N6-甲基腺苷在三氧化二砷抑制肝癌细胞生长中的作用研究

目的 探讨RNA 上的N6-甲基腺苷（N6-methyladenosine, m6A）修饰在三氧化二砷（Arsenic Trioxide,ATO）抑制肝癌细胞生长中的作用,为ATO抗肝癌的作用机制研究提供新思路。方法 以人肝癌细胞HepG2 为研究对象,用不同浓度ATO处理细胞24 h,采用MTT实验检测细胞存活率,m6A RNA 甲基化定量检测试剂盒测定RNA上的m6A修饰水平,同时用荧光定量PCR法检测m6A相关酶（METTL3/METTL14/WTAP/FTO/ALKBH5）的mRNA水平。结果 随ATO浓度的增加,细胞存活率逐渐下降,与对照组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）。同时,RNA上的m6 A修饰水平随ATO浓度增加而逐渐升高,在5、10和20 μM ATO处理组中,m6A修饰水平分别为对照组的1.81、3.11和4.08倍。此外,5、10和20 μM ATO处理后,3种m6A甲基转移酶（METTL3/METTL14/WTAP）的mRNA表达水平显著升高,METTL3分别为对照组的1.27、2.26和2.31倍,METTL14分别为对照组的2.38、6.95和9.07倍,WTAP分别为对照组的1.71、2.39和2.62倍;2种去甲基化酶的mRNA水平也呈增加的趋势,其中FTO分别为对照组的1.29、2.17和2.60倍,ALKBH5分别为对照组的1.29、1.63和2.13倍。结论 m6A 及其相关酶在ATO抑制肝癌细胞生长中具有重要作用。     

N6-甲基腺苷通过miR-155参与肺腺癌细胞对三氧化二砷的耐受性

目的 探讨N6-甲基腺苷是否通过影响miR-155的水平参与肺腺癌细胞对三氧化二砷的耐受性。方法 以肺腺癌亲本细胞系（A549）和课题组前期研究中构建的耐三氧化二砷的肺腺癌细胞株（A549R）为研究对象,以m6A RNA 甲基化定量检测试剂盒检测亲本细胞和耐砷细胞中总RNA上的m6A水平;免疫印迹法检测甲基转移酶METTL3的蛋白水平;以METTL3 siRNA敲低METTL3的水平后,检测耐砷细胞总RNA上的m6A水平,并采用荧光定量PCR法检测miR-155基因表达量。结果 与亲本肺腺癌细胞（A549）相比,耐砷细胞（A549R）总RNA上的m6A修饰水平增加,甲基转移酶METTL3的蛋白水平升高;与相应的阴性对照细胞相比,耐砷细胞中的METTL3蛋白表达水平降低后,总RNA上的m6A修饰水平下降,同时miR-155表达量也随之降低。结论 高水平的METTL3可催化m6A修饰的形成,进而通过影响miR-155的表达参与肺腺癌细胞对三氧化二砷的耐受性。     

m6A修饰在女性生殖发育及相关疾病中的研究进展

N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine, m6A)修饰是由m6A甲基转移酶、去甲基化转移酶、阅读蛋白进行调控的一种RNA转录后水平修饰, 在最为广泛, 且在哺乳动物的生殖发育中发挥重要作用。一方面, m6A修饰调控着卵母细胞成熟和早期胚胎发育过程中RNA的代谢过程;另一方面, m6A修饰与卵巢和子宫疾病密切相关, 尤其是妇科肿瘤, m6A修饰影响着肿瘤细胞的增殖和迁移。本文对m6A修饰在女性生殖生理及其相关疾病中的研究进展做一综述, 旨在为临床治疗提供新的思路。     

