日本血吸虫不同时期虫体蛋白质的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）分析，比较日本血吸虫不同发育时期虫体的蛋白质组成。尾蚴、雌虫、雄虫和虫卵各分离出２６、５１、５６和６０条蛋白带，其主带也不相同。雌、雄虫比较有９处蛋白带呈明显差异。日本血吸虫蛋白质组成有期和性的特异性，尾蚴、雌虫、雄虫和虫卵不仅有各自的特异蛋白，而且还有大量相同蛋白带。     

中国大陆日本血吸虫品系的研究 X.成虫蛋白质的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

对中国大陆的安徽、湖北、广西、四川和云南5地日本血吸虫成虫蛋白质组分进行了SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离和比较,结果表明各地虫体蛋白质电泳图谱基本相似,但作银染分析时,广西地区两性虫体的蛋白条带则呈现某些差别。     

南京所见一种裂体吸虫与日本血吸虫形态及生活史比较

用自然环境中钉螺逸出的尾蚴感染小鼠和兔,获得了一种比日本血吸虫小的裂体吸虫。雄虫大小(7.14±0.64)mm×(0.58±0.03)mm,口吸盘较大0.54mm×0.59mm;腹吸盘更大0.65mm×0.68mm,超过虫体宽度,且圆边构造不明显;睾丸4～8个,多为8个,重叠排成两行;背部有密集杵状小棘。雌虫(7.19±1.12)mm×(0.37±0.02)mm,子宫内有虫卵20～80个。雌雄合抱寄生在肠系膜下静脉、肠系膜上静脉、肝内门脉血管和膀胱静脉丛的小静脉和末梢静脉中。虫卵有钩状或环状微侧刺。终宿主小鼠的虫卵开放前期32.6d±1.2d,比日本血吸虫短1.4d。中间宿主钉螺的开放前期比日本血吸虫长1周以上。与钉螺的相容性差,钉螺的感染率3.7%～6.6%,显著低于日本血吸虫的感染率31.7%～46.6%(P值均＜0.01)。这些特性表明该裂体吸虫与日本血吸虫不同。     

日本血吸虫不同时期虫体蛋白质的SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）分析，比较日本血吸虫不同发育时期虫体的蛋白质组成。尾蚴、雄只和虫卵各分离出２６、５１、５６和６０条蛋白带，其主带也不相同。雌、雄虫比较有９处蛋白带呈明显差异．日本血吸虫蛋白质组成有期和性的特异性，尾蚴、雄虫、雄虫和虫卵不仅有各自的特异蛋白，而且还有大量相同蛋白带。     

中国与日本不同地域品系日本血吸虫蛋白组分的SDS-PAGE和EITB分析

目的： 补充观察我国浙江、江西、台湾省和日本山梨的日本血吸虫成虫的蛋白组分, 以及上述４ 地和安徽、湖北、四川、云南省血吸虫与广西省钉螺和日本钉螺抗血清的反应性。方法： 采用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳 （ＳＤＳ－ＰＡＧＥ） 和酶联免疫电转移印迹 （ＥＩＴＢ） 分析。结果与结论： 浙江、江西、台湾省和日本的血吸虫隔离群雄虫及雌虫抗原经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后, 以考马斯亮蓝染色结果分别可见７～１７ 条（江西省和日本的血吸虫雄虫条带显色很淡） 及１～６ 条显色带;银染结果分别可见１４～２３条及４～１９ 条（台湾省的血吸虫雌虫仅见１条极淡的）显色带。台湾省血吸虫雄虫与浙江省血吸虫雄虫谱型相似, 但在８１ ｋＤａ以上组分有所不同, 江西省血吸虫雄虫５４ｋＤａ 条带明显, 日本的血吸虫雄虫不仅条带少, 谱型也与浙江、江西及台湾省的血吸虫各异。ＥＩＴＢ结果： 所试血吸虫成虫与广西省钉螺和日本的钉螺抗血清均产生反应, 证明存在交叉反应抗原组分。所试血吸虫成虫与广西省钉螺和日本的钉螺间存在共同抗原组分。     

日本血吸虫酚氧化酶的电泳及酶活性的研究

目的：观察日本血吸虫成虫酚氧化酶（phenol oxidase,PO)的酶谱及其活性，方法：将42d活成虫置含0．05％戊巴比妥钠的RPMI1640培养基中23℃孵育8h后，分别收集雌，雄成虫，匀浆，超声粉碎，高速离心取上清（含PO），再进行聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）及酶染色后其酶谱；同时在紫外分光光度计下检测前后2个时点的A488(A1,A2），PO活性相对值＝（A2－A1）／(min.mg样品蛋白），其活性值用每分钟每毫克蛋白A488变化值表示。设立酚酶抑制剂（丙烯式硫脲）组，在该组成虫匀浆上清中预先加入丙烯基硫脲以观察其对酚氧化酶活性的抑制效果。结果：雌虫及雄虫均表现为迁移率相同的一条主带，但雄虫的酶带显示反应比雌虫弱。日本血吸虫雌虫及雄虫的酚氧化酶相对活性分别为0.165min^1.mg^-1和0．0805min^1.mg^-1；加入酚酶抑制剂后，酶活性被明显抑制，终浓度为5mmol的丙烯基硫脲对成虫酚酶活性的抑制率为85．03％，当丙烯基硫脲终浓度达25mmol时，酚酶活性被安全抑制，结论：不仅雌性成虫含有日本血吸虫酚氧化酶，而且雄性成虫也含有少量的酚氧化酶且两者酶分子相同，雄性成虫含有的少量酚氧化酶的生理意义有待于进一步研究。     

