燮理汤对溃疡性结肠炎小鼠炎症因子及肠黏膜屏障损伤的影响北大核心CSCD

目的:探讨燮理汤对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis, UC)小鼠的保护作用及其作用机制。方法:60只C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、柳氮磺吡啶肠溶片0.6 g/kg组和燮理汤1.67、3.34、6.68 g/kg组,以DSS溶液自由饮周期循环的方式复制慢性UC模型小鼠。正常对照组小鼠在整个试验期间自由饮用蒸馏水,其余各组在第1 d~7 d、22 d~28 d和43 d~49 d自由饮用1.5%的DSS溶液,其余时间自由饮用蒸馏水。在试验的第22 d起给予相应药物治疗,连续42 d。试验期间每日记录小鼠的一般状况和体质量,观察疾病活动指数(DAI)评分变化;ELISA法检测血清白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和髓过氧化物酶(MPO)的含量;HE染色观察结肠组织病理形态学以及病理损伤评分变化;免疫荧光法检测结肠组织中闭锁蛋白(Occludin)和闭锁小带蛋白-1(ZO-1)的蛋白表达;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测结肠组织中粘蛋白2(MUC2)、肠三叶因子3(TFF3)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组小鼠一般状况下降,体质量减轻,结肠长度显著缩短(P<0.01),DAI评分、IL-6、TNF-α和MPO含量均显著升高(P<0.01),结肠黏膜结构破坏,炎性细胞严重浸润,病理评分显著升高(P<0.01),结肠组织中ZO-1、Occludin、MUC2和TFF3蛋白表达显著下调,HIF-1α蛋白表达明显上调(P<0.01);与模型对照组比较,燮理汤各剂量组小鼠状况明显好转,体质量增加,结肠长度显著增加(P<0.01),DAI评分以及IL-6、TNF-α和MPO含量均显著降低(P<0.01),结肠黏膜病理损伤明显减轻,病理评分显著降低(P<0.01),结肠组织中ZO-1和Occludin蛋白表达均显著上调(P<0.01),并可不同程度地调控MUC2、TFF3和HIF-1α蛋白表达。结论:燮理汤对UC小鼠有较好的治疗作用,其作用机制可能与减轻炎症反应,保护肠黏膜屏障有关。     

艾灸神阙穴对溃疡性结肠炎小鼠血清促炎性因子及肠黏膜紧密连接蛋白的影响

目的观察艾灸神阙穴对DSS诱导的溃疡性结肠炎(UC)小鼠的疗效,探讨艾灸神阙穴对UC小鼠炎性反应及肠黏膜屏障的影响。方法以32只雄性ICR小鼠为研究对象,随机选取8只作为空白对照组,其余24只通过自由饮用3.5%DSS溶液8 d制成UC模型,造模成功后再随机分为模型组、艾灸组和阳性药物组,每组8只。持续干预8 d:艾灸组小鼠每日抓取放入固定器固定,艾灸神阙穴20 min,每日1次;空白对照组和模型组每日进行同艾灸组同样的抓取固定,但不进行其他操作,每日1次;阳性药物组小鼠按0.4 g/kg体质量灌服美沙拉嗪溶液,每日1次。干预结束后取小鼠血清用ELISA法检测促炎性因子白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平,取小鼠结肠组织用Western blotting法检测紧密连接蛋白1(ZO-1)、Occludin蛋白表达水平,采用HE染色法观察结肠组织病理切片,通过疾病活动指数评分(DAI)观测UC小鼠的恢复情况。结果与空白对照组相比,UC模型小鼠体质量减轻,大便稀软并带有脓血便,模型组小鼠DAI评分显著升高(P 0.05),病理组织切片显示结肠黏膜组织严重损伤,有明显炎性反应,促炎性因子IL-6、TNF-α含量明显升高(P 0.05),结肠组织中ZO-1、Occludin蛋白表达均显著降低(P 0.01)。与模型组相比,艾灸组与阳性药物组小鼠结肠组织病理损伤有显著改善,炎性反应下调,DAI评分显著降低(P 0.05),血清中IL-6、TNF-α含量显著降低(P 0.05),结肠组织中ZO-1、Occludin蛋白表达均显著升高(P 0.01)。结论艾灸神阙穴能有效缓解UC症状,升高结肠组织中紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达,改善结肠组织损伤,降低UC小鼠血清炎性因子IL-6和TNF-α含量,对UC小鼠有治疗作用;提示艾灸对UC的起效机制可能与肠上皮黏膜屏障有关。     

