长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录本1及其在肿瘤转移中的作用

肺腺癌转移相关转录本1（MALAT1）是一种长度约8 000 nt的长链非编码RNA（lncRNA）,其在3＇端构成＂三螺旋＂结构,保护自身免遭降解,在功能上一定程度取代了多聚腺苷酸[poly（A）]。MALAT1的表达受到TAR DNA结合蛋白43（TDP-43）、DiGeorge综合征危象区基因8蛋白（DGCR8）及后垂体激素等多个不同层面的调控。MALAT1介导包括丝氨酸/精氨酸（SR）蛋白向具有转录活性的基因位点聚集,从而控制选择性剪切;也可导致生长基因改变核内位置,有效激活转录单元。此外,癌细胞中MALAT1呈高水平表达,并与Wnt/β-连环蛋白信号通路、Bcl-2家族等密切关联,是癌细胞侵袭和转移的重要因素。同时,MALAT1通过MYB相关蛋白B（B-MYB）和异质核糖核蛋白C（hnRNP C）影响细胞周期和有丝分裂,造成癌细胞增殖。lncRNA无论作为癌症诊断和预后标志物,还是新型治疗靶点,都将为癌症的诊断和治疗带来新的突破口。     

肺腺癌患者血清长链非编码RNA miR155HG表达及意义

目的:明确血清长链非编码RNA(LncRNA) miR155 Host Gene(LncRNA miR155HG)在肺腺癌(LUAD)患者血清中的表达,探讨其表达水平与临床特征的相关性,评价血清中LncRNA miR155HG作为LUAD生物标志物的可能性及优越性。方法:选择LUAD患者38例,留取患者空腹状态下血清4 ml。同时期留取健康对照组血清25例。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测LncRNA miR155HG在血清标本中的表达水平。实验中以GAPDH作为内参照。结果:lncRNA miR155HG在LUAD患者血清中的表达水平较健康对照组高(P<0.0001)。LncRNA miR155HG表达水平与LUAD临床特征如年龄、性别、肿瘤直径、淋巴结转移情况、远端转移情况等无相关性(均P>0.05)。LncRNA miR155HG作为LUAD诊断生物标志物时,ROC曲线下面积、灵敏度及特异度分别为0.8105,91.56%、70.55%。生存分析结果显示,高表达患者预后优于低表达患者,但差异无统计学意义(均P> 0.05)。结论:血清LncRNA...     

长链非编码RNA RAB11B-AS1在胶质瘤中的表达及预后价值研究

目的:检测长链非编码RNA(lncRNA) RAB11B-AS1(RAB11B-AS1)在脑胶质瘤中的表达特征,分析其在不同临床病理特征中的表达差别,探讨其预后价值。方法:应用生信分析数据库(GEPIA)对RAB11B-AS1的表达特征(163例胶质瘤、207例正常脑组织)进行预测。选择68例确诊为脑胶质瘤并行手术治疗的患者作为研究对象,留取术后肿瘤组织,选择68例因脑出血行手术治疗后留取的边缘正常脑组织作为对照。选择人脑胶质瘤细胞株U87和T98G,选择人脑正常胶质细胞株HEB。应用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测RAB11B-AS1的表达,应用免疫组化EnVision检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果:GEPIA预测到RAB11B-AS1在胶质瘤中的表达可能升高。脑胶质瘤术后组织中RAB11B-AS1的表达明显高于正常脑组织(P=0.0001)。胶质瘤中RAB11B-AS1表达在不同肿瘤最大径、WHO分级、有无坏死方面比较差异有统计学意义(均P<0.05)。胶质瘤中RAB11B-AS1与PCNA具有正相关性(r=0.62,P=0.0341)。生存分析显示RA...     

基于长链非编码RNA数据构建肺腺癌预后风险评估模型

目的 肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)预后相关长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)标志物的筛选及预后风险模型的构建.方法 下载癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库中LUAD患者的lncRNA表达数据和相关临床数据,...     

