小鼠耐药蛋白的测定及耐药癫疒间所致脑损伤的研究

目的制作小鼠耐药癫疒间模型,考察耐药蛋白的表达以及实验动物脑损伤情况,为进一步耐药癫疒间逆转研究奠定基础。方法取10只小鼠,给予戊四氮制作小鼠癫疒间模型,造模成功后,低剂量持续口服灌胃给苯妥英钠制作耐药癫疒间模型,试验期间考察小鼠癫疒间的发作级别和频率,以确定小鼠耐药癫疒间模型制作是否成功。另取20只小鼠进行后续研究,将其随机分为2组,分别为阴性对照组及耐药癫疒间模型组。阴性对照组给予生理盐水,耐药癫疒间模型组按前述方法造模。结束后将全部小鼠处死取脑,采用Western blot法考察小鼠脑内P-糖蛋白的变化,采用HE染色法考察耐药癫疒间小鼠脑损伤情况,采用免疫组化法考察脑内Caspase-3的表达情况。结果耐药癫疒间模型组中10只小鼠有8只造模成功,进入试验。脑组织Western blot试验表明,耐药癫疒间模型组较阴性对照组小鼠脑内P-糖蛋白的表达显著增高(P<0.01);脑组织HE染色显示,耐药癫疒间模型组呈现神经细胞核固缩、变形,神经细胞呈现部分水肿,并有神经细胞变性、死亡,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化结果显示,耐药癫疒间模型组呈现Caspase-3的表达(P<0.05)。结论耐药癫疒间小鼠呈现脑内P-糖蛋白高表达,并出现脑组织损伤。     

氟桂利嗪对苯妥英钠耐药癫（癎）小鼠的逆转作用

目的：研究氟桂利嗪对苯妥英钠耐药癫（癎）（drug resistant epilepsy）小鼠癫（癎）发作的逆转作用,初步探讨其作用机制.方法：采用戊四氮制作小鼠癫（癎）模型,灌胃给予苯妥英钠40 mg/（kg·d）,共14 d,制作耐药癫（癎）小鼠模型.造模成功的耐药癫（癎）小鼠30只,按随机数字表法分为3组,分别为模型组、维拉帕米组和氟桂利嗪组.在给予苯妥英钠后30 min,分别腹腔注射生理盐水、维拉帕米20mg/（kg·d）和氟桂利嗪8 mg/（kg·d）,连续给药4d,在第4天（d 4）观察给药后30 min内小鼠癫（癎）发作的严重程度.然后处死小鼠,取脑.采用蛋白质印迹法（Western blot）检测P-糖蛋白（P-gp）表达情况;用免疫组化法测定半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）的表达情况.结果：给药d4,氟桂利嗪组小鼠癫（癎）发作严重程度较模型组显著减轻（P＜0.01）.维拉帕米组和氟桂利嗪组小鼠脑内P-gp的表达量显著减少（P＜0.01）,且氟桂利嗪的效果优于维拉帕米（P＜0.05）;维拉帕米组和氟桂利嗪组小鼠皮层和海马半胱氨酸蛋白酶-3表达量也显著减少（P＜0.01）,氟桂利嗪的作用优于维拉帕米（P＜0.05）.结论：氟桂利嗪能够有效降低苯妥英钠耐药小鼠的癫（癎）发作严重程度,其主要机制可能与降低小鼠脑组织P-gp的表达有关,同时氟桂利嗪也能降低耐药小鼠脑内半胱氨酸蛋白酶-3的表达,对脑组织可能有保护作用.     

