下调microRNA-107表达对人子宫内膜样腺癌Ishikawa细胞增殖迁移和侵袭的作用

目的:探讨下调microRNA-107(miR-107)表达对人子宫内膜样腺癌细胞系Ishikawa增殖迁移和侵袭能力的影响及可能机制。方法:将miR-107抑制剂(miR-107 inhibitor)瞬时转染Ishikawa细胞,下调miR-107表达。实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测miR-107表达,CCK-8法检测细胞增殖能力,细胞划痕方法检测细胞迁移能力,Transwell小室法检测细胞侵袭能力,Western blot法检测ER-α受体蛋白表达水平。结果:转染miR-107 inhibitor的Ishikawa细胞中miR-107表达水平显著降低,细胞的增殖迁移和侵袭能力降低,细胞中ER-a受体蛋白表达水平增高。结论:下调miR-107表达可能通过上调ER-α表达抑制Ishikawa细胞的增殖迁移和侵袭能力。     

periostin促进Ishikawa子宫内膜癌肿瘤干细胞的增殖和侵袭

目的:探讨periostin对子宫内膜癌肿瘤干细胞增殖和侵袭的影响,及其可能作用机制。方法:收集100例手术切除的子宫内膜癌组织及距病灶3cm的癌旁组织,免疫组化、荧光定量PCR技术检测子宫内膜癌组织及癌旁组织中periostin的表达。流式细胞仪分选出子宫内膜癌细胞系Ishikawa CD133~+细胞并培养,免疫荧光检测Ishikawa肿瘤细胞球中CD133的表达情况。Western bolt法检测CD133~+ Ishikawa和parental Ishikawa细胞中periostin的表达。构建针对periostin的shRNA表达载体转染Ishikawa CD133~+细胞和过表达periostin的载体转染亲本parental Ishikawa细胞。Western bolt法检测细胞中periostin蛋白表达水平,CCK-8和Transwell小室检测细胞的增殖和侵袭能力,Western bolt法检测Wnt信号通路蛋白(β-catenin、c-myc、CyclinD1、GSK3β)的表达。结果:periostin在子宫内膜癌组织的表达高于癌旁组织(P0.01),并与子宫内膜癌的病理级别呈正相关(r=0.65,P0.01)。子宫内膜癌肿瘤干细胞具有"干细胞"特性,能形成肿瘤球并表达干细胞标记物CD133。periostin在CD133~+ Ishikawa细胞中的表达高于亲本parental Ishikawa细胞(P0.01);相对于转染空载体组细胞,periostin shRNA能有效抑制Ishikawa CD133~+细胞的增殖和侵袭,且抑制Wnt信号通路蛋白(β-catenin、c-myc、CyclinD1、GSK3β)的表达(均P0.01)。Parental Ishikawa细胞过表达periostin慢病毒能增强其增殖和侵袭能力,表现为Wnt/β-catenin信号通路被激活。结论:periostin通过激活Wnt/β-catenin信号通道促进子宫内膜癌肿瘤干细胞的增殖和侵袭。periostin可能成为临床治疗子宫内膜癌的新靶标。     

EGFR抑制剂AG1478对子宫内膜癌细胞上皮-间质转化的影响

目的:研究表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂AG1478对子宫内膜癌细胞增殖和上皮-间质转化的影响。方法:蛋白印迹法检测子宫内膜癌细胞上皮标记蛋白E-cadherin、α-catenin,间质标记蛋白N-cadherin、vimentin及MMP-9、MMP-2蛋白的表达水平。MTT法检测不同浓度AG1478对子宫内膜癌细胞的增殖抑制作用。蛋白印迹法检测AG1478对子宫内膜癌细胞E-cadherin、α-catenin,N-cadherin、vimentin及MMP-9、MMP-2蛋白表达水平的影响。体外迁移实验检测AG1478对子宫内膜癌细胞迁移能力的影响。结果:(1)EGFR过表达可下调子宫内膜癌细胞上皮标记蛋白并上调间质标记蛋白及MMP-9、MMP-2蛋白的表达水平(P<0.05)。(2)AG1478对两种子宫内膜癌细胞均有增殖抑制作用,以经转染稳定过表达EGFR的Ishikawa细胞更为敏感(P<0.05)。(3)AG1478上调子宫内膜癌细胞上皮标记蛋白并下调间质标记蛋白及MMP-9、MMP-2蛋白的表达水平,以转染EGFR的Ishikawa细胞变化更为显著(P<0.05)。(4)AG1478可减弱子宫内膜癌细胞的迁移能力,以过表达EGFR的Ishikawa细胞更为明显(P<0.05)。结论:EGFR抑制剂AG1478可有效地抑制子宫内膜癌细胞增殖和上皮-间质转化。     

