LncRNA MRAK052509对矽肺上皮-间质转化 过程中关键因子E-cadherin、 N-cadherin、α-SMA的影响研究

目的 观察LncRNA MRAK052509对矽尘诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞EMT过程中E-cadherin、N-cadherin、α-SMA等关键因子表达的影响,为明确矽肺发病分子机制和纤维化的干预提供基础。 方法 建立NR8383巨噬细胞/RLE-6TN肺泡Ⅱ型上皮细胞共培养体系;将 NR8383巨噬细胞种入Transwell小室的上室,下室种入RLE-6TN细胞;细胞分为四组,分别是空白对照组、矽尘组、无义序列对照组（sh-NC组）、LncRNA MRAK052509敲减组（sh-MRAK052509组）;空白对照组及矽尘组下室种入RLE-6TN细胞,sh-NC组和sh-MRAK052509组下室分别种入稳定转染shRNA-NC和shRNA-LncRNA MRAK052509的RLE-6TN细胞;培养24h后,除空白对照组外,其余各组向Transwell上室加入40 μg/cm 2 SiO2粉尘,对照组加入等量的Ham’S F12K培养液;培育24 h后,观察下室细胞形态学变化;采用qPCR法/Western blot法检测细胞中E-cadherin、N-cadherin、α-SMA的mRNA/蛋白相对表达量。结果 形态学观察显示,空白对照组的RLE-6TN细胞呈多边形或圆形鹅卵石状。经矽尘处理后,细胞间接触减少,呈长梭型、纺锤型等成纤维细胞样形态。敲减LncRNA MRAK052509后,细胞形态同空白对照组相似,呈上皮样特征。qPCR显示转染sh-LncRNAMRAK052509可有效敲减RLE-6TN细胞中的lncRNA MRAK052509。qPCR和WB结果显示,各组细胞中E-cadherin、N-cadherin、α-SMA基因( F =9.950, P =0.004; F =11.638, P =0.003; F =4.497, P =0.040)及蛋白( F =122.004, P <0.001; F =24.248, P =0.001; F =22.433, P <0.001)的表达水平均有所改变。与空白对照组相比,矽尘组E-cadherin mRNA和蛋白表达水平较空白对照组降低, sh-MRAK052509组E-cadherin mRNA和蛋白水平较sh-NC组升高,差异均有统计学意义（ P <0.05）;矽尘组细胞的N-cadherin、α-SMAmRNA及蛋白表达水平升高,转染sh-LncRNA MRAK052509后,sh-MRAK052509组N-cadherin、α-SMA mRNA和蛋白表达水平较sh-NC组明显降低, 差异具有统计学意义( P <0.05)。秩相关结果显示,E-cadherin和α-SMA mRNA及蛋白表达水平呈强负相关（ r =-0.759, P =0.004; r =-0.780, P =0.003）。结论 敲低LncRNA MRAK052509可促进E-cadherin表达,抑制N-cadherin、α-SMA mRNA和蛋白表达,对矽尘诱导的RLE-6TN细胞EMT过程有一定干预作用。     

结缔组织生长因子及α平滑肌肌动蛋白在百草枯致大鼠肺纤维化中的作用

目的 观察急性百草枯(PQ)中毒大鼠肺组织结缔组织生长因子(CTGF)及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平的变化,探讨PQ致肺纤维化的机制.方法 SD大鼠随机分为对照组(生理盐水)和染毒组(PQ).染毒组给予生理盐水稀释的PQ(80 mg/kg)一次性灌胃,对照组给予生理盐水1ml/kg一次性灌胃.于不同处理后1、3、7、14、28、56 d分别以免疫组化(SABC)法检测大鼠肺组织中CTGF及α-SMA的表达强度和定位;免疫印迹(Western blot)法检测肺组织中CTGF及α-SMA蛋白的表达水平;初步分析两者表达的相关性及其表达与肺组织纤维化指标的相关性;同时观察中毒大鼠的肺组织病理变化.结果 与对照组比较,免疫组化和Western blot法检测染毒后大鼠肺组织中CTGF、α-SMA的表达变化规律较为一致,均随时间延长而逐渐升高,3、7 d时升高幅度缓慢,14～56d时增幅较大,各时段均明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).CTGF与α-SMA、病理评分及羟脯氨酸含量均呈正相关(r=0.74,r=0.87,r=0.71,P＜0.05或P＜0.01).病理学Masson染色可见大鼠肺组织中14～28 d时成纤维细胞大量增殖,胶原纤维数量逐渐增多.结论 在染毒大鼠肺组织中CTGF及α-SMA的表达持续增高;CTGF可能通过促使肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化,增加胶原分泌和基质合成,在PQ所致肺纤维化的发生发展中起重要作用.     