硫酸镉诱导人胚胎肝细胞热应激蛋白70表达及氧化应激的研究

目的研究硫酸镉诱导人胚胎肝(L-02)细胞热应激蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)表达及氧化应激作用,以探讨HSP70表达与细胞抗氧化作用的关系。方法将对数生长期的L-02细胞分别暴露于终浓度为0(对照,双蒸水)、1、2、4、8、16、32、64、128μmol/L的硫酸镉溶液培养24 h,采用MTT法测定细胞活性。将对数生长期的L-02细胞分别暴露于含终浓度为0(对照,双蒸水)、1、2、4μmol/L硫酸镉的培养基中,培养24 h后,检测细胞裂解液中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力、超氧化物歧化酶(SOD)的活力和丙二醛(MDA)的含量以及细胞HSP70的表达。结果与对照组比较,2～128μmol/L硫酸镉染毒组L-02细胞的存活率降低,差异有统计学意义(P0.05);且随着硫酸镉染毒浓度的升高,L-02细胞的存活率呈下降趋势明显。与对照组比较,4μmol/L硫酸镉染毒组L-02细胞SOD、GSH-Px活力均上升,差异有统计学意义(P0.05);而各浓度硫酸镉染毒组L-02细胞内MDA的含量均无明显变化。随着硫酸镉染毒浓度的升高,L-02细胞内HSP70蛋白的阳性表达呈上升趋势。结论在本研究剂量下,硫酸镉可诱导L-02细胞株HSP70表达上调,引起细胞抗氧化活性增强。     

亚砷酸钠诱导的活性氧增加人皮肤细胞N6 -甲基腺苷水平

目的 探究亚砷酸钠诱导的活性氧是否影响N6 -甲基腺苷（m6A）水平,从RNA表观遗传学角度探讨亚砷酸钠的毒性机制。方法 以亚砷酸钠作为活性氧诱导剂,以N -乙酰半胱氨酸作为活性氧清除剂,检测细胞在亚砷酸钠单独处理和亚砷酸钠联合N -乙酰半胱氨酸处理情况下皮肤细胞活性氧积累情况,同时测定m6A及其甲基化酶的mRNA和蛋白水平的改变。结果 在5、10和15 μM的亚砷酸钠处理下,活性氧含量随砷浓度升高而增加;在亚砷酸钠染毒浓度为15 μM时,细胞内总m6A水平水平相比于对照组升高了1.49倍（P＜0.05）,m6A甲基化酶（METTL3、METTL14和WTAP）mRNA表达水平相应升高（P＜0.05）,METTL14和WTAP蛋白表达水平分别为对照组的1.47倍和1.85倍（P＜0.05）。N -乙酰半胱氨酸可以降低异常升高的活性氧、m6A以及其甲基化酶水平。结论 亚砷酸钠诱导的活性氧能增加人皮肤细胞m6A的修饰水平,其机制可能与上调m6A甲基化酶表达水平有关。     

赖氨酸甲基转移酶PR-Set7在亚砷酸钠致人永生化皮肤角质形成细胞DNA损伤中的作用

目的探讨组蛋白甲基转移酶PR-Set7在亚砷酸钠致人永生化皮肤角质形成细胞(Ha Ca T细胞)DNA损伤中的作用机制。方法将处于对数生长期的Ha Ca T细胞暴露于含终浓度分别为0(对照)、1.25、2.5、5、10μmol/L亚砷酸钠的DMEM高糖培养基染毒24 h。采用MTT法测定Ha Ca T细胞的存活情况。另设对照(24 h)组、亚砷酸钠(10μmol/L,24 h)染毒组、PR-Set7小干扰RNA干扰组(Si PR-Set7,50 nmol/L,48 h)和联合暴露(50 nmol/L Si PR-Set7干扰48 h后,10μmol/L亚砷酸钠暴露24 h)组。分别采用q RT-PCR法检测PR-Set7 m RNA的表达水平,采用Western blot法检测H4K20me1和PR-Set7蛋白的表达水平,采用单细胞凝胶电泳法检测DNA损伤水平。结果与对照组相比,5、10μmol/L亚砷酸钠染毒组Ha Ca T细胞的存活率均较低,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,5、10μmol/L亚砷酸钠染毒组Ha Ca T细胞PR-Set7蛋白和m RNA的表达水平均升高,而H4K20me1蛋白的表达水平降低;2.5、5、10μmol/L亚砷酸钠染毒组Ha Ca T细胞尾部DNA%及尾矩升高,差异有统计学意义(P0.05)。随着亚砷酸钠染毒浓度的升高,Ha Ca T细胞PR-Set7蛋白和m RNA的表达水平均呈上升趋势,而H4K20me1蛋白和m RNA的表达水平呈下降趋势,DNA损伤水平(尾部DNA%及尾矩)呈上升趋势。与对照组比较,Si PR-Set7干扰组Ha Ca T细胞PR-Set7蛋白的表达大幅下降;亚砷酸钠染毒组、Si PRSet7干扰组和联合暴露组Ha Ca T细胞H4K20me1蛋白的表达水平均降低,而尾部DNA%及尾矩均升高,差异有统计学意义(P0.05)。与亚砷酸钠染毒组比较,联合暴露组Ha Ca T细胞PR-Set7蛋白和m RNA以及H4K20me1蛋白的表达均降低,而Ha Ca T细胞尾部DNA%及尾矩均升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论在对Ha Ca T细胞进行PR-Set7干扰后,亚砷酸钠可能通过抑制组蛋白甲基转移酶PR-Set7蛋白及m RNA的表达水平,从而降低H4K20me1的修饰水平,影响Ha Ca T细胞DNA损伤修复能力,使DNA损伤加重。     

