耐环丙沙星鲍氏不动杆菌的gyrA基因及parC基因突变分析

目的 研究本地区临床分离鲍氏不动杆菌环丙沙星耐药表型与DNA旋转酶A亚单位gyrA基因及拓扑异构酶Ⅳ parC基因突变的关系。方法收集28株耐药株及2株敏感株，通过PCR扩增其gyrA基因及parC基因，并对扩增产物进行限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）及DNA序列分析。结果敏感株的gyrA基因产物经HinfⅠ酶切后可产生两个片段，耐药株则产生1个片段；而parC基因产物经Hinf Ⅰ酶切后，敏感株及耐药株均产生两个片段；DNA测序显示，5株耐药株gyrA基因存在Ser83→Leu及Ala88→Thr突变，其中Ser83→Leu的突变是导致Hinf Ⅰ酶切位点消失的原因，而1株敏感株无突变；1株敏感株与1株耐药株的pcrC基因存在Ser108→Ile突变，另外14株耐药株存在多位点同义突变。结论与parC基因相比，gyrA基因突变是鲍氏不动杆菌对环丙沙星耐药的主要分子基础，环丙沙星的高水平耐药可能需要多种不同的突变。     

鼠伤寒沙门菌耐药株拓扑异构酶基因突变分析

目的　探讨鼠伤寒沙门菌对氟喹诺酮类药物的耐药性与拓扑异构酶基因突变之间的关系。方法　三株鼠伤寒沙门菌分离株X2 ,X7,X11对氟喹诺酮类药物环丙沙星的MIC分别为 32、0 38和 0 0 2 3μg ml,X2为耐药株。利用聚合酶链反应 (PCR)对其拓扑异构酶四个耐药基因gyrA ,gyrB ,parC ,和parE进行扩增和序列分析。结果　发现分离株X2的gyrA基因同时在 2 4 8、2 5 9位点发生点突变 (Ser83→Phe ,Asp87→Asn)。分离株X7gyrA基因在 2 4 8位点发生点突变 (Ser83→Tyr)。分离株X11的gyrA基因没有发生突变。X2parC基因QRDR在 2 38位点发生点突变 (Ser80→Arg)。而分离株X7、X11的parC基因没有发生突变。三株鼠伤寒沙门菌分离株的gyrB和parE基因都没有发现突变。结论　gyrA和parC上同时发生突变会导致鼠伤寒沙门菌对环丙沙星的高耐药性     

390株肠球菌耐药性及Ⅰ类整合子的检测

目的调查390株肠球菌耐药性及Ⅰ类整合子的携带率,以利于临床治疗用药. 方法根据 NCCLS推荐的琼脂稀释法进行药敏试验,应用WHONET5软件进行统计分析;采用PCR方法进行Ⅰ类整合子的检测以及滤膜接合法进行质粒接合转移试验;联合药敏试验采用棋盘法. 结果粪肠球菌对氨苄西林、青霉素、氯霉素、左氧氟沙星MIC50和MIC90分别为4、16μg/ml;8、16μg/ml;16、64μg/ml;4、16μg/ml;屎肠球菌对上述4种抗菌药物的MIC50和MIC90分别为64、128μg/ml;64、128μg/ml;32、128μg/ml;32、128μg/ml;粪肠球菌和屎肠球菌对万古霉素MIC50和MIC90均分别为2μg/ml和4μg/ml;324株粪肠球菌和66株屎肠球菌Ⅰ类整合子的携带率分别为53.1%和51.5%;Ⅰ类整合子携带aadA2基因;40株粪肠球菌和20株屎肠球菌中的Ⅰ类整合子全部转移到受体菌中;对链霉素MIC≤2 000μg/ml的菌株,链霉素与氨苄西林的FIC指数≤0.5. 结论屎肠球菌对青霉素、氨苄西林、氯霉素、左氧氟沙星等抗菌药物的MIC50和MIC90显著高于粪肠球菌;万古霉素对粪肠球菌及屎肠球菌具有很好的抗菌作用;由质粒携带的整合子可通过质粒播散耐药性;携带Ⅰ类整合子及aadA2基因且非高耐链霉素的肠球菌,链霉素与氨苄西林具有协同抗菌作用.     