氟桂利嗪对杏仁核点燃鼠模型脑内P-糖蛋白及谷氨酸表达的影响

目的观察氟桂利嗪对杏仁核点燃鼠模型脑内P-糖蛋白（P-glycoprotein,Pgp）及谷氨酸（glutamate,Glu）表达的影响。方法选择健康雄性Wistar大鼠30只制作动物模型,造模成功后随机分为单纯对照组、癫痫模型组和氟桂利嗪组,再分别取脑组织,采用免疫组化的方法检测大鼠脑内Pgp及Glu表达并比较各组的变化。结果（1）癫痫模型组中杏仁核、海马、颞叶P-糖蛋白表达的阳性细胞计数明显增多、谷氨酸灰度值减少（灰度值越高,Glu的表达越少）,氟桂利嗪组中Pgp表达的阳性细胞计数减少、谷氨酸灰度值增多（P〈0.05）。（2）Pgp和Glu的表达均以杏仁核最强,特别是在模型组中,其次为海马和颞叶。结论（1）氟桂利嗪在杏仁核电刺激点燃模型中可明显抑制杏仁核、海马、颞叶Pgp、Glu的表达。（2）Pgp、Glu在杏仁核、海马、颞叶中表达程度不同,以杏仁核表达最强。     

血管内皮生长因子在模拟高原缺氧小鼠脑组织、心肌组织中的表达研究

目的 研究血管内皮生长因子（VEGF）在模拟高原缺氧小鼠脑和心肌组织中的表达及意义.方法采用低压氧舱模拟海拔8000 m高原缺氧环境,将BALB/c小鼠随机分为正常对照组,缺氧6 h组、9 h组、12 h组、24 h组、2 d组、3 d组,每组10只.HE染色切片观察缺氧不同时间小鼠脑组织和心肌组织的组织病理学改变情况,免疫组织化学法检测脑组织和心肌组织VEGF蛋白的表达水平差异及其规律.结果 缺氧各组脑组织血管周、神经细胞周和胶质细胞周间隙扩大,细胞核染色质不均匀,呈空泡状或网状,脑组织间质内空泡状结构增多;心肌组织轻度血管扩张充血,细胞轻度肿胀,横纹消失结构不清呈均质状,少量肌细胞核固缩深染.缺氧各组脑、心肌组织VEGF阳性表达强度半定量评分较正常对照组显著增加（P＜0.01）,且随缺氧时间延长表达增加.结论 缺氧能造成小鼠脑和心肌组织损伤,呈现水肿病理表现,并刺激VEGF分泌,导致新生血管形成.     

白藜芦醇对糖尿病小鼠血脑屏障上P-糖蛋白表达和转运功能的影响

目的研究白藜芦醇对糖尿病小鼠血脑屏障上P-糖蛋白（P—gP）表达和功能的影响。方法小鼠腹腔注射四氧嘧啶（ALX,200mg·kg^-1）诱导1型糖尿病。挑选空服血糖〉11．1mmol·L^-1的小鼠分为糖尿病模型组、白藜芦醇低剂量组（7．5mg·kg^-1）和白藜芦醇高剂量组（15mg·kg^-1）。另设正常对照组。白藜芦醇灌胃给药两周,用WesternBlot技术测定血脑屏障上P—gP的蛋白水平;用罗丹明（Rh123）累积实验测定其P—gP的转运功能,并测定小鼠空腹血糖值（FSG）、糖化血红蛋白值（GHb）及脑内的活性氧（ROS）含量和总抗氧化能力（T—AOC）。结果白藜芦醇低剂量组和高剂量组小鼠血脑屏障上P—gP的表达水平显著升高,脑组织摄取Rh123水平（Kp）显著下降,同时白藜芦醇低剂量组和高剂量组的FSG和GHb明显低于模型组;脑组织总抗氧化能力显著高于模型组;而脑内ROS含量显著低于模型组。结论白藜芦醇能显著提高血脑屏障上P-gP表达水平和转运功能,这一作用可能与白藜芦醇降低脑内氧化应激水平有关。     

