CUL4A促进人卵巢癌细胞侵袭转移及其机制探讨

目的:检测Cullin 4A(CUL4A)表达对卵巢癌细胞迁移及侵袭能力的影响,并初步探讨其相关分子机制。方法:Western blot法检测人卵巢癌细胞株中CUL4A表达,设计合成靶向CUL4A的特异性shRNA,构建稳定低表达CUL4A的卵巢癌细胞株。Western blot和荧光定量PCR验证干扰效率;划痕实验及Transwell法检测下调CUL4A后细胞的迁移及侵袭能力;Western blot和荧光定量PCR检测上皮间质转化(EMT)相关指标及上游信号分子Snail、ZEB1变化。结果:SKOV-3、OV2008、ES-2、OVCAR-3卵巢癌细胞中CUL4A表达均高于正常卵巢上皮细胞HOSE,且以SKOV-3表达水平最高。shRNA转染SKOV-3细胞后,CUL4A的mRNA及蛋白水平显著下降,细胞迁移和侵袭能力明显受到抑制;E-cadherin表达增加,N-cadherin、Vimentin、Snail和ZEB1表达均显著降低。结论:CUL4A可促进卵巢癌细胞的迁移和侵袭,其分子机制可能与调节EMT的上游信号分子Snail及ZEB1有关,提示CUL4A在卵巢癌的发生发展中起着重要的作用。     

CD105促进卵巢癌细胞转移的机制研究

目的:探讨CD105促进卵巢癌上皮细胞转移的机制。方法:通过RNAi技术沉默CD105基因,通过基因芯片对比敲除CD105基因后卵巢癌耐药细胞株中下游靶基因表达变化,利用KEGG数据库对差异基因进行Pathway分析。结果:通过基因芯片对比发现CD105下游调控的靶基因中有意义的是转移抑制因子NDRG1、EMT标记物E-cadherin等基因表达上调,与肿瘤侵袭相关的LncRNA SNHG7显著下调。涉及信号通路有264个,其中有显著性差异(P≤0.05)的信号通路共计27条,与肿瘤代谢、转移、黏附、凋亡的信号通路有:Drug metabolism、Cell adhesion molecules(CAMs)、ECM-receptor interaction、MAPK signaling pathway等,并与TGF-β、PI3K-Akt及Jak-STAT通路相关。结论:CD105可能通过抑制NDRG1或促进SNHG7导致卵巢癌的EMT和转移。TGF-β/CD105可能与MAPK/JAK-STAT通路相互作用,导致肿瘤转移。     

4.1N蛋白抑制人卵巢透明细胞癌细胞迁移侵袭及其机制初探

目的:探讨4.1N蛋白对卵巢透明细胞癌细胞迁移和侵袭能力的调控并初步探讨相关分子机制。方法:应用免疫组化法检测4.1N蛋白在卵巢透明细胞癌组织中的表达缺失状况。建立4.1N稳定转染卵巢透明细胞癌ES-2细胞系,通过划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验观察细胞迁移侵袭能力的改变。利用qRT-PCR和Western blot法检测紧密连接相关分子(Claudin-4和ZO-1)、上皮-间质转化(EMT)标记物(E-cadherin、Ncadherin和Vimentin)和相关转录因子(Twist、Slug和ZEB-2)及基质金属蛋白酶(MMP-2和MMP-3)表达水平的变化。结果:与卵巢异位的子宫内膜组织相比,卵巢透明细胞癌中4.1N蛋白表达水平显著降低甚至缺失(P0.0001)。过表达4.1N后,ES-2细胞的迁移和侵袭能力显著降低,Claudin-4和ZO-1表达上调,Twist、Slug、ZEB-2、MMP-2和MMP-3表达水平下降。结论:4.1N在卵巢透明细胞癌细胞中可能通过调控紧密连接蛋白、部分上皮-间质转化转录因子和基质金属蛋白酶的表达水平,抑制癌细胞的迁移和侵袭能力,进而参与负性调控卵巢透明细胞癌的演进。     

