龙蛭汤对衣霉素诱导人脐静脉内皮细胞内GRP78和CHOP的影响

目的探讨龙蛭汤对衣霉素(TM)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)内质网应激及其标志蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和特异性蛋白C增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)表达的影响。方法制备龙蛭汤含药血清,体外培养HUVEC细胞株,分为对照组(10%空白血清),TM组(10%空白血清+3μg/mL TM),TM+龙蛭汤组(10%含药血清+3μg/mL TM),龙蛭汤组(10%含药血清),继续培养6 h。使用CCK-8法比较各组细胞活力,细胞免疫荧光法和Western Blot比较各组GRP78和CHOP蛋白表达,RT-PCR法比较各组GRP78和CHOP mRNA表达。结果与对照组比较,TM组HUVEC细胞活力下降,GRP78、CHOP蛋白及mRNA表达增加(均P0.05);与TM组比较,TM+龙蛭汤组、龙蛭汤组HUVEC细胞活力升高,GRP78、CHOP蛋白及mRNA表达降低(均P0.05)。结论龙蛭汤可通过下调GRP78、CHOP表达,减轻细胞过度的内质网应激反应,提高HUVEC细胞活力。     

丹参酮ⅡA减轻棕榈酸诱导的心肌细胞凋亡及内质网应激

【目的】 探讨丹参酮ⅡA对棕榈酸诱导心肌细胞脂毒性损伤模型内质网应激凋亡的影响。【方法】 将对数期H9c2细胞分6组,即对照组,棕榈酸（400 μmol/L）组,丹参酮 ⅡA 20 μmol/L组和棕榈酸+丹参酮 ⅡA（5、10、20 μmol/L）组,另外引入棕榈酸+CCT020312组与棕榈酸+CCT020312+丹参酮ⅡA 20 μmol/L组考察通路激活状态。细胞计数试剂盒8（CCK-8）法测定H9c2细胞活力;流式细胞术测定细胞凋亡情况;实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）法检测细胞内质网应激相关分子葡萄糖调控蛋白78（GRP78）、转录激活因子4（ATF4）和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）的mRNA表达水平;蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测细胞 GRP78、ATF4、CHOP、Caspase-3、Caspase-9、Caspase-12、蛋白激酶 RNA 样内质网激酶（PERK）、磷酸化PERK（p-PERK）、真核生物翻译起始因子2α（eIF2α）、磷酸化eIF2α（p-eIF2α）的蛋白表达水平。【结果】与对照组比较,棕榈酸组细胞存活率显著降低（P < 0.01）,GRP78、ATF4、CHOP mRNA 和蛋白表达水平均显著升高（P <0.01）,H9c2 细胞的凋亡率升高,p-PERK/PERK 和 p-eIF2α/eIF2α 比例也显著增大（P < 0.01）,凋亡相关分子 Caspase-3、Caspase-9和Caspase-12蛋白表达水平均显著升高（P < 0.01）。不同浓度丹参酮 ⅡA作用后,与棕榈酸组比较,棕榈酸+丹参酮 ⅡA（5、10、20 μmol/L）组细胞存活率显著升高（P < 0.01）,GRP78、ATF4、CHOP mRNA 和蛋白表达水平均显著降低（P < 0.01）,H9c2细胞的凋亡率降低,p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例也显著减小（P < 0.01）,Caspase-3、Caspase-9和Caspase-12蛋白表达水平显著降低（P < 0.01）,均具有剂量依赖性,且棕榈酸+丹参酮 ⅡA 10 μmol/L组（P < 0.05）和棕榈酸+丹参酮 ⅡA 20 μmol/L 组（P < 0.05）变化显著。加入 PERK 通路激活剂 CCT020312 作用后,与棕榈酸组比较,棕榈酸+CCT020312组的p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例,细胞凋亡率,GRP78、ATF4、CHOP 的mRNA和蛋白表达水平均显著升高（P < 0.05）;再经过丹参酮ⅡA处理,与棕榈酸+CCT020312组比较,棕榈酸+CCT020312+丹参酮ⅡA组的p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例,细胞凋亡率,GRP78、ATF4、CHOP 的mRNA和蛋白表达水平均显著回降（P < 0.05）。【结论】 丹参酮ⅡA可减轻心肌细胞脂毒性损伤,其机制与其通过抑制PERK信号通路活化来减轻棕榈酸诱导的心肌H9c2细胞凋亡,并且控制内质网应激反应有关。     