β淀粉样蛋白对人神经母细胞瘤细胞内质网应激的影响

目的研究β淀粉样蛋白(Aβ_(25~35))对人神经母细胞瘤细胞(SHSY5Y)凋亡过程中内质网应激的影响,探讨在内质网应激过程中未折叠蛋白质反应途径(UPR pathway)在凋亡中的作用。方法将处于对数生长期的细胞分别暴露于含0(对照)、5、10、20、30、40μmol/L Aβ_(25~35)的培养基染毒48 h,采用CCK8法检测细胞活性。将对数生长期的细胞分别暴露于含0(对照)、5、10、15μmol/L Aβ_(25~35)的培养基染毒24、48和72 h。采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用Western blotting法检测内质网应激分子伴侣葡萄糖调节蛋白GRP78以及跨膜蛋白活化转录因子-6(ATF-6)、蛋白激酶-1(IRE1α)和RNA-激活蛋白激酶样内质网激酶(PERK)蛋白的表达水平。结果与对照组比较,各浓度Aβ_(25~35)染毒组SHSY-5Y细胞的存活率均较低,差异均有统计学意义(P0.05);且随着Aβ_(25~35)染毒浓度的升高,SHSY-5Y细胞的存活率呈下降趋势。与对照组比较,各浓度Aβ_(25~35)染毒组SHSY-5Y细胞的凋亡率均较高,除5μmol/L Aβ_(25~35)染毒24 h外,差异均有统计学意义(P0.05);且随着Aβ_(25~35)染毒浓度的升高和染毒时间的延长,SHSY-5Y细胞的凋亡率均呈上升趋势。与对照组相比,各剂量、时间点Aβ_(25~35)染毒组SHSY5Y细胞内质网ATF-6蛋白的表达水平较高;15μmol/L Aβ_(25~35)染毒24、48 h和各剂量Aβ_(25~35)染毒72 h后SHSY5Y细胞内质网GRP78蛋白的表达水平较高;10、15μmol/L Aβ_(25~35)染毒24 h和15μmol/L Aβ_(25~35)染毒48 h及各剂量Aβ_(25~35)染毒72 h后SHSY5Y细胞内质网IRE-1α蛋白的表达水平较高;15μmol/L Aβ_(25~35)染毒24 h和10、15μmol/L Aβ_(25~35)染毒72 h后SHSY5Y细胞质网PERK蛋白的表达水平较高,差异均有统计学意义(P0.05)。随着Aβ_(25~35)染毒浓度的升高和染毒时间的延长,细胞内GRP78、ATF-6、IRE1α和PERK蛋白的表达水平均呈上升趋势。结论 Aβ_(25~35)可以诱导SHSY5Y神经细胞内质网应激,导致SHSY5Y细胞发生凋亡。     