卵巢癌细胞侵袭转移相关转录因子表达分析

目的:分析并比较卵巢癌细胞中与肿瘤转移、侵袭相关的转录因子。方法:采用细胞划痕及小室跨膜实验比较卵巢癌细胞HO-8910及其高转移株HO-8910PM的转移侵袭能力差异;采用高通量转录因子活性检测芯片(DNA/蛋白结合芯片)分析并比较两种细胞中转录因子的活化情况,明确与肿瘤侵袭、转移相关表达的转录因子;用转录因子酶联免疫活性分析方法验证芯片检测结果。结果:细胞划痕实验及侵袭实验表明HO-8910PM比HO-8910细胞转移侵袭能力强,在345个转录因子中共筛选出与肿瘤侵袭、转移相关的31个表达差异转录因子。HO-8910PM细胞与HO-8910细胞相比,表达上调的有13种,下调的有18种。v-Maf仅表达于HO-8910PM,HLF仅表达于HO-8910。结论:v-Maf、HLF等31种转录因子可能参与了卵巢癌侵袭转移的相关机制。     

血小板活化因子对卵巢癌细胞侵袭的影响及其相关机制

目的 探讨血小板活化因子(PAF)对卵巢癌细胞侵袭的影响及其相关机制,为卵巢癌的治疗提供新的靶点.方法 (1)以100 nmol/L的PAF分别处理卵巢浆液性癌细胞株OVCA429细胞及卵巢黏液性癌细胞株RMUG-L细胞,均以仅加入二甲基亚砜(DMSO)为对照,采用体外侵袭实验检测其穿膜细胞数.(2)以不同浓度(分别为0、0.1、1、10、100、1000 nmol/L)的PAF处理后检测OVCA429细胞中环腺苷酸应答元件结合蛋白(CREB)、磷酸化CREB(p-CREB)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白的表达水平;以100 nmol/L的PAF处理不同时间(分别为0、5min、10 min、30 min、1h及12 h)后检测OVCA429细胞中有丝分裂原活化蛋白激酶p38蛋白(p38 MAPK)、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、CREB及p-CREB蛋白的表达水平,上述各蛋白的表达水平均采用蛋白印迹法检测.(3) OVCA429细胞在加入PAF( 100 nmol/L)的基础上,分别加入各蛋白的抑制剂,即PAF受体(PAFR)抑制剂-WEB2076(50 μmol/L)、p-p38 MAPK抑制剂-SB203580(10 μmol/L)、CREB结合蛋白(CBP)-CREB相互作用抑制剂-217505(25 μmol/L).实验分为6组:PAF组、PAF+WEB2076组、PAF+ SB203580组、PAF+ 217505组、PAF+ SB203580 +217505组及空白对照组,采用蛋白印迹法检测各组细胞中p-p38 MAPK、p-CREB、MMP-2蛋白的表达强度.结果 (1)体外侵袭实验显示,予PAF处理后,OVCA429细胞的穿膜细胞数[(118±23)个]明显多于其对照细胞[(36±8)个,P＜0.01],而RMUG-L细胞的穿膜细胞数[(45±13)个]与其对照细胞[(53±9)个]比较无明显变化(P＞0.05).(2)不同浓度的PAF处理后,OVCA429细胞中p-CREB、MMP-2蛋白的表达水平呈明显的剂量依赖性(P＜0.01),0.1 nmol/L的PAF即可引起p-CREB、MMP-2蛋白表达水平明显升高,至100 nmol/L时达高峰;而CREB蛋白的表达无明显变化.100nmoL/L的PAF处理不同时间后,OVCA429细胞中p38 MAPK、CREB蛋白表达无明显变化;而p-p38 MAPK、p-CREB蛋白表达水平明显升高(P＜0.01),至处理10 min时达高峰,随后逐渐降低.(3)与空白对照组比较,PAF组细胞中p-p38 MAPK、p-CREB及MMP-2蛋白的表达强度明显增强.与PAF组比较,PAF+ WEB2076组、PAF+SB203580组、PAF+ SB203580+ 217505组细胞中p-p38 MAPK、p-CREB及MMP-2蛋白的表达强度明显减弱,但PAF+ SB203580+ 217505组与PAF+ WEB2076组及PAF+ SB203580组相比无明显差异;PAF +217505组细胞中p-p38 MAPK、p-CREB蛋白的表达强度无明显变化,但其MMP-2蛋白的表达强度明显减弱.结论 PAF可促进卵巢浆液性癌OVCA429细胞的侵袭,这一作用可能是通过p38MAPK激活转录因子CREB,进一步上调MMP-2蛋白的表达而实现的.     