裸鼠人肝癌移植瘤耐药模型的建立

目的 建立裸鼠人肝癌(HCC)移植瘤多药耐药(MDR)模型.方法 体外培养肝癌细胞系HepG2,建立裸鼠的皮下肿瘤.诱导组(12只)用阿霉素(ADM)间歇腹腔注射,诱导建立裸鼠肝癌耐药模型;对照组(4只)腹腔注射等容积的生理盐水.MTT比色法检测耐药细胞的MDR,RT-PCR和流式细胞术检测肿瘤耐药基因MDR1-mRNA和P-糖蛋白(P-gp)的表达,罗丹明试验观察该蛋白功能.结果 移植瘤组织形态及生物学方面符合人肝癌特征.诱导组肝癌细胞MDR1-mRNA和P-gp蛋白的表达均明显高于对照组.诱导组HepGZ对ADM的耐药指数增加了15.6倍.耐药细胞有较强的药物外排功能.结论 成功地建立了与临床肝癌相似的裸鼠肝癌耐药模型.     

P-糖蛋白抑制药逆转肿瘤多药耐药的研究进展

P-糖蛋白（permeability glycoprotein，P-gp）过度表达是多药耐药（multidrug resistance，MDR）产生的主要原因，P-糖蛋白抑制药可以抑制P-糖蛋白对肿瘤药物的外排作用，使肿瘤细胞内的药物浓度提高，从而逆转肿瘤MDR，第3代P-糖蛋白抑制药具有高效、低毒、选择性高等特点，中药可以通过多种途径抑制P-糖蛋白的表达和功能，从而逆转MDR。     

神经节苷脂对大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3表达的影响

目的研究单唾液四己糖神经节苷脂（Monosialoganglioside,GM1）对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后神经功能缺失评分及Caspase-3表达的影响,探讨其神经保护作用机制。方法42只Wistar雄性大鼠随机分为三组,即神经节苷脂GM1治疗组,脑缺血再灌注损伤模型组,正常对照组。采用改良线栓法建立右侧大脑中动脉缺血再灌注模型。治疗组缺血即刻腹腔注射30mg/kg神经节苷脂,模型组注射等剂量生理盐水,运用Zea-Longa法进行神经病学评分,用光镜观察脑组织形态学改变,用免疫组化法检测Caspase-3。结果与模型组相比,GM1治疗组脑组织变性坏死程度轻,神经功能缺损评分显著减少,Caspase-3阳性细胞减少（P〈0.01）;模型组Caspase-3表达明显多于对照组（P〈0.01）,而且缺血再灌注24h较再灌注1h明显增多（P〈0.01）。结论GM1可以通过抑制Caspase-3的表达来抑制细胞凋亡,从而发挥脑缺血再灌注损伤的保护作用。     

癫清片对戊四唑点燃大鼠海马损害的病理学观察

目的观察癫清片对戊四唑(PTZ)点燃大鼠脑组织学损害特点。方法取按照One’s分级标准造模成功的癫大鼠60只,随机分为模型对照组;癫清片高、中、低剂量组;癫宁片组及苯妥英钠片组,连续灌胃给药28 d,处死后脑标本制成4μm层厚的横轴位切片,HE染色,光镜下观察各组海马的CA1、CA2、CA3、CA4的组织学改变,并选择组织学损害最明显的区域在高倍镜下(40×10)计数神经元的丢失。结果模型对照组总的神经细胞数量减少,变性神经细胞可占锥体细胞的83%,各给药组与模型组相比,均可增加总的神经细胞数量,变性神经细胞比率减少,其中癫清片高剂量组与苯妥英钠片组表现相似。结论PTZ可使海马的CA1、CA2、CA3、CA4的大量神经细胞变性坏死;癫清片具有增加锥体层总体神经细胞和正常神经细胞数量的作用。     

