低剂量环磷酰胺抑制结肠癌肝转移的免疫调节机制研究

目的探讨低剂量环磷酰胺抑制结肠癌肝转移的免疫调节机制。方法将30只小鼠随机分为5组,采用脾脏注射小鼠结肠癌CT26细胞方法建立小鼠结肠癌肝转移模型,在不同时点将低剂量的CTX(20 mg/kg)注入治疗组小鼠体内。采用流式细胞仪来检测肝和脾脏组织中的T细胞标记物(CD8+、CD4+T细胞)数量,免疫组织化学方法对肝组织的白细胞介素10(IL-10)和转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达情况进行分析,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中的干扰素γ(IFN-γ)和IL-10的蛋白质量浓度。结果小鼠结肠癌肝转移模型中CD4+T细胞、CD8+T细胞数量和百分比和IFN-γ都出现了下调,而IL-10和TGF-β1的蛋白表达量则明显升高。同时,肝脏的系统及局部免疫微环境发生了变化,导致抗肿瘤免疫反应的细胞数量减少,促进了结肠癌肝转移的发生。而使用低剂量的CTX治疗后增强了细胞抗肿瘤免疫反应,抑制IL-10和TGF-β1的蛋白表达,诱导IFN-γ蛋白分泌。结论低剂量的CTX通过改变小鼠肝脏局部和系统免疫微环境来增强小鼠的免疫调节能力,从而增强小鼠肝脏的抗肿瘤免疫作用。因此CTX可以被用来预防/治疗结肠癌肝转移。     

结直肠癌肝转移动物模型的建立

目的比较几种结直肠癌肝转移动物模型的建立方法,确定一种比较适合的结直肠癌肝转移动物模型。方法以BALB／c鼠为研究对象,随机分组,分别经脾脏、直肠、腹腔按不同剂量（0．1mL、0．2mL、03mL、1．0mL）（浓度为1×10^6个／mL）注入小鼠结肠腺癌细胞（CT26）悬液,其中腹腔组无1．0mL剂量,卡方检验比较三组动物模型组内及组间肝转移率。结果三种方法均能复制出结直肠癌肝转移动物模型,脾脏组0．1mL、0．2mL、03mL、1．0mL肝转移率分别为50．0％、77．2％、50．0％、27．0％;直肠注射组0．1mL、02mL、03mL、1．0mL肝转移率为50．0％、53．1％、16．7％、6．7％;腹腔注射组0．1mL、02mL、03mL、肝转移率为10．0％、22．2％、10．0％。结论经脾脏注射0．2mL（1×10^6个／mL）BALB／c鼠结肠腺癌细胞株（CT26）是一种建立结直肠癌肝转移动物模型成功率较高的方法。而经肛门直肠注射0．1mL或0．2mL（1×10^6个／mL）BALB／c鼠结肠腺癌细胞株（CT26）是一种建立结直肠癌肝转移动物模型简便及符合结直肠癌肝转移规律的方法。     

1,25-二羟基维生素D3对致死剂量脂多糖攻击的大鼠CD_4~＋CD_（25）~＋Treg细胞的调节作用

目的：观察不同剂量1,25-二羟基维生素D3（1,25-（OH）2D3）短期应用对大鼠受致死剂量脂多糖（LPS）攻击后的保护作用,并探讨此保护作用是否与1,25-（OH）2D3对CD4＋CD25＋Treg细胞的调节作用有关。方法：将大鼠分成3个剂量组,每组20只。分别给予1,25-（OH）2D3 0.125μg/只、0.25μg/只、1μg/只灌胃,3次/周,共2周。另设对照组给予赋形剂。给药后第15天腹腔注射致死剂量LPS（10mg/kg）,每组10只用于观察96 h内的死亡率;其余10只大鼠注射LPS 6 h后抽取外周血并留取脾脏标本。流式细胞仪检测大鼠外周血及脾脏CD4＋CD25＋Treg细胞数量,实时定量PCR检测脾脏Foxp3mRNA水平,ELISA检测外周血IL-10和TGF-β水平。结果：用1,25-（OH）2D3预处理的各组大鼠死亡率均显著低于对照组,用药各组外周血及脾脏CD4＋CD25＋Treg细胞数量、脾脏Foxp3mRNA表达水平、外周血IL-10及TGF-β水平也显著高于对照组。结论：1,25-（OH）2D3能够有效保护大鼠抵抗致死剂量LPS的攻击,这种保护作用可能与1,25-（OH）2D3上调CD4＋CD25＋Treg细胞的数量和功能有关。     

