17β-雌二醇对骨髓基质细胞骨形态发生蛋白受体ⅠA、B mRNA表达的影响

目的:研究骨髓基质细胞在向成骨细胞分化的介质中,17β-雌二醇(E₂)对其骨形态发生蛋白受体(BMPR)ⅠA,ⅠBmRNA表达的影响,探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用。方法:用1,25(OH)₂D₃和地塞米松(DEX)诱导大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化,应用半定量RT-PCR技术,观察不同浓度E₂对骨髓基质细胞分化过程中BMPR-ⅠA,ⅠBmRNA表达的影响,以α-磷酸奈酚为底物测定细胞碱性磷酸酶的活性,VanGieson染色法显示Ⅰ型胶原的含量。结果:E₂能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中BMPR-ⅠAmRNA的表达,且呈剂量依赖性,随E₂浓度增加,BMPR-ⅠAmRNA从(23.7±1.7)%降至(16.3±1.5)%(P<0.05)和(8.3±1.2)%(P<0.01);BMPR-ⅠBmRNA随E₂浓度增加而增加,从(1.3±0.6)%增至(5.7±2.0)%(P<0.05)和(15.3±3.0)%(P<0.01)。ALP活性随E₂浓度增加而降低,从(42.6±2.5)U·L^-1·g^-1protein降至(10.8±1.5)U·L^-1·g^-1protein和(3.6±1.7)U·L^-1·g^-1protein(P<0.01);细胞Ⅰ型胶原的含量随E₂浓度增加而减少。结论:E₂能明显抑制体外培养的骨髓基质细胞分化过程中BMPR-ⅠAmRNA的表达,降低成骨细胞生成。     

重组人诱导型一氧化氮合酶在V79细胞中的表达及四氢叶酸对其活性的影响

目的:探讨重组人诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)基因在V₇₉成纤维细胞中转染的可行性及四氢叶酸(H₄B)对转染后产生NO的影响。方法:将人iNOS基因通过真核表达载体转入V₇₉细胞中,经G₄₁₈筛选,RT-PCR、免疫荧光法进行鉴定。采用Griess法测定加入H₄B前后NO^-₂ 的生成量。结果:iNOS基因转染组V₇₉细胞中有iNOSmR NA的表达,细胞胞质中可见分泌的iNOS蛋白。未加H₄B时,iNOS转染组NO^-₂ 含量明显高于正常细胞组和空质粒转染组 (P <0.01,n=6),正常细胞组和空质粒转染组之间NO^-₂ 含量无明显差异 (P >0.05,n=6);加入H₄B后,iNOS转染组中NO^-₂ 含量较未加组明显增加,两者相比具有显著差异 (P <0.01,n=6),而正常细胞组和空质粒转染组与未加H₄B组相比无明显变化 (P >0.05,n=6)。结论:通过外界加入H₄B能显著增加成纤维细胞转染产生的iNOS的活性,成纤维细胞可以作为iNOS基因转染的靶细胞.     

TFF1基因启动子双荧光素酶报告基因载体的构建及活性鉴定

目的:构建含有野生型或突变型人三叶因子1(Trefoil factor 1,TFF1)基因启动子双荧光素酶报告基因重组质粒,并研究雌激素对上述启动子转录活性的影响。方法:设计人野生型和突变型TFF1基因启动子的引物,扩增回收片段,将其克隆到含有荧光素酶报告基因的载体pGL3-Basic中构建重组质粒,经双酶切和测序鉴定后转染胆囊癌GBC-SD细胞,24h后采用双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶的表达活性。结果:成功构建了野生型pGL3-TFF1质粒和雌激素应答元件(Estrogen response elements,ERE)位点突变的pGL3-TFF1-△ERE突变质粒,激活蛋白1(Activating protein-1,AP-1)位点突变的pGL3-TFF1-△AP-1突变质粒以及pGL3-TFF1-△ERE+△AP-1双突变质粒。经双荧光素酶报告基因检测分析,pGL3-TFF1质粒和pGL3-TFF1-△ERE突变质粒均具有基础转录活性,与对照组比较(P0.001)。雌激素能进一步增强野生型TFF1启动子质粒和pGL3-TFF1-△ERE突变质粒的启动子转录活性(P0.01),而对pGL3-TFF1-△AP-1突变质粒以及pGL3-TFF1-△ERE+△AP-1双突变质粒的活性无影响(P0.05)。结论:本研究成功构建了野生型以及突变型TFF1启动子质粒,发现非经典雌激素受体结合部位——激活蛋白1(AP-1)位点对雌激素诱导的TFF1启动子转录活性增强发挥决定性作用。     