清肠温中方对DSS诱导慢性溃疡性结肠炎模型小鼠Th1/Th2平衡的干预作用

目的研究清肠温中方对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导慢性溃疡性结肠炎(UC)模型小鼠Th1/Th2平衡的干预作用。方法 90只雄性BALB/c小鼠随机分为6组,除空白组外其余均自由饮用3%DSS溶液7d,之后换蒸馏水饮用7、14d为1个周期,共3个周期复制模型。用蒸馏水、清肠温中方高、中、低剂量和美沙拉嗪缓释颗粒灌胃干预14d,记录疾病活动指数(DAI),酶联免疫吸附法检测血清白介素-1β(IL-1β)、白介素-4(IL-4)、白介素-5(IL-5)、白介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α),免疫组化染色检测结肠黏膜NF-κBp50表达。结果与空白组比较,模型组小鼠DAI评分明显升高(P0.01),血清IL-1β、IL-6及TNF-α明显增多(P0.01),IL-4、IL-5明显减少(P0.01),结肠黏膜NF-κBp50表达明显增多(P0.01)。与模型组比较,清肠温中方各剂量组均能降低DAI评分(P0.05),减少血清IL-1β、IL-6及TNF-α(P0.05)、增加IL-4、IL-5(P0.05)含量,并减少结肠黏膜NF-κBp50表达(P0.05),尤其以清肠温中方中剂量组和美沙拉嗪组效果最明显。结论对于DSS诱导的慢性UC模型小鼠,清肠温中方可以减少Th1、增加Th2细胞,减少肠黏膜中的NF-κB表达,恢复Th1/Th2平衡从而起到治疗作用。     

黄连解毒汤对UC小鼠的抗炎作用、入血成分测定及其作用靶点的虚拟筛选

考察黄连解毒汤(HLJD)对小鼠溃疡性结肠炎(UC)的作用,测定入血成分以及虚拟筛选入血成分的作用靶点,分析作用机制。将60只Balb/c小鼠随机分成空白组、模型组、美沙拉秦组(0.3 g·kg^-1)以及HLJD高、中、低剂量组(24.66,12.33,6.17 g·kg^-1)。除空白组外,各组小鼠自由饮用2.5%葡聚糖硫酸钠溶液诱导UC,同时HLJD组和美沙拉秦组小鼠灌胃给予相应药物,连续7 d。每日观察小鼠,进行疾病活动指数(DAI)评分。实验末,HE染色观察小鼠结肠病理变化,ELISA测定结肠组织中IL-1β,IL-6和TNF-α含量,UPLC-Q-TOF-MS测定入血成分。通过PharmMapper反向对接筛选入血成分的作用靶点,通过TTD,OMIM,GeneCards数据库检索UC疾病靶点,选取成分靶点和疾病靶点的交集作为HLJD治疗UC的作用靶点。利用STRING数据库进行GO和KEGG富集分析。利用Discovery Studio将入血成分与排名靠前的作用靶点进行分子对接。结果显示,与空白组相比,模型组小鼠DAI显著上升(P<0.05),镜下可见炎症细胞数量和浸润程度明显增加。与模型组相比,HLJD组小鼠DAI显著降低(P<0.05),炎症细胞数量和浸润程度减轻。模型组IL-1β,IL-6和TNF-α水平显著升高(P<0.01),HLJD组炎症因子水平显著降低(P<0.05)。经UPLC-Q-TOF-MS鉴定10个入血成分。网络药理学分析结果显示,作用靶点主要富集在对有机物、化学物质、含氧化合物的反应等129条生物过程,以及IL-17,TNF,hepatitis B等16条信号通路。分子对接结果显示,黄柏内酯、巴马汀和小檗碱可通过氢键等形式与CASP3和MMP9靶点结合。综上所述,HLJD可减轻DSS诱导的UC小鼠结肠黏膜炎症浸润和黏膜损伤,其作用机制可能与黄柏内酯、巴马汀和小檗碱等入血成分作用于CASP3,MMP9等靶点,进而调控IL-17,TNF等信号通路有关,最终可降低结肠组织IL-1β,IL-6和TNF-α水平发挥抗炎作用。     

穴位埋线联合艾灸对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织IL-6/JAK/STAT3信号通路的影响

目的:观察“天枢”“大肠俞”“上巨虚”穴位埋线联合艾灸对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠组织白细胞介素-6(IL-6)含量及酪氨酸激酶(JAK)、信号转导及转录激活因子3(STAT3)表达的影响，探讨穴位埋线联合艾灸治疗UC的可能机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、埋线组、艾灸组、联合组，每组6只。采用三硝基苯磺酸/乙醇灌肠法制备UC大鼠模型。穴位选取双侧“天枢”“大肠俞”“上巨虚”。埋线组予埋线治疗，1次/7 d,共2次。艾灸组予艾条温和灸治疗，10 min/次，1次/d,共14 d。联合组予艾条温和灸治疗，并于6 h后进行埋线治疗，方法、疗程同埋线组、艾灸组。HE染色法观察结肠组织形态变化，ELISA法检测结肠组织IL-6含量，免疫组织化学法和Western blot法检测结肠组织JAK和STAT3的表达。结果:正常组大鼠结肠黏膜结构完整，无炎性细胞浸润；模型组大鼠结肠上皮组织结构破损模糊，大量炎性细胞浸润；埋线组、艾灸组和联合组大鼠结肠上皮组织损伤均有不同程度改善，联合组改善最明显。与正常组比较，模型组结肠组织IL-6含量及JAK、STAT3蛋白表达均明显升高(P<0....     

