姜黄素对肝癌细胞耐药基因表达的影响

目的:研究姜黄素对人肝癌细胞Huh7和Hep3B中耐药基因(MDR1、MRP1和DRG2)表达的影响,探讨姜黄素诱导肝癌细胞凋亡的分子作用机制.方法:以DAPI核染色法研究姜黄素对不同肝癌细胞的凋亡诱导作用.利用JC-1染料进行线粒体染色研究姜黄素对Huh7和Hep3B细胞线粒体膜电位的影响.通过半定量PCR(RT-PCR)检测姜黄素对耐药基因表达的影响.结果:姜黄素可以显著抑制Huh7细胞中耐药基因MRP1的表达.结论:姜黄素可能通过抑制耐药基因MRP1的表达诱导肝癌细胞Huh7凋亡.     

姜黄素对人肝癌细胞株 He pG2巨噬细胞迁移抑制因子表达的影响

[目的]检测人肝癌细胞株HepG2中巨噬细胞迁移抑制因子（MIF）的表达及释放,探讨姜黄素对HepG2中MIF表达的影响。[方法]反转录聚合酶链反应（RT-PCR）及免疫印迹法（Western Blot）检测对照组及不同浓度姜黄素干预组（10,20,30,40,50μmol/L）HepG2中MIF mRNA及蛋白表达水平;ELISA检测对照组及不同浓度姜黄素干预组（10,20,30,40,50μmol/L ）培基中 M IF蛋白水平。[结果]HepG2高表达MIF mRNA及MIF蛋白,各浓度姜黄素干预均可抑制HepG2中MIF mRNA及MIF蛋白的表达,且呈浓度依赖效应（ P ＜0．05）;HepG2可自分泌MIF蛋白,各浓度姜黄素干预均可抑制 HepG2中MIF 蛋白的释放,且呈浓度依赖效应（ P ＜0．05）。[结论]人肝癌细胞株HepG2可表达及释放MIF ;姜黄素在转录和翻译水平能有效抑制M IF的表达及释放,这可能是其发挥抗肿瘤效应的分子机制之一。     

铁代谢与细胞分化

铁是多种生命形式必需的营养元素之一，存在于铁卟啉化合物、铁硫蛋白、运铁蛋白等含铁化合物中。铁参与细胞内许多重要信号分子的调控，在细胞周期、分化、凋亡等生物过程中发挥重要作用。细胞内铁的代谢状态与细胞分化相关信号调控分子之间有着密切的关系，从而决定了细胞的分化方向。由于正常细胞与肿瘤细胞的铁代谢存在着差异，使得铁剥夺疗法也成为肿瘤治疗中的新途径。     

姜黄素致HepG-2细胞的凋亡作用及对bcl-2/bax表达的影响

目的:研究姜黄素致人肝癌HepG-2细胞的凋亡作用及bax与bcl-2 mRNA表达的变化,为姜黄素的临床应用提供实验依据.方法:当HepG-2细胞处于对数生长期时,分别加入不同浓度(0、2.5、5、10、20、30 mg/L)的姜黄素处理48 h,MTT试验检测细胞的抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;实时荧光定量PCR检测bax和bcl-2mRNA的含量.结果:随着姜黄素浓度的增高,其对HepG-2细胞的抑制作用逐渐增强.当姜黄素浓度为30mg/L时,其抑制率达到(58.23±2.56)%,IC50=25.44 mg/L,而细胞的凋亡率由对照组的(1.1±0.3)%上升到(38.4±1.5)%;bax和bcl-2分别是对照组的(5.00±0.55)倍和(0.28±0.05)倍.结论:姜黄素能抑制HepG-2细胞的生长,诱导细胞凋亡,它的分子机制可能是上调bax基因和下调bcl-2基因的表达.     

姜黄素联合全反式维甲酸诱导耐药的急性早幼粒细胞白血病细胞分化的实验研究

本研究旨在探讨姜黄素联合全反式维甲酸(ATRA)对耐药的急性早幼粒细胞白血病细胞分化的影响及其分子机制。以耐药的NB4-R1细胞为实验对象,对细胞进行计数和细胞形态学观察,应用流式细胞术(FCM)检测姜黄素单用或联合ATRA对NB4-R1细胞增殖、分化的影响;用Western blot检测AKT磷酸化在细胞分化中的变化。结果显示,全反式维甲酸对NB4-R1细胞增殖无影响,但可增强姜黄素对NB4-R1生长的抑制作用。单用姜黄素或全反式维甲酸对细胞分化无影响,姜黄素联合全反式维甲酸可明显诱导细胞CD11b表达,细胞在形态上呈明显分化特征。全反式维甲酸可在短时间内促进NB4细胞AKT第473苏氨酸磷酸化,而对NB4-R1细胞中的AKT磷酸化影响不大。姜黄素可以促进NB4-R1细胞AKT磷酸化,而联合全反式维甲酸可进一步增强AKT磷酸化。结论:PI3K/AKT通路失活可能是导致APL细胞耐药的因素之一,而姜黄素通过活化PI3K/AKT信号通路逆转APL耐药,促进NB4-R1细胞分化。     