β_1-整合素与纤维粘连蛋白联合促进卵巢癌细胞侵袭转移

目的:探讨β1-整合素及纤维粘连蛋白对卵巢癌细胞粘附侵袭能力的影响和作用机制。方法:流式细胞仪间接免疫荧光染色检测人卵巢癌SKOV3-S1细胞β1-整合素表达。用人工基底膜粘附实验和体外侵袭实验观察经β1-整合素抗体处理的SKOV3-S1细胞粘附侵袭能力的变化。逆转录PCR检测β1-整合素处理及与纤维粘连蛋白结合后SKOV3-S1细胞基质金属蛋白酶基因表达的变化,同时用酶谱法分析细胞上清MMPs活性变化。结果:SKOV3细胞高侵袭克隆SKOV3-S1均表达β1-整合素,β1-整合素抗体对其粘附及侵袭人工基底膜能力的抑制率分别为69·8%和65·7%。纤维粘连蛋白能诱导癌细胞MMP2基因表达并分泌蛋白酶,β1-整合素抗体能减弱这种诱导作用。结论:β1-整合素与纤粘维连蛋白结合能诱导卵巢癌细胞粘附并表达MMP2基因,分泌蛋白酶降解ECM,从而促进肿瘤侵袭转移。     

nm23-H2基因抑制卵巢癌细胞侵袭转移及调节网络初探

目的研究上皮性卵巢癌转移相关nm23-H2基因功能及其调控网络,为最终揭示卵巢癌侵袭转移分子机制和晚期卵巢癌基因治疗提供理论依据。方法将nm23-H2重组质粒pCDNA3/nm23-H2转染人卵巢癌细胞系SKOV3.ip1,经G418抗性筛选及RT-PCR鉴定得到稳定转染阳性克隆H2-18,设计体外黏附实验及人工基底膜侵袭实验比较转染前后细胞黏附侵袭特性的改变。应用2 747点人类肿瘤相关Oligo芯片检测转染前后细胞基因表达的改变,寻找与nm23-H2相关下游调控肿瘤相关基因,并探讨其调节网络。结果用重组质粒pCDNA3/nm23-H2转染SKOV3.ip1细胞。转染前后细胞在体外的增殖能力没有显著变化,转染后细胞的黏附与侵袭基底膜能力明显降低。经人类肿瘤相关Oligo芯片检测转染前后细胞发现55个二倍差异表达基因,在上调基因中以转录调节、信号转导、分化发育及细胞凋亡类基因为多;下调基因中以信号传导及黏附运动功能类基因为主。结论nm23-H2基因具有抑制卵巢癌侵袭转移的作用,并且这一作用的实现是通过对一系列下游肿瘤相关基因的调控来完成的。基因芯片技术结合普通分子生物学技术是后基因组时代肿瘤相关基因功能研究及探索基因调控网络的有效手段。     