复合酶Ⅱ抗高脂血清致血管内皮细胞损伤的保护效应

目的和方法:以高脂血清作用于培养的血管内皮细胞,通过检测内皮细胞表面粘附分子ICAM-1的表达及培养液中NO₂^-的含量,研究复合酶Ⅱ抗高脂血清所致细胞损伤的保护效应。结果:高脂血清可使培养的血管内皮细胞表面粘附分子ICAM-1的表达显著增加(由0.228±0.025增加到0.328±0.030,P＜0.01),细胞合成和释放NO^- ₂ 的含量明显减少(由0.433±0.144减少到0.149±0.034,P＜0.01);而复合酶Ⅱ则能显著降低ICAM-1的表达(0.229±0.065),增加内皮细胞NO₂^-的合成与释放(0.386±0.036),与高脂血清损伤组相比,差异有高度显著性(P＜0.01)。结论:复合酶Ⅱ同时具有SOD和CAT活性结构和作用特性,能更有效地清除氧自由基,对高脂血清造成的血管内皮细胞损伤具有明显的抗损伤效应。     

人着色性干皮病D组基因对白细胞介素-6促进人血管平滑肌细胞增殖作用的影响

目的: 探讨人着色性干皮病D组基因(XPD)对白细胞介素-6(IL-6)促进人血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖作用的影响。方法: 用脂质体转染法将重组质粒pEGFP-N2/XPD和空质粒pEGFP-N2稳定转染VSMCs,然后给予1×10⁵ U/L IL-6孵育48 h。实验分为6组:(1)空白对照组;(2)pEGFP-N2组;(3)pEGFP-N2/XPD组;(4)IL-6组;(5)IL-6 + pEGFP-N2组;(6)IL-6 + pEGFP-N2/XPD组。用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白报告基因表达情况;用MTT法观察细胞增殖活力;用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率;用RT-PCR和Western blotting检测XPD、Bcl-2、Bax和野生型P53(wt-P53)表达量的变化。结果: 在荧光显微镜下,可在转染了重组质粒pEGFP-N2/XPD或空质粒pEGFP-N2的细胞中观察到绿色荧光,即转染成功;MTT结果显示,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染抑制了细胞增殖活力(P<0.05),并能抑制IL-6促进VSMCs增殖的作用(P<0.05);流式细胞仪结果显示,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染引起了细胞G₀/G₁期增加(P<0.05)、S期减少(P<0.05)、凋亡率增加(P<0.01),并能抑制IL-6促进VSMCs G₀/G₁期减少、S期增加、凋亡率降低的作用(P<0.01);RT-PCR和Western blotting检测发现,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染使得XPD表达增高(P<0.05或P<0.01),同时Bcl-2表达降低,Bax和wt-P53表达增高(P<0.05或P<0.01),并能抑制IL-6促进VSMCs的Bcl-2表达增高、Bax和wt-P53表达降低的作用(P<0.05或P<0.01)。结论: XPD能抑制VSMCs增殖并促进其凋亡,并能抑制IL-6促进VSMCs增殖和降低其凋亡的作用,有望成为治疗动脉粥样硬化的靶点。     

牛bFGF-pcDNA3在人脐静脉内皮细胞中的表达及鉴定

目的:研究牛bFGF-pcDNA₃在体外培养人脐静脉内皮细胞中的表达与活性,及对该细胞生物学特性的影响。方法:脂质体法将bFGF-pcDNA₃真核表达载体转染体外培养的人脐静脉内皮细胞,经G418筛选阳性克隆。通过免疫细胞化学法检测bFGF的表达部位及Ⅷ因子相关抗原的表达。应用化学发光Westernblotting法检测bFGF在转染细胞与未转染细胞中的表达。绘制细胞的生长曲线并计算倍增时间,采用MTT法对bFGF的生物活性进行估计。结果:bFGF-pcDNA₃转染人脐静脉内皮细胞后,细胞呈梭形者增多。免疫细胞化学证实转染前后细胞均为血管内皮来源细胞,转染与未转染细胞均在胞浆内表达bFGF。Westernblotting证实细胞转染前后均表达17kDbFGF,但转染后表达量增高,细胞生长曲线上移,倍增时间缩短。MTT法证实转染细胞产生的bFGF其生物学活性约相当于持续添加外源性bFGF5714ng/L。结论:转染bFGFcDNA的人脐静脉内皮细胞能在体外增殖,并具有表达与分泌活性bFGF的功能。bFGF-pcDNA₃可引起内源性bFGF表达增高,对血管内皮细胞产生相应的生物学活性。     