姜黄素对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响

目的：脂肪细胞分化障碍是肥胖引发胰岛素抵抗的途径之一，观察中药姜黄提取物姜黄素对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响，在细胞水平分析姜黄素防治糖尿病可能的机制。方法：实验于2005—12／2006—03在哈尔滨医科大学营养与食品卫生学教研室完成。以3T3-L1前脂肪细胞为靶细胞，在常规培养时，分别加入0，5，10，15，20，25，30，35，40，50，80和100μmol／L浓度的姜黄素（购自美国Signm公司），每个剂量设12个平行孔，培养3d，在此期间，分别在24，48，72h时，于姜黄素各剂量组中分别选取4个平行孔，以MTF法测定其增殖情况。在诱导分化时，设一组空白对照，实验组与诱导液同步加入0，2．5，5，10，15和20μmol／L的姜黄素，于诱导分化的第6天，采用油红0染色方法测定3T3-L1前脂肪细胞分化程度。结果：①姜黄素作用3T3-L1前脂肪细胞48h，5，10μmol／L剂量组的细胞吸光度值与空白对照相比显著增加（0．67&;#177;0．01，0．69&;#177;0．02，0．57&;#177;0．01，P〈0．01），15μmol／L剂量组细胞吸光度值与空白对照相比差异无显著性意义（0.54&;#177;0．01，P〉0．05），其余剂量组（20，25，30，35，40，50，80和100μmol／L）细胞吸光度值显著降低（0.53&;#177;0．01，0．47&;#177;0.01，0．42&;#177;0.03，0.45&;#177;0.03，0.18&;#177;0.01，0.2&;#177;0.01，0.16&;#177;0.04，0.44&;#177;0．05，P〈0．01）。②姜黄素作用细胞48h时，促进或抑制细胞增殖的作用最强，40μmol／L以上浓度的姜黄素出现细胞毒性作用，大部分细胞成片脱落死亡。72h时，15-35μmol／L姜黄素组细胞的生长率有所增加，而40μmol／L以下姜黄素处理组细胞生长率仍维持在较低水平。⑧脂肪细胞油红0染色分光光度法结果显示2．5。5，10，15和20μmol／L姜黄素剂量组的细胞吸光度值与空白对照相比显著增加（0．38&;#177;0.05，0．49&;#177;0.04，0．56&;#177;0.06，0．75&;#177;0.06，0．77&;#177;0.1，0．83&;#177;0.06。0．38&;#177;0．05。P〈0．05-0．01）。结论：不同浓度姜黄素对3T3-L1前脂肪细胞具有促进增殖和抑制增殖双重作用，低浓度姜黄素促进细胞增殖，高浓度姜黄素抑制细胞增殖。姜黄素通过促进3T3-L1前脂肪细胞的分化，从而增加脂肪细胞对胰岛素的敏感性，这可能是其防治糖尿病的机制之一。     