艾灸减轻新生小鼠缺氧缺血性脑病的作用及其机制研究

目的　研究艾灸减轻新生小鼠缺氧缺血性脑病（HIE）的作用及其机制。方法　55只出生7 d的ICR小鼠按照随机数字表法分为假手术组（Sham组）、模型组（HI组）和艾灸组（MOX组）。HI组和MOX组采用右侧颈总动脉结扎联合缺氧法制备HIE模型，MOX组建模后艾灸刺激大椎穴，35 min/次，1次/d，连续治疗3 d。处理结束后麻醉取脑，DAPI染色观察脑组织形态结构，TUNEL染色检测脑组织细胞凋亡；免疫荧光染色检测脑组织caspase-9表达；放射免疫分析法测定脑组织caspase-3含量。结果　与Sham组相比，HI组小鼠脑组织排列疏松，脑组织凋亡细胞数和caspase-9表达显著增多（P＜0.05）；与HI组相比，MOX组小鼠脑组织排列较致密，脑组织凋亡细胞数、caspase-9和caspase-3表达显著减少（P＜0.05）。结论　艾灸可能通过降低脑组织caspase-9和caspase-3的表达来减少细胞凋亡，从而减轻新生小鼠缺氧缺血性脑损伤。     

中药对拟阿尔茨海默病动物模型小鼠治疗后大脑、肝等组织生化指标的变化

目的探讨中药对拟阿尔茨海默病动物模型小鼠治疗后大脑、肝等组织生化指标的变化。方法用小鼠作为研究对象，以氯化铝拌饲料喂养6．5个月染毒建立模型，以水迷宫时间和错误率表示记忆和判断力的改变。用中药灌胃治疗1．5个月。小鼠分为4个组，即正常组、模型组、治疗Ⅰ组和治疗Ⅱ组。模型组、治疗Ⅰ组和治疗Ⅱ组先用氯化铝染毒5个月，然后两个治疗组分别用乌圆补血口服液和海尔福口服液灌胃，连续45d。实验结束，取大脑、肝组织匀浆和血清测定各项指标。结果实验前后血红蛋白（Hb）各组间差异无统计学意义（P〉0．05）；脑AChE（乙酰胆碱酯酶）活力（U／mg．蛋白）正常组和治疗Ⅰ组明显高于模型组（P〈0．05），正常组明显高于治疗Ⅱ组（P〈0．05）；脑GSH—Px（谷胱甘肽过氧化物酶）活力（U／mg．蛋白）正常组和模型组明显高于治疗Ⅰ组和治疗Ⅱ组（P〈0．01）；脑超氧化物歧化酶（SOD）活力（U／mg．蛋白）正常组明显高于治疗Ⅰ组和治疗Ⅱ组（P〈0．05或P〈0．01）；肝GSH—Px（U／mg．蛋白）治疗Ⅰ组明显高于模型组（P〈0．05）；肝清除率（％）治疗Ⅰ组和治疗Ⅱ组明显高于正常组和模型组（P〈0．01）；肝SOD活力（U／mg．蛋白）治疗Ⅰ组明显高于模型组（P〈0．05）；脑丙二醛（MDA）（nmol／mg．蛋白）治疗Ⅰ组和治疗Ⅱ组明显低于模型组（P〈0．05）；水迷宫时间（s），染毒后3组时间均有延长，其错误率（％），模型组高于其他各组。结论用AlCl3造模组记忆和判断能力明显下降，认为造模成功，而且造模组脑AChE明显低于正常组、治疗Ⅰ组和治疗Ⅱ组，但治疗后脑MDA明显下降，肝、脑清除率明显升高，治疗Ⅰ组肝GSH—Px升高，脑AChE升高接近正常组。治疗Ⅰ组大脑组织出现明显的治疗效果。     

JNK信号通路通过介导细胞凋亡对肺纤维化的调控作用

目的观察肺纤维化中肺组织caspase-3和磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)蛋白表达的变化,并探讨JNK信号转导通路对肺纤维化的调控作用。方法 72只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(N组)、肺纤维化模型组(M组),肺纤维化+JNK抑制剂干预组(I组),每组24只,分别于第3、7、14、28天处死,每组6只。留取肺组织,对其行苏木素-伊红(HE)染色,观察其病理学改变,碱水解法测定其中羟脯氨酸的含量,免疫组织化学法测肺组织中caspase-3和p-JNK的变化。结果模型组早期肺泡炎症明显,后期肺组织实变,caspase-3和p-JNK蛋白表达含量均显著增加(P<0.05),14d时达峰值。干预组能明显阻断JNK的激活(P<0.05),干预组caspase-3表达较模型组显著减少(P<0.05),14d时减少最明显。结论细胞凋亡是肺纤维化的一个重要病理组织学特点。JNK信号转导通路在肺纤维化中被激活,发挥促细胞凋亡效应。     