长链非编码RNA MALAT1对胰腺癌细胞系PANC-1转移的影响

目的:探讨长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录本1（MALAT1）在胰腺癌细胞系中的表达及其对PANC-1转移的影响。方法:应用荧光定量PCR检测4种胰腺癌细胞系中MALAT1的表达水平,通过siRNA下调PANC-1的MALAT1水平,应用贴壁、离壁实验和Transwell迁移、侵袭实验观察PANC-1的贴壁、离壁、迁移和侵袭能力,应用Western blotting检测PANC-1的Vimentin、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平。结果:4种胰腺癌细胞系中MALAT1差异性表达,PANC-1细胞系中表达最高。下调MALAT1的表达后,PANC-1的Vimentin、MMP-2和MMP-9的蛋白水平显著下降（P<0.01）,贴壁、离壁、迁移、侵袭能力均显著减弱（P<0.01）。结论:下调MALAT1通过降低Vimentin、MMP-2和MMP-9的表达可减弱胰腺癌细胞系PANC-1的转移能力。     

长链非编码RNA PVT1对非小细胞肺癌细胞增殖和迁移能力的影响及其机制研究

目的 通过上调或者下调PVT1的表达，分析探究长链非编码RNA PVT1在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖和迁移能力中的作用及机制，并在此基础上运用RNA-Seq分析PVT1的靶向基因，说明其作用机理。 方法 ①通过TCGA数据库(The Cancer Genome Atlas)分析NSCLC细胞中PVT1的表达与NSCLC患者生存时间之间的关系；②探究PVT1上调或下调对NSCLC细胞增殖及迁移能力的影响；③运用RNA-seq技术探究PVT1的下游靶基因，然后运用siRNA沉默该基因，探究此基因对NSCLC细胞增殖和迁移能力。 结果 ①PVT1的高表达与肺癌患者存活时间减少有显著关系(P<0.001)；②PVT1高表达可以显著促进肺癌患者肿块体积的增大，并且与肿瘤分期和淋巴结转移程度密切相关(均P<0.05)；③过表达PVT1可以促进NSCLC细胞的增殖及迁移；④用Si-RNA下调PVT1可以抑制NSCLC细胞的增殖及迁移；⑤PVT1下调会使LATS2的表达水平显著升高。 结论 PVT1通过表观调控LATS2促进NSCLC细胞增殖和迁移能力。      

敲减长链非编码RNA ATB抑制胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭

目的 采用shRNA ATB敲减胶质瘤U87细胞中ATB后,研究其对人胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 本研究采用实时定量PCR(qRT-PCR)方法检测ATB在人胶质瘤细胞系U87与正常人脑胶质细胞HEB中的表达情况.并在此基础上构建了ATB表达载体shRNA ATB 质粒,利用其转染人胶质瘤U87细胞株,获取低表达ATB的U87细胞.应用MTT法检测敲减ATB后对U87细胞增殖的影响;应用细胞克隆实验检测敲减ATB后对U87细胞克隆增殖能力的影响;应用Transwell实验检测敲减ATB后对U87细胞迁移和侵袭能力的影响.结果 qRT-PCR结果显示,与正常人脑胶质细胞HEB相比,人脑胶质瘤细胞系U87中ATB 表达明显上调(P<0.01);与shRNA对照组相比,转染了shRNA-ATB实验组能显著减少ATB 水平(P<0.01);细胞克隆实验显示shRNA-ATB实验组细胞克隆形成能力较shRNA对照组明显降低(P<0.01);MTT结果表明敲减细胞内ATB后细胞增殖的速率明显低于shRNA对照组(P<0.01).此外,Transwell实验进一步验证了敲减胶质瘤U87细胞中的ATB后,细胞迁移和侵袭能力明显受到抑制(P<0.01).结论 靶向敲减U87细胞中的ATB后能够抑制其增殖、迁移和侵袭,表明ATB基因可能是胶质瘤患者的潜在治疗靶点.     