青蒿琥酯对肺纤维化大鼠α-SMA表达的影响

摘要:目的　观察青蒿琥酯对肺纤维化大鼠肌成纤维细胞α平滑肌动蛋白（α-Smooth Muscle Actin,α-SMA）表达的影响。方法　雄性SD大鼠102只,随机分为对照组、模型组和干预组。其中对照组24只,模型组和干预组各39只。（1）对照组:一次性气管内滴入生理盐水约0.3 ml,次日每只大鼠每日腹腔注射生理盐水1 ml。（2）模型组:一次性气管内滴入博莱霉素5 mg/kg,次日每只大鼠每日腹腔注射生理盐水1 ml。（3）干预组:一次性气管内滴入博莱霉素5 mg/kg,次日每只大鼠每日腹腔注射青蒿琥酯10 mg/100 g。上述各组大鼠分别于d 7、d 14、d 21、d 28各处死6只。观察大鼠的一般状态,记录死亡情况,计算肺系数,行HE染色和肺泡炎评分。取d 28各组大鼠肺组织行Mason染色和α-SMA免疫组化染色。Western blot检测α-SMA蛋白的表达。结果　（1）与对照组相比,各个时期模型组肺系数均显著增高,P 值均小于0.05。与模型组相比,d 28时干预组肺系数显著降低,P＜0.05。（2）与对照组相比,各个时段模型组肺泡炎均显著增高,P值均小于0.05。与模型组相比,d 21、d 28时干预组肺泡炎显著降低,P值均小于0.05。（3）Mason染色表明与对照组相比,模型组肺组织出现大量胶原沉积,干预组胶原沉积较模型组轻微。（4）与对照组比较,α-SMA免疫组化的平均光密度异模型组显著增高（P＜0.05）。与模型组相比,干预组α-SMA平均光密度显著减低（P＜0.05）。（5）对照组α-SMA蛋白的表达较低,模型组α-SMA蛋白持续高表达,干预组蛋白的表达逐渐下降。结论　青蒿琥酯减轻肺纤维化可能机制:（1）青蒿琥酯下调α-SMA的表达。（2）青蒿琥酯减轻肺纤维化大鼠肺泡炎。     

白藜芦醇抑制JAK2/STAT3信号通路对矽肺大鼠纤维化的干预

目的 探讨白藜芦醇（resveratrol，Res）抑制JAK2/STAT3信号通路对矽肺大鼠纤维化的干预作用。方法 将无特定病原体级的Sprague Dawley雄性大鼠24只按随机数字表法分为对照组（生理盐水）、模型组（SiO2）和Res（50、100 mg/kg）组，每组6只。模型组和Res组经气管一次灌注1 ml（50 mg/ml）SiO2混悬液，对照组灌注1 ml生理盐水。造模24 h后，每天给药1次，Res组分别经口灌胃50、100 mg/kg，对照组和模型组给予等体积的1%的羧甲基纤维素钠。28 d后处死大鼠收集肺组织，计算肺脏器系数，观察肺组织病理学变化，检测羟脯氨酸（HYP）、白介素-18（IL-18）、白介素-1β（IL-1β）、转化生长因子-β1（TGF-β1）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、胶原蛋白Ⅰ（Col-Ⅰ）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、E-钙黏蛋白（E-Cad）、波形蛋白和JAK2/STAT3的表达水平。结果 与对照组相比，模型组的肺脏器系数、肺组织病理Szapiel评分、HYP含量和IL-18、IL-1β、TGF-β1、TNF-α水平均明显升高（P<0.05），而Res抑制了这些指标的表达（P<0.05）。蛋白免疫印迹结果显示，模型组Col-Ⅰ、α-SMA、波形蛋白和JAK2/STAT3的蛋白表达高于对照组，E-Cad的表达低于对照组（P<0.05）；Res组Col-Ⅰ，α-SMA、波形蛋白和JAK2/STAT3的蛋白表达水平降低，E-Cad的表达升高（P<0.05）。实时定量反转录聚合酶链反应实验（RT-PCR）结果显示，模型组JAK2/STAT3的mRNA表达高于对照组，Res组JAK2/STAT3的mRNA表达显著低于模型组（P<0.05）。结论 Res能有效减轻矽肺大鼠肺部炎症和纤维化，可能与其抑制了JAK2/STAT3信号通路、影响炎性因子分泌有关。     