苯并[a]芘的细胞毒性及诱导IL-1β和IL-8表达作用研究

目的 探讨不同浓度苯并[a]芘（BaP）对人肺癌（淋巴结转移）NCI-H292的细胞毒性及其对NCI-H292细胞炎性因子分泌的影响。方法 取对数期生长的NCI-H292细胞，分别以不同剂量BaP（0、4、8、16和32 μmol/L） 染毒24、48和72 h后，采用实时无标记细胞分析系统（RTCA）法检测细胞存活率，ELISA法检测细胞内白介素-1β（IL-1β）和白介素-8（IL-8）水平。本实验按照5×3析因设计。结果 与对照组相比，各剂量BaP染毒组在24、48和72 h时间点细胞存活率均显著降低（P<0.001），细胞存活率与染毒剂量之间呈高度负相关关系（r1=-0.986、-0.974和-0.993，P<0.01）；与同剂量组24 h时比较，各实验组在染毒48 h和72 h细胞存活率均显著升高（P<0.001）， 细胞存活率与染毒时间之间呈高度正相关关系（r2=0.958、0.996、0.994、0.999和1.000，P<0.01）。NCI-H292细胞内IL-1β水平在染毒剂量和染毒时间上有交互效应（P<0.001），在48 h和72 h时BaP高剂量（8~32 μmol/L）染毒组IL-1β水平均呈随着染毒剂量升高而降低（P<0.01），72 h时低剂量BaP染毒组IL-1β水平则呈随着染毒剂量升高而升高的剂量-效应关系（P<0.01）；同时，各实验组细胞IL-1β水平在24、48和72 h均呈随着染毒时间增加而上升的时间-效应关系（P<0.01）。NCI-H292细胞内IL-8水平在染毒剂量和染毒时间上有交互效应（P<0.01）： 在染毒72 h，BaP染毒剂量为0~16 μmol/L时IL-8水平呈随着染毒剂量升高而升高的剂量-效应关系（P<0.01）；4、8 μmol/L染毒组细胞IL-8水平在24、48和72 h呈随着染毒时间增加而上升的时间-效应关系（P<0.01）。结论 BaP染毒可引起NCI-H292细胞的存活率下降，且随着染毒剂量增加毒性作用增强；BaP可刺激NCI-H292细胞分泌IL-1β和IL-8，其可能在BaP致肺肿瘤炎症过程中发挥重要作用。     

亚砷酸钠对人胚肺成纤维细胞核因子κB信号通路的影响及其作用机制

目的探讨核因子κB(NF-κB)信号通路在亚砷酸钠染毒致人胚肺成纤维细胞(HELF)损伤中的作用机制。方法将HELF细胞分别暴露于0(对照)、0.625、1.25、2.5、5、10、20、40μmol/L亚砷酸钠溶液染毒18、24、48 h,采用MTT法检测细胞存活率。将HELF细胞分别暴露于0(对照)、0.625、1.25、2.5、5、10、20、40μmol/L亚砷酸钠溶液染毒24 h,采用ELISA法检测上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和白介素-1β(IL-1β)炎性因子的浓度。将HELF细胞分为2组,一组分别暴露于0(对照)、2.5、5、10、20μmol/L的亚砷酸钠溶液,另一组同时加入10μmol/L的NF-κB抑制剂PDTC溶液,染毒24 h后,采用Western blot法检测细胞NF-κB相关蛋白p-IKKβ和p-P65的表达水平。结果与对照组比较,2.5、5、10、20、40μmol/L亚砷酸钠染毒HELF细胞18、24、48 h后的细胞存活率均下降,除2.5 mol/L亚砷酸钠染毒48 h外,差异均有统计学意义(P0.05);且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高和染毒时间的延长,各染毒时间HELF细胞的存活率均呈下降趋势(均P0.01)。与对照组比较,1.25、2.5、5、10、20、40μmol/L亚砷酸钠染毒组HELF细胞上清液中TNF-α的浓度均升高,5、10、20、40μmol/L亚砷酸钠染毒组HELF细胞上清液中IL-6的浓度均升高,各浓度亚砷酸钠染毒组HELF细胞上清液中IL-1β的浓度均升高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高,HELF细胞上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β的浓度均呈上升趋势。与对照组和相同浓度PDTC干预组比较,各浓度亚砷酸钠染毒组HELF细胞p-IKKβ和p-P65蛋白的表达水平均升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论亚砷酸钠暴露可激活NF-κB通路,促使炎性因子增加,从而造成HELF细胞损伤。     