运用Quantity One 软件分析日本血吸虫不同发育时期蛋白组分差异

目的应用Quantity One软件进行图像分析,阐明日本血吸虫不同发育时期蛋白组分的差异。方法以日本血吸虫尾蚴人工感染昆明鼠,分别收集感染前和感染后第8、12、16、20、24天和第28天虫体,用SDS-PAGE平行分离各时点虫体蛋白,用图像分析软件Quantity One4.4比较分析其区带差异。结果图像分析软件Quantity One4.4分析7个不同时点的虫体蛋白区带显示:区带数在0、8、12、16、20、24d和28d虫体中分别为27、30、33、32、31、36条和29条,各时点虫体特异性区带在0、8、12～24d和28d虫体中分别为7、4、8、3条,虫体特异性区带多为低表达量的条带。结论运用图像分析软件能够快速获得日本血吸虫不同发育时期蛋白泳道条带的分析图形,自动计算出蛋白区带数、区带光密度值大小和分子量。     

中国大陆日本血吸虫品系的研究X.成虫蛋白质...

The purpose of the present study was to investigate the SDS-PAGE separation of proteins of the 5 different isolates of Schistosoma japonicum from the mainland of China to determine their similarities and/or differences and to gain additional data which could give an added insight into the degree of relationship. Soluble proteins of freshly sonicated adult worm extract of the 5 different isolates (i.e., Anhui, Hubei, Guangxi, Sichuan and Yunnan) were compared by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The results indicated that no marked difference could be observed among the isolates after gels were stained by Coomassie blue white both male and female worms of Guangxi isolate showed some definite differences in their protein profile, i.e., lack of 50-75 kDa band in male worms and a marked reduction in the quantity of > 110 and 30 kDa bands in female worms as shown by silver stain.     

日本血吸虫与曼氏血吸虫的致病差异

曼氏血吸虫和日本血吸虫是全球范围内两种主要的肠道血吸虫病病原体,所致基本病理均为虫卵引起的肝脏肉芽肿和纤维化,但两者在产卵方式以及肉芽肿的组成细胞等方面均存在明显差异。 目前,我国的血吸虫病研究主要以日本血吸虫病为对象,国外主要以曼氏血吸虫病为对象,而介绍两种血吸虫致病差异的综述较少。 为更好地理解两种血吸虫的致病差异,本文从血吸虫的基因组和进化路径、幼虫迁移、成虫寄生位置及产卵方式、局部组织病理、肉芽肿的形成机制以及肉芽肿的细胞组成等 6 个方面对日本血吸虫和曼氏血吸虫的致病差异进行了综述。     

蚯蚓与日本血吸虫间共同抗原的初步研究

目的初步探讨蚯蚓与日本血吸虫间共同抗原.方法用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析蚯蚓抗原(LtAg)和日本血吸虫成虫抗原(SjAg)的蛋白组分; 并将其蛋白组分分别与日本血吸虫病患者阳性血清和兔抗蚯蚓的免疫血清进行斑点酶联免疫吸附试验、免疫印迹试验.结果 LtAg和SjAg的蛋白组分间存在较多分子量相近的蛋白条带. LtAg抗原分子量在39～90 kDa范围内与日本血吸虫病患者血清的交叉反应尤其明显.SjAg也能与兔抗蚯蚓血清较好的结合.结论实验结果提示,LtAg与SjAg之间存在着至少3种具有免疫活性的分子量相近的蛋白组分.     

日本血吸虫卵壳蛋白基因的克隆与表达

目的：在体外高效表达具有生物学和免疫学活性的日本血吸虫卵壳蛋白，探讨其作为抗卵免疫靶抗原的可能性。方法：采用PCR技术扩增日本血吸虫卵壳蛋白基因，将其克隆到pcDNA3质粒，在HeLa细胞中高效表达，对表达产物进行鉴定和免疫原性研究。结果：特异扩增日本血吸虫卵壳蛋白基因编码序列（618bp），构建了真核表达质粒pcDNA3／ESG，在HeLa细胞中高效表达卵壳蛋白，其表达量高达24．4％，分子量约为22kDa，dot－ELISA和Westernblot分析显示，表达蛋白能与感染兔血清及虫卵免疫血清产生较强的免疫反应；此外，表达蛋白还能特异刺激经虫卵免疫后的BALB／c小鼠脾细胞增殖，其转化率达44．57％。结论：成功地构建重组质粒pcDNA3/ESG, 并在HeLa 细胞中高效表达卵壳蛋白基因, 表达的重组蛋白具有较强的免疫活性。     