黄连对2型糖尿病大鼠胰腺内质网应激PERK/ATF4/CHOP信号通路的影响

目的:观察黄连对2型糖尿病大鼠的炎症因子、血糖、内质网应激信号通路蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/活化转录因子4(ATF4)/CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)相关蛋白的干预作用。方法:将80只雄性SPF级大鼠随机分为正常组、模型组、盐酸二甲双胍组、黄连组,每组20只。采用"10周高糖高脂饲料喂养+经腹腔注入低剂量链脲佐菌素(STZ)"方案对非正常组大鼠造模。盐酸二甲双胍组予盐酸二甲双胍0. 2 g·kg~(-1)·d~(-1),黄连组按照剂量为0. 4 g·kg~(-1)·d~(-1)给药,模型组、正常组大鼠均给予同等体积的蒸馏水,每天1次。待灌胃期终止,取血,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组大鼠的空腹血糖(FBG),C反应蛋白(CRP),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;采用免疫组化法检测各组大鼠胰腺组织葡萄糖调节蛋白78(GRP78),CHOP,ATF4蛋白的表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠胰腺组织PERK,磷酸化(p)-PERK蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠FBG,TNF-α,CRP水平及ATF4,CHOP,GRP78,p-PERK蛋白表达均明显升高(P 0. 05);与模型组比较,黄连组和盐酸二甲双胍组FBG,TNF-α,CRP水平,ATF4,CHOP,GRP78,p-PERK蛋白表达均明显下降(P 0. 05)。结论:黄连能在一定程度上降低大鼠血糖,缓解炎性反应,可抑制质网应激PERK/ATF4/CHOP信号通道,减少CHOP,ATF4,GRP78,p-PERK的表达。     

基于内质网应激探讨淫羊藿苷对TM4细胞损伤的保护作用

目的:基于内质网应激(ERS)探讨淫羊藿苷对D-半乳糖(D-Gal)诱导的小鼠睾丸支持细胞株TM4细胞损伤的保护作用。方法:将TM4细胞分为正常对照组、模型组及淫羊藿苷低(0.5μmol/L)、高(1.0μmol/L)浓度组。Western blot法检测TM4细胞紧密连接相关蛋白Occludin、Claudin-1及内质网应激相关蛋白GRP78、p-PERK、p-eIF2α、ATF4、p-IRE1、XBP1、ATF6表达水平。结果:Western blot结果显示,与正常对照组比较,模型组细胞紧密连接相关蛋白Occludin、Claudin-1及内质网应激相关蛋白GRP78、p-PERK、p-eIF2α、ATF4、p-IRE1、XBP1、ATF6表达显著降低(P0.01),给予淫羊藿苷干预后上述蛋白表达均显著升高(P0.05或P0.01)。结论:淫羊藿苷可减轻D-Gal诱导的TM4细胞损伤,其机制可能与上调内质网应激信号通路有关。     