长链非编码RNA PAPPA-AS1在人肺腺癌细胞铂类耐药中的作用

目的: 研究长链非编码RNA（long noncoding RNA,lncRNA）PAPPA-AS1在人肺腺癌细胞铂类耐药中的作用,并初步探讨其可能的调控机制。方法: 采用RNA测序（RNA-seq）技术检测人肺腺癌细胞A549及其铂类耐药细胞中lncRNA和mRNA的差异表达谱;qRT-PCR检测lncRNA PAPPA-AS1在A549/DDP和A549/NDP细胞中的表达水平;利用siRNA技术下调铂类耐药人肺癌细胞中PAPPA-AS1的表达,CCK-8实验检测肺腺癌细胞对铂类药物的敏感性;克隆形成实验检测细胞的增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡分布;蛋白质印迹法检测Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白在A549/DDP和A549/NDP细胞中的表达水平。 结果： 与亲代敏感细胞A549相比,lncRNA PAPPA-AS1在A549/DDP和A549/NDP细胞中呈高表达;与对照组比较,si-PAPPA-AS1组的肺腺癌细胞对铂类药物的敏感性增强,细胞增殖活力下降,细胞凋亡率增加（P均<0.05）;与对照组比较,si-PAPPA-AS1组的细胞中Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9蛋白表达明显升高,磷酸化PI3K、Akt和mTOR蛋白表达明显降低。结论： 下调PAPPA-AS1可以通过抑制PI3K/Akt信号通路逆转肺腺癌细胞对铂类药物的抵抗性。     

GPC5基因在肺腺癌细胞系中的功能研究

目的 研究GPC5基因在肺腺癌细胞系中的表达情况及其对肺腺癌细胞系生物学行为的影响.方法 采用逆转录PCR (RT-PCR)、实时定量PCR (qRT-PCR)以及Western blot分析肺腺癌细胞系中GPC5基因mRNA及蛋白表达情况;构建GPC5过表达载体及干扰载体,通过转染构建GPC5过表达细胞系及GPC5沉默细胞系;利用CCK-8法分析肺腺癌细胞系生长情况;通过流式细胞术检测肺腺癌细胞系的周期及凋亡变化.结果 检测了GPC5基因在4株肺腺癌细胞系(A549、H1299、H358和H1975)和1株肺正常上皮细胞系(HBE)中的mRNA表达情况,发现与HBE细胞系相比,GPC5基因在A549细胞系中呈低表达,在H1299细胞系中高表达,同时蛋白检测结果与mRNA水平一致;A549细胞中过表达GPC5基因可抑制细胞生长,引起细胞周期阻滞;在H1299细胞中干扰GPC5基因表达促进细胞生长,促进细胞周期;在过表达和干扰细胞模型中均未发现GPC5基因对细胞凋亡的显著影响.结论 GPC5基因可以对肺腺癌细胞系的生物学行为产生影响,可能是肺腺癌的抑癌基因.     

LncRNA UNC5B-AS1对胶质母细胞瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响及与microRNA-199的关系

目的 探究长链非编码RNA UNC5B-AS1（LncRNA UNC5B-AS1）对胶质母细胞瘤（GBM）细胞增殖、迁移、侵袭的影响及与microRNA-199（miR-199）的关系。方法 体外培养GBM细胞系U251,分为对照组、空载组、抑制组及过表达组。对照组细胞不做处理;空载组、抑制组、过表达组分别采用空载质粒、si-LncRNA UNC5B-AS1、过表达LncRNA UNC5B-AS1载体转染GBM细胞系U251。qRT-PCR检测LncRNA UNC5B-AS1、miR-199的表达;CCK-8法、划痕实验、Transwell实验分别检测U251细胞增殖、迁移及侵袭能力;双萤光素酶法检测LncRNA UNC5B-AS1与miR-199的靶向作用;Western blotting检测PI3K/Akt通路蛋白的表达。结果 与对照组、空载组比较,抑制组LncRNA UNC5B-AS1降低（P <0.05）,miR-199升高（P <0.05）,过表达组LncRNA UNC5B-AS1升高（P <0.05）,miR-199降低（P <0.05）。与对照组、空载组比较,抑制组细胞活力指数、划痕愈合率、细胞侵袭数、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白相对表达量降低（P <0.05）,过表达组细胞活力指数、划痕愈合率、细胞侵袭数、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白相对表达量升高（P <0.05）。双萤光素酶实验结果显示,LncRNA UNC5B-AS1与miR-199-mimics基因上存在结合靶点。结论 LncRNA UNC5B-AS1在GBM细胞中高表达,抑制LncRNA UNC5B-AS1能够抑制GBM细胞的增殖、迁移、侵袭作用,其作用机制可能与靶向调控miR-199和调节PI3K/Akt通路有关。     

