杂交瘤细胞冻存和复苏的新方法

随着杂交瘤细胞触合技术和检测方法敏感性的提高,一次成功的触合,可以产生上百个阳性克隆,此时要了解单抗的性质和用途是困难的。因此,必须解决短期内大批样品的冻存和复苏问题,否则就会丧失若干有用的杂交瘤。近年来,国内外的一些学者,企图解决这个问题,都因复苏方法不理想,结果不满意。在前人工作的基础上,我们利用HF塑料薄膜     

介绍一种有效的拯救小鼠杂交瘤的方法:脾内接种法

在小鼠杂交瘤的制备、传代过程中,常遇到一些棘手问题;小到影响实验进展,大到细胞丢失:其中常见的是 1.污染,包括支原体、细菌及真菌污染。在杂交瘤未冻存前:这些污染会造成很大的损失。2.有些杂交瘤复苏后不易存活。3.个别情况下杂交瘤增殖不良,不易向24孔板内扩增。腹腔接种在一定程度上可以解决这一问题,但常规方法要求细胞数量较     

杂交瘤与单克隆抗体

1975年Kohler与Milstein证明了正常抗体分泌细胞与骨髓瘤细胞触合而成的单克隆能够长期存活。“杂交瘤”方法使血清学进入了一个新的精确的时代。目前,杂交瘤技术已十分稳定,常用的方法有多种。在本文中,作者总结了主要的方法,试图为选择这些方法提供依据。     

杂交瘤细胞系复苏方法的探讨

淋巴细胞杂交瘤技术开展以来,人们获得越来越多的分泌不同特性单克隆抗体的杂交瘤细胞系,一般冻存于液氮罐中,当在复苏时,常常遭遇失败,直接影响后续工作。究其原因,如冻存细胞数量少,生长状态不良、细胞污染或补充液氮不及时等;此外,复苏时培养基条件的改变(换用另一批号小牛血清)及复苏方法不得当等也是原因。本     

杂交瘤细胞的小鼠腹腔复苏法

<正> 已经建立的杂交瘤细胞,常冻存于液氮,应用时再作复苏传代。传统的复苏方法,程序繁琐,耗费试剂,且容易造成污染。为此,我们对杂交瘤细胞在小鼠腹腔内直接复苏进行了探索,简介如下。 一、方法: (一)将抗-HBs/a杂交瘤细胞(本室建立)从液氮中取出,立即置37℃水箱,待刚好解冻后(约1分钟),全部移入50ml塑料离心     

介绍一种有效的拯救小鼠杂交瘤的方法：脾内接种法

在小鼠杂交瘤的制备、传代过程中，常遇到一些棘手问题；小到影响实验进展，大到细胞丢失：其中常见的是1．污染，包括支原体、细菌及真菌污染。在杂交瘤未冻存前，这些污染会造成很大的损失。2．有些杂交瘤复苏后不易存活。3．个别情况下杂交瘤增殖不良，不易向24孔板内扩增。腹腔接种在一定程度上可以解决这一问题，     

杂交瘤细胞的复苏及分泌单克隆抗体稳定性的观察

单克隆抗体(McAb)杂交瘤技术已在医学生物学各个领域中得到广泛应用。为了解杂交瘤细胞冻存一般时间复苏后产生McAb的稳定性,我们复苏了30株杂交瘤细胞,并用其中一部分细胞株制备McAb腹水。本文就杂交瘤细胞复苏后的生长情况及细胞冻存后分泌McAb的稳定性等进行了探讨。     

杂交瘤细胞系直接在小鼠体内复苏的探索

建株的杂交瘤细胞系一般冻存于液氮,待应用时再作复苏传代。传统的复苏方法易受污染导致失败。为此,我们对杂交瘤细胞系直接在小鼠体内复苏进行了摸索。简介如下: 将抗HBs/a杂交瘤细胞(本室建株的细胞)系从液氮中取出,立即于37℃水箱解冻(约1分钟)后,全部移入50毫升塑料离心管中,加无血清1640或GKN溶液50毫升洗涤,1000转/分     

一种短期保存杂交瘤细胞的方法

用-70℃超低温冰箱保存杂交瘤细胞,可获得短期良好效果:六个月内试验的八株杂交瘤细胞均能成功复苏。八月后存活率开始下降,十一月时成功率明显减低,十五个月时只有个别杂交瘤细胞可存活。凡能复苏的杂交瘤细胞,均保留分泌单克隆抗体的特性,但部分的     