白僵蚕水提物对镉致胰岛β细胞毒性的影响研究

目的 探讨白僵蚕水提物对硫酸镉（CdSO4）致胰岛β细胞NIT-1细胞毒性的影响。方法 采用冷水浸泡法提取白僵蚕的水溶性成分。分别用（0、0.4、0.8、1.6、3.2和6.4mg/mL）白僵蚕水提物染毒细胞24h;用4μmol/L CdSO4分别与（0.4和0.8mg/mL）白僵蚕水提物混合后共处理24h;以及用（0.4和0.8mg/mL） 白僵蚕水提物预处理2h,再以4μmol/L CdSO4分别染毒24h。采用CCK8、Hoechst33258染色以及荧光探针等方法分别检测NIT-1细胞存活率、细胞凋亡及活性氧ROS的水平。结果 （1）与对照组比较,细胞存活率随白僵蚕水提物染毒浓度的增加呈现出先升高后下降的趋势（P<0.05）;（2）与单独处理组相比,4μmol/L CdSO4与（0.4和0.8mg/mL）白僵蚕水提物共处理组细胞存活率均降低（P<0.05）,且预处理组细胞存活率相比白僵蚕单独处理组也降低（P<0.05）;（3）联合处理组细胞变圆、细胞核呈致密浓染,细胞凋亡率均高于白僵蚕和CdSO4单染组（P<0.05）;同时,联合处理组ROS荧光强度也升高,分别为白僵蚕和CdSO4单染组的1.18和1.05倍（P<0.05）。结论 白僵蚕水提物在低浓度下可促进NIT-1细胞的增殖,高浓度则降低细胞的存活率;低浓度的白僵蚕水提物无法拮抗CdSO4诱导的细胞死亡,反而增强了细胞毒性,其机制可能与凋亡和ROS水平增加有关。     

亚慢性镉染毒大鼠MALAT1异常表达与肝肾损伤的关系

目的 研究肺癌转移相关转录子1(MALAT1)在亚慢性氯化镉(CdCl2)染毒大鼠模型肝肾组织中的表达情况,探讨MALAT1与镉致肝肾损伤过程中的关系.方法 在已建立的亚慢性CdCl2染毒大鼠模型中,采用实时荧光定量反转录PCR(QRT-PCR)技术检测肝肾组织中MALAT1表达情况,分析MALAT1与测定的肝功能生化指标(ALT、AST)、肾功能生化指标(BUN、SCR)、相关基因(FOXC2、BCL-2、BAX、TGF、STAT、EGFR)及肝肾镉含量的相关性.结果 与各自的对照组相比,大鼠肝肾组织中MALAT1表达水平均呈不同程度的升高,并有随染毒剂量的增高而升高的趋势,高剂量组表达量分别为(2.63±1.31)和(2.73±0.99),均为对照组的2.46倍,差异均有统计学意义(均P＜0.05).肝脏组织中MALAT1表达与血清中ALT含量存在相关性(r=0.459,P＜0.05);肾脏组织中MALAT1表达与肾镉(r=0.427),BUN(r=0.531),SCR(r=0.400)含量及EGFR表达水平(r=-0.466)均存在相关关系(均P＜0.05).结论 MALAT1在亚慢性镉染毒大鼠肝肾组织中表达水平增高,且与肝肾功能指标含量存在相关关系.肺癌转移相关转录子1可能在镉致肝肾损伤过程中发挥作用.     

镉对人胚肾细胞中经典瞬时受体电位通道mRNA表达影响

目的观察不同质量浓度的氯化镉(CdCl2)染毒后人胚肾细胞(HEK 293T细胞)经典瞬时受体电位通道(TRPC)6个亚型mRNA表达水平的改变,在mRNA水平上探讨镉对肾细胞钙通道的影响。方法 HEK 293T细胞分别暴露于7.5、15.0、30.0、45.0和60.0μmol/L的CdCl28 h后,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖活力;实时荧光定量聚合酶链反应法检测0、15.0和30.0μmol/L CdCl2作用8 h和30.0μmol/L CdCl2染毒4 h后TRPC 6个亚型mRNA表达水平。结果以对照组(CdCl20μmol/L)HEK 293T细胞存活率为100%,各不同质量浓度的染毒组细胞存活率分别为79.40%、77.29%、72.26%、70.25%、60.80%,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。经CdCl2染毒后,各染毒组HEK 293T细胞的TRPC 6个亚型mRNA相对表达量均低于对照组(P<0.05或P<0.01)。结论 CdCl2可能引起HEK 293T细胞的TRPC基因mRNA的表达水平发生改变。     

