HMME-PDT对人舌鳞癌Tca8113细胞的作用及影响因素初步研究

目的:初步探讨血卟啉单甲醚(HMME)介导的光动力疗法(HMME-PDT)对人舌鳞癌Tca8113细胞的作用及可能的影响因素。方法:以HMME作为光敏剂、发光二极管(LED)为光源的光动力疗法作用于Tca8113细胞。采用MTT法分别检测光敏剂孵育时间、光敏剂浓度、光剂量及光功率密度对Tca8113细胞抑制率的影响。HE染色观察细胞形态学改变,Hoechst 33342荧光染色观察细胞核凋亡情况。结果:细胞抑制率随光敏剂孵育时间延长而增大,呈时间依赖效应;并且随光敏剂浓度和光剂量增加而增大,呈浓度-光剂量依赖效应;在相同光剂量下,抑制率随光功率密度增加而增大,在高剂量时更明显。HE染色显示,与对照组相比,PDT处理组细胞密度明显降低,死细胞明显增多;Hoechst 33342荧光染色可见核染色质浓集、核固缩、核碎裂,出现凋亡小体,呈典型凋亡形态改变。结论:HMME-PDT能有效杀伤Tca8113细胞,光敏剂孵育时间、光敏剂浓度、光剂量及光功率密度以均是影响PDT疗效的重要因素,HMME-PDT主要通过凋亡方式诱导细胞死亡。     

血卟啉对人胰腺癌细胞Panc-1的光动力作用及机制

目的: 研究光敏剂血卟啉的光动力作用对人胰腺癌细胞Panc-1的体外杀伤效应及其主要机制。方法: 将光敏剂浓度和光照剂量2个因素按不同水平分组,以CCK-8实验的吸光度值为检测指标并转换为细胞存活率,研究这2个因素对光动力作用的影响及其规律。在此基础上,先后以荧光显微镜、流式细胞仪、Western blotting测定这一过程中细胞内活性氧的水平、细胞坏死及凋亡比率以及caspase-3蛋白的表达,探讨光动力作用的主要机制。结果: 随着光敏剂浓度和光照剂量的增加,光动力治疗(PDT)后Panc-1细胞存活率相应下降,并分别在光敏剂浓度10 mg/L、光照剂量20 J/cm²达到最大杀伤效应。光敏剂浓度和光照剂量之间对降低细胞存活率有协同作用。单独给予光敏剂和光照均不对细胞存活率产生影响。PDT作用可使 Panc-1细胞内产生活性氧,并随光敏剂浓度和光照剂量的增加而增多。PDT后细胞出现凋亡和坏死,二者比例随光敏剂浓度和光照剂量的增加而增加,但始终表现为凋亡率＞坏死率。PDT使细胞内caspase-3表达增强,并随光敏剂浓度和光照剂量的增加而增加。结论: 血卟啉光动力治疗对人胰腺癌细胞株Panc-1具有明确的杀伤作用,但是光敏剂和激光照射本身并不具有独立的杀伤效应。光敏剂浓度和光照剂量2个影响因素在一定范围内与PDT效应之间呈正相关的关系,二者之间存在协同作用。PDT的作用机制主要在于其产生的各种活性氧成分,通过各种途径激活caspase-3,最终导致细胞凋亡。     

HMME介导的光动力对兔血管平滑肌细胞生长抑制及诱导细胞凋亡的作用

目的：观察原代培养的兔血管平滑肌细胞在HMME-PDT作用下生长的变化及其死亡方式。方法：常规台盼兰染色观察HMME-PDT作用后6h和24h对细胞的杀伤作用，HMME的浓度为10μg／ml，激光剂帚为2．4～9．6J／cm^2；HE染色法观察PDT后24h细胞形态的变化；流式细胞仪Annexin V／PI双染法检测细胞死亡方式；共聚焦品微镜观察HMME在线粒体的定位。结果：台盼兰法检测结果娃示随着PDT能量密度的增加细胞的存活率逐渐下降，光镜下可见大部分细胞呈死亡或凋亡样改变，Annexin V／PI法检测显示PDT 24h后凋亡率可达50．5％．共聚焦显微镜观察到HMME在线粒体内有分布。结论：HMME-PDT能显著抑制兔血管平滑肌细胞的生长．并使其发生明显的凋亡。     