两种异位种植结肠癌肝转移动物模型的比较

目的建立并对比两种异位种植结肠癌肝转移小鼠模型。方法以1×106个/mL小鼠结肠癌细胞株(CT26)0.2mL对BALB/c小鼠分别行肝门静脉注射法,脾脏种植切除脾脏法构建结肠癌异位种植肝转移动物模型。术后待小鼠自然死亡,比较两种动物模型的肝转移率和成瘤效果、肺转移率以及小鼠生存期的差异。结果肝门静脉注射法与脾脏种植切除脾脏法相比,前者在肝转移率、肝脏成瘤效果和肺转移率方面高于后者,后者在小鼠生存时间和操作难易程度方面优于前者。结论本研究建立并对比了两种具有高转移率的结肠癌肝转移小鼠模型,肝门静脉法在肝转移率和肝脏成瘤效果方面更具优势,适合对肝转移率和取材要求较高的实验研究;而脾脏种植切除脾脏法则更适合验证周期较长的药物实验。     

沉默STC2对裸鼠结肠癌模型中肝转移瘤形成情况及IL-10和VEGF表达水平的影响

目的建立结肠癌肝转移裸鼠模型,探讨斯钙素2(Stanniocalcin 2,STC2)在结肠癌肝转移中的作用。方法利用慢病毒载体将shRNA转染入HCT116细胞以沉默STC2,构建沉默STC2的HCT116细胞系,并用Western Blot验证沉默STC2效果,建立结肠癌肝转移动物模型,分析STC2在结肠癌肝转移中的作用。将24只雄性Balb/c裸鼠随机分为实验组及对照组,每组12只。实验组将沉默STC2的HCT116细胞系—HCT116p LL3.7-STC2注射入Balb/c裸鼠脾脏并保留脾脏建模;对照组将未沉默STC2的HCT116细胞系—HCT116p LL3.7-Con注射入Balb/c裸鼠脾脏并保留脾脏建模。观察两组Balb/c裸鼠肝转移瘤形成情况,采用免疫组织化学方法检测Balb/c裸鼠肝脏内转移瘤中IL-10和VEGF的表达。结果 Western Blot实验提示造模成功,沉默STC2的实验组细胞HCT116p LL3.7-STC2中STC2蛋白量的表达少于对照组细胞HCT116p LL3.7-Con。实验组肝转移瘤发生率为41.67%(5/12),对照组为91.67%(11/12),组间差异有统计学意义(P0.05)。实验组肝转移瘤数量少于对照组(P0.05),两组肝转移瘤大小和肝脏重量的差异均无统计学意义(均P0.05)。实验组肝转移瘤中IL-10及VEGF表达水平均低于对照组(均P0.05)。结论在裸鼠模型中,将STC2沉默后的结肠癌细胞肝转移潜能下降,且其肝转移瘤中IL-10及VEGF的表达水平低于未沉默者。     

CD4+CD25+调节性T细胞在肝移植术后腹腔感染中的表达及其作用

目的研究移植后细菌感染CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞（Treg）表达的变化。方法以DA大鼠为供体,LEW大鼠为受体,采用改良的Kamada二袖套法建立肝移植模型。术后随机分为3组,G1组术后3d腹腔生理盐水注射;G2组术后3d给予腹腔大肠杆菌注射;G3组术后常规给予免疫抑制药物CsA,3mg/（kg·d）。感染后7d处死动物,每组6个样本,检测血清ALT、TB,并采用流式细胞术检测脾脏Treg的水平,RT-PCR方法检测脾脏Foxp3和肝脏IL-10、TGF-β mRNA的表达。结果G3、G2组Treg表达水平显著升高,分别为：（16.72±0.95）%,（27.4±1.09）%,与G1（9.88±0.98）%比较差异均有统计学意义（P〈0.01）;脾脏Foxp3和肝脏IL-10、TGF-β mRNA表达水平均增加;感染组的肝功虽然较差,与排斥组相比无统计学意义,但从病理切片观察该组肝脏的急性免疫排斥反应减轻,Banff评分有统计学意义。结论大鼠肝移植术后腹腔细菌感染增加了脾脏Treg的表达,促进了免疫抑制作用的发挥,部分减轻了急性排斥反应。     

