3组:正常组、MCA组、5氮胞苷(5-Aza)组,采用western blotting检测心肌特异蛋白表达情况。将诱导后的心肌细胞通过葡萄糖剥夺(GD)建立细胞损伤模型,收集3h、12h、24h细胞,Western blotting法检测自噬蛋白的表达情况。将细胞分为5组:正常组、GD组、MCA预处理组(M+G组)、LY294002+MCA预处理组(M+G+L组)、LY294002组(L组)。利用Western-blotting法检测各组自噬蛋白及相关信号通路蛋白的表达情况。结果:1P3代细胞表面抗原CD44、CD90、CD45的阳性率完全符合BMSCs的标准;2MCA组Ctnt、Cx43蛋白的相对表达量明显高于5-Aza组(P0.01);3GD处理3h后自噬蛋白Beclin 1、LC3Ⅱ/Ⅰ比值明显升高(P0.01);4经MCA预处理后自噬蛋白Beclin 1、LC3Ⅱ/Ⅰ比值下降(P0.01),提高了PI3K的活性,上调了AKT、mTOR磷酸化水平(P0.01),加入阻断剂后通路蛋白水平下降。结论:MCA可以诱导BMSCs向心肌细胞分化,并在一定程度上抑制了诱导后心肌细胞的自噬,其机制可能与PI3K/AKT/mTOR信号通路相关。     

糖尿病大鼠主动脉自噬水平的变化及雷帕霉素的干预作用

目的观察糖尿病大鼠主动脉自噬水平的变化及雷帕霉素的干预作用,探讨雷帕霉素是否通过调节自噬、内质网应激和细胞凋亡对糖尿病大鼠主动脉产生保护作用。方法雄性SD大鼠用随机数字表法分为正常对照组、糖尿病组和雷帕霉素干预组。采用链脲佐菌素制备1型糖尿病大鼠模型。雷帕霉素干预组给予雷帕霉素2mg/(kg·d)灌胃。于实验第8周留取血标本,用于血生物化学指标和脂联素水平检测,然后处死动物并迅速取出胸主动脉和腹主动脉,测定主动脉Beclin1、微管相关蛋白轻链3(LC3)、p62、C/EBP同源蛋白(CHOP)、Caspase-12、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、Bax和Bcl-2的mRNA和蛋白表达。结果与正常对照组比较,糖尿病组大鼠血清脂联素水平显著降低(P0.05),主动脉壁增厚,内皮严重受损,主动脉Beclin1、LC3的mRNA和蛋白表达水平及Bcl-2mRNA表达水平显著降低(P 0. 05),主动脉p62、CHOP、Caspase-12和GRP78的mRNA和蛋白表达水平及Bax mRNA表达水平显著升高(P0.05)。与糖尿病组比较,雷帕霉素干预组大鼠血清脂联素水平显著升高(P0.05),主动脉组织病理改变显著减轻,主动脉Beclin1、LC3的mRNA和蛋白表达水平及Bcl-2 mRNA表达水平显著升高(P0.05),主动脉p62、CHOP、Caspase-12和GRP78的mRNA和蛋白表达水平及Bax mRNA表达水平显著降低(P0.05)。结论糖尿病大鼠主动脉组织自噬水平降低,雷帕霉素可能通过激活自噬和减轻内质网应激和细胞凋亡水平对糖尿病大鼠主动脉产生保护作用。     