HMME-PDT对牙骨质片及种植体表面Pg菌斑生物膜的影响

目的 探讨光动力疗法（PDT）对牙骨质片及种植体表面牙龈卟啉单胞菌（Pg）菌斑生物膜的杀灭效果,获得有效杀灭Pg的光敏剂和激光照射的合理剂量.方法 选用Pg标准菌株分别联合经全唾液处理后的无菌牙骨质片和无菌种植体共同培养,建立简易的体外人工牙骨质片和种植体表面细菌附着模型.以血卟啉单甲醚（HMME）为光敏剂,波长630 nm半导体激光为光源,照射牙骨质片表面细菌附着模型60 s后,计算菌落形成单位（CFU）,筛选出最佳激光能量密度（EDL）和HMME剂量,以筛选的合理剂量照射种植体表面细菌附着模型,并用扫描电镜观察PDT对种植体表面菌斑生物膜的影响.结果 当EDL为12J/cm2、HMME质量浓度为25 μg/ml时,PDT可有效杀灭Pg菌斑生物膜（（13.00±5.00） CFU）,且扫描电镜观察到种植体表面无损伤.结论 630nm半导体激光联合HMME介导的光动力疗法（HMME-PDT）对Pg菌斑生物膜有良好的杀灭效果,本实验使用的EDL与HMME剂量较小,有望作为临床治疗剂量.     

PSD-007对宫颈癌Hela细胞光动力杀伤效应的剂量学研究

目的 探讨癌光啉（PSD-007）对人宫颈癌Hela细胞体外光动力杀伤效应及主要影响因素.方法 不同质量浓度（0、3.125、6.25、12.5、25、50、100 μg/ml）的PSD-007与Hela细胞共同孵育2h后,予以不同能量（0、0.6、1.2、2.4、4.8、9.6 J/cm2）635 nm波长的激光照射,以相同剂量光照和光敏剂剂量的人乳腺癌细胞系MCF-7光动力杀伤作用做对比,通过噻唑蓝（MTT）比色法测定细胞的光密度（OD）值及存活率;质量浓度为12.5 μg/ml的PSD-007与细胞共同孵育2h后,以不同能量（1.2、2.4、4.8 J/cm2）的激光照射,流式细胞术（FCM）分析细胞周期及凋亡率.结果 与空白对照组相比,单纯光敏剂PSD-007在＞25 μg/ml质量浓度下影响Hela细胞存活率,光动力疗法（PDT）对Hela细胞有更明显的杀伤效应,并且随着光敏剂质量浓度增加和光照能量密度增大,对细胞的杀伤效果逐渐增强.当光敏剂质量浓度＞12.5 μg/ml,光照能量＞4.8 J/cm2时,各组间细胞存活率的差异无统计学意义（P＞0.05）.FCM分析发现,PDT于G0/G1期阻断Hela细胞生长,凋亡诱导作用呈时间依赖性.结论 光敏剂PSD-007自身对体外人宫颈癌细胞系Hela细胞具有生长抑制作用,PSD-007介导的光动力杀伤效应更为显著,较人乳腺癌-7（MCF-7）细胞的PSD-007光动力作用有更低的使用剂量和光照剂量.     

以532nm激光为光源的HMME-PDT对人类乳腺癌细胞的杀伤作用

目的：探讨532nm激光不同光剂节参数及血卟啉单甲醚（HMME）不同浓度参数对体外培养的乳腺癌细胞（MCF-7）的光动力学杀伤作用。方法：MCF-7细胞用浓度分别为5μg／ml、10μg／ml、20μg／ml的HMME孵育2h后，以532nm半导体激光照射，能量密度分别为0．3J／cm^2、0．6J／cm^2、1．2J／cm^2,2．4J／cm^2、4．8J／cm^2，24h后用CCK-8检测细胞存活率，并在光镜及电镜下观察细胞的形态变化。结果：随着激光剂景的增大，在一定的范围内，细胞的抑制率呈现上升趋势；能量密度为2．4J／cm^2．HMME浓度为20μg／ml时，达到最大的抑制率为55．5％；并且细胞的抑制率也和HMME浓度呈剂量依赖型；光镜下可观察到细胞坏死和凋亡样改变。结论：以532nm激光为光源的HMME-PDT对MCF-7细胞有明显的杀伤作用．并在一定范围内呈光剂量和HMME浓度剂最依赖型。     