阿司匹林预防小鼠结肠癌肝转移的作用及其机制

目的 探讨阿司匹林对结肠癌肝转移模型小鼠结肠癌肝转移的预防作用及其可能作用机制.方法 将20只BALB/c小鼠采用随机数字表法分成对照组和实验组,每组10只.对照组给予生理盐水灌胃0.2 mL/d,实验组给予阿司匹林灌胃30 μg/(g·d).两组小鼠灌胃60 d后使用结肠癌C26细胞采用脾脏种植且切除脾脏的方法建立小鼠结肠癌肝转移模型.模型建立成功后,实验组和对照组小鼠分别予以阿司匹林和生理盐水灌胃直到处死小鼠.建模后观察小鼠肝转移及生存情况.将结肠癌细胞系C26分为两组,对照组不作处理,实验组用10 mmoL/L阿司匹林处理24 h,分别对两组细胞进行划痕实验和Transwell实验,观察阿司匹林对C26细胞侵袭转移的影响;另外通过RT-PCR和Western blot检测两组细胞上皮间质转化(EMT)相关基因的表达.组间比较采用Student-t检验方法.Kaplan-Meier法绘制生存曲线,生存分析采用Log-rank检验.结果 对照组和实验组小鼠肝内转移瘤数目分别为(4.8±1.9)个和(2.6±1.6)个,肝脏荷瘤质量分别为(504±107) mg和(362±67) mg,两组比较,差异均有统计学意义(t=2.840,3.584,P＜0.05).实验组小鼠的1个月生存率为80％,与对照组的40％比较明显提高,差异有统计学意义(x2=4.418,P＜0.05).病理检查结果显示:实验组小鼠肝脏肿瘤细胞的数量和残存肿瘤细胞的异型性与对照组比较均减少.划痕实验结果显示:划痕24 h后,对照组C26细胞发生了明显的迁移,而与对照组比较,实验组未见细胞发生移动.Transwell法检测结果显示:对照组和实验组C26细胞穿膜细胞数分别为(253 ±21)个和(148±13)个,两组比较,差异有统计学意义(t=5.101,P＜0.05).RT-PCR法检测结果显示:对照组和实验组C26细胞中EMT相关基因E-cadherin mRNA相对表达量分别为0.002±0.001和0.005±0.001;波形蛋白分别为1.005±0.286和0.270±0.168,两组比较,差异均有统计学意义(t=-4.606,4.942,P＜0.05).Western blot法检测结果显示:对照组和实验组小鼠肝脏组织C26细胞中EMT相关基因E-cadherin蛋白相对表达量分别为0.473±0.179和1.585 ±0.410;波形蛋白分别为0.787±0.118和0.280 ±0.133,两组比较,差异均有统计学意义(t=-5.542,6.355,P＜0.05).结论 阿司匹林干预结肠癌肝转移模型小鼠,可抑制结肠癌细胞在肝内的种植转移,提高小鼠生存率.其可能作用机制是阿司匹林上调E-cadherin的表达水平,下调波形蛋白的表达水平,抑制了结肠癌细胞EMT的发生,从而减弱了肿瘤细胞的侵袭和转移.     

MCP对结肠癌肝转移的galectin-3表达的影响

目的:探讨galectin-3在小鼠结肠癌肝转移中的表达及MCP对其抑制的作用。方法:75只Balb/c小鼠随机分为阴性对照组,阳性对照组,低浓度MCP组,中浓度MCP组,高浓度MCP组。阳性对照组和各MCP治疗组小鼠经脾脏下极包膜注入CT-26结肠癌细胞建立结肠癌肝转移模型。MCP加入饮用水中，各处理组的浓度分别为0 mg/mL， 0.01 mg/mL，0.025 mg/mL和0.05 mg/mL。3周后观察各组小鼠肝转移情况。采用酶联免疫吸附实验（ELISA）方法检测小鼠血清galectin-3浓度; 制作肝转移瘤组织芯片、用免疫组化方法检测肝转移瘤组织中galectin-3的表达。结果:（1）除阴性对照组外各组脾脏原发瘤体积中位数分别为1.51cm3，0.93 cm3，0.77 cm3和0.70 cm3。高浓度MCP组肿瘤体积较对照组明显降低（P＜0.05）。（2）除阴性对照组外，各组肝转移率依次为100%，80%，73.3%和60%。高浓度MCP组肝转移灶数目明显低于阳性对照组（P＜0.05）。（3）阳性对照组和各治疗组血清galectin-3浓度均明显高于阴性对照组（均为P＜0.01）; 阳性对照组与各治疗组间差异无显著性（P＞0.05）。（4）除阴性对照组外，各组肝转移瘤组织中galectin-3表达相互间差异无显著性（P＞0.05）。结论:galectin-3在结肠癌肝转移中呈高水平表达; MCP能明显抑制结肠癌的肝转移。     