矽肺模型大鼠肺组织中IL-17A的表达

目的探索实验性矽肺大鼠肺组织中白细胞介素-17A(IL-17A)的表达,为开展IL-17A在矽肺纤维化的研究提供依据。方法16只健康雄性SD大鼠随机分为两组,矽肺组和对照组各8只,矽肺组大鼠气管非暴露注入粉尘50mg,对照组大鼠注入生理盐水。染尘40d处死大鼠,取肺组织进行病理学观察,实时荧光定量PCR(Realtime qPCR)法定量检测肺组织中IL-17A mRNA的转录水平,免疫组化法检测两组大鼠肺组织中IL-17A的蛋白表达水平。结果矽肺组大鼠肺组织中IL-17A mRNA与蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05)。结论IL-17A在矽肺大鼠肺组织中高表达,其可能参与了矽肺中晚期肺纤维化过程。     

姜黄素通过增强自噬水平抑制急性肺损伤大鼠肺组织炎症反应

目的 观察脂多糖（LPS）诱导的急性肺损伤（ALI）大鼠模型肺组织中自噬表达,探讨姜黄素是否通过上调急性肺损伤大鼠自噬水平抑制肺组织的炎症反应。方法 40只雄性SD大鼠随机分为对照组、急性肺损伤组（ALI组）、姜黄素组、自噬抑制剂3 - 甲基腺嘌呤组（3 - MA组）。采用一次性气管内滴注LPS（4 mg/kg）制备ALI大鼠模型。姜黄素组与3 - MA组于造模前15 min分别腹腔注射姜黄素（200 mg/kg）或自噬抑制剂3 - MA（15 mg/kg）。于造模后24 h取材HE染色观察肺组织形态变化;ELISA法测定支气管肺泡灌洗液中（BALF）中细胞总数及肿瘤坏死因子 -α（TNF -α）、白介素- 1β（IL - 1β）及白介素 - 6（IL - 6）的含量;real - time PCR检测自噬基因ATG5、 ATG7的mRNA水平;western blot法检测自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC - 3）、Beclin - 1。结果 与对照组相比,ALI组大鼠肺组织中大量炎症细胞浸润,BALF中细胞总数增加,TNF -α、IL - 1β及IL - 6水平较对照组显著上调（P＜0.05）,自噬指标ATG5、ATG7 mRNA水平与LC - 3、Beclin - 1蛋白表达量明显上调（P＜0.05）。与ALI组相比,姜黄素组炎症细胞浸润减轻,BALF中细胞总数减少,TNF -α、IL - 1β及IL - 6水平显著减少（P＜0.05）,自噬相关基因和蛋白表达进一步上调（P＜0.05）。3 - MA处理显著抑制自噬相关指标的表达,加重炎症细胞浸润, 增多BALF中TNF -α、IL - 1β的含量（P＜0.05）。结论 姜黄素处理通过进一步增强ALI的细胞自噬水平减轻大鼠肺组织的炎症损伤,进而发挥保护性疗效。     