塞来昔布联合血卟啉单甲醚-光动力疗法对人鼻咽癌CNE-2细胞作用的初步研究

目的:探讨环氧化酶-2抑制剂塞来昔布联合血卟啉单甲醚(HMME)光动力对鼻咽癌细胞的作用.方法:实验分对照组、单独PDT组、单独塞来昔布组和联合作用组.光敏剂HMME的剂量为2.5μg/mL,光能量密度分别为0.125 J/cm2、0.25 J/cm2和0.5 J/cm2,MTT法检测各组作用24h后的细胞抑制率,并用金氏公式分析联合效应.HE染色观察细胞形态变化和数量改变.并用Hoechst 33342荧光染色观察细胞核凋亡情况.结果:64 μM和80 μM的塞来昔布对CNE-2细胞的抑制率分别是4.84%和13.23%,2.5μg/mL HMME+0.25 J/cm2 PDT组的抑制率为28.34%,80μM的塞来昔布与2.5μg/mL HMME+0.25 J/cm2 PDT联合组的抑制率为44.57%,金氏公式分析显示在所选的剂量中所有的HMME-PDT与塞来昔布联合处理均有协同或相加效应.HE染色显示,各处理组与对照组相比细胞稀少,形态不规则,部分细胞呈凋亡样改变,联合处理组细胞稀少更明显,死亡细胞更多,Hoechst 33342荧光染色可见细胞核出现明显染色质浓集、核碎裂,核固缩、蓝色荧光强度增加的凋亡现象,联合处理组的细胞死亡更多,凋亡现象更明显.结论:单用塞来昔布或HMME-PDT均能抑制CNE-2细胞的生长,塞来昔布联合HMME-PDT产生相加或协同效应.     

HMME介导的光动力疗法诱导鼠肝癌MM45T-Li细胞凋亡的实验研究

目的 探讨光动力疗法对鼠肝癌细胞MM45T-Li凋亡的影响.方法 以血卟啉单甲醚(HMME)为光敏剂,630 nm激光为激发光源的光动力疗法作用于鼠肝癌MM45T-Li细胞.细胞分别与2.5、5、10、20.μg/ml的光敏剂孵育4h后,用不同能量密度的激光照射;MTr法检测HMME的暗毒性以及光动力疗法作用24h后的细胞活性;Hoechst细胞核荧光染色法观察HMME介导的光动力疗法对细胞凋亡的影响.结果 在不照光的情况下各组浓度的HMME对细胞活性无明显抑制作用.当HMME浓度为10、20 μg/ml时,PDT对细胞活性的抑制率随能量密度的增加而增加.Hoechst染色观察PDT作用12h后部分细胞出现染色质凝集、核固缩、核碎裂等形态学改变,5.4 J/cm2及7.2 J/cm2组的凋亡率高于对照组(P＜0.05).结论 HMME介导的光动力疗法可以有效地诱导鼠肝癌MM45T-Li细胞凋亡.     