TGF-β1基因修饰的未成熟树突状细胞对小肠移植大鼠外周血及移植肠浸润T细胞的影响

目的探讨经转化生长因子-β1（TGF-β1）基因修饰的未成熟树突状细胞（imDC）预处理大鼠小肠移植受体后的外周血及移植肠浸润T细胞的变化及意义。方法选用近交系F344／N和BN大鼠建立全小肠异位移植模型,实验分4组（每组24只）：同基因移植组（BN-BN组）、异基因移植组（F344／N-BN组）、异基因移植＋TGF-β1基因转染imDC组（F344／N-BN＋TGF-β1组）和异基因移植＋TGF-β1基因转染imDC＋FK506组（F344／N-BN＋TGF-β1＋FK506组）。各组大鼠分别于术后3、5、7d各处死6只,获取大鼠静脉血和移植肠。应用免疫组化SABC法检测受体鼠外周血及移植肠CD4^＋、CD8^＋、CD25^＋细胞和IL-4的表达。同时行移植肠组织病理学检查并观察大鼠生存情况。结果TGF-β1修饰的DC细胞能显著抑制外周血及移植肠浸润淋巴细胞CD4^＋、CD8^＋及CD25^＋的表达,并提高IL-4的表达;显著延长受体大鼠的生存时间,但移植肠仍有排斥反应的病理组织学征象。结论TGF-β1修饰的DC通过影响受体外周血及移植肠浸润T细胞对大鼠小肠移植发挥免疫抑制作用。     

冻椎间盘复合表达hBMP7的髓核细胞体外构建生物椎间盘的可行性研究

目的 探讨利用液氮储存的椎间盘与表达人BMP7的髓核细胞体外构建生物活性椎间盘器官的可行性.方法 取液氮储存2个月的犬椎间盘48个,分为EGFP对照组、1×10^4、1×10^5和1×106共四组,每组12个椎间盘.对照组用22 G注射器自椎间盘后正中注入20 μL 含有1×10^5表达EGFP的髓核细胞,1×10^4组注入20 μL含有1×10^4 PKH-26标记的表达hBMP7的髓核细胞,1×10^5组注入20 μL含1×106KH-26标记的表达hBMP7的髓核细胞,1×106组注入20 μL含1×10^5KH-26标记的表达hBMP7的髓核细胞.注射后立即置入50 mL离心管中,加入30 mL完全培养基,分别于培养第4、7、14 d,从外源细胞存活、存活细胞量、hBMP7的表达、蛋白多糖及总胶原含量变化对体外构建的生物活性椎间盘进行评价.结果 在椎间盘培养的各时间点均可见PKH-26红色荧光和表达绿色荧光蛋白的髓核细胞存在.对不同组、不同时间点的椎间盘中荧光强度定量后发现：培养第7天、14天时1×10^5组荧光强度明显高于1×106组和1×10^4组（P〈0.05）.1×10^5组在第7、14天时hBMP7 mRNA表达量明显高于1×106组和1×10^4组（P〈0.05）,EGFP组未见表达;且1×10^5组在培养的第7天、14天时蛋白多糖及总胶原含量均较另外三组明显增高（P〈0.05）.结论 应用液氮冻存的椎间盘与1×10^5个表达hBMP7的髓核细胞复合,外源性髓核细胞可较长时间存活,并能增加蛋白多糖及胶原含量,是一种体外构建生物活性椎间盘的可行性方法.     