COX2促进卵巢癌细胞迁移及相关机制的研究

目的:探讨COX2对卵巢癌细胞株增殖及迁移的影响及其相关机制。方法:构建慢病毒载体Lenti-COX2-EGFP,转染卵巢癌细胞株SKOV3和ES2。PCR及Western blot法鉴定转染效率,CCK-8实验检测细胞增殖,划痕实验观察细胞迁移能力,qRTPCR法检测E-cadherin、Vimentin、Snail和Slug表达。结果:与对照组相比,过表达COX2后卵巢癌细胞的增殖和迁移能力增强,差异均有统计学意义(P0.05);E-cadherin表达下调,Snail、Slug、Vimentin表达上调。COX2抑制剂塞来昔布处理则可抑制COX2过表达细胞的增殖及迁移能力,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:COX2可促进卵巢癌细胞增殖及上皮间质转化(EMT)继而增强肿瘤细胞迁移能力;塞来昔布可发挥阻断作用。推测COX2可能是卵巢癌临床治疗的一个潜在靶点。     

卵巢癌细胞耐药机制及其对策研究进展

克服化疗耐药是提高晚期卵巢癌远期疗效的关键.卵巢癌细胞耐药的可能分子机制有:P糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽S转移酶(GST)使细胞内有效药物浓度降低,β微管蛋白亚型改变及基因突变,MLH1、BRCA1等DNA损伤修复功能异常,p53失活、BCL2过表达及其他细胞凋亡信号途径异常.已开展试图克服耐药的临床试验包括:铂类类似物ZD-0473和BBR-3464,紫杉醇类似物埃坡霉素;ET-743和喹唑啉等新的细胞毒药物;PSC-83和地西他滨等耐药逆转剂;Ad-p53、ZD-1839及蛋白酶体抑制剂等.     

卵巢癌细胞耐药机制及其对策研究进展

克服化疗耐药是提高晚期卵巢癌远期疗效的关键。卵巢癌细胞耐药的可能分子机制有：P糖蛋白（P-gp）、谷胱甘肽S转移酶（GST）使细胞内有效药物浓度降低，β微管蛋白亚型改变及基因突变，MLH1、BRCA1等DNA损伤修复功能异常，p53失活、BCL2过表达及其他细胞凋亡信号途径异常。已开展试图克服耐药的临床试验包括：铂类类似物ZD-0473和BBR-3464，紫杉醇类似物埃坡霉素；ET-743和喹唑啉等新的细胞毒药物；PSC-83和地西他滨等耐药逆转剂；Ad-p53、ZD-1839及蛋白酶体抑制剂等。     

低氧环境对人上皮性卵巢癌细胞株上皮间质转化及侵袭能力的影响及机制探讨

目的:探讨低氧环境对人卵巢癌细胞上皮间质转化(EMT)和侵袭能力的影响及可能机制。方法:培养人卵巢癌细胞株SKOV-3、3AO,将每株细胞分为对照组、Co Cl2(模拟低氧环境)组、VPL(钙离子拮抗剂)组和VPL+Co Cl2组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测Co Cl2对SKOV-3、3AO细胞生长情况的影响;倒置相差显微镜下观察低氧后细胞形态的改变;采用Western blot法检测SKOV-3、3AO细胞中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、转录因子Twist、上皮型钙黏蛋白(E-cad)及神经型钙黏蛋白(N-cad)表达的变化;体外侵袭实验穿膜小室(Transwell小室)检测细胞的侵袭能力。结果:Co Cl2作用后,两种细胞的存活率均较对照组明显降低(P0.05)。低氧环境下,部分细胞伸出伪足,呈多角形,细胞排列松散、紊乱。Co Cl2能体外模拟细胞低氧环境,诱导HIF-1α蛋白高表达。SKOV-3、3AO细胞中,Co C12组中HIF-1α、Twist、N-cad蛋白表达明显高于对照组、Co C12+VPL组(P0.01,P0.05);E-cad蛋白表达明显低于对照组、Co C12+VPL组(P0.01,P0.05);VPL组与对照组相比,各蛋白表达的变化无明显差异(P0.05)。Co C12组两种细胞的穿膜数均显著多于对照组、Co C12+VPL组(P0.01,P0.05)。结论:钙信号途径参与了低氧环境下HIF-1α调节卵巢癌SKOV-3、3AO细胞中Twist的表达,从而诱导这两种细胞EMT的发生并增强其侵袭能力。     