槲皮素对百草枯染毒肺上皮细胞存活率和上皮间质转化标志的影响

  目的  探讨槲皮素（Que）对百草枯（PQ）处理肺上皮细胞（MLE-12）的存活率和上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）的影响及机制。
  方法  采用CCK-8法分别检测不同剂量PQ（50、150、450 μmol/L）对MLE-12细胞存活率的影响。实验设立空白对照组、阳性对照组、PQ（150 μmol/L）+Que（30、60、90μmol/L）干预组、阴性对照组，在Que干预24 h后检测细胞存活率。应用荧光定量PCR法和蛋白免疫印迹（Western blot）法分别检测α-SMA、结缔组织生长因子（connective tissue growth factor，CTGF）、E-Cadherin、TGF-β1、Smad3、Akt、mTOR的mRNA和蛋白表达。
  结果  经PQ（150 μmol/L）处理后，60 μmol/L和90 μmol/L的Que能够显著提高MLE-12细胞存活率，与阳性对照组比较差异有统计学意义（P < 0.05）。荧光定量PCR法和Western blot法检测结果表明，与空白对照组比较，50 μmol/L的PQ能提高α-SMA、CTGF、E-Cadherin、TGF-β1、Smad3、Akt、mTOR的mRNA表达，以及α-SMA、CTGF、E-Cadherin、TGF-β1、Smad3、Akt的蛋白表达（P < 0.05）；150 μmol/L的PQ能提高TGF-β1和mTOR的mRNA表达，以及α-SMA、E-Cadherin、TGF-β1、Smad3的蛋白表达（P < 0.05）；450 μmol/L的PQ能提高CTGF和Smad3的mRNA表达，以及α-SMA、E-Cadherin、Smad3的蛋白表达（P < 0.05）。在不同浓度Que干预PQ（150 μmol/L）染毒的MLE-12细胞后，与阳性对照组相比，30 μmol/L的Que能降低α-SMA、TGF-β1、Akt、mTOR的mRNA和蛋白表达水平，以及α-SMA、CTGF、Akt、mTOR的蛋白表达水平（P < 0.05）；60 μmol/L的Que能提高CTGF、E-Cadherin、Smad3、Akt的mRNA表达水平，以及α-SMA、Smad3、mTOR的蛋白表达水平（P < 0.05）；90 μmol/L的Que能降低TGF-β1、mTOR的mRNA表达水平，提高CTGF的mRNA表达水平，降低Akt、mTOR的蛋白表达水平（P < 0.05）。
  结论  百草枯染毒可能通过TGF-β1诱导细胞发生上皮间质转化。槲皮素干预能提高百草枯染毒MLE-12细胞的存活率，并能改变细胞上皮间质转化程度，其机制可能是通过调控TGF-β1/Smad和Akt/mTOR信号通路实现。
     

P物质对人胚肺成纤维细胞作用及机制

目的探讨P物质(SP)对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)增殖与活化的作用及其调控机制。方法体外培养MRC-5细胞,以P物质或与NK-1R抑制剂(L732138)及TGFβR1抑制剂(SB431542)联合培养细胞后,利用CCK8法检测细胞增殖活性,天狼猩红染色检测胶原纤维含量,Western blot检测α-SMA、TGFβ1、Smad3及p-Smad3蛋白的表达。结果 MRC-5细胞经P物质(1、10、100、1 000、10 000 nmol/L)处理后,24 h细胞增殖率无明显变化;在处理48及72 h后,100 nmol/L P物质可促进细胞增殖。与对照组比较,100 nmol/L P物质处理72 h后的细胞胶原蛋白含量(54.04±1.25)、α-SMA蛋白表达水平(2.48±0.07)明显升高(P 0.001)。与100 nmol/L P物质+L732138组比较,100 nmol/L P物质组细胞胶原纤维含量、α-SMA、TGFβ1、p-Smad3蛋白相对表达量[分别为(56.14±1.25)、(0.89±0.04)、(0.87±0.05)、(1.06±0.03)]明显升高(P 0.001);与100 nmol/L P物质组比较,100 nmol/L P物质+SB431542组细胞A450值、胶原纤维含量明显降低(P 0.001)。结论 P物质可以通过TGFβ1/Smad3信号通路促进人胚肺成纤维细胞(MRC-5)增殖及活化。     

平喘益肺合剂对哮喘气道重塑大鼠肺组织α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的探讨平喘益肺合剂对哮喘大鼠气道重塑和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的影响及可能的作用机制。方法选取40只雄性SD大鼠,随机分为正常对照组(A组)、哮喘组(B组)、地塞米松组(C组)、平喘益肺合剂组(D组),每组各10只。用卵白蛋白致敏吸入激发制备哮喘模型。在哮喘激发4周后测量肺组织α-SMA mRNA和气道壁Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果 B组α-SMA mRNA、Ⅲ型胶原表达明显高于A组(P0.05);C组和D组α-SMA mRNA、Ⅲ型胶原表达显著低于B组(P0.05)。结论平喘益肺合剂通过降低α-SMA mRNA的过度表达,抑制Ⅲ型胶原的沉积,减轻气道重塑的发生。     