HOXA10在子宫内膜癌中的表达及调控机制探讨

目的:探讨HOXA10在子宫内膜癌组织中的表达情况,以及miRNA135a对HOXA10表达的调控和对子宫内膜癌细胞侵袭能力的影响。方法:通过靶基因预测确定miRNA135a与HOXA10的相关性。应用免疫组化法检测HOXA10在子宫内膜癌组织中的表达。通过脂质体转染法瞬时转染HEC-1B和Ishikawa细胞系建立瞬时过表达miRNA135a模型。Real-time PCR和Western blot法检测转染前后HOXA10 mRNA和蛋白水平表达的变化,通过划痕实验、Transwell侵袭实验观察细胞侵袭和迁移能力的变化。结果:子宫内膜癌中HOXA10表达水平显著低于正常子宫内膜组织(P0.01);过表达miRNA135a后,HEC-1B和Ishikawa细胞的迁移和侵袭能力显著增强,差异有统计学意义(P0.01),两种细胞中HOXA10 mRNA和蛋白水平均显著降低(P0.01)。结论:子宫内膜癌中miRNA135a通过抑制HOXA10促进内膜癌细胞的侵袭和迁移能力,参与子宫内膜癌生物学行为的调控。     

UBE3C在雌激素促进子宫内膜癌细胞迁移及侵袭中的作用机制研究

目的:探讨泛素连接酶E3C(UBE3C)在雌激素(E_2)诱导子宫内膜癌细胞发生迁移、侵袭及上皮间质转化(EMT)过程中的作用。方法:免疫组化法检测子宫内膜癌组织中UBE3C表达情况。qRT-PCR及Western blot法检测UBE3C在子宫内膜癌细胞株、子宫内膜间质细胞株及正常子宫内膜上皮细胞中的表达。雌激素以浓度及时间梯度处理Ishikawa细胞,qRT-PCR及Western blot法检测UBE3C mRNA和蛋白表达。雌激素处理siNC或siUBE3C转染的Ishikawa细胞,划痕试验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移、侵袭能力,Western blot法检测EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、snail及slug表达。结果:UBE3C在子宫内膜癌组织及细胞中高表达。雌激素能上调Ishikawa细胞UBE3C mRNA及蛋白表达,且在一定范围内呈剂量时间依赖性。雌激素刺激增强Ishikawa细胞的迁移、侵袭能力,促进EMT;si-UBE3C干扰能显著抑制上述作用,且能减弱雌激素对Ishikawa细胞迁移、侵袭能力的增强及EMT的促进。结论:UBE3C与雌激素能增强子宫内膜癌细胞的迁移、侵袭能力,促进上皮间质转化,UBE3C可能是雌激素下游重要的靶基因之一,介导雌激素诱导子宫内膜癌细胞的迁移、侵袭及上皮间质转化。     