醋酸甲羟孕酮通过诱导上皮-间质转化促进卵巢癌细胞转移机制研究

目的 探讨醋酸甲羟孕酮（MPA）对人卵巢上皮性癌（EOC）细胞转移能力的影响及其作用机制。方法 2011年8月至2012年6月在河北医科大学病理学实验室进行实验。培养EOC细胞SKOV3,取对数生长期细胞用于实验,分别设立对照组和MPA组（10-5mol/L MPA作用于SKOV3细胞48 h或72 h）。采用划痕实验观察细胞迁移能力,倒置显微镜观察细胞形态,实时荧光定量PCR(Real Time-PCR)检测Snail、Slug mRNA表达水平,蛋白印迹法(Western blot)检测E-cadherin、N-cadherin和vimentin蛋白表达水平。 结果 划痕24h、48h时,MPA组剩余划痕面积为［（0.34 ±0.06）%、（0.14±0.02）%］均显著小于对照组［（0.51±0.05）%、（0.46±0.06）%］,差异有统计学意义（P<0.05）。与对照组相比,10-5mol/L MPA作用于SKOV3细胞72h后,细胞由上皮形态转变为间质形态,即细胞由立方形或椭圆形转变为纺锤形或多角形,且细胞间连接松散。10-5mol/L MPA作用于SKOV3细胞48h,可显著上调 Snail、Slug mRNA表达水平,与对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）;10-5mol/L MPA作用于SKOV3细胞72 h,E-cadherin蛋白表达水平较对照组明显减少,差异有统计学意义（P<0.05）。而N-cadherin和vimentin蛋白表达水平较对照组明显增加,差异均有统计学意义（P<0.05）。 结论 MPA可通过诱导EOC细胞发生上皮-间质转化,进而增强EOC细胞的转移能力。     

组织蛋白酶L基因与卵巢上皮性癌细胞侵袭及转移的关系

目的 构建组织蛋白酶L(CTSL)基因的真核表达质粒,通过体外实验研究CTSL基因与卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞侵袭、转移的关系.方法 采用逆转录(RT)-PCR技术从卵巢癌组织总RNA中扩增CTSL基因的cDNA全长,克隆至pMD18-T载体上;酶切、纯化CTSL基因后与pcDNA3.1载体连接,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-CTSL.应用脂质体介导的基因转染技术将重组质粒转染卵巢癌HO8910细胞,RT-PCR技术和蛋白印迹法分别检验CTSL mRNA和蛋白的表达情况,细胞增殖能力测定分别采用四甲基偶氮唑蓝法和集落形成实验,细胞周期检测、细胞体外侵袭、转移、黏附能力测定分别采用流式细胞仪、细胞体外侵袭重建基底膜实验、穿膜小室(transwell小室)实验、体外黏附实验.结果 RT-PCR和蛋白印迹法结果证实,HO8910细胞转染pcDNA3.1-CTSL质粒后有CTSL基因和蛋白的表达.HO8910-CTSL细胞的生长速度加快,但与对照的HO8910-pcDNA3.1及HO8910细胞分别比较,差异均无统计学意义(P>0.05).HO8910-CTSL细胞的S+G2+M期细胞比例为37.9%,与HO8910-pcDNA3.1细胞及HO8910细胞(分别为32.9%、31.8%)比较虽有增加,但差异均无统计学意义(P>0.05).HO8910-CTSL细胞的侵袭、转移能力增加(分别为0.34±0.18、1.252±0.114),与HO8910-pcDNA3.1细胞(分别为0.17±0.04、0.486±0.027)及HO8910细胞(分别为0.16±0.05、0.459±0.674)分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05);HO8910-CTSL细胞的黏附能力(0.16±0.04)与HO8910-pcDNA3.1细胞(0.19±0.04)及HO8910细胞(0.19±0.03)比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 CTSL基因真核表达质粒转染使卵巢癌细胞的体外侵袭和转移能力增加,有可能成为抗卵巢癌侵袭和转移的分子靶点.     