健脾消积方水提物对人肝癌SMMC7721细胞自噬的调控机制

目的探讨健脾消积方水提物抗肝癌机制以及对细胞自噬流和自噬相关蛋白的影响。方法提取健脾消积方水提物,作用于SMMC7721细胞,使用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞学检测细胞的凋亡率,使用Western Blot检测自噬相关蛋白Beclin1、LC3和P62的表达,并监测自噬体的形成及自噬体与溶酶体的融合过程。计量资料两组比较采用独立样本t检验,多组比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 CCK8检测显示,细胞加药后24 h、48 h、72 h、96 h,增殖均受到了明显抑制,与对照组相比差异均有统计学意义(t值分别为28. 458、81. 093、85. 328、100. 158,P值均0. 001)。流式细胞学凋亡检测结果显示,加药组肝癌SMMC7721细胞凋亡较对照组显著增加(t=-42. 629,P 0. 001)。Western Blot结果显示,与对照组相比,加药组Beclin1蛋白表达下调,自噬标志蛋白LC3Ⅱ表达上调,P62表达上调。加药组细胞的自噬体向自噬溶酶体的流动受到了阻滞,与对照组相比,差异有统计学意义(F=31. 155,P 0. 001)。结论健脾消积方水提物能够抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,促进细胞凋亡;同时能上调Beclin1的表达,下调LC3和P62的表达并阻滞自噬流的形成。     

维生素D通过哺乳动物STE20样激酶1-核因子E2相关因子2通路调控自噬抑制缺氧/复氧诱导的糖尿病心肌细胞损伤的研究

目的 探讨维生素D(VitD)通过哺乳动物STE20样激酶1(Mst1)-核因子E2相关因子2(Nrf2)通路调控自噬抑制缺氧/复氧（H/R）诱导的DM心肌细胞损伤。方法 大鼠H9C2细胞分为正常对照组（Con）、葡萄糖浓度25.5 mmol/L（高糖）组（HG）、H/R组、HG+H/R组、HG+H/R+VitD组、HG+H/R+3-MA组、HG+H/R+Mst1抑制剂组（HG+H/R+Mst1i组）。CCK8检测细胞活性，TUNEL检测细胞凋亡率，Western blot法检测选择性自噬接头蛋白（p62）、重组人自噬效应蛋白1(Beclin1)、Mst1、p-Mst1、Nrf2的蛋白表达。结果 与Con组比较，H/R、HG、HG+H/R组凋亡率、切割的半胱氨酸蛋白酶3(c-Caspase-3)蛋白表达升高（P<0.05），细胞活力降低（P<0.05）。与HG+H/R组比较，HG+H/R+VitD组细胞活力升高（P<0.05），凋亡率、c-Caspase-3蛋白表达降低（P<0.05）。与Con组比较，HG+H/R组Beclin1、Mst1、p-Mst1蛋白表达...     

加味丹参饮含药血清预处理对缺氧/复氧H9C2心肌细胞自噬相关基因Atg5和Beclin1 mRNA表达的影响

目的探讨加味丹参饮含药血清预处理对缺氧/复氧H9C2心肌细胞自噬及其相关基因Atg5、Beclin1 mRNA表达的影响。方法将体外培养的H9C2心肌细胞随机分为空白血清组(CG)、缺氧/复氧组(HRG)、加味丹参饮含药血清组(JDG)、JDG+自噬抑制剂(3-MA)组(JIG)、JDG+自噬激动剂(RAPA)组(JAG)。倒置显微镜观察各组心肌细胞生长及形态变化;MTT比色法测定心肌细胞存活率;透射电子显微镜观察心肌细胞自噬体形态及数量;实时荧光定量PCR检测自噬相关基因Atg5、Beclin1 mRNA表达。结果与CG比较,HRG镜下心肌细胞变性坏死程度增加,细胞存活率下降(P<0.01),电镜下自噬体增多,实时荧光定量PCR示Atg5、Beclin1 mRNA表达上调;与HRG相比,JDG及JAG镜下心肌细胞变性坏死程度减轻,细胞存活率显著升高(P<0.01),电镜下自噬体增加,Atg5、Beclin1 mRNA表达进一步上调(P<0.05)。结论加味丹参饮预处理通过上调自噬相关基因Atg5、Beclin1 mRNA表达,增强细胞自噬,保护缺氧/复氧损伤H9C2心肌细胞。     