黄芪多糖对毒胡萝卜素诱导人结肠癌系HT29细胞内质网应激的影响

目的探讨黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,AP)对毒胡萝卜素内酯(Thapsigargin,Tg)诱导人结肠癌系HT29细胞发生内质网应激(Endoplasmic Reticulum Stress,ERS)时内质网结构变化及相关分子GRP78和CHOP的影响。方法常规培养HT29细胞后,将细胞分为4组:①空白细胞组(Control组):细胞不做任何药物处理;②细胞模型组(Model组):采用1μmol/L Tg诱导HT29细胞建立ERS模型;③黄芪多糖低浓度组(AP-L组);④黄芪多糖高浓度组(AP-H组)。CCK8法检测黄芪多糖对HT29细胞活性,透射电镜观察内质网结构变化,Real-time PCR法检测ERS时GRP78、CHOP mRNA表达情况。结果黄芪多糖浓度分别为1、10μg/mL,且分别作用HT29细胞12、24、36、48 h时,细胞存活率随着浓度的增加而增加,说明对细胞无明显毒副作用。透射电镜观察Control组内质网结构呈网膜状结构,网膜腔不扩张;Model组内质网形态迥异,大小不一,呈空泡状改变,部分可见融合成簇现象;AP-L组内质网网膜腔扩张程度减轻,空泡体积减小和数量减少;AP-H组内质网形态基本恢复正常,呈网膜状结构,可见数量较少,形态较小的空泡状结构。Real-time PCR法检测结果:与Control组相比,Model组HT29细胞GRP78、CHOP mRNA表达明显增加(P<0.05);与Model组比较,AP-L组和AP-H组HT29细胞GRP78、CHOP mRNA表达均减少(P<0.05);与AP-L组比较,AP-H组HT29细胞GRP78、CHOP mRNA表达减少(P<0.05)。结论黄芪多糖能够抑制Tg诱导HT29细胞发生ERS,其机制可能与降低GRP78和CHOP的表达、减轻内质网应激有关。     

温阳通脉方经内质网应激相关通路对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的作用

目的:观察温阳通脉方含药血清是否在内质网应激相关通路对心肌细胞缺氧/复氧损伤的作用,并探究体外培养时最佳给药剂量。方法:以20%含药血清处理,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测得CoCl_2烫最佳浓度和各组细胞存活率;比色法检测各组半胱氨酸蛋白酶3(Caspase3)酶活性和上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;Hoechst 33342荧光染色观察各组细胞凋亡形态变化;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;Western Blot法检测各组内质网应激相关蛋白GRP78、Caspase12、CHOP表达以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达情况。结果:与空白对照组血清相比,模型组细胞活性明显降低,Caspase3酶活性和LDH活性明显升高,细胞凋亡数量明显增多,凋亡率明显升高, GRP78、Caspase12、CHOP和Bax表达明显增多,Bcl-2表达明显减少;与模型组相比,3.24、6.48、12.96g/kg组含药血清能够不同程度改善细胞活性,Caspase3酶活性和LDH活性明显减少,凋亡率不同程度降低,GRP78、Caspase12、CHOP和Bax表达明显减少,Bcl-2表达不同程度增多。结论:温阳通脉方能减轻缺氧/复氧后H9C2心肌细胞损伤,其机制可能与温阳通脉方抵抗内质网应激介导的细胞凋亡有关,其抗凋亡程度呈剂量依赖性,以温阳通脉方12.96g/kg组效果最佳。     

鬼针草乙酸乙酯提取物对内质网应激所致肝细胞损伤的保护作用研究

该研究旨在探讨鬼针草乙酸乙酯提取物对内质网应激所致的肝细胞损伤的保护作用及机制。衣霉素诱导L02细胞建立内质网应激损伤模型;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测鬼针草乙酸乙酯提取物对内质网应激所致L02细胞损伤的存活率;Western blot法检测内质网应激信号通路蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、真核生物翻译起始因子2α(eIF2α)、转录因子激活蛋白4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、B细胞淋巴瘤/白血病基因2(Bcl-2)、Bcl-2结合抗凋亡基因(Bax)的表达水平,同时检测加入内质网应激抑制剂(4-苯基丁酸)和shRNA沉默CHOP因子后上述表达情况;免疫荧光法检测L02细胞中GRP78、PERK、CHOP的表达水平。结果显示,鬼针草乙酸乙酯提取物显著提高内质网应激所致L02细胞损伤的存活率(P0.05或P0.01),并在一定范围内呈时间剂量依赖性。给药组的GRP78、PERK、eIF2α、ATF4、CHOP、Bax表达水平显著降低(P0.05或P0.01),Bcl-2表达水平显著升高(P0.01);加入内质网应激抑制剂和shRNA沉默CHOP因子后,GRP78、PERK、eIF2α、ATF4、CHOP、Bax表达水平显著降低(P0.01),Bcl-2表达水平显著升高(P0.01)。免疫荧光结果显示GRP78、PERK、CHOP表达情况与Western blot法检测结果一致。综上,鬼针草乙酸乙酯提取物对内质网应激所致的L02细胞损伤具有显著保护作用,其机制可能与抑制内质网应激,下调PERK/eIF2α/ATF4/CHOP信号通路所介导的细胞凋亡有关。     