荔枝核总黄酮对胆汁淤积性肝纤维化大鼠抗肝纤维化的机制探讨

目的观察荔枝核总黄酮对胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝功能指标的影响及对胶原蛋白的影响,探讨其可能的干预机制。方法将胆总管结扎后的SD大鼠分为胆总管结扎组（BDL组）,荔枝核总黄酮组（TlFL组）,水飞蓟宾组（SIL组）,以假手术组为阴性对照。四周后处死大鼠,取血清检测各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、直接胆红素（BILD2）、总胆红素（BILT2）、肌酐（CREJ2）、血尿素氮（UREAL）,同时,取肝组织行HE、Masson染色,westernblot测定各组肝组织的PC3、PCI、p16的表达。结果与BDL组比较,TFL组血清SOD含量明显升高（P〈0．05）,ALT,AST,BILD2,BILT2水平明显降低（P〈0．05）,明显改善大鼠肝纤维化程度（P〈O．05）,且对肾功能无明显影响（P〉0．05）,TFL可明显抑制p16、PC3、PCI蛋白的表达（P〈0．05）。结论TFL组（300mg,／kg·d）有明显改善胆汁淤积及减轻肝组织纤维化的作用且对肾功能无明显影响,明显抑制胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝脏p16、PC3、PCI蛋白的表达,可能是通过诱导细胞凋亡途径抑制肝纤维化。     

高血压前期药物干预对卒中易感型自发性高血压大鼠的影响

目的比较氯沙坦和氨氯地平的高血压前期干预对卒中易感型自发性高血压大鼠（SHRSP）血压和循环及脑组织肾素-血管紧张素-醛固酮系统的影响。方法 SHRSP组分为氯沙坦组、氨氯地平组。Wista大鼠（WKY）作为对照组。6周后,测量收缩压、血浆和脑组织中的血管紧张素（AngⅡ）和醛固酮（Aldo）含量、脑组织血管紧张素Ⅰ型受体（AT1R）和Ⅱ型受体（AT2R）蛋白表达。结果 10周龄时,SHRSP组比WKY组的收缩压明显降低（P〈0.05）;氯沙坦提高血浆AngⅡ水平,降低血浆及脑组织Aldo水平（P〈0.05）。同时,氯沙坦和氨氯地平可降低大脑皮层AT1R蛋白表达（P〈0.05）。结论氯沙坦和氨氯地平干预均可有效延缓血压进展;氯沙坦对SHRSP循环及脑组织肾素血管紧张素醛固酮系统均有抑制作用。     

甲泼尼松对兔急性脊髓损伤后MMP-2、12表达及神经功能的影响

目的探讨兔急性脊髓损伤后应用大剂量甲泼尼松（methylprednisolone）干预基质金属蛋白酶-2、12（MMP-2、12）表达及神经功能的影响。方法家兔随机分为急性脊髓损伤后应用生理盐水对照组（A组）和应用甲泼尼松治疗组（B组）,损伤后不同时间点取材,用HE染色观察损伤脊髓组织病理变化;用免疫组化染色检测MMP-2及Real—TimePCR检测MMP-12的表达变化;采用Tarlov评分评价神经功能。结果HE染色镜检发现脊髓组织病理学改变B组明显轻于A组。A、B两组均发现MMP-2、12的表达,MMP-2、12表达A组〉B组（P〈0．05）。B组神经功能改善优于A组。结论大剂量甲泼尼松能抑制家兔急性脊髓损伤后MMP-2、12表达,促进神经功能恢复。     