半固体培养基法制备单抗的可行性研究

目的建立稳定的甲基纤维素半固体培养基一步法筛选和克隆化杂交瘤细胞的方法。方法常规细胞融合后,用甲基纤维素半固体培养基重悬细胞沉淀,通过优化甲基纤维素半固体培养基中甲基纤维素、血清及L-谷氨酰胺三种成分的浓度,建立稳定高效的杂交瘤细胞克隆化方法。并进行有限稀释法和甲基纤维素半固体培养基法筛选杂交瘤细胞的对照实验。阳性克隆扩大培养,ELISA检测后冻存,再次复苏后ELISA检测呈阳性为稳定杂交瘤细胞株。结果甲基纤维素三种浓度中,甲基纤维素浓度1．0％和1．2％时获得的杂交瘤细胞团个数约为甲基纤维素浓度1．25％时的2倍。而甲基纤维素浓度1．2％时细胞团固定效果较甲基纤维素浓度1．0％更好。通过对梯度稀释的SP 2／0细胞培养后,选择半固体培养基中使用的胎牛血清浓度（25％）,在半固体培养基中含4mmol／L L-谷氨酰胺比含2mmol／L L-谷氨酰胺得到多近一倍的杂交瘤。得到的5株阳性杂交瘤在扩大培养、冻存复苏后抗体分泌稳定,得到5株稳定阳性杂交瘤细胞株。有限稀释法和甲基纤维素半固体培养基法筛选杂交瘤细胞对照实验显示半固体培养基法可节省一半时间。结论建立了稳定的甲基纤维素半固体培养基一步法筛选和克隆化杂交瘤细胞的方法。该法缩短了克隆化的时间,节省了人力和材料．不需要添加饲养细胞和细胞因子,是一种稳定高效的杂交瘤细胞克隆化方法。     

杂交瘤冻存的简便快速方法

本文介绍两种在96孔微培养板内冻存和复苏杂交瘤细胞的简便快速方法,可提高对杂交瘤的管理水平,以避免细胞的丢失。具体方法是:用福尔马林杀死的嗜肺军团菌(OLDA株)或鹌鹑肌细胞,分别免疫Balb/c小鼠。杀鼠取脾细胞,与Sp 2/O—Ag14小鼠浆细胞瘤细胞杂交得LD 8 a 2—3 D 8-1 B 7和MF 2-5 A6杂交瘤。通过间接免疫荧光试验检测杂交瘤所分泌的抗     

腹水杂交瘤细胞的直接冻存法与复苏效果的观察

在单克隆抗体的研究中,目前有关杂交瘤细胞的冻存均是采用传统体外培养的细胞进行。实验表明,这种冻存和复苏后的杂交瘤细胞的活力尚欠理想,尤其一些经数次克     

抗人IgG单克隆抗体的研究——Ⅰ.分泌抗人IgG单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

本文报道用人IgG免疫BALB/c 小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞系SP2/O融合,获得 3株分泌抗人 IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为 SIBPH1、SIBPH2和 SIBPH3。现重点报道SIBPH1株。用琼脂双扩散和免疫电泳等方法,证实该株杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体,对IgG具有良好的专一性,注入同系小鼠腹腔可诱生含较高效价抗IgG的腹水(双扩散1:256～512),单克隆抗体属小鼠IgG_1亚类,该杂交瘤细胞株经组织培养传代逾半年,冻存12个月,复苏良好,分泌抗IgG性能稳定。本文还对杂交瘤细胞建株的若干问题进行了讨论。     

体外免疫的小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合条件的观察

<正> 在淋巴细胞杂交瘤技术中采用体外免疫的方法,不仅可以节省抗原,而且可以期望产生数量较高的特异性杂交瘤。在制备单克隆抗体的过程中,也可以解决某些抗原不能对人体进行免疫的问题。国外曾报告过这方面的工作,本文在此基础上进一步观察了用体外免疫的淋巴细胞进行融合的条件。     

不同复苏压力对颅脑创伤合并非控制性失血性休克大鼠血流动力学及存活率的影响

目的探讨颅脑创伤合并非控制性失血性休克大鼠彻底止血前的理想复苏压力。方法制作大鼠颅脑创伤合并非控制性失血性休克模型,观察彻底止血前不同复苏压力(50 mmHg、60 mmHg、70 mmHg、80 mmHg和90 mmHg)对输液量、失血量、血流动力学、大脑灌注以及动物存活率的影响。结果不同复苏压力对颅脑创伤合并非控制性失血性休克的失血量有明显的影响,随着复苏压力的增加,大鼠的失血量、输液量逐渐增加,当复苏压力大于80 mmHg时,其失血量和输液量显著高于70 mmHg。当复苏压力小于70 mmHg时,随着复苏压力增加,脑含水量和血流量逐渐增加,70 mmHg复苏组脑含水量接近假手术组,而80 mmHg和90 mmHg组的血流量反而下降。血压维持在50 mmHg、60 mmHg、70 mmHg动物的存活时间和存活率明显高于常压(80 mmHg和90 mmHg)复苏组;50 mmHg、60 mmHg、70 mmHg组的血流动力学指标明显得到改善。结论对于颅脑创伤合并非控制性出血性休克,最理想的复苏压力是70 mmHg,它能改善血流动力学,降低脑水肿,提高动物存活率。     

