外周血Th17和Th22细胞在呼吸机相关性肺炎患者中的水平变化及临床意义

目的 观察外周血Th17和Th22细胞在呼吸机相关性肺炎（VAP）中的水平变化及临床意义。方法 选取2014年01月至2019年01月于本院行机械辅助通气治疗的患者810例作为研究对象。采用流式细胞术检测患者外周血Th17和Th22细胞水平;酶联免疫吸附法检测相关炎性细胞因子（IL-17、IL-22）水平,绘制受试者工作曲线（ROC曲线）,评价外周血Th17和Th22细胞水平对VAP患者预后的曲线下面积（AUC）和最佳截断值。结果 VAP组患者外周血Th17、Th22细胞水平及IL-17和IL-22水平高于非VAP组（t=66.050,P<0.001;U=54.630,P<0.001;t=27.530,P<0.001;t=28.500,P<0.001）;高危组VAP患者中上述指标水平最高,中危组次之,低危组最低,差异比较具有统计学意义（F=39.440,P<0.001;F=71.400,P<0.001;F=50.640,P<0.001;F=94.510,P<0.001）。死亡组患者上述指标水平高于存活组（t=3.098,P=0.002;t=4.322,P<0.001;t=4.825,P<0.001;t=4.122,P<0.001）。VAP患者外周血Th22细胞与Th17细胞、IL-22及APACHEⅡ评分呈正相关（r1=0.8200,P1<0.001;r2=0.895,P2<0.001;r3=0.752,P3<0.001）;同时外周血Th17细胞与IL-17、APACHEⅡ评分呈正相关（r1=0.832,P1<0.001;r2=0.710,P2<0.001）。ROC曲线分析显示,外周血Th22细胞曲线下面积为0.874 (0.813~0.935),其最佳工作点为7.92,此时评估VAP患者预后不佳的敏感性和特异性分别为79.49%和78.93%,优于外周血Th17细胞,但差异无统计学意义（Z=0.810,P=0.310）。 结论 外周血Th17和Th22细胞水平在VAP患者中显著升高,对于VAP患者预后的评估,具有一定的临床应用价值。     

NaAsO2对L-02肝细胞氧化应激性损伤及SOD1、AUF1表达影响

目的 观察不同剂量亚砷酸钠（NaAsO2）对L-02肝细胞氧化应激性损伤作用及超氧化物歧化酶1（SOD1）、AU 碱基富集元件RNA 结合因子1（AUF1）表达影响。方法 用0、10、20、40μmol/L NaAsO2分别处理L-02肝细胞24小时，化学比色法检测谷胱甘肽巯基转移酶（GST）、γ-谷氨酰转肽酶（γ-GT）活力及总胆汁酸（TBA）含量和SOD1、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）活性；荧光探针2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯检测细胞内活性氧族（ROS）相对荧光密度；实时荧光定量PCR和Western Blotting分别检测SOD1和AUF1转录和蛋白表达。结果 （1）与对照组比较，20、40μmol/L NaAsO2组GST活性和TBA含量均升高（P<0.05）；10、20、40μmol/L NaAsO2组γ-GT活性也升高（P<0.05）。（2）与对照组比较，20、40 μmol/L NaAsO2组SOD1活性均下降（P<0.05）；GPx活性仅在10μmol/L升高（P<0.05）；细胞内ROS先降低后升高（P<0.05）。（3）与对照组比较，20和40μmol/L NaAsO2组AUF1和SOD1 mRNA表达均升高（P<0.05），AUF1蛋白表达先升高后降低（P<0.05）；10、20μmol/L NaAsO2组SOD1蛋白表达升高（P<0.05），但40μmol/L NaAsO2组SOD1蛋白表达有降低趋势。结论 NaAsO2对L-02肝细胞产生氧化应激性损伤，其机制可能是NaAsO2通过降低AUF1的蛋白表达降低，从转录后调控降低了SOD1 mRNA的稳定性而使其蛋白表达和酶活力降低。     