积雪草苷调控GRP78/PERK/CHOP通路对急性心肌梗死大鼠的心肌保护作用研究

目的观察积雪草苷(AC)通过内质网应激(ERS)相关葡萄糖调节蛋白78(GRP78)/蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/转录因子C、EBP同源蛋白(CHOP)通路对急性心肌梗死(AMI)大鼠的心肌保护作用。方法选择SPF级8周龄级SD大鼠108只,结扎左冠状动脉前降支建立心肌梗死模型,随机分为假手术组,模型组,积雪草苷低、中、高剂量组,牛磺酸组,造模完成24 h后给药,每天早晚各1次,4周后测定左室质量和体质量,TCC染色法测定心肌梗死面积,TUNEL法检测心肌细胞凋亡率,HE染色观察心肌细胞形态,Westorn blotting检测GRP78、PERK、CHOP及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-12、Caspase-3的表达。结果与假手术组比较,模型组左室质量和左室质量/体质量的比值显著增加(P 0.05),心肌梗死面积显著增加,心肌细胞凋亡率显著增加;与模型组比较,积雪草苷各组和牛磺酸组左室质量和左室质量/体质量的比值显著下降(P 0.05),梗死面积下降,细胞凋亡比例显著减少(P 0.05),且积雪草苷各组呈浓度依赖性降低。HE染色显示假手术组心肌纤维排列整齐,横纹清晰,无水肿或坏死;模型组心肌纤维不规则,横纹不清或缺失,积雪草苷各组和牛磺酸组心肌纤维轻度扩张,心肌纤维局灶性丢失。Western blotting检测显示,与假手术组比较,模型组GRP78、PERK、CHOP、Bax、Caspase-12、Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P 0.05),Bcl-2蛋白水平显著降低(P 0.05);与模型组比较,积雪草苷各组随着浓度的升高GRP78、p-PERK、CHOP、Bax、Caspase-12、Caspase-3蛋白表达逐渐降低(P 0.05),Bcl-2蛋白表达逐渐升高(P 0.05),均呈剂量依赖性。结论 AC可减少大鼠心肌梗死区,可通过抑制GRP78/PERK/CHOP通路发挥对急性心肌梗死大鼠的保护作用。     