长链非编码RNA PVT1抑制miR-31表达并促进卵巢癌细胞侵袭转移的实验研究

目的:探讨长链非编码RNA PVT1能否抑制卵巢癌细胞侵袭转移,明确其影响可否通过抑制miR-31的方式实现。方法:qRT-PCR法检测长链非编码RNA PVT1及miR-31在卵巢癌组织及卵巢癌细胞系SKOV3中的表达,同时分别设定正常卵巢组织和卵巢正常上皮细胞系IOSE80作为对照。研究PVT1表达水平与卵巢癌患者临床病理参数的相关性。SKOV3细胞中转染PVT1 siRNA下调PVT1表达,qRT-PCR检测PVT1表达对miR-31表达的影响,Transwell实验检测PVT1表达对SKOV3侵袭转移能力的影响。"反义"实验验证下调miR-31能否逆转PVT1 siRNA对SKOV3侵袭转移能力的抑制效应。荧光素酶报告基因实验检测miR-31与PVT1的靶向结合作用。结果:卵巢癌组织及细胞系中,PVT1表达显著增高,miR-31表达显著降低,两者表达呈明显负相关。PVT1高表达与卵巢癌患者的高临床分期及腹膜后转移密切相关。转染PVT1 siRNA可明显下调SKOV3中PVT1表达,促进miR-31表达,抑制SKOV3细胞的侵袭转移能力;转染miR-31 inhibitor可明显逆转PVT1 siRNA对SKOV3侵袭转移能力的抑制效应;荧光素酶报告基因实验证实miR-31可与PVT1靶向结合。结论:PVT1可通过抑制miR-31的方式促进卵巢癌细胞侵袭转移。     

肝细胞生长因子对卵巢癌细胞侵袭作用的影响

肝细胞生长因子（HGF）与其受体c-met蛋白特异性结合，可激活多条信号传导通路的级联反应，促进细胞增殖、肿瘤血管形成、肿瘤细胞的侵袭等。为了解HGF对卵巢癌细胞浸润转移的促进作用及其对卵巢癌细胞核转录因子（NFKB）通路的传导作用，采用Boyden小室体外侵袭实验观察HGF对卵巢癌细胞株SKOV3细胞侵袭作用的影响，     

AKT2基因沉默抑制卵巢癌细胞侵袭和粘附能力的实验研究

目的:探讨AKT2基因对人卵巢癌细胞A2780侵袭和黏附活性的影响。方法:构建AKT2基因的短发卡状RNA质粒转染人卵巢癌细胞A2780,运用RT-PCR、蛋白质免疫印迹法比较转染前后AKT2表达的差异;用transwell小室检测细胞侵袭人工基底膜的能力;MTT法检测卵巢癌细胞与细胞外基质黏附能力。结果:与对照相比,构建shR-NA表达载体可抑制AKT2 mRNA转录和蛋白的表达;AKT2表达下降后,穿透重组基底膜的细胞数明显下降(P<0.05),且可显著抑制细胞与细胞外基质的黏附(P<0.05)。结论:靶向AKT2 shRNA能有效地抑制卵巢癌细胞中AKT2基因的表达,并抑制卵巢癌细胞体外侵袭和黏附能力。AKT2基因有可能成为治疗卵巢癌的新途径。     