Smad7对AGEs介导肾小管上皮细胞转分化的影响

目的探讨Smad7对终末期糖基化终产物（AGEs）介导大鼠近端肾小管上皮细胞转分化的影响。方法采用Tet-on质粒系统构建强力霉素（Dox）调控Smad7表达的NRK52E株。转染的NRK52E细胞根据刺激条件不同分为（1）Dox-组：单纯AGEs刺激；（2）Dox＋组：AGEs＋Dox刺激。采用细胞免疫化学方法检测p-Smad2／3核表达水平，Western blot方法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和E-钙粘着糖蛋白（E-cadherin）蛋白表达。结果Dox调控Smad7表达的NRK52E细胞株构建成功。Dox可进一步上调AGEs介导的Smad7 mRNA和蛋白表达（t=3．05。P〈0．01）。Smad7高表达可抑制AGEs介导NRK52E细胞30min和24h P-Smad2／3核表达水平（t=4．5，t=3．2，P〈0，01）。明显下调α-SMA和上调E-Cadherin蛋白表达（t=3．47，t=3．25。P〈0．01）。结论Smad7通过抑制Smad信号通路活化，阻抑AGEs介导的肾小管上皮细胞向肌成纤维母细胞转分化。     

过氯酸胺对大鼠肺组织中转化生长因子-β1和肿瘤坏死因子-αmRNA表达的影响

目的探讨过氯酸铵（AP）对大鼠肺组织转化生长因子-β1（TGF—β1）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA表达的影响。方法将100只SD大鼠随机分为5组：48、96和192mg／kgAP染毒剂量组、阴性对照组（生理盐水）和博莱霉素组（BLM5，mg／kg），采用一次性气管内注入染毒，染毒后第3、7、14和28天每组各处死5只大鼠，通过RT—PCR法测定肺组织中TGF-β1和TNF—αmRNA的表达。结果肺组织TGF-β1mRNA表达：第3天3个AP染毒剂量组（1．73、1．38、1．64），第7、14天192mg／kg剂量组（1．31、0．70）以及第28天96、192mg／kg剂量组（1．25、2．25）均比阴性对照组增加，差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）；阴性对照组、BLM组和48mg／kg剂量组随染毒后时间延长TGF-β1mRNA表达均明显降低，而第28天96、192mg／kg剂量组表达仍较高。肺组织中TNF—αmRNA表达：第3天96、192mg／kg剂量组（1．01、1．13）、第7和14天192mg／kg剂量组（0．74、0．91）、比阴性对照组增加，差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）；各剂量组TNF—αmRNA表达在第3天最高，而后逐渐下降至正常水平。结论AP可使大鼠肺组织致纤维化细胞因子TGF—β1和TNF—αmRNA表达增加。     

大气混合污染物对大鼠肺组织CC16及细胞因子的影响

目的测定大气污染物对大鼠肺组织CC16、TNF-α和IL-6的mRNA表达影响。方法用日本产低流量PM10空气采样器采集PM10颗粒物,采样滤膜用生理盐水超声震荡洗脱,混悬液定容为15mg/ml。48只体重为200~240g Wistar大鼠随机分为3个实验组和1个对照组。实验组大鼠分别气管注入15mg/ml PM10的生理盐水混悬液1ml,对照组大鼠注入1ml生理盐水。次日,实验组大鼠静态吸入浓度分别为15、12、400mg/m3的SO2、NO2、CO空气混合气,每天吸入2h,对照组吸入正常空气。于吸入气体污染物1天、7天和30天后次日分别处死实验组和对照组大鼠,取肺组织,采用RT-PCR方法测定TNF-α、IL-6和CC16的mRNA表达水平;采用免疫组化和Western blotting测定肺和BALF中CC16的水平。结果吸入大气污染物组在吸入后1天和7天其肺组织CC16 mRNA的表达量明显低于对照组;细胞因子TNF-α和IL-6 mRNA表达增强,高于对照组,并于染毒初期即染毒第1天和第7天增高明显,染毒第30天,又呈下降趋势。免疫组化检测显示,实验组大鼠肺组织CC16表达水平在染毒后1天,7天时显著高于对照组,而在30天时低于对照组。BALF中CC16表现为1天和7天时显著低于对照和30天组。结论大气污染物作用于大鼠呼吸系统后,大鼠肺组织和BALFCC16表达量下降,TNF-α和IL-6 mRNA表达增强,并且在污染物作用早期变化明显。     