c-Jun氨基末端激酶在镉致小鼠脑原代星形胶质细胞凋亡中的作用

目的利用原代培养的小鼠脑星形胶质细胞(astrocytes,AS),探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号转导通路是否参与镉致小鼠脑星形胶质细胞凋亡的过程。方法原代培养的小鼠脑星形胶质细胞给予0~20μmol/L镉染毒0~24 h,倒置相差显微镜观察细胞形态变化;给予0~20μmol/L镉染毒9、12 h,采用MTT法检测细胞存活率;给予0~20μmol/L镉染毒12 h,采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率;给予0~20μmol/L镉染毒0~12 h,采用蛋白印迹(Western blotting)法检测JNK磷酸化蛋白的表达水平。结果镉浓度为5~20μmol/L时,随染毒剂量的升高及作用时间的延长,细胞形态发生明显改变:细胞间网络连接松散,突起消失,胞体收缩成球形,贴壁能力下降,最终脱落,漂浮于培养液中。与对照组比较,各浓度镉染毒9、12 h后小鼠脑星形胶质细胞的存活率均下降,差异有统计学意义(P0.01);且随着镉染毒浓度的升高和染毒时间的延长,小鼠脑星形胶质细胞的存活率均呈下降趋势。与对照组比较,各浓度镉染毒12 h后小鼠脑星形胶质细胞的凋亡率均升高,差异有统计学意义(P0.01);且随着镉染毒浓度的升高,小鼠脑星形胶质细胞的凋亡率均呈上升趋势。与对照组比较,5~20μmol/L镉染毒3 h后小鼠脑星形胶质细胞内p-JNK表达量均升高,20μmol/L镉染毒6 h后小鼠脑星形胶质细胞内p-JNK表达量升高,10~20μmol/L镉染毒9、12 h后小鼠脑星形胶质细胞内p-JNK表达量均升高,差异有统计学意义(P0.05);与0 h比较,0~20μmol/L镉染毒3~12 h后小鼠脑星形胶质细胞内p-JNK表达量均升高,差异有统计学意义(P0.05);且随着镉浓度的升高和染毒时间的延长,小鼠脑星形胶质细胞内p-JNK的表达量均呈上升趋势。结论镉可能通过上调JNK磷酸化蛋白的表达水平来诱导小鼠脑星形胶质细胞的凋亡。     