淋病奈瑟菌对氟喹诺酮类药物的耐药性与gyrA和parC基因突变关系的研究

目的 探讨江苏省淋球菌对氟喹诺酮的耐药状况、耐药基因突变型的分布情况及二者之间的关系。方法 采用琼脂稀释法检测淋球菌氟喹诺酮类药物（环丙沙星、左氧氟沙星）的最小抑菌浓度（MIC），采用PCR法扩增含有喹诺酮耐药决定区的gyrA和parC基因片段，并进行测序分析。结果 根据所测MIC，本研究分离的95株淋球菌对环丙沙星100％的耐药；通过测序分析，在54株淋球菌中检测到gyrA和parC的18种突变形式，parC基因突变点越多，MIC相对也较高。结论 parC基因的突变导致淋球菌对喹诺酮类药物的高水平耐药。     

儿童肠球菌耐药性分析和部分耐药基因检测

【目的】了解儿童肠球菌感染抗生素耐药性状况,检测肠球菌部分耐药基因。【方法】采用Kirby-Bauer纸片扩散法进行药敏试验,聚合酶链反应(PCR)的方法分析25株粪肠球菌和屎肠球菌中,β-内酰胺类耐药相关基因(TEM)、氨基糖苷类抗生素耐药相关基因(氨基糖苷类修饰酶基因)(aac(6’)/aph(2")、aph(2")、aph(3")-Ⅲ、ant(6)-Ⅰ基因)、万古霉素耐药相关基因(VanA、VanB、VanC)、耐喹诺酮类耐药相关基因(GyrA、ParC)和耐药外排EmeB基因。【结果】26株肠球菌全部对万古霉素敏感,粪肠球菌对青霉素类抗生素敏感性高,对其他抗生素高度耐药,屎肠球菌对除万古霉素以外的所有临床常用抗菌药物显示高水平耐药。25例粪肠球菌和屎肠球菌共检出各种耐药基因57个,未检出耐万古霉素基因,屎肠球菌耐药基因检出率高于粪肠球菌检出率。【结论】儿科肠球菌感染主要为粪肠球菌和屎肠球菌,除对万古霉素高度敏感外,对常用抗生素均产生了不同程度的耐药性。肠球菌具有多重耐药基因;相关耐药基因是导致肠球菌对抗生素产生耐药的重要原因。     

大肠埃希菌对氟喹诺酮类的耐药性及其机制研究

目的 探讨大肠埃希菌(ECO)对氟喹诺酮类药物的耐药率及耐药机制.方法 K-B法测定100株ECO对5种氟喹诺酮抗菌药物的耐药性,试管稀释法测定耐环丙沙星和左氧氟沙星的最低抑菌浓度(MIC);错配PCR技术检测耐环丙沙星ECO gyrA基因和parC基因的突变.结果 100株ECO中耐环丙沙星有65株;环丙沙星MIC50、MIC90分别是32、128 μg/ml,左氧氟沙星MIC50、MIC90是16、64 μg/ml;基因位点结果显示,耐环丙沙星的65株中,有60株发生gyrA、parC一个或多个基因位点的突变,有5株未发生突变.结论 gyrA、parC基因突变是该地区ECO,对氟喹诺酮类药物耐药的重要机制,且基因突变位点越多其耐药程度越高.     

ICU肠球菌属esp基因分布及对万古霉素耐药的相关性研究

目的 了解医院重症监护病房(ICU)来源的肠球菌属的种类、esp基因的分布及其对万古霉素耐药的相关性.方法 用法国生物梅里埃公司全自动细菌分析仪VITEK-32进行肠球菌属鉴定,菌落杂交法检测esp基因的分布,微量稀释法测定细菌对万古霉素和替考拉宁的MIC.结果 113株肠球菌属中以粪肠球菌和屎肠球菌为主,共94株占总数的83.2％,其中粪肠球菌63株占55.8％,屎肠球菌31株占27.4％,esp基因阳性72株占76.6％,esp基因阳性者对万古霉素和替考拉宁的耐药率明显高于esp基因阴性者.结论 ICU感染肠球菌属以粪肠球菌和屎肠球菌为主,而且esp基因阳性较高,与肠球菌属耐万古霉素密切相关,值得重视.     