蓝莓对肝纤维化大鼠肝组织自噬相关蛋白LC3和Beclin1表达的影响

目的:观察蓝莓对免疫性肝纤维化大鼠肝组织微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)及Beclin1表达的影响.方法:60只健康♂SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、蓝莓原浆高剂量组、蓝莓原浆中剂量组、蓝莓原浆低剂量组及复方鳖甲软肝片组.除正常对照组外,其余各组均采用腹腔注射无菌猪血清复制大鼠肝纤维化模型.造模同时各蓝莓组给予不同浓度蓝莓原浆(0.25 m L/100 g、0.5 m L/100 g、1.0 m L/100 g)灌胃,复方鳖甲软肝片组用复方鳖甲软肝片灌胃(0.054 g/100 g),1次/d.12wk处死大鼠,测定血清谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate transaminase,AST)含量,行肝组织病理学检查;Western blot检测LC3-Ⅱ、Beclin1、Ⅰ型胶原(ColⅠ)的蛋白水平;实时定量PCR(realtime quantitative PCR,q RT-PCR)检测LC3-Ⅱ、Beclin1的m RNA水平.结果:各组大鼠血清ALT、AST水平差异无统计学意义(均P0.05).与正常对照组比较,模型组肝纤维化程度明显(P0.05),LC3-Ⅱ、Beclin1的m RNA及蛋白表达、ColⅠ的蛋白表达明显增高(均P0.01).与模型组比较,蓝莓原浆高、中剂量组肝纤维化程度明显减轻(P0.05),胶原表达减少;LC3-Ⅱ、Beclin1的m RNA、蛋白表达及ColⅠ的蛋白表达明显降低(均P0.01).结论:猪血清所致的大鼠免疫性肝纤维化中自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1升高,蓝莓对大鼠免疫性肝纤维化的干预作用可能与下调LC3和Beclin1的基因及蛋白表达,进而抑制自噬有关.     

祛风生脉颗粒对大鼠缺血心肌微血管内皮细胞自噬及血管新生的影响

目的观察祛风生脉颗粒对大鼠缺血心肌微血管内皮细胞(CMECs)自噬及血管新生的影响。方法制备祛风生脉颗粒高剂量(Q-G组)、中剂量(Q-Z组)、低剂量(Q-D组)大鼠含药血清,分别与大鼠缺血CMECs共孵育,同时制备空白血清,分别与大鼠缺血CMECs(MX组)和正常大鼠CMECs(ZC组)共孵育。电镜观察各组细胞自噬小体及超微结构变化,Western-blot分析微管蛋白轻链3(LC3)–Ⅱ/Ⅰ比值及P62蛋白表达;划痕法观察细胞迁移能力,倒置相差显微镜下计数管腔形成数。结果与ZC组相比,MX组电镜下观察到自噬小体,但未见到自噬溶酶体,LC3–Ⅱ/Ⅰ比值及P62蛋白表达均升高(P 0.05),细胞迁移数和管腔形成数均较ZC组降低(P 0.05);与MX组相比,Q-D组和Q-Z组电镜下观察到自噬小体增多,同时观察到较多的自噬溶酶体,LC3–Ⅱ/Ⅰ比值升高,P62蛋白表达降低(P 0.05),细胞迁移数和管腔形成数均较MX组增多(P 0.05);与Q-D组和Q-Z组相比,Q-G组电镜下观察到自噬溶酶体数目进一步增多;与MX组相比,Q-G组LC3–Ⅱ/Ⅰ比值显著升高,P62蛋白表达明显降低(P 0.01),细胞迁移数和成管数较MX组均显著增多(P 0.01)。结论祛风生脉颗粒能改善缺血CMECs迁移和成管能力,从而促进缺血心肌血管新生,其作用与药物剂量呈正相关,机制可能与增强缺血CMECs自噬有关。     