SiO2 诱导巨噬细胞线粒体分裂在肺成纤维细胞活化中的作用

目的 探讨巨噬细胞线粒体过度分裂调控的核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族含热蛋白结构域3(NLRP3)炎症小体激活在矽肺纤维化中的作用机制。方法 以不同浓度二氧化硅(SiO2)染毒大鼠肺巨噬细胞NR8383 12h,采用CCK8检测SiO2对NR8383 细胞存活率的影响;活细胞荧光探针法检测细胞活性氧(ROS)水平;ELISA法测定细胞上清液中白细胞介素-18(IL-18)、IL-1β和转化生长因子-β1(TGF-β1)的水平;Western blot法检测NLRP3炎症小体相关蛋白(NLRP3、Cleaved caspase-1、ASC)以及线粒体分裂蛋白Drp1的表达水平;Western blot法检测不同染毒时间点(0、12、24、48h)100 μg/ml SiO2 浓度下大鼠成纤维细胞 RFL-6COLⅢ、NLRP3、Drp1、α-SMA蛋白的表达水平;使用 Transwell小室将100 μg/ml SiO2处理过的NR8383细胞与RFL-6细胞进行共培养,检测不同处理时间点共培养上清液中IL-18、IL-1β和TGF-β1的水平及NR8383细胞NLRP3、Cleaved caspase-1、ASC、Drp1和RFL-6细胞COLⅢ、α-SMA的表达水平;使用线粒体分裂抑制剂Mdivi-1(10 μmol/L)预处理共培养细胞,观察线粒体分裂抑制后对NR8383细胞NLRP3炎症小体激活、ROS 水平、TGF-β1释放水平及RFL-6细胞纤维化的影响。结果 随着SiO2染毒浓度增加,NR8383细胞存活率逐渐下降,确定100 μg/ml SiO2为最高染毒浓度;随SiO2染毒剂量的增加,NR8383细胞中ROS水平和细胞培养上清液中IL-18、IL-1β、TGF-β1水平明显增加(P<0.05);与对照组相比,100 μg/ml SiO2染毒后NR8383细胞NLRP3、Cleaved caspase-1、ASC和Drp1蛋白表达显著增加(P<0.05);随着 SiO2染毒时间的增加,RFL-6细胞中COLⅢ、NLRP3、Drp1、α-SMA的表达水平无显著变化。在100 μg/ml SiO2染毒NR8383与RFL-6细胞共培养体系中,随着染毒时间的增加,NR8383细胞中ROS产生和上清液中IL-18、IL-1β、TGF-β1水平显著增加(P<0.05);与对照组相比,SiO2染毒24 h后NR8383细胞中NLRP3、Cleaved caspase-1、ASC 及Drp1表达水平显著增加(P<0.05);RFL-6细胞中COLⅢ、α-SMA蛋白表达显著增加(P<0.05)。Mdivi-1可使SiO2处理的NR8383细胞中ROS和上清液中IL-18、IL-1β、TGF-β1水平的升高受到抑制(P<0.05),并下调NR8383细胞中NLRP3、Cleaved caspase-1、ASC、Drp1和RFL-6细胞中COLⅢ、α-SMA的蛋白表达(P<0.05)。结论 SiO2 可以促进大鼠肺巨噬细胞线粒体过度分裂、NLRP3炎症小体激活,进而诱导共培养体系大鼠成纤维细胞纤维化;抑制大鼠肺巨噬细胞线粒体过度分裂可以减轻NLRP3炎症小体活化,并抑制大鼠成纤维细胞纤维化,提示SiO2诱导肺巨噬细胞线粒体过度分裂可能是导致矽肺炎症过程和纤维化的重要原因。     

m6A甲基化修饰在精子发生中的研究进展

N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine, m6A)甲基化作为真核生物中最常见的RNA修饰, 通过甲基化转移酶、去甲基化酶、甲基化识别蛋白三种调控因子参与多种细胞进程和疾病进展。近年来的研究表明m6A甲基化修饰参与了精子发生的整个过程, 其失调造成的生精障碍可能导致男性不育。本文就m6A调控因子在睾丸中的时空表达、m6A甲基化在精子发生中的作用机制以及m6A甲基化调控异常与男性不育等方面的研究进展作一综述, 旨在为男性不育的基础研究和临床治疗提供参考。     

m6A甲基转移酶低表达与系统性红斑狼疮的关联研究

目的 探讨N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine, m6A)甲基转移酶与系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)的相关性。方法 利用实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)和蛋白质印迹(western blotting, WB)实验检测m6A甲基转移酶在SLE中的表达情况,并分析其与SLE临床特征和临床用药之间关系。进一步构建m6A甲基化核心酶METTL3的干扰和过表达Jurkat细胞系,流式细胞术分析Jurkat细胞凋亡状态,RT-qPCR分析细胞因子白介素-2(interleukin-2, IL-2)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha, TNF-α)分泌情况。结果 m6A甲基转移酶在SLE疾病中整体低表达,其中METTL3在SLE患者T淋巴细胞中稳定下调(均P<0.05),与患者抗体和低补体等临床特征明显相关(均P<0.05)。功能实验发现,敲低METTL3会加速Jurkat...     