基于NF-κB和JAK/STAT通路探讨黄芪、当归、忍冬藤水提冻干粉调控大鼠滑膜细胞增殖和凋亡的作用机制

目的基于NF-κB和JAK/STAT通路,探讨黄芪、当归、忍冬藤水提冻干粉对IL-1β诱导的大鼠滑膜细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法取生长状态良好的RSC-364细胞,分为5组:正常组无药物干预,模型组加10 ng/mL IL-1β,对照组加10 ng/mL IL-1β、10 ng/mL IL-1RA,100μg/mL药物组加10 ng/mL IL-1β和100μg/mL黄芪、当归、忍冬藤水提冻干粉,250μg/mL药物组加10 ng/mL IL-1β和250μg/mL黄芪、当归、忍冬藤水提冻干粉,分别于培养12 h、24 h后流式细胞术检测各组滑膜细胞凋亡率,HE染色观察滑膜细胞形态,Western-Blot法检测滑膜细胞中NF-κB和JAK/STAT通路关键蛋白NF-κB p50、IKKα/β、JAK1、STAT3表达水平。结果模型组培养12 h和24 h细胞凋亡率均显著低于正常组(P均<0.05),250μg/mL药物组培养12 h后细胞凋亡率显著高于模型组(P<0.05)。模型组培养12 h和24 h后细胞中TRAF2、IKKα/β、NF-κB p50、JAK1、STAT3表达水平均明显高于正常组(P均<0.05),而250μg/mL药物组均明显低于模型组(P均<0.05);100μg/mL药物组STAT3表达水平与模型组比较差异无统计学意义(P均>0.05),TRAF2、IKKα/β、NF-κB p50、JAK1表达水平也均明显低于模型组(P均<0.05)。结论黄芪、当归、忍冬藤水提冻干粉可能通过抑制NF-κB和JAK/STAT信号通路促进滑膜细胞凋亡,抑制IL-1β诱导的滑膜细胞过度增殖,减轻炎症反应。     

黄芪甲苷对被动型Heymann肾炎大鼠PERK通路的影响

目的:观察黄芪甲苷对被动型Heymann肾炎大鼠PERK通路的影响。方法:用羊抗大鼠Fx1A抗体血清尾静脉注射制备被动型Heymann肾炎大鼠模型。40只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、黄芪甲苷低剂量组、黄芪甲苷高剂量组和贝那普利组。造模成功后各治疗组灌胃给药4周。定期检测24 h尿蛋白定量。4周后处死所有大鼠,采血检测血清白蛋白,PASM染色观察肾组织病理学改变,免疫组化检测肾组织磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶(p-PERK)、磷酸化真核细胞翻译起始因子2α(p-e IF2α)的表达,Western blot检测肾组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达。结果:模型组大鼠24 h尿蛋白定量较正常对照组显著升高(P0.05),并随着时间推移蛋白尿逐渐增多,至4周后达到高峰。在给药4周后,与正常对照组比较,模型组大鼠肾组织p-PERK、p-e IF2α、GRP78表达明显升高,血清白蛋白明显降低,差异均有统计学意义(P0.05)。与模型组比较,黄芪甲苷高剂量组及贝那普利组大鼠24 h尿蛋白显著减少,肾组织p-PERK、p-e IF2α、GRP78表达显著减少,血清白蛋白显著升高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:黄芪甲苷可能通过抑制内质网应激(ERS)中的PERK通路缓解被动型Heymann肾炎大鼠肾脏损伤。     

滋补脾阴方药对脾阴虚糖尿病大鼠大脑皮质内质网应激的影响

目的观察脾阴虚糖尿病大鼠大脑皮质磷酸化(p)RNA依赖的蛋白激酶样内质网激酶(PERK)、真核起始因子2α-亚单位(eIF2α)、p-eIF2α、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的变化,探讨脾阴虚糖尿病相关认知下降发病机制及滋补脾阴方药的作用机制。方法将大鼠随机分为对照组、糖尿病组、脾阴虚组、脾阴虚糖尿病组(病证组)、脾阴虚糖尿病+滋补脾阴方药组(治疗组)。采用高脂喂养4周联合小剂量链脲佐菌素注射方法建立2型糖尿病模型。在此基础上采用饮食不节、劳倦过度及灌服伤阴药方法建立脾阴虚糖尿病模型。治疗组给予滋补脾阴方药灌胃,其余各组给予等体积生理盐水灌胃,连续15 d,取大脑皮质。采用Western Blot、RT-PCR方法观察PERK、eIF2α、p-eIF2α、GRP78表达变化。结果糖尿病组、脾阴虚组、病证组PERK、p-eIF2α蛋白表达及GRP78 mRNA表达较对照组增强(P0.05),糖尿病组、病证组GRP78蛋白表达较对照组增强(P0.05),治疗组上述分子表达较糖尿病组、病证组均减弱(P0.05)。结论内质网应激参与脾阴虚糖尿病相关认知下降的发病,滋补脾阴方药通过减轻内质网应激改善学习记忆障碍。     

