混合DNA样品池应用的研究

将个体ＤＮＡ提取出来后，按一定方式进行混合，构成混合ＤＮＡ样品池，这种混合ＤＮＡ样品可用于病因未明的遗传性及遗传倾向十分明显疾病的研究。此方法比通常的连锁分析省时、省力。在肿瘤相关基因或遗任基因的研究中以混合ＤＮＡ样品用比较基因组杂交法对些结果也显示它的实用性。另外，混合ＤＮＡ样品也可用在医学的个体认定、基固定变的检测及短串联重复序列的鉴定，是一个值得研究和推广的方法。     

造血干细胞移植后嵌合状态的检测及定量研究进展

异基因造血干细胞移植后嵌合状态的形式有三种：完全供者嵌和状态、混合嵌和状态及完全受者型。微卫星DNA等分子学检测嵌和状态的方法都是利用人类基因组中具有高度多态性的DNA遗传标记来区分个体。定量检测嵌合状态的方法有：凝胶成像密度扫描、DNA测序仪和基因扫描软件程序、多重PCR扩增微卫星标志、高效液相色谱及实时定量PCR等。     

微卫星DNA在异基因干细胞移植植入监测中的应用

目的探讨微卫星DNA多态性分析技术在异基因干细胞移植植入监测中的应用。方法对68例异基因干细胞移植的受者进行移植监测。采用荧光标记引物复合扩增15个微卫星DNA多态性进行基因分型，比较受者移植前后的基因型变化。结果经移植后检测微卫星DNA多态性，9例移植后DNA多态性为受者型；55例表现出单一供者型；1例检测出2个供者的混合供者型；3例检测出受者和供者基因型的混合嵌合型。结论复合扩增微卫星DNA技术在异基因干细胞移植植入监测中十分有效，检测方法灵敏、可靠、快速、简便，具有重要的应用价值。     

Shirley Clift modified-TG 小鼠基因组DNA提取方法及其在Gene -Trap中的应用

目的介绍一种简单、快速、高效同时从数十、甚至上百个小鼠尾巴中提取基因组DNA的方法.方法 Shirley Clift modified-TG 小鼠Gene-Trap DNA提取法.结果 使用该法从小鼠尾巴中获取的基因组DNA的数量、纯度完全适用各种实验,如在C3H/HCJ-Mgrn1md转基因小鼠杂交C57BL/6小鼠Mahogunin基因变异传代培殖实验中,应用鼠尾抽提的DNA 进行Gene-trap.类推该法到小鼠其它组织如肝、肾、肌肉和心脏,也同样得到了高质量的基因组DNA.结论 该技术可以连续、高效、快速、批量从小鼠组织中提取基因组DNA,为国内利用小鼠进行基因遗传疾病的研究提供了基础方法.     

Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒探针的制备及其在检测乙型肝炎病毒DNA中的应用

目的制备Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(hepatitis B virus deoxynucleic acid,HBV DNA)基因探针,研究其在检测HBV DNA中的应用.方法分别用枸橼酸还原金氯酸法、化学共沉淀法制备Au、Fe3O4纳米颗粒,二法结合制备Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒.通过金-硫(Au-S)共价键,将烷氢硫醇修饰的寡核苷酸结合在Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒上,制备纳米颗粒HBV DNA基因探针.用荧光标记法检测纳米颗粒探针表面寡核苷酸的覆盖率和与其互补的寡核苷酸的杂交效率.在尼龙膜上,使用Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒基因探针通过斑点杂交法、Ag染色法检测HBV DNA.在纳米颗粒基因探针液相检测体系中加入HBV DNA,透射电镜下观察.结果制备的Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒粒径均匀,为(15±5)nm,水相分散良好,具有磁性.Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒基因探针表面寡核苷酸的最大覆盖率为(120±8)条,最大杂交效率为(14±2)%.斑点杂交法可检出低至1010copies/ml的合成靶DNA,可目视化检出乙肝患者血清中HBV DNA的PCR产物.在液相检测体系中加入HBV DNA,透射电镜观察到纳米颗粒组装成大的网状结构的聚集体.结论成功制备了Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒HBV DNA基因探针,它可直接用于HBV DNA的检测.     

外周血单个核细胞DNA提取方法的研究进展

DNA的提取是分子生物学研究的基础技术,提取的DNA的纯度及结构完整性是进行基因工程各项研究所必需的条件.外周血作为一种常用的临床检测材料,如何从外周血单个核细胞中快速、高效的分离提取基因组DNA,对于临床血液检验与分析非常重要.目前,DNA的抽提方法有很多,如酚-氯仿法、盐析法、离心吸附柱法等人工方法,以及磁珠法等半自动方法及试剂盒法.本文就从外周血血液中提取DNA方法的原理、具体操作步骤及方法评估等给予简要的综述.     