白僵蚕水提物对镉致胰岛β细胞毒性的影响研究

目的 探讨白僵蚕水提物对硫酸镉（CdSO4）致胰岛β细胞NIT-1细胞毒性的影响。方法 采用冷水浸泡法提取白僵蚕的水溶性成分。分别用（0、0.4、0.8、1.6、3.2和6.4mg/mL）白僵蚕水提物染毒细胞24h;用4μmol/L CdSO4分别与（0.4和0.8mg/mL）白僵蚕水提物混合后共处理24h;以及用（0.4和0.8mg/mL） 白僵蚕水提物预处理2h,再以4μmol/L CdSO4分别染毒24h。采用CCK8、Hoechst33258染色以及荧光探针等方法分别检测NIT-1细胞存活率、细胞凋亡及活性氧ROS的水平。结果 （1）与对照组比较,细胞存活率随白僵蚕水提物染毒浓度的增加呈现出先升高后下降的趋势（P<0.05）;（2）与单独处理组相比,4μmol/L CdSO4与（0.4和0.8mg/mL）白僵蚕水提物共处理组细胞存活率均降低（P<0.05）,且预处理组细胞存活率相比白僵蚕单独处理组也降低（P<0.05）;（3）联合处理组细胞变圆、细胞核呈致密浓染,细胞凋亡率均高于白僵蚕和CdSO4单染组（P<0.05）;同时,联合处理组ROS荧光强度也升高,分别为白僵蚕和CdSO4单染组的1.18和1.05倍（P<0.05）。结论 白僵蚕水提物在低浓度下可促进NIT-1细胞的增殖,高浓度则降低细胞的存活率;低浓度的白僵蚕水提物无法拮抗CdSO4诱导的细胞死亡,反而增强了细胞毒性,其机制可能与凋亡和ROS水平增加有关。     

NF-κB在砷诱导人正常膀胱上皮细胞COX-2表达中的作用

目的观察NF-κB核转录因子在砷诱导人正常膀胱上皮细胞(SV-HUC-1)环氧化酶-2(COX-2)表达中的作用。方法在细胞培养液中加入不同浓度的NaAsO2,24 h后提取细胞总RNA和核蛋白,用RT-PCR和Westernblot方法分别分析COX-2 mRNA表达和NF-κB蛋白水平;选择COX-2高表达的NaAsO2处理组,再用NF-κB抑制剂(PDTC)处理,观察COX-2 mRNA表达水平的变化。结果 4、8μmol/L NaAsO2处理细胞后,COX-2 mRNA表达水平显著高于对照组(P<0.05);4μmol/L NaAsO2处理组细胞NF-κB蛋白水平也显著提高,高于对照组,而10μmol/LNaAsO2处理组细胞NF-κB蛋白水平低于对照组(P<0.05);同时用4μmol/L NaAsO2和PDTC共同处理细胞后,COX-2 mRNA表达水平降低,显著低于单纯用4μoml/L NaAsO2处理细胞的COX-2 mRNA表达水平(P<0.05)。结论低剂量的砷能够诱导人正常膀胱上皮细胞COX-2 mRNA和NF-κB蛋白表达水平的增高,砷诱导的核转录因子NF-κB活化在砷诱导的COX-2...     

26例稀土尘肺患者血清TNF-α、IL-1β、MCP-1、HYP检测结果分析

目的 检测稀土尘肺患者血清中TNF-α、IL-1β、MCP-1、HYP的含量,探讨稀土尘肺早期诊断的敏感性指标。方法 选择某稀土冶炼厂26名稀土尘肺患者作为稀土尘肺组,选择同期参加健康体检的不接触稀土粉尘的47人作为对照组,抽取空腹静脉血5 ml,采用ELISA法进行血清TNF-α、IL-1β、MCP-1、HYP表达水平检测。结果 稀土尘肺患者血清中IL-1β、HYP水平高于对照组,TNF-α、MCP-1水平低于对照组（tTNF-α=-2.199,tIL-1β=2.884,tMCP-1=-3.280,tHYP=5.014,P＜0.05）;在稀土尘肺组中,IL-1β、MCP-1随着年龄的升高,表达水平逐渐上升（tIL-1β=-2.746,tMCP-1=2.873,P＜0.05）;吸烟组患者血清中IL-1β的表达水平高于非吸烟组（tIL-1β=-2.336,P＜0.05）,其余三项指标的差异无统计学意义;HYP随着稀土尘肺期别的升高,表达水平逐渐上升（tHYP=3.439,P＜0.05）;工龄在＜12年组患者血清中IL-1β、MCP-1、HYP表达水平低于工龄在12~年组（tIL-1β=2.910,tMCP-1=2.859,tHYP=2.751,P<0.05）;HYP表达水平在排除年龄、吸烟、期别三个混杂因素后,与工龄呈正相关（tHYP=2.257,P<0.05）。结论 TNF-α、IL-1β、MCP-1、HYP在稀土尘肺患者血清中差异表达,对稀土尘肺的病情发展有重要意义,HYP可作为早期辅助诊断稀土尘肺的敏感性指标。     