纳米银颗粒对人HepG2和A549细胞的氧化损伤效应研究

目的探讨纳米银颗粒对人HepG2和A549细胞的氧化损伤效应。方法采用稳定转染了HSPA1A启动子荧光素酶报告基因质粒的HepG2和A549细胞株(HepG2/HSPA1A和A549/HSPA1A细胞)作为细胞株,用不同浓度(6.25、12.5、25、50μg/ml)的纳米银混悬液染毒细胞48h,分别测定细胞存活率、荧光素酶活力、丙二醛(MDA)浓度和细胞内银浓度。结果HepG2/HSPA1A和A549/HSPA1A染毒组的细胞存活率均低于对照组,差异有统计学意义(P0.05或P0.01);染毒浓度为50μg/ml时,细胞存活率分别为对照组的25.26%和12.30%。纳米银颗粒可明显诱导HepG2/HSPA1A和A549/HSPA1A细胞内荧光素酶的表达,各染毒组酶活力均高于对照组,差异有统计学意义(P0.01);HepG2/HSPA1A细胞内荧光素酶活力高于A549/HSPA1A细胞,前者在最高染毒浓度(50μg/ml)时的酶活力为对照组的138.2倍。仅在最高染毒浓度(50μg/ml)时,HepG2/HSPA1A和A549/HSPA1A细胞MDA浓度均高于对照组,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。细胞内银浓度随纳米银浓度的增加而升高,有明显的剂量-效应关系,且HepG2/HSPA1A细胞内银浓度略高于A549/HSPA1A细胞。结论纳米银颗粒可直接进入细胞并诱导细胞氧化损伤;HepG2/HSPA1A和A549/HSPA1A细胞荧光素酶活力所反映的HSPA1A启动子转录活力可用于快速评估纳米银颗粒所致细胞氧化损伤水平。     

壬基酚亚慢性染毒对大鼠胰腺结构及功能的影响

目的研究壬基酚对大鼠胰腺的亚慢性毒性作用。方法 32只6周龄雄性SD大鼠随机分为0 mg/kg、20 mg/kg、60 mg/kg和180 mg/kg壬基酚染毒组,每组8只。采用每日灌胃染毒,持续90 d。染毒结束后测定空腹血糖、血清胰岛素、胰高血糖素和胰腺组织内胰岛素浓度;分离胰岛进行胰岛分泌胰岛素实验;采用酶联免疫法检测肝脏组织中肝糖原含量;采用免疫组织化学法观察胰岛面积、胰岛α、β细胞相对容积以及β细胞与α细胞比率。结果与对照组比较,180 mg/kg染毒组大鼠体重减轻,血清胰岛素、胰岛分泌胰岛素及肝糖原水平下降,胰岛面积减小,β细胞相对容积增大,差异具有统计学意义(P0.05)。60 mg/kg染毒组胰高血糖素、胰腺组织内胰岛素、肝糖原升高,差异具有统计学意义(P0.05)。各染毒组空腹血糖水平、α细胞相对容积和β细胞与α细胞比率与对照组相比无明显差异。结论壬基酚能够改变胰岛形态结构,影响胰腺组织的正常分泌功能。     

微囊藻毒素-LR对小鼠肝细胞DNA甲基化的影响

目的研究微囊藻毒素-LR(MC-LR)暴露对小鼠肝细胞DNA总体甲基化水平及DNA甲基转移酶(DNMTs)mRNA表达的影响。方法将40只健康SPF级昆明小鼠随机分为4组,分别为对照组(含0.02%DMSO)和5、10、20μg/kg MCLR染毒组,每组10只,雌雄各半。采用腹腔注射方式进行染毒,连续染毒20 d。采用高效液相色谱(HPLC)法检测小鼠肝细胞DNA中的脱氧胞苷和5-甲基脱氧胞苷含量,并计算DNA的总体甲基化水平;采用实时荧光定量PCR法检测DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3A和DNMT3B m RNA的表达水平。结果 10、20μg/kg MC-LR染毒组小鼠肝细胞DNA总体甲基化水平,DNMT1、DNMT3A及DNMT3B mRNA的表达水平均低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。小鼠肝细胞DNA总体甲基化水平与DNMT1、DNMT3A、DNMT3B mRNA表达水平均呈正相关(P0.05)。结论 MC-LR可抑制小鼠肝细胞DNMT1、DNMT3A和DNMT3B mRNA的表达,降低DNA总体甲基化水平。