乙酰化微管蛋白在矽肺成纤维细胞中定位及表达变化

目的观察乙酰化微管蛋白α(Ac-tubulinα)在矽肺纤维化的成纤维细胞中的定位及表达变化。方法 (1)采用典型抽样方法,选取22例煤工尘肺尸检病例病变肺组织为煤工尘肺组,以其临近较为正常肺组织为对照组。(2)将无特定病原体级雄性大鼠随机分为对照组和5个染尘组,每组10只。采用动式吸入染尘方法,染尘组大鼠以质量浓度为2 000 mg/m~3游离二氧化硅粉尘分别染尘2、4、8、12、16周,对照组大鼠不予染尘。(3)采用贴壁法原代培养大鼠肺成纤维细胞,予浓度为100 nmol/L的血管紧张素(Ang)Ⅱ分别诱导刺激0、5、15、30 min和1、3、6、12、24、48 h。(4)采用免疫组织化学法检测Ac-tubulinα和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,免疫荧光染色法观察Ac-tubulinα/Vimentin和Ac-tubulinα/α-SMA的表达,免疫印迹法检测Ac-tubulinα和α-SMA蛋白的相对表达水平。结果与对照组比较,煤工尘肺组病例肺组织中Ac-tubulinα表达阳性率下调(P0.01),α-SMA表达阳性率上调(P0.01)。免疫荧光染色结果显示,煤工尘肺组病例肺组织纤维化病变区域Vimentin阳性表达明显增强,Ac-tubulinα表达缺失;对照组正常肺组织中存在Ac-tubulinα和Vimentin共表达。动物实验结果显示,随染尘时间的增加,大鼠肺组织Ac-tubulinα表达量逐渐下调(P0.01),α-SMA表达量逐渐上调(P0.01)。采用AngⅡ诱导成纤维细胞向肌成纤维细胞分化,随诱导时间的增加,成纤维细胞中Ac-tubulinα表达量逐渐下调(P0.05),α-SMA表达量逐渐上调(P0.05)。结论 Ac-tubulinα的缺失表达可能参与了矽肺纤维化的发生与发展。     

维生素E对氯化镍染毒大鼠肺组织p15基因甲基化过程的影响

[目的]探讨维生素E（VE）对氯化镍染毒大鼠肺组织p15基因甲基化过程的影响。[方法]以0．1、0．2、0．4和0．8mg／mL氯化镍灌胃染毒大鼠,并设立对照组（生理盐水）和拮抗组（0．8mg／mL氯化镍＋5mg／mL VE）,持续6周。染毒结束后处死大鼠,制备肺组织匀浆,采用分光光度法,测定谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）水平的变化;以荧光定量PCR法检测肺组织中抑癌基因p15的表达水平;以甲基化PCR法检测p15启动子甲基化状态;以Western-blot检测DNA甲基转移酶1（DNMT1）和蛋氨酸腺苷转移酶2A（MAT2A）的表达水平。[结果]随着氯化镍染毒剂量的增加,MDA含量显著升高,GSH含量显著下降（P〈0．01）;与相同剂量染毒组相比,拮抗组大鼠肺组织中MDA含量降低,GSH含量升高（P〈0．05）;对照组大鼠肺组织p15启动子为非甲基化状态,染毒组大鼠肺组织p15启动子甲基化和非甲基化条带均有表达;各染毒组p15mRNA表达量与对照组相比均显著性降低（P〈0．01）,使用抗氧化剂VE后p15mRNA表达量与相同剂量染毒组相比显著性增高（P〈0．05）;随着染镍剂量的增高,DNMT1和MAT2A表达量显著性升高,与对照组相比,最高剂量染镍组DNMT1和MAT2A的表达量分别增高了1．52倍和1．49倍。使用拮抗剂VE后,与相同剂量染镍组相比DNMT1和MAT2A的表达量分别降低了10％和29％;双变量相关分析显示大鼠肺组织中GSH含量与DNMT1和MAT2A蛋白表达水平呈负相关关系,相关系数分别为r=-0．889（P=0．018）和r=-0．821（P=0．044）。[结论]维生素E可能通过影响GSH在氯化镍染毒大鼠肺组织中的含量而影响p15基因的甲基化过程。     