人外周血T细胞活化状态对血卟啉单甲醚吸收的影响

目的：观察健康人外周血T细胞的活化状态对其吸收新型光敏剂血卟啉单甲醚(HMME)的影响。以期为进一步研究HMME-PDT对活化T细胞选择性作用提供实验依据。 方法： 以流式细胞仪检测孵育浓度和孵育时间对活化T细胞吸收HMME的影响。密度梯度法常规分离人外周血淋巴细胞，分别以多克隆刺激剂PHA和PDB+Ion刺激T细胞活化，同时设立未加刺激剂的静止T细胞作对照。在评价孵育浓度对T细胞吸收HMME的影响时，将上述处理的淋巴细胞分别与0、5、10、20、30和40 mg/L的HMME孵育1 h，经CD3抗体染色后进行T细胞HMME吸收分析。在评价T细胞活化状态对HMME吸收量与孵育时间相关性的影响时，将培养的淋巴细胞与10 mg/L的HMME分别孵育0-160 min后进行检测。 结果： T细胞的活化使其HMME吸收量的孵育浓度相关曲线以及孵育时间相关曲线较静止T细胞右移和上移。在一定孵育浓度范围内(5-20 mg/L)，活化T细胞对HMME的吸收量明显大于静止T细胞，差别具有统计学意义。然而，随着孵育浓度的进一步增加，活化T细胞与静止T细胞对HMME吸收量的差异逐渐减小。在10 mg/L HMME孵育浓度的条件下，不论活化与否，随着孵育时间的延长，T细胞内HMME的吸收量在逐渐增强。在15-60 min之间，活化T细胞HMME吸收量明显高于静止T细胞。 结论： 活化T细胞与静止T细胞HMME吸收量的差别取决于其孵育浓度和孵育时间，在一定孵育浓度和孵育时间范围内，活化T细胞HMME的吸收量明显高于静止T细胞，提示这可能有助于形成选择性删除活化T细胞的剂量关联和时间关联的HMME-PDT治疗窗口。     

HMME-PDT对大鼠致龋模型中变形链球菌抑制作用的研究

目的 探讨不同参数光动力疗法(PDT)在大鼠口腔龋齿预防中的作用.方法 用变形链球菌感染Wistar大鼠口腔,建立龋齿模型.以0.9%生理盐水、0.2%氟化钠为对照组,单纯激光、单纯光敏剂、不同参数PDT为实验组.采用血卟啉单甲醚(HMME)为光敏剂,532 nm半导体激光为光源,每周处理牙齿1次,5周后处死大鼠,Ke...     

PDT治疗BALB／c荷瘤小鼠喉癌中的激光剂量效应研究

目的 激光照射剂量和光敏剂的种类及浓度可明显影响光动力疗法（PDT）的治疗效果.本研究以BALB/c荷瘤小鼠为对象,探讨不同激光照射剂量对PDT治疗喉癌效果的影响.方法 取48只皮下接种人喉癌上皮细胞Hep-2的BALB/c荷瘤鼠,分成6组,其中1组为对照,其余5组尾静脉注射血卟啉单甲醚（HMME）后3h分别以30、60、120、240、480 J/cm^2能量的波长630 nm激光照射肿瘤组织.隔日观察肿瘤大小、体质量,并在PDT后30 d取肿瘤组织做病理切片.结果 与对照组相比,所有剂量组PDT都使肿瘤消除或部分消除,疗效与剂量呈正相关,120和480 J/cm^2组小鼠肿瘤完全治愈.瘤损部位在PDT作用后1d出现结痂,5d结痂变硬变黑,同时肿瘤开始消退,30 d左右肿瘤完全消失.结论 PDT是治疗小鼠喉癌非常有前景的方法,其最佳照射剂量是120 J/cm^2.     

光敏剂浓度和给药时间对荧光诊断效果的影响

目的 为探索光敏剂浓度和给药时间对蓝光诱导的荧光诊断的影响,以提高荧光诊断的准确度.方法 常规方法制备荷瘤小鼠,分别给荷瘤小鼠静脉注射不同浓度（0～70 mg/kg体质量）的光敏剂-血卟啉衍生物（HpD）,并在给药后不同时间（0～48 h）,以前置395～415 nm滤光片的碘镓灯为激发光源,蓝光诱导载体荧光,通过图像采集系统采集荧光图像,取活组织做病理切片检查.结果 HpD浓度为40mg/kg体质量,给药后18 h,可以较为精确地反映肿瘤组织的浸润范围,荧光诊断准确度高于其他实验组;同时假阳性率低于其它实验组,差异有统计学意义.结论 荧光诊断的效果与光敏剂的浓度和观察时间密切相关;优化2者参数,可提高荧光诊断的准确度并降低假阳性率,对临床肿瘤手术方案的制定有重要参考价值.     