电针对溃疡性结肠炎小鼠结肠Notch/NF-κB信号通路的影响

目的:观察电针对溃疡性结肠炎(UC)模型小鼠肠黏膜屏障的保护作用及其对Notch/NF-κB信号通路的影响，探讨电针治疗UC的相关机制。方法:雄性C57BL/6J小鼠采用葡聚糖硫酸钠饮用法复制UC模型，造模成功后随机分为模型组、电针组，每组6只，另设6只为空白组。电针组给予电针“足三里”治疗，每日30 min,连续治疗7 d。观察各组小鼠的一般情况，进行疾病活动指数(DAI)评分，采用HE染色法观察各组小鼠结肠组织形态变化，ELISA法检测小鼠血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6含量，免疫荧光法检测结肠组织Claudin-1蛋白表达，免疫组织化学法检测结肠组织黏液蛋白(Muc)-2、Notch-1、基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白表达，实时荧光定量PCR法检测结肠组织Notch-1、Hes-1、核转录因子(NF)-κB、Toll样受体(TLR)-4、蛋白激酶B(AKT) mRNA含量。结果:与空白组比较，模型组小鼠DAI评分升高(P<0.001),血清中TNF-α、IL-6含量增加(P<0.01,P<0.001),结肠组织中Claudin-1、Mu...     

木瓜总三萜对DSS诱导溃疡性结肠炎小鼠PPARγ/SIRT1/NF-κBp65信号通路及黏膜屏障的影响

观察木瓜总三萜对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导溃疡性结肠炎小鼠PPARγ/SIRT1/NF-κBp65信号通路及结肠黏膜屏障的影响。将C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、木瓜总三萜(50,100 mg·kg~(-1))组和柳氮磺吡啶(250 mg·kg~(-1))组。实验小鼠通过自由饮用2.5%DSS诱导溃疡性结肠炎(UC)模型,在自由饮用2.5%DSS前3 d,各给药组灌胃给予相应的药物,正常组和模型组给予等体积的0.5%羧甲基纤维素钠溶液,每天1次,连续10 d。每天观察实验小鼠一般状况、记录疾病活动指数(DAI)。末次给药次日,取血,进行血液中TNF-α,IL-1β,IL-6,IFN-γ,IL-4,IL-10含量检测;取结肠进行长度测量、结肠黏膜损伤指数(CMDI)计算、MPO活性检测和组织形态学分析;实时定量PCR法检测结肠组织中E-cadherin,occludin,MUC2,TFF3 mRNA表达,Western blot法检测结肠组织中SIRT1,IKKβ,p-IKKβ,IκBα,p-IκBα及胞浆和胞核中PPARγ,NF-κBp65蛋白表达。结果显示,木瓜总三萜(50,100 mg·kg~(-1))可显著改善DSS诱导的UC模型小鼠一般状况,降低DAI,CMDI和组织病理学评分,增加结肠长度,减轻结肠黏膜溃疡、糜烂及炎性浸润,恢复黏膜屏障的正常功能,降低血液中促炎因子TNF-α,IL-1β,IL-6,IFN-γ含量,升高抗炎因子IL-4,IL-10含量,抑制结肠组织中MPO活性,上调结肠组织中黏膜屏障保护因子E-cadherin,occludin,MUC2,TFF3 mRNA表达,下调结肠组织胞浆中PPARγ,组织中p-IKKβ,p-IκBα和胞核中NF-κBp65蛋白表达,降低p-IKKβ/IKKβ和p-IκBα/IκBα的比值,上调胞核中PPARγ,组织中SIRT1和胞浆中NF-κBp65蛋白表达(P0.05或P0.01),且随着剂量的增加,其作用效果更加明显。表明木瓜总三萜对DSS诱导的小鼠UC有显著治疗作用,其作用机制可能与其调节PPARγ/SIRT1/NF-κBp65信号通路、抑制促炎因子生成、上调肠黏膜屏障保护因子的蛋白表达有关。     