MiRNA-199a-3p通过mTOR通路与阿霉素联合抑制子宫内膜癌细胞的增殖和促凋亡作用

目的:探讨阿霉素对转染miRNA-199a-3p的子宫内膜癌(EC)的作用及机制。方法:构建pSIREN-miRNA-199a-3p过表达质粒并稳定转染内膜癌细胞系Ishikawa、SPEC-2细胞。应用逆转录PCR(RT-PCR)检测miRNA-199a-3p的表达;MTT、克隆形成实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测mTOR信号通路相关蛋白表达。结果:上调miRNA-199a-3p可显著抑制子宫内膜癌细胞Ishikawa、SPEC-2的克隆形成能力(P0.01,P0.05);miRNA-199a-3p可增强阿霉素对Ishikawa、SPEC-2细胞的生长抑制(P均0.05)和凋亡诱导作用(P均0.05);Western blot证实,miRNA-199a-3p可显著下调mTOR及其效应蛋白p70S6K的磷酸化水平。结论:miRNA-199a-3p可能通过mTOR通路与阿霉素联合抑制子宫内膜癌细胞的增殖并促进其凋亡,为联合应用miRNA和阿霉素治疗EC提供了实验依据。     

miR-630在子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、侵袭和迁移中的作用及其机制

目的探讨miR-630对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。方法将体外培养的Ishikawa细胞分为miR-630 mimics组、mimics-NC组、miR-630 inhibitor组和inhibitor-NC组,采用实时荧光定量PCR检测miR-630表达,MTT实验和克隆形成实验检测细胞增殖,Transwell小室实验检测细胞侵袭和迁移。双荧光素酶报告基因实验检测miR-630和BMI1的靶向关系,免疫印迹法检测BMI1蛋白的表达。结果与相应对照组相比,转染miR-630 mimics可使Ishikawa细胞中miR-630表达水平明显升高,细胞OD值和BMI1蛋白的表达水平明显降低,克隆数、侵袭细胞数和迁移细胞数明显减少(P0.05);而转染miR-630 inhibitor引起Ishikawa细胞的变化与转染miR-630 mimics的结果正好相反(P0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实BMI1是miR-630的靶基因。结论 miR-630可抑制Ishikawa细胞增殖、侵袭和迁移,其作用机制可能与靶向调控BMI1表达有关。     

TFF3过表达促进宫颈腺癌Hela细胞增殖迁移侵袭功能及其机制研究

目的:探讨TFF3基因过表达对宫颈腺癌Hela细胞增殖、迁移、侵袭的影响及相关机制。方法:构建重组慢病毒(LV-TFF3)感染宫颈腺癌细胞系Hela,应用PI3K/Akt通路抑制剂LY294002及其溶剂DMSO分别处理TFF3过表达的Hela细胞。实时荧光定量PCR检测TFF3表达,CCK-8实验验证TFF3对Hela细胞增殖能力的影响,细胞划痕实验和Transwell实验检测TFF3对细胞迁移和侵袭功能的影响,Western blot法检测TFF3过表达对PI3K/Akt/Twist1信号通路及EMT相关蛋白表达的影响。结果:重组慢病毒(LV-TFF3)感染宫颈腺癌细胞系Hela后,TFF3基因表达水平明显增高(P0.01),细胞增殖、迁移、侵袭能力明显增强(P0.05),p-Akt、Twist1和Vimentin蛋白表达水平明显增高,E-Cadherin蛋白表达水平明显降低(P0.05)。TFF3过表达的Hela应用LY294002处理后细胞功能明显降低(P0.05),p-Akt、Twist1和Vimentin表达水平下降,E-Cadherin表达水平升高(P0.05)。结论:TFF3过表达可能通过激活PI3K/Akt/Twist1信号转导通路,增强宫颈腺癌Hela细胞的增殖、迁移及侵袭能力,并引发EMT,促进宫颈腺癌的恶性生物学行为。     