肠球菌耐药分析

目的：为了了解肠球菌特别是氨基糖苷类高水平耐药肠球菌（HLAR）及耐万古霉素肠球菌（VRE）的耐药状况，指导临床合理用药，方法：对两年中天津地区7所医院各类住院患者标本分离出的肠球菌，采用纸片扩散法进行耐药分析。结果：在215 株肠球菌中，以粪肠球菌和屎肠球菌的分离率最高，占总数的99．1％，分离出氨基糖苷类高水平耐药肠球菌（HLAR）56株，分离率为45．2％，分离出耐万古霉素肠球菌（VRE）9株，分离率为4．6％，结论：肠球菌耐药性呈上升趋势，提示临床在治疗此类菌感染时，应根据分离株的耐药特点和药敏试验结果合理选用抗生素，以减少耐药菌株的产生和耐药基因的传播。     

临床感染常见肠球菌的耐药现状分析

目的 了解引起临床感染的常见肠球菌耐药现状，为临床抗肠球菌感染提供选药依据。方法采用VITEK32全自动细菌鉴定药敏仪及配套鉴定、药敏板监测172株粪肠球菌和68株屎肠球菌对常用抗菌药物的耐药率。补充药敏试验采用KB纸片扩散法。结果粪肠球菌对青毒素、氨苄西林的耐药率分别为23．26％和19．76％，而屎肠球菌对上述两药的耐药率分别为85．62％和90．83％；粪肠球菌对利福平、呋喃妥因、左氧氟沙星的耐药率分别为32．33％、18．98％、39．05％，而屎肠球菌对上述药的耐药率分别为84．63％、35．29％、75.00％；经统计分析，粪肠球菌与屎肠球菌的耐药率差异有显著性（P〈0．01）。粪肠球菌对高浓度庆大霉素（500mg／L）、链霉素（2000mg／L）的耐药率分别是54．85％、51．74％，而屎肠球菌却为71．16％、70．15oA；发现1株粪肠球菌对万古霉素耐药。结论屎肠球菌对临床常用抗菌药物的耐药率高于粪肠球菌，应根据肠球菌的种类和药敏试验结果确定用药方案；警惕耐万古霉素肠球菌的出现，动态监测肠球菌的耐药状况对指导临床治疗具有重要意义。     

环丙沙星体外诱导肺炎链球菌耐药机制研究

目的探讨环丙沙星体外诱导肺炎链球菌耐药的分子机制。方法10株临床分离的肺炎链球菌体外用不同浓度梯度环丙沙星逐级诱导成为耐药株,检测诱导前后菌株对环丙沙星的MICs,PCR扩增诱导前后菌株parC/parE和gyrA/gyrB基因喹诺酮耐药决定区(QRDR)、测序并与GenBank公布序列比对。结果8株临床菌株成功诱导为耐药株,诱导后MICs是诱导前16倍以上,诱导后2株只发现parC/parE基因的QRDR有突变其耐药水平较低MICs分别为8μg/ml和16μg/ml,6株parC/parE和gyrA/gyrB基因的QRDR同时存在点突变耐药水平较高,MICs分别为64μg/ml和128μg/ml。结论逐步增加药物浓度可以诱导肺炎链球菌parC/parE和/或gyrA/gyrB基因的QRDR点突变导致对环丙沙星耐药。     

Molecular analysis of fluoroquinolone-resistant Salmonella Paratyphi A isolate, India

Salmonella enterica serovar Paratyphi A is increasingly a cause of enteric fever. Sequence analysis of an Indian isolate showed a unique strain with high-level resistance to ciprofloxacin associated with double mutations in the DNA gyrase subunit gyrA (Ser83-->Phe and Asp87-->Gly) and a mutation in topoisomerase IV subunit parC (Ser80-->Arg).     

esp基因存在与粪肠球菌耐药的相关性分析

目的研究粪肠球菌临床株表面蛋白基因(esp)的流行情况及esp基因存在状况与粪肠球菌耐药的相关性。方法用PCR法扩增粪肠球菌esp基因并克隆、测序;用琼脂稀释法检测5种常用抗菌药物对粪肠球菌临床株的最低抑菌浓度(MIC)。结果61株粪肠球菌中,esp基因阳性率为42.6%;氨苄西林、环丙沙星、高浓度庆大霉素MIC>500 mg/L,红霉素耐药粪肠球菌中,esp阳性率分别为33.3%、54.8%、70.6%、51.0%;敏感株中esp阳性率分别为43.6%、30.0%、7.4%、8.3%。结论esp基因的存在状况与粪肠球菌对氨苄西林耐药无明显相关性,而与环丙沙星、红霉素、高浓度庆大霉素耐药有显著相关性;esp基因有可能成为粪肠球菌耐药株的分子表面标志物。     