艾灸对溃疡性结肠炎模型小鼠结肠黏膜损伤及结肠远端黏膜层CGRP阳性神经纤维表达的影响

目的:观察艾灸"足三里"对溃疡性结肠炎(UC)模型小鼠不同时间段结肠远端、中段、近端黏膜损伤及结肠远端黏膜层降钙素基因相关肽(CGRP)阳性神经纤维表达的影响。方法:将51只C57BL/6N小鼠随机分为7 d对照组(8只)、7 d模型组(7只)、7 d艾灸组(7只)、14 d对照组(6只)、14 d模型组(14只)和14 d艾灸组(9只)。模型组和艾灸组均予2%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液自由饮用7 d建立UC模型。造模3 d后,7 d艾灸组及14 d艾灸组予艾灸"足三里"干预,每天1次,每次10 min,分别干预5、12 d。采用HE染色法观察各组小鼠结肠组织形态,计算结肠远端、中段、近端黏膜损伤长度百分比。采用免疫荧光法观察各组小鼠结肠远端、中段、近端损伤部位黏膜层神经纤维及结肠远端黏膜层CGRP阳性神经纤维的表达。结果:造模后小鼠出现多处黏膜损伤,表现为上皮层消失、隐窝结构异常或消失。与7 d对照组比较,7 d模型组小鼠结肠长度更短(P0.001),结肠全段、远端及中段黏膜损伤长度百分比增加(P0.001);结肠远端、中段、近端损伤部位黏膜层神经纤维阳性表达及远端黏膜层CGRP阳性神经纤维表达增加(P0.001,P0.05,P0.01)。与7 d模型组比较,7 d艾灸组小鼠结肠远端及中段损伤部位黏膜层神经纤维阳性表达及远端黏膜层CGRP阳性神经纤维表达减少(P0.05)。与14 d对照组比较,14 d模型组小鼠结肠长度更短(P0.01),结肠全段黏膜损伤长度百分比增加(P0.001)。与14 d模型组比较,14 d艾灸组小鼠结肠长度更长(P0.05),结肠全段黏膜损伤长度百分比减少(P0.05)。结论:艾灸"足三里"可减少UC模型小鼠结肠黏膜层神经纤维及CGRP阳性神经纤维表达,从而改善结肠黏膜损伤程度。     

基于TNF-α/IL-6/GP130炎症免疫轴探讨黄葵敛肠方对溃疡性结肠炎小鼠模型炎症因子和黏膜炎症免疫亢进的研究

目的研究黄葵敛肠方对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)模型小鼠模型炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-23)和黏膜炎症免疫亢进(GP130、iNOS、RORrt、STAT3)的研究的影响,探讨其可能的作用机制。方法 Balb/c小鼠,雌雄各半,随机分为正常组、模型组、阳性药组、黄葵敛肠方高剂量组、黄葵敛肠方组、黄葵敛肠方低剂量组。正常组全程常规饲养,自由饮水,其余各组小鼠的饮用水更换为5%DSS水溶液,第4～17天,各组开始给药干预,阳性药组每天给予美沙拉嗪[0.52g/(kg·d)]灌胃干预,黄葵敛肠方高剂量、黄葵敛肠方、黄葵敛肠方低剂量组,每天分别给予黄葵敛肠灌肠方[37.70g/(kg.·d),18.85g/(kg·d),9.425g/(kg·d)]灌肠干预。第18天,处死全部小鼠,取结肠标本观察肠黏膜变化情况,评估疾病活动指数(DAI),酶联免疫吸附(ELISA)测定结肠黏膜TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-23的表达水平,实时荧光定量PCR(Real-TimePCR)测定结肠黏膜GP130、iNOS、RORrt、STAT3的表达水平。结果与正常组比较,模型组小鼠DAI、结肠黏膜评分以及炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-23)和黏膜炎症免疫亢进(GP130、iNOS、RORrt、STAT3)表达水平显著增加(P0.01),经药物干预后,上述炎症及免疫亢进指标显著下降,尤其以黄葵敛肠方高剂量组为最佳(P0.01)。结论黄葵敛肠方可能通过抑制肠黏膜炎症反应、肠黏膜免疫亢进来达到治疗UC的作用。     