siRNA沉默转酮醇酶样蛋白1基因对人肝癌HepG2细胞生长微环境的影响

目的:通过siRNA技术沉默肝癌细胞系HepG2转酮醇酶样蛋白1(TKTL1)基因后观察其对生长微环境中乳酸生成水平、还原型谷胱甘肽(GSH)水平及NADPH/NADP⁺比值的影响,旨在探讨肿瘤细胞TKTL1表达与其转移特性的内在联系。方法:用构建的靶向TKTL1基因siRNA干扰质粒载体转染HepG2细胞株,RT-PCR检测TKTL1mRNA表达并结合转酮醇酶(TKT)活性测定判断其干扰效率;以未转染HepG2细胞为对照,进一步观察TKTL1沉默的癌细胞内乳酸生成水平、GSH含量、NADPH/NADP⁺比值及葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)活性的变化。结果:siRNA沉默HepG2细胞TKTL1基因后TKTL1mRNA表达下降、TKT活性显著降低(P<0.01),乳酸生成、GSH水平及NADPH/NADP⁺比值较对照组细胞均显著降低(P<0.01),但G-6-PD活性无明显变化(P＞0.05)。结论:肿瘤可能通过TKTL1高表达调整葡萄糖代谢从而改变乳酸及氧化自由基生成,使细胞生长微环境利于肿瘤转移。     

脂氧素A4对肝细胞生长因子诱导HepG2肝癌细胞血管生成相关细胞因子表达的影响

目的: 探讨脂氧素A₄(LXA₄)对肝细胞生长因子(HGF)诱导的HepG2肝癌细胞血管生成相关细胞因子表达的影响。方法: 体外培养HepG2肝癌细胞,实验分为空白组、HGF处理组、HGF+LXA₄处理组、HGF+脂氧素受体激动剂BML-111处理组。RT-PCR检测脂氧素受体(ALX)表达情况,Western blotting检测COX-2、MMP-2、MMP-9、IκBα和NF-κB p65的表达量,ELISA检测TNF-α、IL-1β、VEGF和TGF-β分泌水平, 荧光素酶报告质粒检测NF-κB转录活性。结果: HepG2肝癌细胞表达ALX,LXA₄和BML-111下调COX-2、 MMP-2和MMP-9,抑制TNF-α、IL-1β、VEGF和TGF-β分泌,并且干扰NF-κB转位及其转录活性。结论: 脂氧素抑制HGF诱导HepG2肝癌细胞表达血管生成相关细胞因子,包括VEGF、COX-2、TNF-α、IL-1β、TGF-β、MMP-2及MMP-9,此效应可能通过干扰NF-κB活化实现。     

IGFBP7对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及其机制

目的: 探究胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP7)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及其分子生物学机制。方法: 将质粒pCMV6-IGFBP7转染MCF-7细胞,构建稳定表达IGFBP7的MCF-7细胞系;采用Western blotting检测IGFBP7在MCF-7细胞稳定转染子的表达;采用软琼脂培养克隆形成实验检测IGFBP7对MCF-7细胞克隆形成能力的影响;采用流式细胞术检测IGFBP7对MCF-7细胞周期的影响;采用Western blotting检测IGFBP7对MCF-7细胞细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、p-ERK1/2、细胞周期素D1(cyclin D1)、细胞周期素依赖性激酶4(CDK4)、cyclin E、CDK2、p21^CIP1/WAF1、p27^KIP1、p53、视网膜母细胞瘤蛋白(Rb)和p-Rb蛋白含量的影响。结果: (1)只有稳定转染质粒pCMV6-IGFBP7的MCF-7细胞表达IGFBP7。(2)IGFBP7能够显著降低MCF-7细胞的克隆形成率(P<0.01),阻止细胞从G₁期进入S 期,使其停滞于G₁期(P<0.01)。(3)IGFBP7能够显著抑制ERK1/2的磷酸化(P<0.01)。(4)IGFBP7能够下调cyclin D1和cyclin E蛋白表达(P<0.01),上调p27^KIP1、p21^CIP1/WAF1和p53蛋白表达(P<0.01),抑制Rb的磷酸化(P<0.01)。(5)MEK1/2阻断剂PD98059可部分模拟IGFBP7的肿瘤抑制效应。结论: (1) IGFBP7可通过下调cyclin D1和cyclin E蛋白表达,上调p27^KIP1、p21^CIP1/WAF1和p53蛋白表达,以及抑制Rb磷酸化发挥抗肿瘤作用;(2) IGFBP7对cyclin D1和p27^KIP1的调节可能与其抑制ERK1/2信号通路有关。     