日本血吸虫中国大陆株62kDa重组抗原的表达、纯化及鉴定

目的：获得并鉴定日本血吸虫62kDa重组抗原。方法：将Sj62/pGEX-1 λT／TG2克隆菌用IPTG诱导表达,经超声粉碎,离心后取上清过GS4B柱,用还原型谷胱甘肽洗脱液洗脱后获得纯化的rSj62/26GST重组融合蛋白,用Thrombin酶切后获得纯化的rSj62重组蛋白,并对重组蛋白进行SDS－PAGE和Western blotting鉴定。结果：重组蛋白纯度较高,且可被血吸虫感染的鼠血清识别。结论：用重组的方法获得了与天然虫源蛋白性质相似的重组抗原蛋白。     

日本血吸虫线粒体相关蛋白的基因克隆及特性鉴定

[目的 ]探索研制血吸虫病疫苗的新路径 ,对日本血吸虫线粒体相关蛋白进行基因克隆及特性鉴定。[方法 ]分析本室筛选日本血吸虫成虫cDNA文库获得的 1个cDNA片段 (Sj338 2 4)的开读框序列 ,在其上下游分别设计引物A和B ,并以该cDNA片段为模板进行PCR扩增后 ,将该片段重组于pGEM T中并进行DNA测序鉴定及检索。再经酶切后将该基因片段亚克隆入表达载体pGEX 6P 1,并进行蛋白表达、纯化及抗原性鉴定。 [结果 ]该目的基因PCR产物全长共 487bp ,其开读框由 45 9bp组成 ,编码 15 3个氨基酸经残基组成的多肽。DNA序列同源性分析发现Sj338克隆基因与人及褐鼠的线粒体外膜蛋白的部分编码基因较高度同源。重组质粒pPEX 6P 1 Sj338能高效融合表达 ,理论蛋白的分子量为 17kDa。SDS PAGE和Westernblotting检测结果表明 ,重组蛋白rSj338具有良好的抗原性。 [结论 ]Sj338可能为日本血吸虫线粒体相关蛋白的基因 ,重组蛋白有望成为新的疫苗候选分子。     

日本血吸虫精子发育与支持细胞超微结构的观察

本文观察日本血吸虫雄虫睾丸精子发育及支持细胞的超微结构。首次报道血吸虫精子发育及日本血吸虫生殖细胞的结构；精原细胞、精母细胞的特点。根据精细胞的形状、核质浓缩程度、线粒体的分布、顶体样结构的形成、残余体的结集与消失及周身微管的存在等特征，将精细胞分为Sda、Sdb、Sdc、Sdd4笄型。它们镶嵌于支持细胞胞质之间，构成十分复杂的画面。文中介绍了顶体样结构及残余体的内容物，并对其由来与性质进行了讨论。     

日本血吸虫Sjp50重组蛋白用于免疫诊断的研究

目的 克隆和表达日本血吸虫免疫素Sjp50的编码基因，初步研究其免疫反应性，方法 根据EST测序的结果设计引物，从含有免疫素基因片段的克隆中扩增得到该编码基因，亚克隆人原核表达载体pGEX4T-1中表达，然后用ELISA方法初步检测重组蛋白的免疫反应性。结果 成功克隆和表达了日本血吸虫Sjp50基因。该重组蛋白用于血吸虫抗体的ELISA检测，在动物实验中检测特异性和敏感性分别为94.12%和76.67%，非治疗组兔体内的抗体在感染后9-11周上升到高水平，并在感染后21周仍维持在高水平，而治疗组兔血清中抗SiFp50抗体水平在治疗后11周迅速下降至感染前抗体水平。用于血吸虫病人血清中的抗体检测的特异性为98.30%，急性病人和慢性病人检测的敏感性分别为95.20%和63.20%。结论 获得了Sjp50的重组蛋白，该蛋白能被日本血吸虫病人的血清所识别，且在动物实验中其抗体水平在药物治疗后11周降至感染前的水平，具有诊断现症感染病人和疗效考核的潜能。     

中国大陆日本血吸虫品系的研究：Ⅰ,幼虫—钉螺的相容性

本文进行了安徽贵池、湖北监利、广西桂平、四川天全、云南洱源及福建福清6地日本血吸虫和钉螺的人工交互感染实验。结果表明各地日本血吸虫与钉螺呈现不同的相容性。湖北、安徽两地的血吸虫幼虫与钉螺的相容性无差别。湖北、安徽两地血吸虫幼虫很难在云南、四川两地钉螺体内发育成熟逸出尾蚴:反之,云南、四川两地血吸虫幼虫与湖北、安徽两地钉螺却可相容。广西的血吸虫幼虫或钉螺与安徽的钉螺或幼虫亦可交互感染而相容,但尾蚴逸出前期均较感染本地钉螺的为长;广西的血吸虫幼虫与四川、云南、福建的钉螺并不相容。福建的钉螺与安徽、云南两地血吸虫幼虫均可相容。本文还提出了在研究日本血吸虫与钉螺的相容性时,必须包括逸出尾蚴的钉螺感染率和尾蚴逸出前期的数据,才能正确评价两者的相互关系。