UNC5B-AS1在胃癌中差异表达的临床意义及对胃癌细胞活力和迁徙的影响

本文旨在研究长链非编码RNA UNC5B-AS1在胃癌中差异表达的临床意义及其对胃癌细胞活力和迁徙的影响。从TCGA和GEO数据库中筛选出所有差异表达的mRNAs和lncRNAs,通过qRT-PCR检测mRNA水平UNC5B-AS1在胃癌中的差异表达;CCK-8实验检测UNC5B-AS1表达对胃癌细胞增殖的影响;划痕实验检测UNC5B-AS1对胃癌细胞迁移的影响。结果显示,相较于癌旁组织,UNC5B-AS1在人胃癌组织中表达显著下调,但胃癌患者的总生存期无显著影响,高表达UNC5B-AS1的胃癌患者无复发生存期较差,且相对于Ⅰ期胃癌患者,Ⅱ-Ⅳ期的胃癌患者高表达UNC5B-AS1,异常表达的UNC5B-AS1对胃癌细胞的增殖无显著影响,然而敲降UNC5B-AS1,胃癌细胞的迁移能力显著增加;过表达UNC5B-AS1,胃癌细胞的迁移能力显著抑制。结果推测UNC5B-AS1可作为评价胃癌复发和转移的相关标志物和潜在的治疗靶点。     

lncRNA MNX1-AS1通过调控miR-218-5p影响非小细胞肺癌细胞的增殖、凋亡及迁移

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)MNX1-AS1通过调控miR-218-5p的表达对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法qRT-PCR检测MNX1-AS1和miR-218-5p在肺癌细胞系及肺正常上皮细胞系中的表达;采用双荧光素酶报告基因实验和RNA pull down实验验证MNX1-AS1和miR-218-5p之间的靶向关系;干扰A549细胞中MNX1-AS1和miR-218-5p的表达后,MTT、流式细胞术和Transwell实验检测MNX1-AS1靶向miR-218-5p对癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。结果与肺正常上皮细胞系相比,肺癌细胞系中MNX1-AS1表达升高,miR-218-5p表达降低(P＜0.05);荧光素酶报告基因实验显示,MNX1-AS1可与miR-218-5p结合导致荧光素酶活性显著降低(P＜0.05);RNA pull down实验证实miR-218-5p能特异性结合MNX1-AS1(P＜0.05);抑制A549细胞中MNX1-AS1的表达后,miR-218-5p水平上调,细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著降低,凋亡率显著升高;与MNX1-AS1抑制剂组相比,共抑制MNX1-AS1和miR-218-5p的细胞增殖、迁移、侵袭能力升高,凋亡率下降(P＜0.05)。结论MNX1-AS1可以通过靶向下调miR-218-5p的表达影响非小细胞癌的增殖、凋亡、迁移和侵袭。     