高脂饮食联合维生素D3腹腔注射对大鼠动脉组织AUF1及IL-35表达的影响

目的探讨高脂饮食联合维生素D3腹腔注射对大鼠动脉组织AU碱基富集区结合因子1(AUF1)及白细胞介素35(IL-35)表达的影响。方法选择SD大鼠20只随机分为实验组和对照组各10只。给予实验组大鼠高脂饮食及维生素D3腹腔注射,对照组大鼠予以正常饲养。12周后检测比较两组大鼠的血脂水平、动脉组织病变情况;比较两组大鼠动脉组织AUF1 mRNA及IL-35 mRNA及其蛋白表达情况。结果实验组大鼠血清总胆固醇、三酰甘油均显著高于对照组,动脉组织AUF1 mRNA、IL-35 mRNA表达显著高于对照组(P 0. 05)。光镜下,对照组大鼠动脉内膜光滑,中膜平滑肌细胞排列整齐,纤维清晰,边界清楚,无炎症细胞浸润;实验组大鼠主动脉内皮细胞肿胀增厚,中膜平滑肌细胞排列紊乱,局部有轻微增殖等表现,但未见斑块组织。两组大鼠动脉组织AUF1及IL-35的蛋白印迹均未见明显条带。结论高脂饮食联合维生素D腹腔注射能诱发大鼠动脉发生一定程度的炎症反应,对动脉组织的AUF1 mRNA、IL-35 mRNA表达产生比较明显的影响,但对动脉组织IL-35及AUF1蛋白表达并未产生明显的影响,可能与本研究大鼠实验周期较短有关。AUF1、IL-35可作为抗炎症性反应干预的靶点。     

氯沙坦钾对棕榈酸所致骨骼肌细胞凋亡的干预作用

目的从细胞水平探索氯沙坦钾对骨骼肌损伤的保护作用及其机制。方法用2%马血清诱导分化L6成肌细胞; CCK-8试剂盒及Western Blot确定合适的氯沙坦细胞处理浓度。实验分为4组:对照组,二甲基亚砜组,棕榈酸(1 mmol/L)组以及棕榈酸(1 mmol/L)+氯沙坦钾(50μmol/L)组。Western Blot检测凋亡相关蛋白(cleaved caspase-3、cleaved PARP、Bcl-2、Bax)、自噬相关蛋白(LC3、Beclin 1),实时荧光定量PCR (quantitative real-time PCR,q PCR)检测P53和P21 m RNA表达水平。结果显微镜下观察及Western Blot检测myogenin蛋白表达增加,证明骨骼肌细胞诱导分化成功。CCK-8试剂盒检测示氯沙坦钾浓度为50、100、200、400μmol/L时L6成肌细胞活力分别为0.87±0.087、1.11±0.037、1.21±0.099、1.30±0.068,其中50μmol/L时细胞活力最大,且对cleaved caspase-3蛋白表达抑制最明显。与未作处理的对照组比较,qPCR显示棕榈酸处理组骨骼肌细胞P53、P21 m RNA表达量分别从0.36±0.03、0.50±0.05上调至0.68±0.08、1.07±0.02 (P0.05),cleaved caspase3、cleaved PARP蛋白表达均增加,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及Beclin 1蛋白表达减低;与棕榈酸单独处理组比较,氯沙坦钾与棕榈酸共处理组P53、P21 m RNA表达量分别从0.68±0.08、1.07±0.02下调至0.44±0.01、0.67±0.03 (P0.05),cleaved caspase-3、cleaved PARP蛋白表达减低,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及Beclin1蛋白无显著改变。结论氯沙坦钾通过抑制cleaved caspase3及其底物cleaved PARP表达抑制细胞凋亡,但这种保护效应并不是通过自噬途径实现的。     