姜黄素对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响

目的:脂肪细胞分化障碍是肥胖引发胰岛素抵抗的途径之一,观察中药姜黄提取物姜黄素对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响,在细胞水平分析姜黄素防治糖尿病可能的机制。方法:实验于2005-12/2006-03在哈尔滨医科大学营养与食品卫生学教研室完成。以3T3-L1前脂肪细胞为靶细胞,在常规培养时,分别加入0,5,10,15,20,25,30,35,40,50,80和100μmol/L浓度的姜黄素(购自美国Sigma公司),每个剂量设12个平行孔,培养3d,在此期间,分别在24,48,72h时,于姜黄素各剂量组中分别选取4个平行孔,以MTT法测定其增殖情况。在诱导分化时,设一组空白对照,实验组与诱导液同步加入0,2.5,5,10,15和20μmol/L的姜黄素,于诱导分化的第6天,采用油红O染色方法测定3T3-L1前脂肪细胞分化程度。结果:①姜黄素作用3T3-L1前脂肪细胞48h,5,10μmol/L剂量组的细胞吸光度值与空白对照相比显著增加(0.67±0.01,0.69±0.02,0.57±0.01,P<0.01),15μmol/L剂量组细胞吸光度值与空白对照相比差异无显著性意义(0.54±0.01,P>0.05),其余剂量组(20,25,30,35,40,50,80和100μmol/L)细胞吸光度值显著降低(0.53±0.01,0.47±0.01,0.42±0.03,0.45±0.03,0.18±0.01,0.2±0.01,0.16±0.04,0.44±0.05,P<0.01)。②姜黄素作用细胞48h时,促进或抑制细胞增殖的作用最强,40μmol/L以上浓度的姜黄素出现细胞毒性作用,大部分细胞成片脱落死亡。72h时,15～35μmol/L姜黄素组细胞的生长率有所增加,而40μmol/L以下姜黄素处理组细胞生长率仍维持在较低水平。③脂肪细胞油红O染色分光光度法结果显示2.5,5,10,15和20μmol/L姜黄素剂量组的细胞吸光度值与空白对照相比显著增加(0.38±0.05,0.49±0.04,0.56±0.06,0.75±0.06,0.77±0.1,0.83±0.06,0.38±0.05,P<0.05～0.01)。结论:不同浓度姜黄素对3T3-L1前脂肪细胞具有促进增殖和抑制增殖双重作用,低浓度姜黄素促进细胞增殖,高浓度姜黄素抑制细胞增殖。姜黄素通过促进3T3-L1前脂肪细胞的分化,从而增加脂肪细胞对胰岛素的敏感性,这可能是其防治糖尿病的机制之一。     

姜黄素对人口腔鳞癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨姜黄素对人口腔鳞癌细胞Tca8113及Tb增殖的抑制及诱导凋亡作用。方法分别应用6．25、12．50、25．00、50．00μmol／L的姜黄素作用Tca8113及Tb细胞24h,采用MTT法检测姜黄素对口腔鳞癌细胞Tca8113及Tb增殖的抑制作用,形态学观察及流式细胞仪测定细胞凋亡。结果6．25～50．00μmol／L姜黄素能显著抑制口腔鳞癌细胞Tca8113和Tb细胞的增殖（F＝793．94、391．08,q＝6．00～62．68,P〈0．05）。流式细胞仪检测显示口腔鳞癌细胞凋亡率随姜黄素浓度升高而增加。倒置显微镜下可观察到部分凋亡细胞出现染色质凝集、核固缩、核碎裂等形态学改变。结论姜黄素对人口腔鳞癌细胞Tca8113及Tb的增殖具有显著的抑制作用,并可诱导细胞凋亡。     

姜黄素对SMMC-7721人肝癌细胞凋亡和细胞周期的影响

目的探讨姜黄素对体外培养SMMC-7721人肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法选用SMMC-7721人肝癌细胞进行体外培养至对数生长期,以5～160μmol/L姜黄素(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L)分别处理SMMC-7721人肝癌细胞24、48、72h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验测定细胞的生长抑制率;流式细胞仪检测不同浓度药物对细胞周期及凋亡率的影响。结果 MTT显示姜黄素对SMMC-7721人肝癌细胞增殖抑制率随药物浓度增加及作用时间延长有升高趋势,呈时间剂量依赖性。流式细胞术显示,随着浓度的升高细胞凋亡率提高,但姜黄素对SMMC-7721人肝癌细胞并不发生周期阻滞作用。结论姜黄素对SMMC-7721人肝癌细胞的生长有显著的抑制作用,并能诱导其凋亡,但不产生周期阻滞作用。     

姜黄素联合顺铂对肺癌治疗的体外实验研究

目的探讨姜黄素（CUR）与化疗药（DDP）联合应用治疗肺癌的效应和可能机制。方法应用MTT试验检测CUR与DDP联用对人肺癌A549细胞增殖的影响，用流式细胞术检测CUR与DDP联用对人肺癌A549细胞周期和凋亡的影响。结果在一定的浓度范围内，随着姜黄素与顺铂均可抑制细胞生长，呈量-效关系。姜黄素与顺铂联用时，可以增强对A549细胞的增殖抑制作用。姜黄素和顺铂均可诱导A549细胞的凋亡，而且两者联用可增加A549细胞的凋亡率。姜黄素将细胞聚结在C2／M期并可诱导凋亡，顺铂将细胞聚结在s期并可诱导凋亡。结论姜黄素、顺铂均可抑制人肺腺癌A-549细胞的增殖、诱导细胞的凋亡，在一定浓度范围内，呈量-效关系，而且两者联合应用具有相加或协同作用。其效应可能是通过对细胞周期的影响来实现的。     