改良盐酸胍法提取脐血DNA 用于HLA基因分型

为了比较经典的盐酸胍(Gu·HCl)抽提DNA法和改良盐酸胍抽提DNA法在提取脐血DNA的效果,探讨这两种方法在脐血组织相溶性抗原(HLA)基因分型中的应用,使用盐酸胍抽提DNA法和改良盐酸胍抽提DNA法提取72例脐血标本的DNA,并分别测定其DNA的浓度和纯度,采用序列特异性引物聚合酶反应方法(PCRSSP)比较这两种方法所提取的DNA.结果表明两种方法提取脐血DNA均获成功;根据对DNA的质量监测发现,用改良盐酸胍抽提DNA在质量上较盐酸胍法好;用于HLA基因分型时,改良盐酸胍抽提DNA法可减少非特异性条带的出现.结论改良盐酸胍抽提DNA法不但操作简便,成本下降,而且在最少血量中能提取出高纯度的DNA,减少非特异性条带的出现.该法完全可以满足脐血库的日常脐血样品DNA的提取以及脐血HLA基因分型的要求.     

细胞裂解法提取全血基因组DNA及两种抗凝剂对其结果的影响

在以医学检验为目的PCR实验和分子生物学研究中,基因组DNA模板的提取是实验成功的关键因素之一.如果样品已高度降解,即使DNA量很大也不会产生任何信号[1].目前提取全血基因组DNA的方法较多,为研究采用较为经济简便的方法从样本中提取高纯度、高产量的DNA,作者在原有的盐析法[2]基础上建立了细胞裂解法提取抗凝全血DNA,同时与采用EDTA.K2和枸橼酸钠这2种抗凝剂处理的全血提取DNA的纯度、产量进行了比较.     

与人体肥胖相关的神经肽Y基因克隆及序列分析

目的 克隆与肥胖相关的人神经肽Y(NPY)基因,并鉴定该克隆基因序列的正确性.方法 根据GeneBank中收录的NPY基因序列,设计该基因上下游序列,经过PCR反应合成NPY的cDNA.然后与pET28a+载体重组,筛选阳性克隆和DNA序列分析鉴定,测序后与GeneBank中NPY基因进行同源性比较和序列分析.结果 PCR扩增出一个100 bp左右的DNA片段,与载体重组后和DNA序列分析鉴定,DNA序列分析显示克隆的DNA片段是人NPY基因.且所克隆的基因共编码36个氨基酸,分子量为4.2 kD,与GeneBank中NPY基因序列同源性达100%.结论 克隆的人NPY基因与Genebank中NPY序列完全一致,为进一步应用分子生物学技术深人研究NPY与人体肥胖发生、发展及转化等相关作用机制及应用该基因进行其基因蛋白表达奠定了基础.     

全自动提取大量全血样本基因组DNA方法的建立及其在HLA基因分型中的应用

目的 研究和建立从大量全血样本中提取基因组DNA的有效方法,以应用于Luminex HLA 流式磁珠基因分型.方法 使用自动工作站(瑞士TECAN公司)提取基因组DNA,提取的DNA样本用紫外分光光度仪测定其浓度和纯度,DNA的完整性用琼脂糖电泳检测,并统计分析每一DNA样本流式磁珠HLA-A、B和DRB1基因扩增产物经探针分子杂交后的荧光信号强度.结果 从60μl全血中提取基因组DNA,产量平均为(1.584±0.824)μg,样本的A260/A280值平均为1.741±0.229.琼脂糖电泳法测得DNA的分子量约为21kb.结论 本方法适用于从大量全血样本中快速提取基因组DNA,所得基因组DNA适用于高通量HLA流式磁珠基因分型等下游的分子生物学实验.     

一种改良的人DNA微量快速检验技术

目的 探索一种以口腔粘膜脱落细胞为材料的安全、高效、低成本、敏感性高的人DNA微量快速检测方法。方法 采用从漱口液或棉签擦拭口腔粘膜获取脱落细胞,应用混合树脂（Chelex100）煮沸沉淀法提取DNA;用PCR分别对线粒体特异性DNA片断和基因组中的特定基因进行扩增检测。结果 通过对线粒体DNA中440 bp的非编码片段和染色体基因组中220 bp的乙醛脱氢酶DNA片段进行扩增,结果显示,从漱口液脱落细胞提取的DNA中可以稳定地扩增出上述两种DNA片断。结论 建立了一种改良的人口腔粘膜脱落细胞DNA微量快速检验技术。该法取样方便,DNA样品获取量较大,一次取样可同时进行多项线粒体和基因组标志DNA片段的快速PCR检测。     

造血干细胞移植后嵌合状态的检测及定量研究进展

异基因造血干细胞移植后嵌合状态的形式有三种:完全供者嵌和状态、混合嵌和状态及完全受者型。微卫星DNA等分子学检测嵌和状态的方法都是利用人类基因组中具有高度多态性的DNA遗传标记来区分个体。定量检测嵌合状态的方法有:凝胶成像密度扫描、DNA测序仪和基因扫描软件程序、多重PCR扩增微卫星标志、高效液相色谱及实时定量PCR等。     