顺铂对人舌鳞状细胞癌细胞Tca8113细胞凋亡与自噬的影响

目的 探讨顺铂对人舌鳞状细胞癌细胞Tca8113细胞凋亡与自噬的影响.方法 体外培养人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞,给予不同浓度的顺铂(CDDP),通过MTT检测细胞增殖率;Western印迹检测CDDP对Tca8113细胞凋亡以及自噬相关蛋白表达水平的影响.结果 与对照组相比,CDDP可以明显降低Tca8113细胞增殖率(P＜0.05);Western印迹结果显示,CDDP可以明显增加凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3,Cleaved PARP以及Cytochrome C的表达水平;同时,自噬相关蛋白LC3,Beclin 1和p62表达水平也发生明显的自噬性改变.结论 CDDP可以明显抑制Tca8113细胞增殖,其增殖抑制作用可能来源于凋亡,同时CDDP可以诱导Tca8113细胞发生自噬.     

丰宫并殖吸虫感染大鼠后诱导肺组织细胞自噬的初探

目的通过检测蛋白激酶B (Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)信号通路相关因子的表达,探讨丰宫并殖吸虫感染大鼠是否可导致肺组织细胞发生自噬。方法 40只SD大鼠随机分为健康对照组,感染后3、 7、 14 d组,每组10只,感染组每鼠腹壁皮下注射6条丰宫并殖吸虫后尾蚴,分别在感染后3、 7、14 d取各组大鼠血清和肺组织,ELISA检测血清中IL-1、 IL-6水平。取肺组织用于透射电镜观察自噬体,HE染色观察肺组织病理学改变,蛋白质免疫印迹(Western blotting)和免疫组化检测Akt、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、程序性死亡受体-1 (Beclin 1)及微管相关蛋白轻链3 (LC3Ⅱ)相关因子的蛋白表达。采用SPSS 19.0软件对数据进行统计学分析。结果ELISA检测结果显示,感染后3、 7、 14 d组血清中IL-1水平分别为(1 558.0±123.6)、(1 511.0±213.1)和(1 448.0±176.8) pg/ml,均高于对照组的(1 222.0±112.8) pg/ml (P <0.05);感染后3、 7 d组IL-6水平分别为(1 481.0±197.9)、(1 423.0±210.0) pg/ml,均高于对照组的(1 221.0±138.9) pg/ml (P <0.05)。透射电镜观察在不同的感染阶段,肺组织中线粒体均出现自噬现象。大鼠组织肺病理学检测结果显示,各感染组细胞排列紊乱,肺泡结构遭到不同程度的破坏。各感染组Akt蛋白表达水平与对照组比较,差异无统计学意义(P> 0.05);感染后3、 7 d组磷酸化蛋白激酶B (p-Aktser473)蛋白表达水平为(1.288±0.109)、(1.619±0.132),均高于对照组(0.733±0.135)(P <0.01);感染后3、 7、 14 d组磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-m TORser2448)蛋白表达水平分别为(1.574±0.278)、(2.384±0.125)和(1.808±0.121),均高于对照组(1.260±0.087)(P <0.05);感染后3 d组mTOR、 Beclin 1蛋白表达水平分别为(1.714±0.217)和(2.736±0.333),均高于对照组(1.345±0.067)和(1.974±0.225)(P <0.01);感染后14 d组LC3Ⅱ蛋白表达(1.938±0.191)高于对照组(1.401±0.200)(P <0.01)。免疫组化分析结果显示,对照组肺组织细胞呈蓝色,阳性呈棕黄色,各因子阳性定位于细胞膜和细胞浆。各感染组Akt、 mTOR与对照组相比,肺组织细胞中棕黄色显色不明显,A450值与对照组比较差异无统计学意义(P> 0.05);感染后3、 7、 14 d组p-Aktser473、 p-mTORser2448及Beclin 1与对照组相比,棕黄色显色加深明显,A450值分别为(0.104±0.010)、(0.143±0.022)、(0.088±0.013),(0.100±0.007)、(0.151±0.006)、(0.120±0.012)和(0.129±0.005)、(0.047±0.004)、(0.050±0.005),均高于相应对照组(0.032±0.001)、(0.065±0.002)和(0.031±0.001)(P <0.05);感染后3、 14 d组LC3Ⅱ与对照组比较棕黄色明显加深,A450值分别为(0.056±0.006)、(0.120±0.007),均高于对照组(0.042±0.004)(P <0.05)。结论丰宫并殖吸虫感染大鼠所致的肺损伤,炎症反应可诱导肺组织细胞发生自噬,该自噬作用可通过检测Akt/mTOR信号通路相关因子的表达来初步实现。     