丹参注射液对新生鼠缺氧缺血性脑损伤神经细胞的保护作用研究

目的:研究丹参注射液对新生鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)神经细胞的保护作用。方法:复制HIBD动物模型,将60只SD新生鼠随机分为假手术、模型和丹参注射液高、中、低剂量组,在HIBD后48h应用免疫放射分析法测定血清烯醇化酶(NSE)浓度,硫代巴比妥酸法测定血和脑组织丙二醛(MDA)的含量,Western blot检测脑组织转录因子肌细胞增强因子2A(MEF2A)和突触素Ⅰ(Synapsin-1)的蛋白表达量。结果:模型组小鼠HIBD后48h血清NSE、MDA浓度和脑组织MDA含量较假手术组显著升高(P<0.01);丹参注射液治疗后血清NSE、MDA浓度和脑组织MDA含量较生理盐水组明显下降,且呈一定的量效关系(P<0.01)。Western blot检测表明HIBD后48h模型组中MEF2A的蛋白表达量显著高于假手术组(P<0.01);而HIBD后48h模型组Synapsin-1的蛋白表达量显著低于假手术组(P<0.01)。丹参注射液治疗后MEF2A的蛋白表达量明显低于模型组,Synapsin-1的蛋白表达量显著高于模型组,且呈一定的量效关系(P<0.01)。结论:丹参注射液可降低新生鼠缺氧缺血性脑损伤后血清NSE、MDA浓度和脑组织MDA含量,抑制脑损伤后MEF2A基因表达,并抑制Synapsin-1的蛋白表达下调,从而对神经细胞有保护作用。     

改良愈疡方对溃疡性结肠炎模型小鼠抗炎作用机制的研究

目的探讨改良愈疡方对右旋葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的溃疡性结肠炎模型小鼠抗炎作用机制。方法40只雄性C57BL／6小鼠除正常组外,采用口服DSS造模后,按完全随机法分为模型组、治疗组、对照组,每组10只;正常组和模型组均用0．9％氯化钠溶液灌肠,治疗组动物给与中药灌肠,对照组给与柳氮磺胺吡啶灌肠共14d。进行结肠肿瘤坏死因子（TNF）-α水平测定及通过免疫组化检测TNF-α在结肠组织中的表达。结果对照组、治疗组治疗前与模型组基本相同,治疗后治疗组的大便较成形、血便及体质量减轻较不明显,一般情况优于模型组及对照组（P＜0．05）。SS小鼠结肠炎结肠组织中TNF-α较正常组显著增高（P＜0．05）,用中药治疗组则显著降低,且优于对照组（P＜0．05）。同时,在模型组小鼠结肠组织中,TNF—α表达主要见于黏膜和黏膜下层,主要集中在靠近糜烂或溃疡的周边,小血管扩张的周围,也相对增多,治疗组TNF-α阳性细胞明显减少,与模型组及对照组比较均有显著差异（P〈0．05）。结论改良愈疡方对溃疡性结肠炎模型小鼠具有良好的治疗作用,其作用机制是通过降低TNF-α含量。抑制炎症有关。     

多西环素对单侧输尿管结扎大鼠肾组织的影响及可能机制

目的：探讨多西环素对肾间质纤维化的影响及可能机制。方法采用单侧输尿管结扎术（ UUO ）致肾小管间质纤维化大鼠模型。将72只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、多西环素治疗组[8 mg/（ kg·d ）]。手术后7,14,21 d时分别处死各组中6只大鼠,用免疫组化方法观察大鼠肾组织中转化生长因子-β1（ TGF-β1）、基质金属蛋白酶2（ MMP-2）表达情况。行HE及Masson染色评定大鼠肾脏的病理情况。结果模型组各时间点MMP-2表达明显低于同期假手术组（ P〈0.05）,多西环素组各时间点MMP-2表达明显低于同期模型组（ P〈0.05）,多西环素组术后14 d及术后21 d低于术后7 d。模型组各时间点TGF-β1表达明显高于同期假手术组（ P〈0.05）,而多西环素组术后7 d TGF-β1表达明显低于同期模型组,多西环素组术后14 d及术后21 d高于术后7 d。结论多西环素在肾小管间质纤维化的早期对肾脏有保护作用。