肺血管内皮细胞在大鼠急性肺损伤发生中的作用

目的:观察肺血管内皮细胞受损在大鼠急性肺损伤发病中的作用及地塞米松的影响。方法:给Wistar大鼠静脉注射脂多糖(LPS5mg/kgBW)复制急性肺损伤模型。采用ELISA、放射免疫、原位杂交等多种方法测定肺组织ICAM-1mRNA表达、iNOS活性、血中TNF-α、NO₂^-/NO₃^-、ACE含量及肺血管通透性、肺泡灌洗液中细胞数、蛋白含量等的变化。结果:注射LPS后,肺血管ICAM-1mRNA表达增加,从1h开始至24h达高峰。肺组织匀浆iNOS活性升高、肺血管通透性升高、肺泡灌洗液中中性粒细胞数量增加,巨噬细胞数量减少、蛋白含量增加,血中TNF-α、NO₂^-/NO₃^-含量升高而ACE含量下降等变化多在注LPS后2h明显。预先给予地塞米松对上述多种指标的变化有明显缓解作用。结论:提示LPS通过损伤肺血管内皮细胞导致急性肺损伤,地塞米松对其有一定保护作用。     

雌激素及类雌激素测评系统的建立

目的采用重组报道基因的方法开发一套可筛选环境雌激素和检测青春期前儿童体内雌激素水平的雌激素受体介导的转录激活测评系统。方法构建含有雌激素受体反应元件的报道载体pGL3-ERE—LUC和pGL3-overERE—LUC以及人类雌激素受体表达载体pSG5-ER。将两种报道载体分别转染入MCF-7细胞中，加入不同浓度雌激素受体配体，观察其对该系统的影响？将两种报道载体分别与雌激素受体表达载体共转染，加入不同浓度雌激素受体配体，观察其对该系统的影响。结果酶切结果证实pSG5-ER表达载体及报告载体构建成功。转染rpGL3-ERE—LUC或pGL3-overERE—LUC的MCF-7细胞，当加入一定浓度雌二醇（E2）及异黄酮（isoflavone）时，荧光素酶活性均增加；加雌激素受体拮抗剂他莫惜芬（TAM）后，荧光素酶活性下降结论将pGl3-ERE—LUC或pGl3-overERE—LUC分别与pSG5-ER共转染入MCF-7细胞，可建立较敏感的环境雌激素测评系统.     

肿瘤坏死因子α和血管紧张素Ⅱ诱导血管内皮细胞组织因子基因表达及其机制的研究

目的:研究肿瘤坏死因子α(TNFα)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对内皮细胞组织因子(TF)表达的影响,并探讨TF基因5’上游序列在TNFα、AngⅡ诱导内皮细胞该基因转录中的调控作用。方法:应用细胞原位杂交技术检测TFmRNA水平。采用基因重组技术构建含有人TF基因不同上游序列荧光素酶报告基因质粒,经脂质体法转染内皮细胞,检测及分析报告基因活性。结果:TNFα和AngⅡ均可以诱导内皮细胞TFmRNA表达增强。在TF基因上游序列-244/+121bp存在时,TNFα、AngⅡ均可使转染内皮细胞荧光素酶表达量明显增加,而在-111/+121bp存在时TNFα、AngⅡ组与对照组荧光素酶表达量均无明显差异,而且较-244/+121bp存在时荧光素酶表达量明显降低。结论:TF基因上游-244/-112bp序列的存在对TNFα、AngⅡ诱导内皮细胞TF基因表达起重要的调节作用。     

雌激素和高胰岛素调节胰岛素受体底物-1，2表达机制研究

目的：研究雌激素和高浓度胰岛素对胰岛素受体底物(IRS)-1和-2表达的分子机理。方法： 将IRS-1，2基因5′调控区克隆至含荧光素酶表达载体pGL3质粒，转染HeLa细胞，加雌激素（1 nmol/L）或高浓度胰岛素(100 nmol/L)培养，检测IRS-1，2基因5′调控区相对转录活性。结果： 高浓度胰岛素刺激细胞48 h，IRS-2基因5′调控区相对转录活性减低，IRS-1无明显差异；雌激素处理显著增加IRS-1，2基因5′调控区的相对转录活性。结论： 高胰岛素可能通过作用于IRS-2基因5′调控区中胰岛素作用元件，使其转录活性降低。而雌激素则通过作用于IRS-1，2基因5′调控序列，使其转录活性提高，增强其表达。     