姜黄素联合顺铂对肺癌治疗的体外实验研究

目的探讨姜黄素(CUR)与化疗药(DDP)联合应用治疗肺癌的效应和可能机制。方法应用MTT试验检测CUR与DDP联用对人肺癌A549细胞增殖的影响,用流式细胞术检测CUR与DDP联用对人肺癌A549细胞周期和凋亡的影响。结果在一定的浓度范围内,随着姜黄素与顺铂均可抑制细胞生长,呈量-效关系。姜黄素与顺铂联用时,可以增强对A549细胞的增殖抑制作用。姜黄素和顺铂均可诱导A549细胞的凋亡,而且两者联用可增加A549细胞的凋亡率。姜黄素将细胞聚结在G2/M期并可诱导凋亡,顺铂将细胞聚结在S期并可诱导凋亡。结论姜黄素、顺铂均可抑制人肺腺癌A-549细胞的增殖、诱导细胞的凋亡,在一定浓度范围内,呈量-效关系,而且两者联合应用具有相加或协同作用。其效应可能是通过对细胞周期的影响来实现的。     

三氧化二砷诱导人肝癌细胞凋亡的实验研究

[目的]研究三氧化二砷(As2O3)在体外诱导人肝癌细胞BEL—7402凋亡的作用。[方法]用MTT、琼脂糖凝胶电泳、原位末端转移酶技术(TUNEL)、透射电镜及流式细胞仪等方法观察细胞凋亡。[结果]As2O3在体外对BEL—7402细胞生长具有显著抑制作用，随着作用时间的延长和As2O3剂量的增加，抑制作用随之增强。As2O3诱导50％以上BEL—7402细胞发生凋亡的浓度为2μmol/L。经As2O3作用后的BEL—7402细胞，在琼脂糖电泳中出现了典型的DNA凋士条带，用流式细胞仪检测出了典型的凋亡峰，电镜下观察到了典型的凋亡细胞形态学改免令细胞核仁消失，染色质浓缩、碎裂，聚于核膜边缘并形成凋亡小体。[结论]As203在体外能有效诱导人肝癌细胞BEL—7402发生凋亡。     

姜黄素抑制多发性骨髓瘤细胞脑源性神经营养因子所诱导的血管新生作用

为了研究姜黄素对多发性骨髓瘤（MM）细胞脑源性神经营养因子（BDNF）、内皮细胞株TrkB的表达及内皮细胞血管新生的影响，以初步探讨姜黄素通过抑制血管新生治疗多发性骨髓瘤的可能性，采用RT—PCR法分别检测姜黄素处理前后多发性骨髓瘤细胞株KM3中BDNF的基因表达变化与内皮细胞株ECV304中TrkB的基因表达变化，应用内皮细胞迁移试验和内皮细胞小管形成试验评价姜黄素对内皮细胞血管新生的影响。结果显示：外源性BDNF能够有效地促进内皮细胞的迁移和小管形成，但这两个效应均能被姜黄素明显阻断；KM3细胞表达BDNFmRNA，ECV304细胞表达TrkBmRNA，姜黄素对两者的表达均具有抑制作用，并呈剂量-时间依赖性。结论：BDNF是一种具有促进血管增殖活性的细胞因子，姜黄素可以分别下调MM细胞BDNF与内皮细胞T她的表达，阻碍两者间的相互作用，继而抑制血管新生，这可能成为治疗MM潜在的作用靶点。     

姜黄素对胃癌SGC7901细胞生长及survivin蛋白表达的影响

【目的】研究姜黄素对胃癌SGC7901细胞的生长抑制作用,并探讨其可能的作用机制。【方法】MTT比色法测定细胞增殖抑制率;Hoechst33342荧光染色及电镜观察细胞形态及结构变化;免疫细胞化学染色法观察survivin蛋白表达的改变。【结果】一定浓度姜黄素作用SGC7901细胞后,细胞生长受到明显抑制,且抑制率呈浓度和时间依赖性;荧光显微镜下可见核浓缩,聚集,碎裂等典型的凋亡特征;电镜下可见到凋亡小体形成;免疫细胞化学染色法显示随着姜黄素作用浓度增加,survivin蛋白表达降低。【结论】姜黄素在一定浓度范围内可以明显抑制胃癌SGC7901细胞增殖,并下调抗凋亡基因survivin的表达。     