MUC1、MUC6在Barrett食管及食管腺癌中的表达及意义

目的:通过对人Barrett食管(BE)、食管腺癌(EA)、进行MUC1、MUC6的检测,揭示上述2种因子在BE、EA发生发展中的作用及临床意义。方法:经胃镜、病理确诊的BE患者50例,取其粘膜作为BE组,取胃镜活检或手术切除经病理确诊的EA标本25例,作为EA组。分别取正常食管鳞状上皮20例作为正常对照组。进行免疫组化染色观察各组标本中MUC1、MUC6蛋白的表达情况,并进行组间比较。结果:①BE组MUC1的表达高于正常食管鳞状上皮组(P<0.01),而低于EA组(P<0.01);BE组MUC6表达高于正常食管鳞状上皮组(P<0.01),且高于EA组(P<0.01)。②MUC1蛋白的表达与EA细胞分化程度呈负相关(P<0.05),与EA病理学分期呈正相关(P<0.05);MUC6蛋白的表达与EA的临床病理因素无关(P>0.05)。结论:MUC1、MUC6的表达变化可能与BE、EA的发生发展密切相关,MUC1、MUC6与EA的某些临床病理因素相关,监测这些指标可能为EA的诊疗预后提供参考价值。     

PARP9促进肺腺癌细胞的迁移和侵袭

目的 探究聚(ADP-核糖)聚合酶9[poly(ADP-ribose)polymerase 9,PARP9]在肺腺癌组织中的表达、预后及其对肺腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。方法 通过UALCAN数据库、GEO数据库和72例配对肺腺癌组织样本的免疫组化染色结果,分析PARP9在肺腺癌组织中的表达、预后以及与肺腺癌患者临床病理特征的相关性。利用CRISPR/Cas9在肺腺癌细胞H1299和A549中敲除PARP9基因,通过慢病毒感染在PARP9缺陷的A549细胞中恢复表达PARP9,使用Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力的改变。结果 数据库分析与免疫组化染色结果表明,与正常肺组织相比,PARP9在肺腺癌组织中的mRNA和蛋白质水平均显著提高(P<0.05)。PARP9高表达的肺腺癌患者总体生存期更短,且PARP9表达与肺腺癌患者的临床分期与淋巴结转移相关(P<0.05)。PARP9缺陷显著抑制H1299和A549细胞的迁移和侵袭能力,恢复表达PARP9可以逆转该表型(P<0.05)。结论 PARP9在肺腺癌中高表达,高表达PARP9的肺腺癌患者预后不良,PARP9可促进肺腺癌细胞的迁移和侵袭,提示其可能是肺腺癌的一个重要原癌基因。     

FHL1对肺腺癌细胞株A549生物学特性的影响

 目的 研究FHL1的表达对人肺腺癌细胞株A549生物学特征的影响。方法 以FHL1 mRNA及shRNA慢病毒载体转染肺腺癌细胞株A549,并采用Western blot及RT-PCR法筛选检测稳定过表达FHL1肺腺癌细胞株模型及低表达细胞株模型;运用CCK-8实验、Transwell实验、流式细胞仪、细胞集落形成实验等方法对其增殖、侵袭、凋亡及锚定非依赖性生长生物学特性进行检测评估。结果 FHL1稳定过表达及低表达组的Western blot及RT-PCR法检测显示病毒转染效果可靠稳定;CCK-8实验提示低表达组的细胞增殖情况明显高于过表达组及空白组(P=0.002 2);流式细胞仪检测提示过表达组的细胞总体凋亡率为50.48%,明显高于两个低表达组(16.41%、20.12%)及空白对照组(25.90%),差异有统计学意义(P<0.001);Transwell实验提示过表达组细胞表现出的侵袭性明显低于低表达组及空白组差异有统计学意义(P<0.001);成集落实验显示过表达组细胞株形成的集落数为28.7±6.0,明显少于两个低表达组(157.0±6.4、150.7±9.5),差异有统计学意义(P<0.001)。结论 稳定过表达FHL1肺腺癌细胞株A549模型及低表达模型构建成功。FHL1的表达对于肺腺癌细胞株A549的增殖、侵袭及转移均有抑制作用,并能够诱导其加速凋亡。     