清热化湿调枢方对溃疡性结肠炎小鼠肠道黏膜的影响北大核心CSCD

目的观察清热化湿调枢方对溃疡性结肠炎(UC)模型小鼠肠道黏膜的影响并分析其机制。方法选用36只SPF级小鼠,除正常组6只外,其余小鼠予2.5%葡聚糖硫酸钠(DSS)水溶液自由饮用7天以制备UC模型。将制备成功的小鼠按随机对照原则平均分为模型组,美沙拉嗪组和清热化湿调枢方高、中、低剂量组,每组6只。正常组和模型组予0.5 mL纯水灌胃;美沙拉嗪对照组给予0.5 mL剂量为0.52 g/(kg·d)美沙拉嗪混悬液灌胃;清热化湿调枢方低、中、高剂量组分别给予0.5 mL剂量为0.845、1.69、3.38 g/(kg·d)清热化湿调枢方混悬液灌胃。各组均连续干预10天后,观察各组小鼠疾病活动指数(DAI)评分、结肠长度,ELISA法检测结肠组织细胞因子TNF-α、IL-10、C-反应蛋白(CRP)以及肠黏膜分泌型免疫球蛋白A(slgA)水平,异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FITC-D)法检测小肠黏膜通透性,并取小鼠结肠组织HE染色以观察病理形态改变。结果与正常组比较,模型组小鼠体重减轻,IL-10和slgA含量降低,结肠长度减短(P<0.05),DAI评分、TNF-α和CRP水平、血清FITC-D含量升高(P<0.05),结肠黏膜上皮显著缺损、隐窝结构紊乱、腺体变形且数量减少、大量炎性细胞浸润。与模型组比较,美沙拉嗪组和清热化湿调枢方高剂量组DAI评分差值升高(P<0.05),美沙拉嗪组和清热化湿调枢方高、中剂量组小鼠体重差值、IL-10和slgA含量、结肠长度增加(P<0.05),TNF-α和CRP水平、血清FITC-D含量降低(P<0.05),美沙拉嗪组和清热化湿调枢方高剂量组小鼠结肠黏膜均显著改善,黏膜上皮稍欠光滑,隐窝和腺体结构大致完整,极少炎性细胞浸润。结论清热化湿调枢方对DSS诱导的UC小鼠肠道黏膜损伤及腹泻、便血等症状有一定改善作用,其效应机制可能与改善肠道通透性有关。     

3种浓度葡聚糖硫酸钠诱导小鼠溃疡性结肠炎模型的比较

目的通过比较3种浓度葡聚糖硫酸钠(DSS)建立小鼠溃疡性结肠炎(UC)模型的成模情况及对相关促炎因子表达的影响,验证并筛选出成模率高、生存率高、经济的模型。方法将24只雄性C57BL/6J小鼠随机分为空白组、3%DSS组、4%DSS组、5%DSS组,每组6只。DSS各组小鼠自由饮用相应浓度DSS溶液(DSS溶液隔日更换1次),空白组小鼠自由饮水,连续6 d。记录各组小鼠第1—6天体质量、便血情况和生存情况。造模6 d后处死各组小鼠,观察结肠大体形态并测量结肠长度,取含病变肠组织制作病理切片行HE染色观察,采用RT-PCR法检测各组结肠组织中促炎因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达情况。结果 DSS各组小鼠前3 d体质量保持平稳,第4天开始下降,且第2—6天体质量均明显低于空白组(P均0.05);第6天时,4%DSS组小鼠体质量明显低于3%DSS组和5%DSS组(P均0.05)。实验第1,2天各组小鼠未见肛门出血及肉眼血便,隐血试验阴性;实验第3天,3%DSS组1只小鼠出现肛门出血, 4%DSS组3只小鼠出现肛门出血及肉眼血便, 5%DSS组小鼠全部出现肛门出血及肉眼血便;4%DSS组和3%DSS组小鼠分别于实验第4天和第5天全部出现肛门出血及肉眼血便。实验第6天,空白组、3%DSS组、4%DSS组和5%DSS组存活率分别为100%,83.3%,83.3%,50%。DSS各组小鼠均出现UC病理表现,4%DSS组和5%DSS组尤为明显。DSS各组小鼠结肠组织中IL-1βmRNA表达量和4%DSS组、5%DSS组TNF-αmRNA表达量均明显高于空白组(P均0.05),4%DSS组、5%DSS组IL-1β、TNF-αmRNA表达量均明显高于3%DSS组(P均0.05),5%DSS组IL-1β、TNF-αmRNA表达量均明显高于4%DSS组(P均0.05)。结论给予C57BL/6J小鼠4%浓度的DSS溶液饮用6 d可高效经济地建立小鼠UC模型。     