血培养分离肠球菌属细菌的分布及耐药性

目的了解血培养中肠球菌属细菌的临床分布特点及耐药性。方法分析某院2012年1月—2016年12月住院患者血培养标本分离出的肠球菌属细菌情况,并对其药敏结果进行统计分析。结果共分离肠球菌属细菌139株,其中屎肠球菌78株,粪肠球菌60株,鸟肠球菌1株,分别占56.11%、43.17%及0.72%;年龄分布以60岁及≤28 d患者为主,分别占56.83%和17.27%。主要来源科室为重症监护病房(ICU)及新生儿科,分别占34.53%和18.70%。鸟肠球菌仅有1株,分离自新生儿科。屎肠球菌对青霉素、氨苄西林、左氧氟沙星、环丙沙星、莫西沙星及呋喃妥因的耐药率高于粪肠球菌(均P0.05);但对四环素的耐药率低于粪肠球菌(P=0.001)。屎肠球菌对万古霉素和利奈唑胺的耐药率分别为2.56%、6.41%;粪肠球菌对万古霉素和利奈唑胺的耐药率为0及3.33%。结论血培养中肠球菌属细菌以屎肠球菌和粪肠球菌为主,老年人及新生儿为主要分离人群。屎肠球菌对多数抗菌药物的耐药率高于粪肠球菌,但两者对利奈唑胺的耐药率均高于万古霉素,需继续重点监测。     

Ciprofloxacin-resistant Salmonella enterica Typhimurium and Choleraesuis from pigs to humans, Taiwan

We evaluated the disk susceptibility data of 671 nontyphoid Salmonella isolates collected from different parts of Taiwan from March 2001 to August 2001 and 1,261 nontyphoid Salmonella isolates from the National Taiwan University Hospital from 1996 to 2001. Overall, ciprofloxacin resistance was found in 2.7% (18/671) of all nontyphoid Salmonella isolates, in 1.4% (5/347) of Salmonella enterica serotype Typhimurium and in 7.5% (8/107) in S. enterica serotype Choleraesuis nationwide. MICs of six newer fluoroquinolones were determined for the following isolates: 37 isolates of ciprofloxacin-resistant (human) S. Typhimurium (N = 26) and Choleraesuis (N = 11), 10 isolates of ciprofloxacin-susceptible (MIC <1 mg/mL) (human) isolates of these two serotypes, and 15 swine isolates from S. Choleraesuis (N = 13) and Typhmurium (N = 2) with reduced susceptibility to ciprofloxacin (MIC >0.12 microg/mL). Sequence analysis of the gryA, gyrB, parC, parE, and acrR genes, ciprofloxacin accumulation, and genotypes generated by pulsed-field gel electrophoresis with three restriction enzymes (SpeI, XbaI, and BlnI) were performed. All 26 S. Typhimurium isolates from humans and pigs belonged to genotype I. For S. Choleraesuis isolates, 91% (10/11) of human isolates and 54% (7/13) of swine isolates belonged to genotype B. These two genotypes isolates from humans all exhibited a high-level of resistance to ciprofloxacin (MIC 16-64 mg/mL). They had two-base substitutions in the gyrA gene at codons 83 (Ser83Phe) and 87 (Asp87Gly or Asp87Asn) and in the parC gene at codon 80 (Ser80Arg, Ser80Ile, or Ser84Lys). Our investigation documented that not only did these two S. enterica isolates have a high prevalence of ciprofloxacin resistance nationwide but also that some closely related ciprofloxacin-resistant strains are disseminated from pigs to humans.     

肠球菌的菌种分布和耐药性分析

目的 为了解深圳市人民医院临床分离的肠球菌的菌种分布和耐药性。方法 用Kirby-Bauer法对全院2001年7月至2003年7月临床分离的206株肠球菌进行药敏试验并对其菌种分布进行分析。结果 206株肠球菌中以粪肠球菌和屎肠球菌分离频率最高,分别占总体的65％和16％。粪肠球菌对替考拉宁、万古霉素、氨苄西林的耐药率低,分别为0、1．5％和4．8％;屎肠球菌对万古霉素和替考拉宁的耐药率均为0,其它肠球菌对万古霉素的耐药率为5．6％;粪肠球菌对氨苄西林的耐药率显著低于屎肠球菌。约30％的肠球菌高耐庆大霉素。结论万古霉素、替考拉宁对肠球菌有较强的抗菌作用,但VRE的出现应引起高度重视。氨苄西林对不同肠球菌的抗菌作用存在显著差异,29．7％的粪肠球菌、50％屎肠球菌和25．7％的其它肠球菌为高耐庆大霉素。     