敲低galectin-1可抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭并促进其凋亡

目的 探讨半乳糖凝集素-1（galectin-1）对肺腺癌细胞的影响及其机制。方法 收集并比较肺腺癌组织和癌旁正常组织galectin-1的表达水平。qRT-PCR法检测肺腺癌细胞系A549、H1299与正常支气管上皮细胞细胞BEAS-2b中galectin-1的表达差异。通过si-RNA敲低galectin-1,分为对照组和si-RNA组,对照组转染同剂量NC-siRNA片段。通过qRT-PCR和Westernblot检测galectin-1mRNA和蛋白水平的表达情况。CCK8、Transwell实验、划痕实验和流式细胞术检测敲低galectin-1后对肺腺癌细胞增殖能力、侵袭和迁移能力和细胞凋亡的情况。Western blot检测敲低galectin-1后凋亡相关蛋白BAX、BCL-2、Caspase3等蛋白和AKT、ERK二条通路蛋白的相对表达情况。结果 galectin-1的mRNA在肺癌组织和肺腺癌细胞株中表达量明显升高（P<0.05）。抑制galectin-1表达后,细胞增殖、迁移和侵袭等下降,凋亡率明显升高（P<0.05）。在抑制galectin-1表达后,ERK信号通路磷酸化水平明显降低（P<0.05）。结论 galectin-1具有抑制肺腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和促进其凋亡的作用,其机制可能与ERK通路的磷酸化激活水平有关。     

氯化钴化学乏氧对人肺癌A549细胞生长及侵袭、迁徙能力的影响

目的探讨氯化钴化学乏氧对人肺腺癌A549细胞生长及迁徙、侵袭能力的影响。方法采用氯化钴(CoCl2)建立人肺腺癌A549细胞体外化学乏氧模型。首先通过倒置相差显微镜、电镜、MTT法及流式细胞学观察CoCl2对A549细胞形态、增殖及细胞周期的影响;进一步利用Transwell小室模型检测CoCl2对A549细胞侵袭及迁徙能力的影响。结果与常氧对照组相比,200μmol/L CoCl2化学乏氧组A549细胞光镜下较稀疏,电镜下出现线粒体肿胀、内质网扩张及自噬泡形成等微观结构改变,生长曲线低平、增殖缓慢,G1期细胞比例增多、S期细胞比例减少;迁徙及侵袭能力增强。结论 CoCl2化学乏氧抑制人肺A549细胞的增殖,诱导G1/S周期阻滞,增强A549细胞的侵袭及迁徙能力。     

SMARCA5在非小细胞肺癌中的表达及作用

目的：研究SMARCA5表达与非小细胞肺癌（NSCLC）患者预后的关系,同时探讨沉默SMARCA5表达对NSCLC生物学行为的影响。方法：采用免疫组化法检测SMARCA5蛋白在NSCLC和正常肺组织中的表达情况。分析SMARCA5表达与NSCLC患者临床病理因素及生存预后的相关性。采用Western blot和RT-PCR检测SMARCA5在人正常支气管上皮细胞系和人肺癌细胞系（A549、Lu165、SK-MES-1和NCI-H520）中的表达。使用SMARCA5 siRNA沉默SMARCA5的表达。采用MTT法和Transwell法检测肺癌细胞的增殖和侵袭能力。结果：SMARCA5蛋白在78例（59.5%）NSCLC组织中高表达。SMARCA5的表达与肿瘤分化不良（χ2=16.666,P＜0.001）、TNM分期（χ2=24.462,P＜0.001）和胸膜浸润（χ2=4.601,P=0.032）显著相关。此外,SMARCA5的高表达与NSCLC患者的不良预后相关（Log-rank检验,P=0.001）。干扰SMARCA5表达可抑制NSCLC细胞的增殖和侵袭（均P＜0.05）。结论：SMARCA5的高表达与NSCLC患者肿瘤TNM分期、胸膜浸润、分化不良和预后不良相关,且敲除SMARCA5表达可降低NSCLC细胞的增殖和侵袭活性。SMARCA5可能在NSCLC的肿瘤进展中发挥一定作用。