电针“上巨虚”和“天枢”对溃疡性结肠炎大鼠核转录因子-κB/NOD样受体热蛋白结构域3信号通路相关蛋白表达的影响

目的:观察电针“上巨虚”“天枢”对2-4-6三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇诱导的溃疡性结肠炎(UC)大鼠核转录因子-κB(NF-κB)/NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)炎性小体信号通路相关蛋白表达的影响,探讨电针治疗UC的部分作用机制。方法:SD大鼠随机分成空白组、模型组、美沙拉嗪组和电针组,每组12只。采用TNBS/乙醇灌肠法制备UC大鼠模型。电针组予电针双侧“上巨虚”“天枢”穴,每日1次,每次20 min,共10次;美沙拉嗪组予美沙拉嗪混悬液(0.2 g/kg)灌胃,每日1次,共10次。观察大鼠一般情况,计算大鼠疾病活动指数(DAI);肉眼结合HE染色观察结肠黏膜损伤情况及结肠组织形态学变化,并评估结肠形态损伤指数(CMDI);酶联免疫吸附法检测血清白细胞介素-1β(IL-1β)、NLRP3及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;分别采用免疫组织化学法、Western blot法检测结肠组织中NF-κB及NLRP3表达水平。结果:与空白组比较,模型组一般情况较差,肠黏膜坏死,形成明显溃疡面,并有大量炎细胞浸润,DAI及CMDI评分显著升高(P<0.05),血清IL-1...     

穴位埋线调控NLRP3炎症小体及IL-27表达对溃疡性结肠炎大鼠的黏膜保护作用

目的：观察穴位埋线对溃疡性结肠炎(UC)大鼠NLRP3炎症小体及IL-27表达的调控作用,探讨其治疗UC的作用机制。方法：SD大鼠按体质量随机分为空白组、模型组、药物组和穴位埋线组,每组各10只。除空白组外,其余各组采用葡聚糖硫酸钠 (DSS) 法制备UC大鼠模型。药物组给予柳氮磺胺吡啶(SASP)连续灌胃14 d,穴位埋线组给予穴位简易埋线,每7 d 干预1次,共3次。观察各组大鼠一般状况,记录疾病活动度指数(DAI)、黏膜损伤指数(CMDI)和结肠长度变化;HE 染色观察大鼠结肠组织病理形态改变;ELISA测定大鼠血清IL-18、IL-1β、IFN-γ、IL-27炎性因子水平;Western-blot及RT-PCR检测大鼠结肠组织中NLRP3、caspase-1及IL-27的蛋白和mRNA表达。 结果：与模型组比较,穴位埋线治疗可有效改善 UC大鼠一般状况,降低DAI和CMDI评分,增加大鼠结肠长度,并减轻结肠组织病理损伤;同时降低了大鼠血清中IL-18、IL-1β、IFN-γ水平,升高IL-27的水平(P＜0.05);下调结肠组织中NLRP3、 caspase-1的蛋白和mRNA表达,上调了IL-27的表达(P＜0.05)。 结论：穴位埋线疗法对DSS所诱导的UC大鼠模型具有明显的治疗作用,其机制可能是通过上调IL-27的表达,抑制NLRP3炎症小体通路激活及炎性细胞因子的表达,从而减轻UC肠黏膜炎性损伤。     

苦豆子总碱对急性期溃疡性结肠炎小鼠血清IL-1β,IL-4的影响

目的:观察苦豆子总碱(total alkaloid of Sophora alopecuroides,TASA)对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)致急性期溃疡性结肠炎(UC)小鼠的作用及对血清IL-1β,IL-4水平的影响.方法:C57BL/C小鼠随机分为6组:对照组、模型组、总碱高、中、低剂量组、柳氮磺吡啶组.5%DSS水溶液自由饮用8 d以产生小鼠急性期UC模型同时灌服相应药物.观察小鼠一般活动状态及大便性状、潜血便血情况,结肠大体形态学及组织病理学改变,进行疾病活动指数评分(disease activity index,DAI),酶联免疫吸附法(ELISA)法检测小鼠血清IL-1β,IL-4的水平.结果:苦豆子总碱能显著改善DSS致结肠炎小鼠的一般状态,减轻其结肠组织病理学损伤.模型组小鼠结肠黏膜DAI比正常组明显增高(P<0.01).而各给药组较模型组DAI均有不同程度的降低(P<0.01).IL-1β与模型组相比均有不同程度的降低(P<0.01),而IL-4在数值上与模型组相比有所升高,但不具有统计学意义.结论:TASA对UC小鼠急性期损伤的大肠黏膜有明显的修复作用,可能通过抑制肠道免疫反应,减少促炎因子的过度表达,调节促炎因子与抗炎因子间的平衡而发挥其抗炎作用.     