顺式调控元件NF-κB在尼古丁诱导ICAM-1表达中的作用

目的: 研究5' 上游序列在尼古丁诱导细胞间粘附分子-1(ICAM-1)基因转录调控中的作用。 方法: 首先采用分子克隆技术构建实验所需的DNA片段,然后采用真核细胞转染技术将重组DNA片段与内参照质粒一起转染体外培养的内皮细胞并检测尼古丁刺激的转染细胞荧光素酶的相对活性。 结果: 成功构建了6种含有不同长度ICAM-1基因启动子序列以及启动子中NF-κB 和 Sp-1 位点突变序列的荧光素酶报告基因质粒。与对照组相比尼古丁可促进含有启动子序列-579 bp(pGL3E-579/+36)(P＜0.05), -230 bp (pGL3E-230/+36) (P＜0.05) 以及启动子 Sp-1 位点突变体(pGL3E-Sp-1-MU) (P＜0.05)的荧光素酶基因表达,而下游NF-κB位点的删切重组体(pGL3E-134/+36)和含有NF-κB位点突变体(pGL3E- NF-κB -MU)的重组荧光素酶报告基因质粒在尼古丁诱导下与对照组相比荧光素酶表达量无明显差异。结论: ICAM-1基因启动子顺式作用元件下游NF-κB位点在尼古丁诱导ICAM-1基因表达机制中可能起重要作用。     

缺氧反应元件启动子表达反义血管内皮生长因子(VEGF)165 cDNA靶向性抑制骨肉瘤细胞VEGF表达

目的以缺氧诱导因子-1/缺氧反应元件(HIF-1/HRE)基因调节系统为载体,构建含HRE启动子的人反义血管内皮生长因子(VEGF)165 cDNA真核表达载体,探讨其对缺氧条件下骨肉瘤细胞VEGF表达的靶向性抑制作用.方法采用聚合酶链反应(PCR)和DNA重组技术构建由HRE启动子驱动的含荧光素酶(Luc)报告基因和人反义VEGF165 cDNA全长的真核表达质粒,将其转染骨肉瘤细胞系MG63,用液闪计数仪测定缺氧对报告基因表达的调节,酶链免疫吸附试验(ELISA)法检测缺氧条件下细胞VEGF表达的变化.结果成功构建了由HRE启动子驱动的含Luc和反义VEGF165 cDNA全长的真核表达质粒pBI-HRE-Luc-AsVEGF165,该质粒转染骨肉瘤细胞系,缺氧条件下可使报告基因在肿瘤细胞中的表达提高3.5×102倍,使肿瘤细胞VEGF分泌下降45%.结论利用肿瘤缺氧,HRE启动子能够实现反义VEGF165的高效表达,为开展靶向性抗肿瘤血管生成治疗提供了实验依据.     

β-肾上腺素受体介导成纤维细胞旁分泌IL-6促进心脏miR-21表达

目的:探讨β-肾上腺素受体(β-adrenergic receptor,β-AR)激动剂异丙基肾上腺素(isoproterenol,ISO)促进心脏微小RNA-21(miR-21)表达的调控机制。方法:采用酶消化法分离原代乳小鼠心肌细胞和心脏成纤维细胞,分别给予ISO(10μmol/L)处理1、6、12、24和48 h,采用real-time PCR法检测细胞miR-21表达水平,采用Western blot法检测细胞p-STAT3和STAT3的蛋白水平,采用ELISA法检测细胞上清中白细胞介素6 (IL-6)的浓度。给予细胞转染含miR-21启动子区萤光素酶报告基因质粒p GL3-21PPR,采用萤光素酶报告基因实验检测条件培养液对miR-21的转录活性的影响。结果:以ISO作用于心脏成纤维细胞产生的培养液上清作为条件培养液,其可使心肌细胞miR-21的表达量随ISO作用于成纤维细胞时间的延长而逐渐增高(P 0.05);该条件培养液可引起心肌细胞miR-21的转录活性显著增加,其中ISO作用24 h和48 h的培养液分别使其转录活性增加94.9%和77.1%(P 0.01);ISO作用成纤维细胞形成的条件培养液中IL-6浓度显著增加,通过旁分泌作用于心肌细胞,引起转录因子STAT3活性增强,促进了miR-21的转录和表达。结论:激动β-AR可介导成纤维细胞合成和表达IL-6,旁分泌作用于心肌细胞,通过IL-6/STAT3途径,上调心脏miR-21表达水平,参与心脏重构。     