KiSS-1基因抑制子宫内膜癌转移的实验研究

目的建立子宫内膜癌裸鼠动物模型,研究基因转染的方法和途径及KiSS-1对子宫内膜癌转移的抑制效果。方法采用基因转化技术,脂质体介导高纯度KiSS-1质粒转染到子宫内膜癌细胞株中。用RT-PCR和West-ernblot技术检测转染前后肿瘤细胞的KiSS-1 mRNA、MMP-9 mRNA和其蛋白metastin的表达。裸鼠分四组行体内及体外KiSS-1转染,从分子生物学水平检测基因表达情况,分析KiSS-1基因对活体肿瘤侵袭转移能力的影响。结果动物实验中KiSS-1质粒转染组较对照组KiSS-1 mRNA表达明显增强(P<0.01);MMP-9 mRNA表达明显减弱(P<0.01)。KiSS-1 mRNA的表达强度与pcDNA3.0-KiSS-1质粒的剂量呈正相关(r=0.95,P<0.05)。裸鼠大体解剖见对照组及空质粒转染组部分裸鼠的肝组织及肺组织表面明显较PcDNA-3.0-KiSS-1质粒转染组及G418组粗糙、色暗、质硬、有粟粒状改变。KiSS-1体内、体外转染组各项检测差异均无统计学意义。结论KiSS-1基因体内转染方法可行,转染率高,对细胞生物学影响与转染剂量有明确关系,体内与体外转染效果相若;KiSS-1基因可能参与抑制子宫内膜癌细胞的侵袭和转移,可考虑为子宫内膜癌基因治疗的一个有意义的基因。     

NLRC3对子宫内膜样癌作用的研究

目的:探讨NLR家族含CARD结构蛋白3(NLRC3)在子宫内膜癌组织中的表达情况及其对子宫内膜癌细胞系生物学行为的影响。方法:采用GEPIA数据库分析子宫内膜癌患者NLRC3表达水平及其与无病生存率的关系。免疫组化、Western blot法检测NLRC3在子宫内膜样癌组织、癌旁组织、对照组子宫内膜组织中的表达。Ishikawa(ISK)、KLE细胞转染过表达NLRC3慢病毒,细胞平板克隆、划痕愈伤实验、Transwell迁移及侵袭实验检测NLRC3对体外细胞增殖、迁移、侵袭的影响。Western blot实验检测过表达NLRC3对上皮间质转化(EMT)的影响。构建裸鼠皮下成瘤模型,检测过表达NLRC3对肿瘤生长的影响。结果:GEPIA数据库分析显示,NLRC3在子宫内膜癌组织中低表达,较高水平NLRC3与较好的无病生存率有关(P<0.05)。免疫组化、Western blot实验结果与数据库分析一致,NLRC3在子宫内膜样癌组织中的表达水平低于正常子宫内膜组织、配对癌旁组织(P<0.05),NLRC3表达随肿瘤病理分化程度降低而逐渐降低。ISK、KLE细胞过表达NLRC...     

Effect of lubrication of frictional properties of sutures

The results of this study have provided an insight into the behavior of sutures in the environment of fluids. It has been shown that friction could both increase or decrease with lubrication, depending upon the nature of the application. In tests on straight sutures, lubricants have generally led to an increase in friction. This was found in the present investigation as well as in another study which measured friction in sutures soaked in serum. These results are explained on the basis that higher friction is expected to arise if the lubricant formed a multilayer film between the sliding surfaces. In this instance, the resistance to shear flow by the lubricant becomes the governing factor. On the other hand, if only a small amount of lubricant, such as a monolayer film, is present between surfaces, as expected within the structure of a snugged surgical knot, the lubricant may play the role of decreasing adhesion and, thus, friction.     

454例足月妊娠胎膜早破妊娠结局的临床分析

目的:探讨胎膜早破与分娩方式及围产儿不良结局的关系,为临床围产期保健和并发症防治提供参考。方法:对2005年1月至2008年12月在我院住院分娩的454例足月妊娠无骨盆异常胎膜早破的病例进行回顾性分析。结果:胎膜早破占同期分娩总数的11.76%,无骨盆异常,其难产率为46.47%,剖宫产率为33.7%,新生儿窒息率10.79%,新生儿肺炎发生率1.54%,明显高于对照组。结论:胎膜早破与难产互为因果关系,及时终止妊娠,以改善新生儿预后,减少母婴并发症。