糖尿病引起的股骨头骨代谢变化

目的探讨糖尿病(DM)引起的股骨头骨代谢的病理变化。方法70只成年日本大耳白兔随机分为实验组和对照组。实验组采用四氧嘧啶耳缘静脉快速推入,建立速发型DM动物模型;对照组给予生理盐水注射。在不同时期检测两组动物的组织病理学、血液生化等指标。结果实验组第4周时2只动物出现骨小梁结构紊乱,空缺骨陷窝数增多为14%;第8周时3只动物出现骨小梁结构部分断裂、消失,空缺骨陷窝数增多为28%;第12周时5只动物出现骨小梁结构断裂消失更明显,空缺骨陷窝计数高达56%,透射电镜下骨细胞内出现大小不等的脂滴,骨细胞呈不同程度坏死,骨髓组织增生减低,脂肪细胞增多、增大。与同期对照组比较,实验组第8、12周时血清钙含量下降,血清磷含量增加,差异均有显著性意义(P<0.05,P<0.0l);钙磷乘积12周时低于对照组(P<0.05)。结论DM可引起骨质疏松,当负重时股骨头拱桥结构在机械压力的作用下发生微细骨折,随着DM病程的延长,细微骨折累积,软骨下骨压缩而塌陷,可能压迫骨内微血管引起缺血,这些因素共同作用导致股骨头骨代谢的病理变化。     

六亚甲基二乙酰胺诱导HL-60细胞分化及其分子机制的研究

本研究探讨六亚甲基二乙酰胺（HMBA）对髓系白血病HL-60细胞分化的作用及其分子机制。应用MTT比色法观察不同浓度HMBA在不同时间点对细胞增殖的抑制作用，采用Wright—Giemsa染色观察细胞形态学变化，运用流式细胞仪测定细胞分化抗原CD11b的表达，并进行细胞周期分析，半定量RT—PCR分析c-myc、mad1、p21、p27、hTERT、HDAC1基因mRNA的表达。结果表明：HL-60细胞经不同浓度（0．5、1、2mmol/L）HMBA处理后细胞增殖受到较明显的抑制，并随时间延长、剂量增大抑制作用明显增强。HL-60细胞经2mmol／L HMBA处理后，细胞形态学上趋于分化成熟，细胞停滞于G0／G1期；CD11b表达显著增高；c-myc、hTERT mRNA表达显著下调，mad1、p21、p27mRNA表达显著上调，而HDAC1 mRNA表达无明显变化。结论：HMBA能诱导HL-60细胞分化，其分子机制可能是通过调节c-myc／mad1开关引起p21、p27上调，并且下调hTERT mRNA表达，与HDAC1活性抑制无关。     

姜黄素抑制Hedgehog信号诱导胃癌细胞凋亡

目的探讨姜黄素对胃癌细胞MKN45的作用及可能机制。方法不同浓度的姜黄素作用胃癌细胞MKN45后,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Westernblot技术检测索尼克刺猬信号(Shh)、脑胶质瘤相关癌基因1(GLI1)的表达水平。结果不同浓度的姜黄素与胃癌细胞MKN45共培养后,随着姜黄素浓度的逐渐增加,MKN45细胞的增殖抑制也逐渐增加,经统计学分析发现,姜黄素5μmol/ml组与对照组比较,姜黄素10μmol/ml组与对照组比较,姜黄素20μmol/ml组与10μmol/ml组、5μmol/ml组、对照组比较,差异均有统计学意义(t分别=16.24、14.57、21.16、25.00、38.20,P均<0.05)。胃癌细胞MKN45经姜黄素处理后,姜黄素20μmol/ml组的细胞凋亡率与10μmol/ml组、5μmol/ml组、对照组比较,差异均有统计学意义(t分别=57.05、59.93、61.98,P均<0.05)。经姜黄素处理的MKN45细胞,Shh和GLI1表达均明显降低,与对照组比较,差异均有统计学意义(t分别=3.76、3.55,P均<0.05)。结论姜黄素能通过抑制Hedgehog信号通路,抑制胃癌细胞的增殖,诱导其凋亡。     

克癌临治疗移植性肝癌（H22）的实验研究

本文报告了克癌临水煎液对小鼠移植性肝癌（Ｈ２２）的治疗作用。以该药２２．７ｇ／ｋｇ．Ｗ灌服荷实体型肝癌Ｈ２２）小鼠，能显著抑制其生长，肿瘤抑制率达５１．３％，并能明显抑制荷瘤机体肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）水平的异常增高，使其维持在一定水平而发挥抗肿瘤、调节机体免疫力等作用。经流式细胞术检测，表明该药还可阻滞肿瘤细胞从细胞周期Ｃ１期向Ｓ期的转变过程，阻断ＤＮＡ合成和复制，并进一步诱发期发生较高水平的细胞