pGL3-Claudin-1 promoter荧光素酶报告基因质粒的构建及其功能鉴定

背景：Claudin-1是一种多功能蛋白,除了组成紧密连接封闭细胞间隙,它在转录水平的表达失调可能作为一种分子标志反映到恶性肿瘤的侵袭转移和预后中。 目的：构建重组大鼠重组Claudin-1萤光素酶报告基因质粒。 方法：设计和合成包含5’非转录区的约2 000 bp的脱氧核糖核酸链,经过限制性内切酶KpnⅠ和MluⅠ酶切后插入到pGL3-Basic载体中,并用感受态E.coli DH5α和Pmd18-T-simple载体筛选阳性样品。阳性克隆通过测序和PCR证实。实验分为4组：对照组,阳性对照组(pGL3-promoter质粒转染),阴性对照组(转染pGL3-Basic质粒),实验组(转染pGL3-Claudin-1 promoter质粒)。将质粒转染293T细胞检测Claudin-1启动子活性。 结果与结论：重组质粒DNA测序结果采用NCBI blast比对与GenBank(gi|62750811)中大鼠Claudin-1基因启动子序列完全匹配。重组萤光素酶报告基因转录活性检测与pGL3-Basic质粒相比,重组pGL3质粒转录活性明显增强 (P < 0.001)。经过测序和转染结果证实有效的pGL3-Claudin-1启动子质粒构建成功。     

AngⅡ通过AP一1调控内皮细胞中巨噬细胞移动抑制因子（MIF）的表达

目的明确介导AngⅡ调控人内皮细胞中巨噬细胞移动抑制因子（migrationinhibitoryfactor,MIF）表达的转录因子。方法构建长度依次递减的MIF基因5’调控区的荧光报告基因表达载体,并将其转化人人脐静脉内皮细胞EAhy926。利用双荧光基因报告系统检测AngII诱导后MIF基因5’调控区不同区段的转录活性。通过突变转录活性高的MIF5’调控区序列,初步确定可能的转录因子结合序列。设计针对可能的转录因子的小干扰RNA（siRNA）序列,并构建其表达载体,分别检测候选转录因子沉默的HEAY926中MIF的转录活性和表达水平。结果双荧光基因报告检测显示,Ang11调控MIF表达的高转录活性区段位于-507至-188之间。序列突变和荧光素酶活性分析显示,MIF基因5’调控区-350至～339间的AP一1结合序列决定了MIF基因的转录活性。AP-1沉默后的HEAY926中AngⅡ调控的MIF转录活性显著降低（P〈0．05）,MIFmRNA和蛋白的表达水平也显著降低（P〈0．05）。结论AngII通过转录因子AP一1调控内皮细胞中MIF的表达。     

Prohibitin启动子中胆固醇活性作用位点研究

 目的：验证抑制素（prohibitin,PHB）基因启动子胆固醇敏感活性作用位点,为PHB在前列腺癌靶向基因治疗中的应用提供实验依据。方法：采用PCR分段扩增PHB启动子,克隆入pGL3-Basic萤光素酶报告基因载体。将构建的重组质粒用脂质体转染至人前列腺癌PC-3细胞,再分别培养于低胆固醇培养基和普通胆固醇培养基中,检测PHB启动子各分段重组质粒萤光素酶活性的变化。限定PHB启动子约200 bp的胆固醇敏感启动区域,找出其中的固醇调节元件（sterol regulatory element,SRE）同源位点并进行点突变,证实PHB基因的胆固醇敏感调控位点。结果：PHB启动子和各分段产物构建质粒完整。与转染完整PHB启动子（pPHB-1192）的PC-3细胞比较,转染pPHB-179 (-35/+138)的PC-3细胞萤光素酶活性显著降低（P<0.05）。点突变位于PHB启动子上的-117到-108 bp的SRE可能位点后,与转染pPHB-1192的PC-3细胞比较,转染SRE点突变的PC-3细胞萤光素酶活性显著降低（P<0.05）。结论：PHB启动子在人前列腺癌PC-3细胞中的活性受胆固醇调节。PHB启动子中对胆固醇敏感的作用位点位于-117到-108 bp的SRE同源位点。PHB可能成为前列腺癌靶向基因治疗的有效工具。