补中益气丸对溃疡性结肠炎小鼠结肠黏膜mRNA表达的影响

目的研究补中益气丸(黄芪、白术、陈皮等)对溃疡性结肠炎(UC)小鼠结肠黏膜NOD样受体蛋白3(Nlrp3)、凋亡相关的斑点样蛋白(Asc)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(caspase-1)mR NA表达的影响,评估其对UC的预防作用。方法将60只C57BL/6小鼠随机分为空白组,模型组,柳氮磺砒啶(SASP)对照组,补中益气丸高、中、低剂量组,每组10只。除正常组外,其余各组予3%葡聚糖硫酸钠(DSS)造模;正常组、模型组每日给予蒸馏水0.01 mL/g;阳性对照组每日给予柳氮磺砒啶1.33 g/kg;补中益气丸高、中、低剂量组每日分别给予补中益气丸12、6、3 g/kg,连续给药7 d后,提取结肠样本,观察小鼠结肠病理变化,实时荧光定量-聚合酶链式反应检测结肠粘膜Nlrp3、Asc、caspase-1的mR NA表达水平。结果模型组小鼠病理检测显示结肠上皮糜烂、出血、多病灶浅溃疡、大量炎细胞浸润,而给药组均不同程度地改善上述症状。与空白组、柳氮磺砒啶对照组比较,模型组Nlrp3表达显著增高(P0.05);与补中益气丸各组比较,没有明显差异(P0.05);与其它各组比较,模型组Asc、caspase-1 mR NA表达均显著增高(P0.05)。结论补中益气丸对DSS诱导小鼠UC有一定预防作用,其虽未能抑制Nlrp3表达,却能明显抑制Asc、caspase-1表达,提示其对小鼠UC预防作用机制可能与抑制结肠黏膜Asc、caspase-1表达,阻断Nlrp3炎性体装配有关。     

清肠温中方对慢性溃疡性结肠炎模型小鼠氧化应激作用的影响

目的:探究清肠温中方对葡聚糖硫酸钠(dextran sulphate sodium,DSS)诱导慢性溃疡性结肠炎模型小鼠氧化应激作用的影响。方法:90只雄性BALB/c小鼠随机分为6组,除空白组外,其余均自由饮用3%DSS方法复制慢性UC模型。用蒸馏水、清肠温中方高、中、低剂量和美沙拉秦缓释颗粒灌胃干预14 d,记录体质量,ELISA法检测血清和结肠SOD、GSH-px、MDA和结肠MPO,HE染色观察结肠病理,免疫组化染色检测结肠黏膜occludin蛋白表达。结果:模型组小鼠体质量、血清和结肠中SOD、GSH-px含量、结肠黏膜occludin表达水平均明显低于空白组(P0.05或P0.01),而MDA和结肠MPO含量、病理评分均高于空白组(P0.01)。清肠温中方中剂量组和美沙拉秦组小鼠体质量、血清和结肠SOD、GSH-px含量、结肠黏膜occludin表达水平均高于模型组(P0.05),而MDA和结肠MPO含量、病理评分均低于模型组(P0.05)。结论:对于DSS诱导的慢性UC模型小鼠,清肠温中方可以促进机体抗氧化、抑制氧化作用,减轻氧化应激反应从而起到治疗作用。     

穴位埋线联合艾灸对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜的抗炎修复作用

目的:观察穴位埋线联合艾灸对溃疡性结肠炎(UC)大鼠体质量、大便性状、出血情况、肠黏膜组织形态及白细胞介素-6(IL-6)表达的影响,探讨艾灸和埋线联合应用对UC大鼠的抗炎修复作用。方法:将SD大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸组、埋线组、埋线加艾灸组,每组6只。采用三硝基苯磺酸联合乙醇灌肠法复制UC大鼠模型。穴位选取双侧"天枢""大肠俞""上巨虚"。艾灸组给予温和灸,每次10 min,每日1次,共干预14次。埋线组给予穴位简易埋线,每周1次,共干预2次。埋线加艾灸组干预方法同艾灸组、埋线组,埋线干预于温和灸干预6 h后进行。观察各组大鼠一般情况、体质量、大便性状、出血情况,并进行疾病活动指数(DAI)评估;HE染色法观察结肠黏膜组织形态变化;免疫组织化学法和Western blot法检测结肠黏膜IL-6的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠饮食减少,活动、精神差,易激惹,毛发少泽,便稀或不成形,肛周红肿伴脓血分泌;治疗后3个治疗组一般情况较模型组均有不同程度的改善。与正常组比较,模型组大鼠DAI明显升高(P<0.01);与模型组比较,埋线加艾灸组、埋线组、艾灸组DAI均明显降低(...     