抗人体肝癌膜表面抗原抗商陆毒蛋白双特异性单克隆抗体的制备及其性质

能同时针对两种抗原决定簇的抗体,即双特异性抗体,最初可由化学拆合的方法制得,近来,杂交瘤技术的发展已使我们有可能得到分泌双特异性的单克隆抗体的细胞株。能分泌抗人体肝癌细胞表面膜抗原和商陆毒蛋白双特异性单克隆抗体的二个杂交瘤细胞株DQ_(1a-     

大鼠第三脑室一氧化氮合酶阳性触液神经元的分布及与催产素的共存

应用 NADPH-d组织化学方法观察了大鼠第三脑室一氧化氮合酶阳性触液神经元的分布及其形态 ,并结合免疫组织化学技术研究了一氧化氮合酶与催产素在第三脑室触液神经元内的共存。结果显示 :在视前区至室间核后大细胞亚核平面的第三脑室室壁均有一氧化氮合酶阳性触液神经元分布 ,呈自前向后 ,由腹侧部渐向背侧部过渡迁移的特征。一氧化氮合酶阳性触液神经元绝大部分为大细胞型标记神经元 ,胞体呈卵圆形、梭形、多角形与倒置梨形。它们位于脑室管膜内、室管膜下 ,或距室管膜有一定距离处 ,但有突起伸至第三脑室。第三脑室催产素免疫阳性触液神经元的形态及分布与一氧化氮合酶阳性触液神经元基本相似 ,两者高度共存。催产素 /一氧化氮合酶双标神经元 ,约占阳性细胞总数的 90 .9%。上述三种阳性触液神经元与邻近核团关系密切 ,尤其与室旁核之间有很多的阳性纤维互相交错。本研究结果表明 ,第三脑室有大量的一氧化氮合酶与催产素免疫阳性神经元分布 ,并且高度共存 ,从而建立了催产素的下丘脑 -脑脊液 -垂体神经体液调节环路的结构基础 ,对生殖与性行为起着重要的调控作用     

杂交瘤细胞P35染色体丢失与其分泌单克隆抗体的特性

单克隆抗体 (mAb)具有特异性强、均一性好、可大量生产等诸多优点 ,已被广泛用于各种实验研究。但分泌mAb的杂交瘤细胞长期保存于液氮中 ,其染色体会不会丢失 ?丢失染色体的杂交瘤细胞可否影响其分泌mAb的特性 ?尚未见有关深入的研究。为此 ,我们将在液氮中保存了 10年 (1992～2 0 0 2年 )的分泌抗人肺腺癌mAb的杂交瘤细胞P3 5,进行复苏并传代培养后 ,检查了其染色体的变化和分泌mAbN3 5的能力 ,并鉴定了该株mAb的部分特性。1　材料和方法1.1　材料　分泌抗人肺腺癌细胞GLC 82mAb的杂交瘤细胞P3 5由本室于 1992年建株 ,在液氮中冻存已…     

人-人杂交瘤:分泌人源性抗链球菌溶血素“O”单克隆抗体细胞系的建立

用人骨髓瘤细胞株与人脾细胞在PEG促进下进行人—人杂交,育选出能分泌抗链球菌溶血素“0”McAb杂交瘤细胞系S-19和S-22两株,共传了50多代。历时5个多月,冻存后复苏仍继续分泌链球菌溶血素0抗体。较为稳定。细胞染色体为68～76条,符合于人型杂交瘤。     

抗人肺腺癌二次杂交瘤BF19的制备

采用二次融合技术制备二次杂交瘤的研究刚刚兴起,目前国内外已有文献报道制备二次杂交瘤获得双功能单抗;但此项工作还不成熟,其制备方法尚处于摸索中。本研究用8-Ag诱导抗人肺腺癌杂交瘤F19细胞获得HGPRT缺陷细胞株F19-HATS,然后与人肺腺癌细胞免疫小鼠脾细胞进行二次融合制备二次杂交瘤。这对人肺癌双功能单抗的研究和肺癌导向药物治疗可能有一定意义。