缬沙坦对急性肺损伤大鼠TGF-β／Smads信号通路的影响

目的观察缬沙坦对急性肺损伤大鼠TGF-β／Smad信号通路的影响。方法24只SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组和缬沙坦组三组,每组8只。缬沙坦组于气管内滴注博莱霉素（BLM）生理盐水溶液（5mg／kg）以复制急性肺损伤动物模型,并于造模当天每日给予缬沙坦（20mg／kg）灌胃;模型组以生理盐水代替缬沙坦灌胃;对照组则均用生理盐水代替BLM和缬沙坦。各组动物均于制模开始后第7天处死,分取肺组织行病理切片HE染色观察肺损伤程度、免疫组化技术检测肺组织TGF—β1、Smad2／3和Smad7蛋白的表达水平。结果缬沙坦组大鼠肺组织损伤程度较模型组比较明显减少（P〈0．01）。模型组肺组织内TGF-β1、Smad2／3蛋白表达水平较对照组明显增强（P〈0．01）。缬沙坦组TGF-β1、Smad2／3蛋白表达水平较模型组降低（P〈0．01）。Smad7蛋白在模型组肺组织内表达明显低于对照组（0．23±0．02vs0．36±0．03,P〈0．01）,缬沙坦组Smad7蛋白表达同模型组比较明显增强（P〈0．01）。结论缬沙坦可下调急性肺损伤大鼠肺组织内TGF—β、Smad2／3蛋白表达,上调Smad7蛋白表达,从而阻断TGF-β／Smad信号通路,减轻急性肺损伤程度。     

Egfl7与非小细胞肺癌上皮间质转化关系的研究

目的:研究Egfl7与非小细胞肺癌(NSCLC)上皮间质转化标志物E-cadherin,Vimentin的相关性,探讨Egfl7是否参与NSCLC的上皮间质转化(EMT).方法:分别采用免疫组化法和RT-PCR法检测40例NSCLC组织和20例肺癌旁正常肺组织中Egfl7,E-cadherin和Vimentin蛋白和mRNA的表达情况.结果:1).NSCLC组织中的Egfl7蛋白和mRNA的表达水平明显高于癌旁正常肺组织;其差异有统计学意义(P＜0.05).Egfl7的表达水平与肺癌的临床分期、及淋巴结转移密切相关(p＜0.05);2).E-cad-herin蛋白和mRNA在NSCLC组织中的表达明显低于癌旁正常肺组织,40例癌组织中E-cadherin的表达有转移组明显低于无转移组;3).Vimenfin蛋白和基因在NSCLC组织中的表达高于癌旁正常肺组织,40例癌组织中Vimentin的表达在转移组明显高于无转移组;4).在NSCLC组织中,Egfl7与E-cadherin表达成负相关(r=0.34,P＜0.05),而与Vimentin表达成正相关(r=0.297,P＜0.05),E-cadherin和Vimentin的表达无明显相关性(r=0.0002,P＞0.05).结论:NSCLC组织中Egfl7高表达,Egfl7可能与NSCLC的侵袭性相关;Egfl7与E-cadherin呈负相关,与Vimentin表达成正相关,Egfl7可能参与了NSCLC患者的上皮间质转化(EMT)过程,阻断Egfl7信号可能会抑制NSCLC患者的ENT.     

哮喘大鼠肺组织Bid mRNA和蛋白表达水平检测的意义

目的通过检测Bid在哮喘大鼠肺组织中表达的变化,探讨Bid在哮喘炎症机制中的作用。方法通过卵白蛋白致敏复制哮喘大鼠模型,分别采用免疫组化法及实时定量PCR法检测肺组织Bid mRNA和蛋白的表达。结果哮喘组Bid mRNA和蛋白的表达水平显著高于对照组(P 0. 01);地塞米松组Bid蛋白的表达水平显著低于哮喘组(P 0. 05),而地塞米松组Bid mRNA的表达量与哮喘组比较差异无统计学意义(P 0. 05);肺组织Bid mRNA与蛋白的表达水平无显著相关性(n=24,r=0. 39,P 0. 05)。结论哮喘大鼠急性发作期肺组织Bid的表达升高,可能在哮喘的炎症机制中起着促进气道炎症的作用,这种促炎的功能可以被地塞米松所抑制。     