天花粉蛋白抑制Hela细胞增殖的临床作用

目的 探讨天花粉蛋白对宫颈癌细胞株Hela细胞增殖抑制作用的机制.方法 用不同浓度的天花粉蛋白处理人宫颈癌细胞株Hela细胞,采用CCK-8法测定天花粉蛋白对Hela细胞增殖的抑制作用,使用MDC荧光染色观察细胞自噬水平的变化,Western印迹法检测细胞Beclin1和LC3蛋白的表达.结果 天花粉蛋白可显著抑制Hela细胞的增殖,且此作用呈现明显的时间和剂量依赖性;TCS给药后3 h可诱导Hela细胞发生自噬,且这一效果持续到24 h后.结论 天花粉蛋白能够诱导Hela细胞自噬水平的提高,且自噬活化与Beclin1和LC3蛋白的激活有关.     

活性维生素D3改善高糖环境下肾小管上皮细胞自噬溶酶体通路的研究

目的探讨活性维生素D3对高糖环境下肾小管上皮细胞自噬溶酶体通路的影响和机制。方法将人近端小管上皮细胞(HK-2)细胞分为正常对照(Con)组、甘露醇组(Man)、高糖组(HG)、高糖+活性维生素D3组(HG+VD)。Western blot法检测自噬小体(LC3II)、自噬底物(P62)、溶酶体相关膜蛋白1(LAMP1)和组织蛋白酶B(CTSB)、维生素D受体(VDR)及转录因子EB(TFEB)蛋白表达。结果与Con组比较,HG组LC3II、LAMP1、CTSB、VDR、TFEB蛋白表达降低,P62蛋白表达升高(P0.05)。与HG组比较,HG+VD组LC3II、LAMP1、CTSB、VDR、TFEB蛋白表达升高,P62表达降低(P0.05)。结论活性维生素D3可改善高糖环境下肾小管上皮细胞自噬溶酶体通路,其机制可能与调控TFEB相关。     

针刀微创联合鼠神经生长因子夹脊穴位注射治疗对带状疱疹后遗神经痛大鼠脊髓背角自噬水平的影响

目的 探究针刀微创联合鼠神经生长因子(mNGF)夹脊穴位注射治疗对带状疱疹后遗神经痛(PHN)大鼠脊髓背角自噬水平的影响。方法 将100只大鼠随机分为对照组、模型组、mNGF肌肉注射(肌肉注射)组、mNGF夹脊穴位注射(穴位注射)组、针刀微创联合mNGF夹脊穴位注射(针刀联合)组。采用水痘-带状疱疹病毒(VZV)慢性感染法构建模型组、肌肉注射组、穴位注射组、针刀联合组PHN模型，对照组注射等量生理盐水；肌肉注射组给予肌肉注射mNGF,穴位注射组给予夹脊穴位注射mNGF,针刀联合组在穴位注射组基础上进行针刀治疗，对照组、模型组不做处理。采用行为学实验测定大鼠机械缩足阈值(MWT);酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脊髓组织炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平；TUNEL染色检测脊髓神经细胞凋亡；免疫组化染色检测脊髓组织酵母自噬相关基因6的哺乳动物同源体(Beclin1)、微管相关蛋白轻链(LC3)-Ⅱ、自噬调控多功能蛋白(p62)表达水平；透射电镜观察脊髓组织自噬泡形成；Western印迹检测脊髓组织Beclin1、LC3-Ⅱ、p62、磷酸化哺乳动物...