组织因子途径抑制物2抑制卵巢癌细胞浸润转移的体外研究

组织因子途径抑制物 2 (TFPI 2 )是新近发现的一种相对分子质量为 32 0 0 0的丝氨酸蛋白酶抑制物 ,在维持细胞外基质 (ECM )结构完整 ,调控肿瘤细胞浸润转移方面起着重要作用。本研究将TFPI 2基因真核表达载体转染卵巢癌细胞株A2 780细胞 ,探讨其对卵巢癌细胞体外浸润转移能力的影响。一、材料和方法1.材料 :RPMI 16 4 0 ,新霉素G4 18,Trizol试剂 ,脂质体转染试剂盒Lipofectamine 2 0 0 0购自美国Gibco公司 ,逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)一步法试剂盒购自美国Promega公司 ,基质胶Matrigelmatrix购自美国BD公司。TFPI 2真核表…     

MTA1基因表达与子宫颈癌细胞侵袭转移的关系

目的：探讨MTA1基因表达与宫颈癌细胞侵袭转移的关系。方法将真核细胞表达载体pcDNA3质粒、MTA1基因表达载体pcDNA3-MTA1质粒、MTA1基因RNA干扰载体pSilencer3.1-MTA1-siRNA质粒稳定转染宫颈癌细胞株CaSki细胞（分别命名为对照组、MTA1组、MTA1 -siRNA组）,逆转录(RT) -PCR技术和蛋白印迹法检测CaSki细胞中MTA1 mRNA和蛋白的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及平板集落形成实验检测CaSki细胞的增殖情况,划痕实验、穿膜实验检测CaSki细胞的迁移能力,基质黏附实验检测CaSki细胞的黏附能力,细胞侵袭实验检测CaSki细胞的侵袭能力,流式细胞仪检测CaSki细胞的细胞周期比例。将3组CaSki细胞接种于裸鼠腋下,观察其在裸鼠体内的生长情况。结果 MTA1组细胞中MTA1 mRNA和蛋白的表达强度均明显高于对照组,而MTA1 -siRNA组细胞中MTA1 mRNA和蛋白的表达强度均明显低于对照组。MTT比色法检测显示,与对照组比较,自第2天起,MTA1组细胞的生长速度加快,而MTA1-siRNA组细胞的生长速度减慢,分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);平板集落形成实验显示,对照组、MTA1组、MTA1 -siRNA组的克隆数分别为( 133±6)、(169±10)和(57±5)个,MTA1组明显多于对照组（P＜0.05）,而MTA1-siRNA组明显少于对照组(P＜0.05)。划痕实验显示,MTA1组细胞的迁移能力明显增强,而MTA1 -siRNA组细胞的迁移能力明显减弱;穿膜实验显示,对照组、MTA1组、MTA1-siRNA组穿膜细胞数分别为( 153±17)、( 247±38)和(82±10)个,MTA1组明显多于对照组(P＜0.05),而MTA1-siRNA组明显少于对照组(P＜0.05)。基质黏附实验显示,孵育90 min时,对照组、MTA1组、MTA1-siRNA组细胞的黏附率分别为(69.3±3.6)％、(80.4±5.6)％、(39.2±7.4)％,MTA1组明显高于对照组(P＜0.05),而MTA1 -siRNA组明显低于对照组（P＜0.05）。细胞侵袭实验显示,对照组、MTA1组、MTA1 -siRNA组穿膜细胞数分别为(231±19)、(354±36)和(76±7)个,MTA1组明显多于对照组(P＜0.05),而MTA1-siRNA组明显少于对照组(P＜0.05)。流式细胞仪检测显示,对照组、MTA1组、MTA1-siRNA组细胞的G1、S、G2期细胞比例分别比较,差异均无统计学意义(P＞0.05)。裸鼠接种CaSki细胞30d后,对照组、MTA1组、MTA 1-siRNA组裸鼠肿瘤体积分别为(519 ±236)、(2245±780)、(111±65) mm3,肿瘤质量分别为(0.41 ±0.19)、(2.10±0.39)、(0.11±0.08)g,MTA1组均明显高于对照组(P＜0.05),而MTA1 -siRNA组均明显低于对照组(P＜0.05)。结论MTA1基因促进宫颈癌细胞的侵袭转移,沉默MTA1基因表达能使宫颈癌细胞生长减慢,细胞侵袭及转移能力下降,从而逆转宫颈癌细胞的恶性表型,为进一步研究MTA1基因的作用机制以及应用RNA干扰技术进行以MTA1基因为靶点的治疗打下了一定的基础。     