体内注射白细胞介素10和转化生长因子质粒延长小鼠移植皮肤存活时间

目的 探讨体内注射白细胞介素10(IL-10)和转化生长因子β1(TGF-β1)质粒对小鼠移植皮肤存活时间的影响.方法 构建含IL-10和TGF-β1基因的质粒,以Balb/c小鼠为受者、Balb/c小鼠与C57BL/6小鼠杂交的F1代小鼠为供者,行皮片移植.移植当天,经尾静脉分别给受者快速注射不含基因的空白质粒(空白组)、含IL-10基因质粒(IL-10组)、含TGF-β1基因质粒(TGF-β1组)以及含IL-10和TGF-β1双基因的质粒(联合组),以后每2天注射1次,20 μg/次,共注射6次,观察移植皮肤存活时间.另取Balb/c小鼠,在输注C57BL/6小鼠脾细胞后,按前述分组及方法接受质粒快速注射,注射5次后,分离其脾细胞,以流式细胞仪检测脾细胞中CD4+ CD25+ T淋巴细胞含量.结果 移植皮片存活时间,空白组为(13.50±1.04)d,IL-10组为(13.83±1.16)d,TGF-β1组为(15.33±1.50)d,联合组为(21.33±3.20)d,联合组移植皮片存活时间明显长于其他3组(P<0.01).脾细胞中CD4+ CD25+ T淋巴细胞的含量,空白组为(6.58±1.86)%,IL-10组为(10.52±1.13)%,TGF-β1组为(14.44±0.42)%,联合组为(14.25±1.24)%,TGF-β1组和联合组的CD4+ CD25+ T淋巴细胞含量明显高于空白组和IL-10组(P<0.01).结论 体内注射IL-10和TGF-β1质粒可延长小鼠移植皮肤存活时间,并能提高CD4+ CD25+ T淋巴细胞含量.     

结肠癌原位瘤模型方法探讨

目的研究常用结肠癌原位瘤模型方法的优劣,建立稳定的结肠癌原位瘤成瘤模型及肝转移模型。方法采用CT26小鼠结肠癌细胞系直接接种于Balb/c小鼠盲肠浆膜下层,或皮下成瘤后采用组织原位种植接种于小鼠盲肠浆膜下层。分析接种4周后原位成瘤及肝转移发生情况。另外,将CT26细胞分别接种于小鼠的小肠浆膜下和盲肠浆膜下。比较接种后成瘤效果及并发症发生率。结果采用细胞注射和组织种植两种方法的原位成瘤率均为100%(5/5),但细胞注射组原位瘤明显大于组织种植组。细胞注射4周后肝转移率为60%(3/5),而组织种植组没有发生肝转移(P0.01)。小肠原位种植成瘤率为100%(5/5),但早期肠梗阻发生率为80%(4/5),而盲肠注射组早期未见肠梗阻发生。结论就接种类型而言,细胞原位注射较组织原位种植更适合结肠癌肝转移模型;而就注射部位而言,结肠癌肝转移模型应首选盲肠注射,而非小肠注射。     

megsin基因转染对高糖环境中系膜细胞胞外调节蛋白激酶表达的影响

目的 观察megsin基因转染对高糖环境中小鼠肾小球系膜细胞血小板源性生长因子BB（PDGF-BB）、磷酸化胞外调节蛋白激酶1/2（pERK1/2）、转化生长因子β1（TGF-β1）的表达及Ⅳ型胶原水平的影响;探讨megsin基因对细胞外信号调节激酶（ERK）通路的作用。 方法 将小鼠肾小球系膜细胞分为7组：低糖组（A组,5.5 mmol/L）、高糖组（B组,30 mmol/L）、高糖+空质粒组（C组）、高糖+megsin质粒组（D组）、高糖+megsin质粒+ERK通路抑制剂组（E组）、高糖+ megsin siRNA组（F组）和低糖+甘露醇组（24.5 mmol/L甘露醇,G组）。分别在培养12、24、48 h后,采用Western印迹法测定各组系膜细胞megsin、PDGF-BB、pERK1/2、TGF-β1的表达,放射免疫测定法（RIA）测定各组细胞上清液中Ⅳ型胶原浓度。 结果 与A组相比,高糖刺激可上调系膜细胞megsin、PDGF-BB、pERK1/2、TGF-β1的表达及上清液Ⅳ型胶原的水平（均P ＜ 0.05）,且有一定的时间依赖性。转染megsin基因可进一步上调高糖环境下系膜细胞PDGF-BB、pERK1/2、TGF-β1、Ⅳ型胶原的表达（均P ＜ 0.05）。应用ERK通路抑制剂后,与D组相比系膜细胞megsin 和PDGF-BB的表达无明显变化（均P ＞ 0.05）,而pERK1/2、TGF-β1及Ⅳ型胶原的表达则明显降低（均P ＜ 0.05）。转染megsin siRNA对系膜细胞megsin基因进行干扰后,系膜细胞PDGF-BB、pERK1/2、TGF-β1的表达及Ⅳ型胶原的含量较B组下调（均P ＜ 0.05）。 结论 高糖环境下,转染megsin基因可使小鼠系膜细胞megsin、PDGF-BB表达增高,其可能部分通过ERK通路使TGF-β1表达上调及Ⅳ型胶原合成与分泌增加。megsin siRNA干扰可使上述指标下调,megsin基因可能在糖尿病肾病发病中起重要作用。     