哮喘大鼠肺组织Lyn激酶mRNA和蛋白表达的检测及意义

目的探讨Lyn激酶在哮喘发病机制中的作用。方法通过卵白蛋白致敏的哮喘大鼠模型,分别采用免疫组化法及荧光PCR法检测肺组织Lyn激酶mRNA和蛋白的表达。结果哮喘组Lyn激酶mRNA和蛋白的表达水平显著低于对照组(P0.01);地塞米松组Lyn激酶mRNA的表达量与哮喘组差异无统计学意义(P0.05),且显著低于对照组(P0.01);地塞米松组Lyn激酶蛋白显著高于哮喘组且显著低于对照组(P0.05)。肺组织Lyn激酶mRNA和蛋白的表达水平呈显著正相关(n=24,r=0.58,P0.01)。结论哮喘大鼠肺组织Lyn激酶的表达降低,Lyn激酶在哮喘的发病机制中可能起了抑制气道炎症的作用,Lyn激酶抑制炎症的功能可以被地塞米松调节。     

哮喘大鼠肺组织Ca^2＋/CaN-NFATc活性及其与TH1/TH2失衡的关系

目的 探究哮喘大鼠肺组织Ca^2＋/CON-NFATc的活性及其与TH1/TH2失衡的关系.方法 24只Wistar大鼠随机分为哮喘组和对照组,12只/组.用鸡卵白蛋白（OVA）溶液致敏和激发复制大鼠哮喘模型.Maclab系统记录分析大鼠肺功能;HE染色观察气道炎症并测量气道管壁厚度;检测肺组织钙含量、CaN活性、去磷酸化NFATc蛋白的表达及IL-4、IL-2的含量.结果 与对照组相比,哮喘组大鼠支气管管壁厚度明显增加（t=-7.99,P〈0.01）;气道阻力和呼吸频率增加（t=2.59,P〈0.05;t=7.94,P〈0.01）,每分通气量减少（t=6.87,P〈0.01）;与对照组相比,哮喘组大鼠肺组织中IL-4含量和IL-4/IL-2比值增高（t=-8.69,11.40,P〈0.01）,而IL-2含量降低（t=8.29,P〈0.01）;与对照组相比,哮喘组大鼠肺组织中CaN活性和去磷酸化NFATc蛋白的相对表达量均增加（t=-2.91,-22.45,P〈0.01）,而肺组织钙含量降低（t=4.75,P〈0.01）;肺组织中CaN活性与去磷酸化NFATc蛋白的相对表达量呈正相关（r=0.39,P〈0.05）;去磷酸化NFATc蛋白的相对表达量与IL-4/IL-2比值呈正相关（r=0.83,P〈0.01）;而肺组织中IL-4/.IL-2比值与大鼠支气管管壁厚度成正相关（r=0.84,P〈0.01）.结论 哮喘大鼠肺组织中CaN-NFATc的活性增加,其活性的增加可促进IL-4/IL-2比值增加,推测CaN-NFATc信号通路可能参与了哮喘大鼠肺组织TH1/TH2失衡的形成.     

水杨酸钠对百草枯所致大鼠肺组织核转录因子和炎性因子的影响

[目的]探讨水杨酸钠（sodium salicylate,NaSAL）对抗百草枯（paraquat,PQ）致肺损伤的作用机制。[方法]将72只雄性SD大鼠随机分为溶剂对照组（生理盐水灌胃）、PQ染毒组和PQ＋NaSAL干预组。PQ经口染毒,剂量为80 mg/kg（按大鼠体重）,干预组给予染毒组相等剂量PQ后立即腹腔注射NaSAL（120 mg/kg）。在染毒后第1、3、7、14天取对照组、染毒组、干预组各6只动物进行检查,分别用凝胶电泳迁移率实验（EMSA）和酶联免疫吸附法（ELISA）检测肺组织中核转录因子（NF-κB）活性变增高;肺组织中TNF-α、TGF-β1蛋白表达增强,各时点蛋白水平与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）。干预组NF-κB活性较染毒组降低;与染毒组相比,干预组肺组织TNF-α、TGF-β1蛋白水平表达明显下降,相应时点差异也有统计学意义（P〈0.05）。[结论]NaSAL干预后可以降低肺组织中NF-κB的活性,减少TNF-α、TGF-β1的蛋化及肿瘤坏死因子（TNF-α）、转化生长因子-β（1TGF-β1）蛋白含量的改变。[结果]染毒组大鼠肺组织中NF-κB活性白表达,提示NaSAL可以改善PQ中毒引起的肺损伤。