四君子颗粒对大鼠糖尿病前期的改善作用

目的探讨四君子颗粒对大鼠糖尿病前期的改善作用。方法采用高糖高脂饮食建立糖尿病前期大鼠模型,随机分为正常组、模型组、四君子颗粒高、低剂量组(10.50、5.25 g/kg),连续灌胃10周。分别于第2、4、6、8、10周末检测FBG、FINS、GHb水平并计算Homa-IR,第10周末采用TUNEL染色法检测胰岛细胞凋亡水平,Western blot法检测胰腺组织p-PERK、GRP78、ATF4、CHOP蛋白表达。结果糖尿病前期大鼠FBG、GHb、FINS水平及Homa-IR均升高(P<0.01),胰岛中凋亡细胞增多,胰腺组织p-PERK、GRP78、ATF4、CHOP蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01)。给予四君子颗粒后,血清FBG、GHb、FINS水平和Homa-IR降低(P<0.05,P<0.01),胰岛细胞凋亡减少,同时,胰腺组织p-PERK、GRP78、ATF4、CHOP蛋白表达下降(P<0.05,P<0.01)。结论四君子颗粒可明显改善大鼠糖尿病前期状态,其机制可能与减轻糖尿病前期大鼠胰岛素抵抗、抑制内质网应激诱导的胰岛细胞凋亡有关。     

黄芪多糖对Tg诱导PERK/eIF2α通路介导HT29细胞凋亡的保护机制研究

目的 探讨黄芪多糖对毒胡萝卜素内酯(Tg)诱导PERK/eIF2α通路介导HT29细胞凋亡的保护作用.方法 将细胞分为空白组、模型组、黄芪多糖低剂量组、黄芪多糖高剂量组.除空白组外,其余组给予1 μmol/LTg诱导24h后进行PERK及p-eIF2α蛋白表达的检测.结果 用Tg诱导HT29细胞,PERK及p-eIF2...     

补肾活血方对高糖高脂诱导损伤的小鼠脑微血管内皮细胞内质网应激和RAGE/LRP-1蛋白表达的影响

目的:在细胞水平探索补肾活血方对高糖高脂诱导的小鼠脑微血管内皮细胞(BEND3细胞)损伤的改善作用,并探究补肾活血方对高糖高脂导致的内质网应激和转运Aβ相关受体蛋白的作用。方法:采用高糖高脂(25mmol/L葡萄糖,200μmol/L棕榈酸)刺激BEND3细胞,用CCK-8法筛选合适的补肾方(BS)、活血方(HX)、补肾活血方(BSHX)的最佳用药浓度;应用免疫蛋白印迹法检测BS、HX、BSHX最佳用药浓度对葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、磷酸化真核起始因子2α(p-eIF2α)、活性转录因子4(ATF4)、核因子κB(NF-κB)抗体以及脑内与转运β淀粉样蛋白相关的晚期糖基化终产物受体(RAGE)和低密度脂蛋白受体相关蛋白-1(LRP-1)的表达情况。结果:CCK-8检测细胞活力,最终选定补肾方100mg/L、活血方20mg/L和补肾活血方120mg/L;与正常对照组比较,高糖高脂刺激BEND3细胞后,GRP78、p-eIF2α、ATF4、NF-κB、RAGE表达显著增加(P<0.01),LRP-1表达下降(P<0.01);药物干预后,GRP78、p-eIF2α、ATF4、NF-κB、RAGE蛋白下调,BSHX组LRP-1表达显著上调(P<0.05,P<0.01);且以BSHX组最为明显。结论:补肾方、活血方、补肾活血方对高糖高脂诱导的BEND3细胞损伤均有改善作用,但以补肾活血方疗效最为突出,且对高糖高脂导致的内质网应激和转运β淀粉样蛋白受体的蛋白表达具有调节作用。     