脾动脉注射IL-2在大鼠肝癌模型中的定位及其对免疫功能的影响

目的：研究不同途径注射IL－2后在大鼠肝癌模型体内的分布和存留情况及其对机体免疫功能的影响。方法 建立大鼠原位肝癌模型，分别经腹腔（IP组），阴茎静脉（IV组），脾动脉（SA组）注射以Iodogen法标记的^131I-IL-2,比较其在各组中的分布存留情况；并测定内源性IL－2水平，NK和LAK细胞活性，T细胞亚群改变以及sIL-2R,TGF-β，IL-10水平。结果：与腹腔及静脉注射途径相比，脾动脉注射组的^131I-IL-2血药浓度及肝脏，脾脏内的放射性浓聚升高更为迅速，药物高峰维持时间也显著延长。IP和IV组在给药后第4天，IL－2水平达高峰，以后逐渐下降，至第8天接近对照组水平，SA组IL－2峰值出现在第6天，至第8天尚呈较高水平。各组sIL-2R,TGF-β，IL－10水平均较对照组为低，其中SA组降低维持时间最长。IP和IV组的NK和LAK细胞活性，CD4^ 亚群，CD4^ /CD8^ 虽有增加，但与对照组相比无统计学显著，而在SA组中上述各指标相对均有显著提升（P＜0．05）。结论：经脾动脉应用IL－2，能迅速升高血液，肝脏及脾脏内IL－2浓度，并在较长时间内维持较高浓度。经脾动脉应用免疫治疗对荷瘤大鼠免疫状态的改善显著优于经腹腔和静脉给药，有望成为免疫治疗的新途径。     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在维持小鼠肝脏移植自发性免疫耐受状态中的作用

目的 探讨CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在维持小鼠肝脏移植免疫耐受状态中的作用。方法 进行小鼠原位肝脏移植,诱导出移植免疫耐受后,向受体注射抗CD25抗体（PC61）以去除CD4^＋CD25^＋T细胞,检测受体内CD4^＋CD25^＋T细胞数量及叉状头／翅膀状螺旋转录因子（Foxp3）的表达以确定CD4^＋CD25^＋T细胞完全被清除,同时观察受体生存时间。结果与同种同系小鼠肝脏移植结果相似,同种异系肝脏移植小鼠的生存时间亦均超过70d。移植免疫耐受诱导后,PC61不同注射方案均能完全去除受体小鼠肝脏、脾脏及血液中的CD4^＋CD25^＋T细胞,且移植肝脏中Foxp3mRNA的表达也明显降低,表明完全去除了CD4^＋CD25。调节性T细胞,但肝脏移植动物生存时间并未受到影响。结论CD4^＋CD25^＋调节性T细胞对于小鼠肝脏移植自发性免疫耐受的维持并非必需。     

骨髓间充质干细胞移植修复大鼠肝缺血再灌注损伤最佳剂量的研究

目的探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植修复大鼠肝缺血再灌注损伤的最佳剂量,为细胞移植修复肝缺血再灌注损伤提供前期的实验依据。方法采用全骨髓直接贴壁法分离培养BMSCs,取第4代细胞进行移植。将30只健康雄性Wistar大鼠建立肝缺血再灌注损伤模型后,随机分成空白对照组、5×10^5个组、1×10^6个组、2×10^6个组及3×10^6个组5组,每组6只。后4组大鼠均在建立肝缺血再灌注损伤模型后,立即抽取200μL细胞悬液（数量分别为5×10^5、1×10^6、2×10^6及3×10^6个）,通过门静脉注射;空白对照组大鼠注射等体积的PBS溶液。于移植术后24h采血检测血清天门冬氨酸氨基转移酶（AST）和丙氨酸氨基转移酶（ALT）水平;取肝脏组织检测阿二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性及核因子-κB（NF-κB）p65蛋白的表达,并行HE染色。结果1×10^6个组和2×10^6个组与空白对照组、5×10^5个组及3×10^6个组比较,其AST、ALT及MDA水平均降低（P〈0．05）,而SOD活性均增高（P〈0．05）;NF-κBp65蛋白的表达均明显下调;肝组织的病理学损伤均改善。但该2组的AST、ALT、MDA及SOD水平比较差异均无统计学意义（P〉0．05）,且肝组织的病理学改变也无明显差别。结论大鼠BMSCs移植治疗肝缺血再灌注损伤的最佳剂量为1×10^6个细胞。     