TWEAK对人卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭转移的影响及其机制的研究

目的:研究肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(TWEAK)对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM转移相关能力的影响及其作用机制。方法:水溶性四唑盐(WST-1)比色法检测TWEAK对HO-8910PM细胞增殖力的影响,细胞黏附和移动实验检测TWEAK对细胞体外黏附和移动力的影响,细胞侵袭重建基底膜实验检测TWEAK组细胞体外侵袭力的变化。采用Western blot法检测TWEAK对细胞IκB-α、NF-κB(P65)和VEGF蛋白表达的影响。通过应用NF-κB拮抗剂PDTC,观察阻断NF-κB通路后VEGF蛋白表达的变化。结果:TWEAK组在24、48h和72h时细胞增殖率无明显变化(P>0.05)。TWEAK组细胞黏附力提高23.67%(P<0.01);TWEAK可增强细胞体外的移动和侵袭力,其趋化指数和侵袭指数分别为1.9±0.3和1.7±0.3(P<0.01)。TWEAK能显著下调IκB-α蛋白表达,上调NF-κB(P65)蛋白在核内的表达,并使VEGF蛋白表达量显著增加。用NF-κB拮抗剂PDTC阻断NF-κB通路,能有效抑制VEGF蛋白的表达。结论:TWEAK对HO-8910PM细胞增殖力无明显影响。TWEAK能促进HO-8910PM细胞移动、黏附和侵袭力。TWEAK促肿瘤侵袭转移的机制之一可能是通过激活NF-κB通路上调VEGF蛋白表达。     

喜树碱药物NSC606985抗卵巢癌细胞活性及其机制的研究

目的:体外观察喜树碱药物NSC606985对人卵巢癌细胞的生长抑制效应、凋亡诱导效应以及抗癌机制。方法:采用MTT法检测不同浓度(6.25,12.5,25,50,100nmol/L)NSC606985作用特定时间(24,48,72h)后对人卵巢癌COC1细胞的生长抑制效应,用AnnexinV-FITC/PI双染法FCM检测NSC606985对COC1细胞的凋亡诱导效应,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测缺氧(2%O2)对HIF-1α,AMFR及RhoC mRNA表达水平的影响。用免疫印迹技术(Western blot)检测物理性缺氧及氯化钴(CoCl2)化学模拟缺氧下HIF-1α蛋白的表达水平以及NSC606985对HIF-1α的调控效应。结果:纳摩尔浓度的NSC606985可以显著抑制人卵巢癌COC1细胞生长,呈现剂量及时间依赖效应。不同浓度(50,100,200nmol/L)NSC606985作用24h凋亡细胞比率分别是68.44%,80.86%,91.98%,具有剂量依赖性。在人卵巢癌细胞系COC1和SKOV3中,缺氧(2%O2)14h对HIF-1α、AMFR及RhoC mRNA的表达无影响,却可以上调HO-8910PM细胞HIF-1αmRNA水平。物理性缺氧(2%O2 14h)及CoCl2化学模拟缺氧(50μmol/L或150μmol/L 24h)诱导COC1,HO-8910PM及SKOV3等卵巢癌细胞株HIF-1α蛋白高水平表达,NSC606985(20～400nmol/L 14h或24h)可呈剂量依赖性显著下调缺氧诱导的HIF-1α蛋白。结论:NSC606985抑制卵巢癌细胞增殖具有剂量和时间依赖性,可能与诱导细胞凋亡相关。缺氧下HIF-1α在卵巢癌细胞的恶性生物学行为中发挥重要作用,NSC606985可通过下调缺氧诱导的HIF-1α蛋白发挥独特的抗癌机制。