新型卟啉类光敏剂光动力治疗肝癌的体外实验研究

目的 探讨一种新型卟啉类光敏药物对人肝癌HepG2细胞的光动力学治疗（PDT）作用及其机制.方法 实验分为4组：阴性对照组,PDT组,药物组及药物＋PDT组.采用Bleaching法研究光敏药物的光稳定性;MTT法检测药物对HepG2细胞的PDT杀伤作用;荧光分光光度计检测光敏药物的细胞吸收量;激光共聚焦显微镜检测药物在癌细胞内定位;Hoechst 333342染色检测PDT后HepG2细胞死亡方式.结果 药物对光照比较稳定;单纯光照及单纯光敏药物自身均对HepG2细胞生长无任何影响（P＞0.05）,但药物孵育后行激光照射对HepG2细胞有强烈的PDT杀伤作用（P＜0.05）,IC50值为1.21 μmol/;细胞的药物吸收量呈显著的浓度依赖性,浓度至12.5 μmol/L时吸收量达到饱和;光敏药物分布于HepG2细胞溶酶体内;PDT后HepG2细胞死亡方式主要为凋亡.结论 新型光敏药物能够杀伤人肝癌HepG2细胞,其方式主要通过损伤溶酶体启动继发性的细胞凋亡实现的.     

复频聚焦超声激活血卟啉杀伤离体肿瘤细胞的实验研究

在优选的超声辐照参数下 ,利用复频聚焦超声激活血卟啉 (Hp)杀伤肿瘤细胞K5 6 2 ,SW - 4 80并用MTT法检测分析了杀伤细胞的效率其初步结果为 :单频超声杀伤结果时低频优于高频 ;复频和单频比较 ,复频优于单频。而且杀伤效率不是单频的代数和 ,而是二者和的 2 - 3倍 ;由超声辐照后的孵育时间可以看出 :孵育 16h超声 Hp的杀伤效率高于 4h。     

Photofrin光动力联合化疗对食管癌细胞株Eca-109增殖的影响

目的研究Photofrin光动力联合氟尿嘧啶和顺铂化疗药物对食管癌细胞株Eca-109增殖的抑制作用。方法将食管癌细胞株Eca-109分为6组，A：对照组，B：化疗组，C：化疗＋高剂量光敏剂治疗组，D：化疗＋低剂量光敏剂治疗组，E：高剂量光敏剂治疗组，F：低剂量光敏剂治疗组。种板孵育24h后，采用台盼蓝染色法检测肿瘤细胞的存活率；于化疗组加入化疗药（5-Fu＋DDP）作用12h，再按实验分组加入光敏剂血卟啉衍生物（HPD）低剂量或高剂量，4h后行630nm激光照射，光能量密度30J／cm^2，照光后继续培育24h，开始行MTT法检测食管癌细胞增殖的抑制率。结果除了低剂量光敏剂＋化疗组同高剂量光敏剂组差异不显著外．其余相互间差异均有统计学意义，高剂量光敏剂＋化疗组细胞抑制率较高，低剂量光敏剂组抑制率较低。结论在特定光源状态下,一定的光敏剂、光照能量密度、孵育时间，光敏剂孵育浓度是人食管癌细胞Eca-109体外光动力效应的主要影响因素。两种不同的HPD孵育浓度下细胞抑制率有显著性差异。相同光照能量密度及孵育时间下，孵育浓度越高，其杀伤效应越强。光动力与化疗联合对食管癌细胞的杀伤力提高，光动力与化疗有协同作用。     

ZnPc和HPD介导的PDT对肺癌细胞杀伤效果的对比研究

目的：对比不同光敏剂浓度、不同光照时间和不同激光功率密度下,ZnPc和HPD对肺癌细胞的杀伤效果,探索了ZnPc-PDT的最佳工作参数。方法：分别选用ZnPc和传统光敏剂HPD为研究对象．使其作用于Lewis肺癌细胞,通过分光光度计测量其吸收峰值,选取合适的激发光源;通过倒置显微镜和MTY法的检测,对比了不同光敏剂浓度、不同光照时间及不同激光功率密度下ZnPC-PDT和HPD-PDT对LLC肺癌细胞的杀伤能力。结果：（1）ZnPc的吸收峰的波峰较HPD相对单一,且波长较长;（2）ZnPc和HPD对肺癌细胞的杀伤作用均随光敏剂浓度、光照时间、光源功率密度的增强而增强,但增大到一定值后会趋于饱和;（3）相同条件下,znPc的杀伤效果均强于HPD,且具有显著性差异。结论．肺癌治疗方面ZnPc-PDT是一种较HPD-PDT更为高效的治疗手段．