湛江地区肠球菌属的检测及耐药性分析

目的探讨湛江地区肠球菌属感染状况,动态观察肠球菌属耐药特性的变迁特点,指导临床医生合理、有效地使用抗生素. 方法对湛江市3所二级以上(含二级)医院2000～2003年临床送检标本进行常规微生物培养和药敏试验. 结果共检出肠球菌属细菌351株,以粪肠球菌为主260株,占74.1%,其次分别为屎肠球菌57株、鸟肠球菌10株、其他24株;药敏结果显示351株肠球菌对高浓度庆大霉素的耐药率为63.0%,对万古霉素的敏感性最高达96.3%;粪肠球菌和屎肠球菌对氨苄西林、克林霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、诺氟沙星、青霉素、四环素、呋喃妥因8种抗生素的耐药性差异存在显著性(P<0.01);4年来肠球菌属对所测抗生素的耐药性未发生明显改变. 结论湛江地区肠球菌属感染尚未形成大规模暴发流行趋势;对粪肠球菌引起的感染可选用青霉素、氨苄西林、万古霉素及呋喃妥因,对屎肠球菌引起的感染可选用万古霉素或氨苄西林.     

Prevalence and mechanisms of quinolone resistance among selected nontyphoid Salmonella isolated from food animals and humans in Korea

The aim of this study was to investigate the prevalence and mechanism of quinolone resistance among selected nontyphoid Salmonella (NTS) isolates. A total of 1279 NTS isolated from food animals (n=692) and humans (n=587) between 1995 and 2009 were investigated by serotyping, antimicrobial susceptibility testing, screening for plasmid-mediated quinolone resistance (PMQR) genes qnr, aac(6')-Ib-cr, and qepA and mutations in the quinolone resistance-determining region (QRDR) of gyrA and parC by PCR, and DNA sequencing. Three hundred thirty (47.7%) of 692 animal isolates and 177 (30.2%) of 587 human isolates were resistant to nalidixic acid. Most animal (94.8%, 313/330) and human (99.4%, 176/177) NTS exhibited decreased ciprofloxacin susceptibility (minimum inhibitory concentration [MIC]: 0.125-2?mg/L). None of them carried qnr or qepA gene. However, aac(6')-Ib was identified in six animal isolates, of which four carried aac(6')-Ib-cr gene. Based on antimicrobial resistance profile, year of isolation, MIC for quinolones and fluoroquinolones, and isolation frequency of serotype, 114 animal and 83 human isolates were tested for QRDR mutations. All contained a single mutation within the QRDR of gyrA at either codon 87 or 83, and 41 of them contained an additional mutation in parC. The most prevalent mutation was Asp87-Tyr (n=107), followed by Asp87-Gly (n=28), Asp87-Asn (n=26), Ser83-Tyr (n=22), and Ser83-Phe (n=14). Point mutations in parC were observed outside the QRDR, which included 40 isolates with Thr57-Ser substitution and 1 Salmonella Typhimurium with a novel Glu51-Lys substitution. In conclusion, a point mutation within the QRDR of gyrA was primarily responsible for quinolone resistance and reduced susceptibility to fluoroquinolones in NTS in Korea. To our knowledge, this is the first report of occurrence of aac(6')-Ib-cr gene among NTS in Korea. The spread of NTS carrying aac(6')-Ib-cr is of serious concern and should be carefully monitored.     

耐氨基苷类高水平肠球菌医院感染的危险因素及氨基糖苷类耐药相关基因研究

目的 了解耐氨基糖苷类高水平肠球菌(HLAR)的耐药性和医院感染的危险因素,研究HLAR氨基糖苷类耐药相关基因类型分布.方法 采用全自动微生物鉴定仪VITEK-AMS对857株肠球菌属进行鉴定及抗菌药物敏感性检测;PCR法检测HLAR氨基糖苷类耐药相关基因,并对PCR结果进行测序分析.结果 肠球菌属中HLAR占50.4％,利奈唑胺、万古霉素和替考拉宁对HLAR的抗菌作用最好,但有3株屎肠球菌对万古霉素和替考拉宁耐药,粪肠球菌对氯霉素和四环素的耐药率高于屎肠球菌,而屎肠球菌对其他常用抗菌药物的耐药率明显高于粪肠球菌,粪肠球菌和屎肠球菌的耐药谱明显不同,aac(6')-Ie-aph(2〃)-Ia基因为耐庆大霉素高水平肠球菌(HLGR)的主要耐药基因,占HLGR的88.0％,严重的基础疾病、侵入性操作和头孢三代抗菌药物和激素的应用是肠球菌属医院感染的常见危险因素.结论 HLAR已成为医院感染的重要耐药菌,HLGR产生的主要机制是aac(6')-Ie-aph(2〃)-Ia基因介导对庆大霉素高水平耐药,控制常见医院感染危险因素,合理使用抗菌药物,可减少HLAR医院感染的发生.