针灸调控STAT3和CyclinD1改善DDP小鼠肝损伤的作用机制

目的：通过观察针刺和艾灸对顺铂(DDP)所致肝损伤小鼠肝脏中信号传导及转录激活蛋白3(STAT3)和细胞周期蛋白D1(CyclinD1)表达的变化，以及血清中谷氨酸脱氢酶(GLDH)、谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性变化，并结合小鼠肝脏超微病理，阐释针灸对DDP所致肝损伤小鼠的保护机制。方法：选用40只清洁级雄性KM小鼠，随机分为4组，空白组按照0.01 mL/g腹腔注射0.9%NaCl溶液，模型组、针刺组、艾灸组按照体质量腹腔注射同剂量DDP溶液，24 h后模型成功。治疗组配伍腧穴“大椎”“肝俞”“肾俞”“足三里”,分别给予针刺和艾灸治疗，其余2组陪同固定不治疗，1次/d,持续5 d。断食24 h后取材，生化检测血清中GLDH、ALT、AST活性，Western Blot测定肝脏中STAT3、CyclinD1蛋白表达量，电镜下观察肝脏超微病理变化。结果：与空白组比，模型组GLDH、ALT、AST活性升高，STAT3蛋白表达升高，CyclinD1蛋白表达降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比，针刺组和艾灸组GLDH、ALT、AST活性降低，STAT3蛋...     

加味白头翁汤对胃肠湿热型溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜HIF-1、MFG-E8表达的影响

目的观察加味白头翁汤对胃肠湿热型溃疡性结肠炎(UC)大鼠模型缺氧诱导因子-1(HIF-1)、乳汁球微粒表皮生长因子-8(MFG-E8)的影响,进一步探讨其作用机制。方法选用40只SD大鼠,用高脂高糖饮食加上TNBS灌肠法复制湿热型溃疡性结肠炎大鼠模型,并随机分为4组(空白组、模型组、西药组、加味白头翁汤组),每组各10只。连续治疗14d后,记录各组的疾病活动指标DAI评分,分别采用免疫组化法及蛋白免疫印迹法测定结肠组织HIF-1、MFG-E8的平均灰度值和蛋白表达情况。结果与模型组相比,经药物干预后大鼠体质量、便血情况有所改善,DAI评分明显下降(0.05);在第7天、第14天,模型组DAI评分分别均高于西药组和加味白头翁汤组,差异有统计学意义(0.05);各组结肠黏膜的HIF-1的平均灰度值显示,为空白组西药组加味白头翁汤组模型组,而MFG-E8平均灰度值显示相反,为空白组西药组加味白头翁汤组模型组,差异均有统计学意义(0.05);各组结肠黏膜的HIF-1的蛋白相对表达量显示,为空白组西药组加味白头翁汤组模型组,而MFG-E8蛋白相对表达量显示相反,为空白组西药组加味白头翁汤组模型组,差异均有统计学意义(0.05)。结论加味白头翁汤可明显改善胃肠湿热型UC大鼠肠道黏膜缺氧状态,减轻肠道炎症反应,促进肠道屏障的修复,达到中药防治溃疡性结肠炎的作用。     

槐果碱治疗小鼠实验性结肠炎的机制研究

研究槐果碱对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠急性结肠炎的防治作用,探讨槐果碱对小鼠肠道组织中Toll样受体4(TLR4)/促分裂原活化蛋白激酶(MAPKs)和蛋白酪氨酸激酶2/信号转导和转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路的影响。采用2.5% DSS饮用6 d诱导小鼠急性结肠炎模型,实验前1天及实验全程中槐果碱组给予腹腔内注射槐果碱30 mg·kg^-1·d^-1,每日进行疾病活动指数(DAI)评分,HE染色观察小鼠结肠黏膜大体形态和组织病理学损伤情况;Real-time RT-PCR法检测各组小鼠肠黏膜肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素-1β(IL-1β)及白介素-6(IL-6)mRNA表达情况;Western blot检测各组小鼠肠黏膜组织中TLR4/MAPKs及JAK2/STAT3信号通路中重要蛋白激酶P38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK),c-Jun氨基端激酶1/2(JNK1/2),细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2),JAK2及STAT3变化情况。结果显示,模型组小鼠体重,DAI,结肠长度及组织病理学变化较正常对照组差异有统计学意义(P<0.05),槐果碱干预组上述指标则均较模型组明显改善(P< 0.05)。模型组TNF-α,IL-1β,IL-6较正常组明显上升(P<0.05),槐果碱干预后不同程度下调(P<0.05)。正常组中TLR4蛋白表达量少,P38,JNK1/2,JAK2,STAT3蛋白磷酸化水平低下,模型组中TLR4蛋白表达上调,P38,JNK1/2,JAK2,STAT3蛋白磷酸化水平升高,槐果碱干预组TLR4表达较模型组减少,P38,JNK1/2,JAK2,STAT3磷酸化水平较模型组明显下调。结果表明,槐果碱能抑制TLR4/MAPKs,JAK2/STAT3信号通路活化,减少肠道组织中促炎细胞因子TNF-α,IL-1β,IL-6表达,减轻炎性反应,从而有效防治实验性结肠炎。