Rh盒子变异的遗传机制

背景RHD基因与2个高度同源、长度大约为9000bp的DNA片段侧接，其上游区及下游区乃Rh盒子。在RHD缺失的单倍型中，2个Rh盒子熔合形成单一杂合Rh盒子，对此进行的检测业已应用于RHD配合性检测。异常的Rh盒子可能会对此应用造成麻烦，这在非洲个体中常见。研究设计与方法对18份包含所有4种具有代表性的D基因簇样品的Rh盒子上游区及下游区总计5850bp的序列进行测序，并对4例在杂合Rh盒子分析中定型错误的样品进行了测序。     

自口腔粘膜上皮脱落细胞中快速提取人基因且DNA的方法比较

目的 建立简单、快速的人基因组DNA的提取方法。方法 用四种不同取材方法采集人口腔粘膜上皮脱落细胞，利用三种不同提取步骤提取人基因且DNA，并将各种方法所提的DNA进行比较。结果 通过对所提DNA进行OD值测定并计算DNA的质和量后发现，用牙签刮取人口腔粘膜上皮细胞、利用细胞裂解法提取的DNA其纯度和产量最高，以各种方法所提的DNA为模板作PCR后均出现了预定条带。结论 用本文建立的人基因且DNA样品的制备方法取材方便、提取简单、对身体无创伤且适合不同需要，值得推广应用。     

临床重要的p血型表型的分子基础

背景 这项研究的目的是通过分析最近克隆的合成Pk(Gb3)抗原的半乳糖转化酶基因和p表型的分子基础。研究设计和方法 采用血清学方法和Pk基因的DNA序列分析研究来自8个不同种族个体40例样品。结果 发现了10例Pk无效     

DNA微阵列对进行性肌营养不良基因缺失检测的分析

背景目前对Duchenne型肌营养不良(DMD)基因缺失的检测主要是Southern印迹或聚合酶链反应(PCR)的方法,在实际应用中有一定的局限性.DNA微阵列技术已广泛应用于基因突变的检测.目的制备简易DNA微阵列检测DMD基因常见外显子缺失,作为一项新技术的方法学摸索,为开发更完善的DMD基因诊断芯片做准备.设计非随机对照研究.地点和对象5例患者来自2000-01/2001-12解放军第四军医大学西京医院神经内科门诊,所有患者均为男性.健康者为患者的父亲.方法应用分子克隆的方法扩增DMD基因18个常见易缺失外显子片段,以此作为探针制备出简易DNA微阵列,对DMD患者和健康对照者的基因进行检测分析.主要观察指标微阵列杂交结果;PCR结果.结果应用简易DNA微阵列检测出4例DMD患者具有不同程度的外显子缺失,其结果与PCR验证相符,对照满意.结论DNA微阵列技术适用于DMD基因缺失检测,具有简便、高通量、灵敏等特点.     

DNA甲基化

DNA甲基化是指甲基基团与DNA的CpG二核苷酸的胞嘧啶核苷共价结合，它对哺乳动物基因及胚胎的正常发育具有重要意义，但也给基因带来额外负担。肿瘤细胞在整体低甲基化同时伴某些特殊部位的起甲基化使原来正常的甲基化成份频繁破坏，甲基化发生在肿瘤抑制基因的启动子区时将抑制剂基因从而使细胞正常生长失控或导致突变。DNA甲基化在DNA修复和基因稳定性方面都有作用，DNA甲基转移酶家族的发现在甲基化研究领域开辟了一个新时期。     

抑癌基因甲基化与胃癌的研究新进展

随着对肿瘤发病机制的研究深入到基因水平,除了遗传学（genetics）改变如基因突变、杂合丢失等,表观遗传学（Epigenetics）改变在肿瘤发生中的重要作用也逐渐成为研究热点。后不涉及DNA序列的改变,但能够影响相关基因的表达,如DNA甲基化和染色质构象变化等。其中DNA甲基化是研究最多也最深入的一种表观遗传学表达机制。     

电化学DNA生物传感器设计及在医学检验中的应用进展

电化学DNA生物传感器将电化学方法的高灵敏度和DNA生物传感器的高度序列特异性结合起来,是一种全新的基因检测手段.本文在介绍电化学DNA生物传感器原理的基础上,重点阐述其设计及在医学检验中的应用进展.     

DNA甲基化

DNA甲基化是指甲基基团与DNA的CpG二核苷酸的胞嘧啶核苷共价结合,它对哺乳动物基因及胚胎的正常发育具有重要意义,但也给基因带来额外负担。肿瘤细胞在整体低甲基化同时伴某些特殊部位的超甲基化使原来正常的甲基化成份频繁破坏,甲基化发生在肿瘤抑制基因的启动子区时将抑制该基因从而使细胞正常生长失控或导致突变。DNA甲基化在DNA修复和基因稳定性方面都有作用,DNA甲基转移酶家族的发现在甲基化研究领域开辟了一个新时期。