基于PERK信号通路介导的细胞凋亡及杯状细胞破坏探讨芍药汤对溃疡性结肠炎大鼠的作用机制

目的:通过检测溃疡性结肠炎(UC)大鼠p-PERK通路蛋白、C/EBP 同源蛋白的表达及结肠杯状细胞数量,探讨芍药汤对UC大鼠的作用机制。方法: 84只SD大鼠中随机抽取14只作为空白组,余下70只大鼠通过三硝基苯磺酸建立UC大鼠模型,除去死亡大鼠,随机分为模型组12只、柳氮磺吡啶组13只、芍药汤低剂量组12只、芍药汤中剂量组13只、芍药汤高剂量组13只。空白组、模型组用等体积的0.9%氯化钠溶液灌胃,柳氮磺吡啶组采用柳氮磺吡啶灌胃,芍药汤高、中、低剂量组按照芍药汤不同剂量灌胃。第14天进行疾病活动指数(DAI)评分。随后将大鼠处死并解剖,进行结肠黏膜损伤指数(CMDI)评分,并检测大鼠结肠p-PERK通路蛋白、C/EBP 同源蛋白的表达及结肠杯状细胞数量。结果: 与空白组比较,柳氮磺吡啶组及芍药汤不同剂量组大鼠DAI、CMDI评分均增高(P<0.05),与模型组比较,柳氮磺吡啶组和芍药汤高、中、低剂量组DAI、CMDA评分均降低(P<0.05),柳氮磺吡啶组与芍药汤高、中、低剂量组DAI、CMDA评分比较无统计学差异(P>0.05); 与空白组比较,模型组、柳氮磺吡啶组和芍药汤高、中、低剂量组p-PERK、CHOP蛋白表达均上升(P<0.05); 与模型组比较,柳氮磺吡啶组和芍药汤高、中、低剂量组p-PERK、CHOP蛋白表达均下降(P<0.05); 与芍药汤低剂量组比较,柳氮磺吡啶组和芍药汤高、中剂量组p-PERK、CHOP蛋白表达均下降(P<0.05); 柳氮磺吡啶组和芍药汤高、中剂量组p-PERK、CHOP蛋白表达无统计学差异(P>0.05); 与空白组比较,其他各组杯状细胞数量均下降(P<0.05); 与模型组比较,柳氮磺吡啶组和芍药汤高、中、低剂量组杯状细胞数量均明显增加(P<0.05); 与芍药汤低剂量组比较,柳氮磺吡啶组和芍药汤高、中剂量组杯状细胞数量均增加(P<0.05); 柳氮磺吡啶组和芍药汤高、中剂量组杯状细胞数量比较无统计学差异(P>0.05)。结论: 芍药汤能抑制内质网应激PERK信号通路被激活,降低CHOP表达活性,减少细胞凋亡,抑制杯状细胞被破坏,保护肠黏膜屏障,改善UC大鼠的症状和体征,这可能是芍药汤治疗UC的作用机制。     

二参汤对异丙肾上腺素致大鼠心肌缺血损伤的保护作用

目的:通过观察二参汤对心肌缺血大鼠血清学和组织学相关指标的影响,探讨二参汤抗心肌缺血的机制.方法:将健康Wistar大鼠用随机数字表法分为5组,二参汤高、中、低剂量组(100,50,20 g·kg-1),空白对照组和模型组,每组10只.二参汤连续ig 14 d后ip注射5 mg·kg-1异丙肾上腺素(ISO)造成心肌缺血性损伤模型后观察心电图标Ⅱ导联变化,血清血栓素A2( TXA2)、前列环素(PGI2)含量的变化及对心肌细胞凋亡相关基因Bax mRNA,Bcl-2 mRNA的表达的影响.结果:与模型组相比,二参汤组在注射ISO后5～30 min各时间段均见T波明显回落(P＜0.05);二参汤组均可不同程度降低血清TXA2的含量,二参汤高剂量组(102.16± 9.41) μg· L-1显著低于模型组( 188.81±38.70) μg·L-1(P＜0.05),增加血清PGI2的含量,二参汤高剂量组(112.10±10.45)μg·L-1显著高于模型组(36.10±4.26)μg·L1(P＜0.05),调整TXA2/PGI2的平衡;二参汤能抑制心肌组织Bax mRNA的表达,上调Bcl-2 mRNA的表达(P＜0.05),保持Bcl-2 mRNA/Bax mRNA的平衡.结论:二参汤通过凋节PGI2/TXA2的平衡,从而抑制血管内皮炎症性改变,保护血管内皮功能,发挥抗心肌缺血作用,通过调节Bcl-2mRNA/BAXmRNA的平衡,调整细胞凋亡基因平衡,抑制过度凋亡保护心肌细胞,达到抗心肌缺血作用.     