门静脉注射白细胞介素-12治疗肝转移肿瘤的实验研究

目的　探讨通过门静脉系统局部应用白细胞介素 12 (IL 12 )对于肝转移肿瘤的治疗作用。方法　通过门静脉注射 2× 10 5个MCA 2 0 5肿瘤细胞建立小鼠肝转移肿瘤模型 ,同时脾脏被移植到皮下 ,作为反复多次向门静脉系统注射的途径。第 3～ 7天 ,0 1μgIL 12通过腹腔或脾脏注射 ,同时对照组中通过脾脏注射等体积的平衡盐水。第 2 1天检查肝转移肿瘤的情况。结果　在肝转移模型中 ,IL 12腹腔注射组和IL 12脾脏注射组的肝脏重量 (1 33± 0 0 8)g和 (1 2 9± 0 0 7)g明显小于对照组 (1 92± 0 17)g ,P <0 0 5 ,IL 12腹腔注射组和IL 12脾脏注射组的肝脏转移结节数目 (1 5 3± 0 5 8,0 6 0± 0 89)明显少于对照组 (18 2 5± 5 71,P <0 0 5 )。在IL 12脾脏注射组中 (n =6 ) ,3只小鼠的肝脏肿瘤完全消失。结论　通过门静脉系统局部应用IL 12是治疗肝转移肿瘤的有效方法。     

免疫性血小板减少症脾切除疗效与外周血Th亚群细胞因子表达的关系

目的探讨原发性免疫性血小板减少症（ITP）脾切除血液学疗效与外周血辅助性T细胞（Th）亚群细胞因子的mRNA表达水平的关系。方法采用QuantiGene Plex（QGP）方法,分别检测14例手术有效（R组）和8例手术无效（NR组）的ITP患者腹腔镜脾切除术前后外周血Th1（IL-2、IFN-γ）、Th2（IL-4、IL-5、IL-6、IL-10）、Th3（TGF-β1）、Th17（IL-17）细胞因子的mRNA表达水平的变化。对照组为30例健康体检者。结果术前及术后R组TGF-β1 mRNA的表达水平均明显高于NR组（P值分别为0.001和0.006）及对照组（P值分别为0.001和〈0.001）。术前及术后R组和NR组之间IL-2、IFN-γ与IL-17 mRNA的表达水平差异均无统计学意义。结论脾切除疗效不同的ITP患者TGF-β1的mRNA表达水平存在差异,检测术前TGF-β1的表达水平有助于预测手术疗效。     

人结肠癌SW480细胞BALB/c小鼠建立肝转移模型的实验研究

肝脏是结肠癌最常见的转移部位,15%-25%的结肠癌患者确诊时已发现肝转移[1],肝转移成为结肠癌患者死亡的最主要因素[2]。本法采用脾脏种植法构建人结肠癌SW480细胞BALB/c小鼠肝转移模型,旨在为研究结肠癌肝转移机制和抗转移治疗     

裸鼠结肠癌肝转移模型的建立

目的 探讨建立裸鼠结肠癌肝转移模型的方法.方法 45只裸鼠随机分为三组,分别用门静脉注射法,脾脏注射法和肝脏注射法建立结肠癌肝转移模型,并比较三种肝转移瘤模型在结肠癌肝脏转移率和自然生存期.结果 门静脉注射组,脾脏注射组和肝脏注射组肝脏转移率分别为100%(15/15),60%(9/15),100%(15/15);自然生存期分别为41.47±2.35 d,042.69±2.13 d,41.31±2.55 d.结论 门静脉注射法建立裸鼠结肠癌肝转移模型是一种简便、有效的方法.