黄芪失笑散对急性心肌梗死大鼠Caspase-3、Bax及Bcl-2表达的影响

目的:观察不同剂量黄芪失笑散对大鼠急性心肌梗死后细胞凋亡及Caspase-3、Bax及Bcl-2蛋白表达的影响。方法:120只雄性SD大鼠随机分为5组:模型组、对照组、黄芪失笑散高剂量组(28g.kg-1.d-1)、中剂量组(14g.kg-1.d-1)、小剂量组(7g.kg-1.d-1)。连续灌胃7天后,结扎冠状动脉左前降支造成急性心肌梗死模型,对照组不结扎,手术后4.5h留取心脏标本,TTC染色法检测心肌梗死面积,Western blot法检测Caspase-3、Bax及Bcl-2蛋白表达量。结果:与对照组比较,黄芪失笑散组可明显减少心肌梗死面积和Caspase-3、Bax蛋白表达量,升高Bcl-2蛋白表达量,P0.01。不同剂量组间差异有统计学意义P0.05,黄芪失笑散大剂量组效果最好。结论:黄芪失笑散能够保护缺血心肌、降低心梗面积,机制与降低梗死边缘区Bax/Bcl-2比值、活化Caspase-3蛋白水平有关。     

苦皮藤对类风湿性关节炎成纤维滑膜细胞增殖和相关细胞因子表达的影响

目的:观察苦皮藤不同提取部位对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)增殖的影响,及其对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的HFLS-RA中细胞因子表达的影响。方法:制备苦皮藤水提物(A)及其醇提物(B),对醇提物根据极性大小进行萃取,得到石油醚部位(C)、二氯甲烷部位(D)、乙酸乙酯部位(E)、正丁醇部位(F)、剩余层部位(G)。噻唑蓝(MTT)法检测苦皮藤各部位不同浓度(10、20、40、80、160μg/mL)干预细胞24 h、48 h、72 h,对细胞增殖的抑制作用;TNF-α(20 ng/mL)体外诱导HFLS-RA增殖,加入不同浓度的各个提取部位(10,40,160μg/mL)作用72 h后,酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞上清中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、前列腺素E 2(PGE 2)的含量。结果:MTT结果表明,苦皮藤的B、C、D(80,160μg/mL)能显著抑制HFLS-RA细胞的增殖(P<0.01),呈时间和剂量依赖性;A、E、F、G四组对细胞的活力均无明显影响。ELISA结果显示,与空白组比较,TNF-α组细胞上清中IL-1β、IL-6、MMP-3、PGE 2含量均显著提高(P<0.01);与TNF-α组比较,B、C、D(40,160μg/mL)能显著抑制IL-1β的表达(P<0.05,P<0.01),具有剂量依赖性;C(40,160μg/mL)能显著抑制IL-6的表达(P<0.05),D(160μg/mL)能显著抑制IL-6的表达(P<0.05);C、D(160μg/mL)能显著降低MMP-3含量(P<0.05);A、B、D(160μg/mL)可抑制PGE 2的表达(P<0.05),C(40、160μg/mL)能显著抑制PGE 2的表达(P<0.05,P<0.01)。结论:苦皮藤可抑制HFLS-RA增殖及其分泌IL-1、IL-6、MMP-3、PGE 2的能力。