Gadd45β和Gadd45γ在亚砷酸钠所致的MIHA细胞周期改变中的作用

目的 探索Gadd45β和Gadd45γ在亚砷酸钠所致的MIHA细胞周期改变中的作用,为砷中毒的人群防治提供依据。方法 收集贵州省兴仁县雨樟镇交乐病区砷中毒人群以及格沙屯正常人群分别作为砷中毒组和对照组,实时荧光定量PCR检测各组人群Gadd45β和Gadd45γ基因mRNA表达水平。同时,分别以不同剂量亚砷酸钠、不同时间处理MIHA细胞,流式细胞术测定细胞周期改变情况,实时荧光定量PCR和免疫印迹法分别检测Gadd45β和Gadd45γ基因mRNA表达水平和蛋白表达情况。在上述实验基础上,针对Gadd45β和Gadd45γ基因分别设计的siRNA作用于染砷的MIHA细胞,反向验证Gadd45β和Gadd45γ基因在砷致细胞周期改变过程中的影响。统计学分析采用独立样本t检验比较两组间差异,采用单因素方差比较多组间差异。结果 人群实验研究发现,与对照组相比,砷中毒患者Gadd45β和Gadd45γ基因mRNA表达水平升高（t = 2.576,P = 0.011;t = 2.312,P = 0.022）;MIHA细胞中,随亚砷酸钠染毒剂量、染毒时间增加,细胞G2/M期比例明显升高（F剂量 = 340.136,P＜0.001;F时间 = 49.194,P＜0.001）;在相对较低亚砷酸钠浓度（低于20 μmol/L）、一定时间内（低于48 h）Gadd45β和Gadd45γ基因mRNA和蛋白表达水平随染砷剂量、染砷时间升高而升高,超过该浓度范围和作用时间后,出现表达下降的现象（Gadd45β:F剂量-蛋白 = 37.568,P＜0.001;F剂量- mRNA = 9.771,P＜0.001;F时间-蛋白 = 61.144,P＜0.001;F时间- mRNA = 46.366,P = 0.001;Gadd45γ:F剂量-蛋白 = 12.989,P = 0.001;F剂量- mRNA = 23.613,P＜0.001;F时间-蛋白 = 27.425,P＜0.001;F时间- mRNA = 37.969,P＜0.001）。转染siRNA分别下调Gadd45β和Gadd45γ的表达后,细胞周期都出现G2/M期比例下调（t = 3.053,P = 0.038;t = 14.47,P＜0.001）。结论 砷致Gadd45β和Gadd45γ基因表达水平升高在其诱导MIHA细胞出现G2/M期阻滞过程中发挥重要作用。     

纳米三氧化二铁经口暴露对大鼠肝脏的影响

目的 探讨纳米三氧化二铁（iron oxide nanoparticles，Fe2O3 NPS）经口暴露后对大鼠肝脏的影响,评估其在食品领域的安全性。 方法 40只大鼠随机分配到低（L组）、中（M组）、高（H组）剂量组和分散剂对照组（C 组），分别给予 50、100、200mg/kg.bw Fe2O3 NPS悬浊液和等体积 0.5%的羟丙基甲基纤维素溶液灌胃。90d后腹腔麻醉取血，计算肝脏系数，观察肝脏组织病理学切片，检测血液生化指标谷丙转氨酶 (ALT)、天冬氨酸氨基转移酶 (AST)、血清白蛋白（ALB）、总蛋白（TP）含量；测定肝组织匀浆中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH - PX)活性、总抗氧化能力(T - AOC)活力、丙二醛(MDA)含量。 结果 各组大鼠的ALB、TP、AST均无统计学差异 (F=0.210；F=2.492；F=0.132，P＞0.05)；病理切片未观察到肝组织损伤；M组、H组的肝脏系数升高（t=2.343；t=2.957，P<0.05）、 T-AOC水平升高（t=2.552，P=0.015；t=5.669，P<0.001）,GSH活性升高（t=3.793，P=0.001；t=6.879，P<0.001）; M、H组的ALT活力降低(t=4.083，P=0.001；t=4.647，P<0.001)，MDA含量降低(t=4.290，P<0.001；t=4.754，P<0.001)。结论 在本研究所设计的灌胃剂量和干预时长的作用下，暂未观察大鼠肝脏病理组织改变，未对大鼠血液生化水平产生负面影响以及对大鼠肝脏产生氧化应激损伤,提示Fe2O3 NPs在食品正常剂量使用下是安全的。     

HCVF蛋白和负性共刺激分子2B4与慢性HCV感染的关联研究

目的 探讨丙型肝炎病毒（hepatitis C virus,HCV）F蛋白的产生与负性共刺激分子2B4在慢性HCV感染中的关联性。方法 收集慢性HCV患者（chronic hepatitis patient,CHP）的血液样本,检测F抗体（F antibody,F-Ab）的阳性率并依据结果分成（HCV-F（+）组、HCV-F（-）组）两组,收集健康者的血液样本作为对照组;分离并培养外周血单核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）,收集各孔细胞,酶联免疫吸附试验检测2B4抗体阻断前后白细胞介素4（interleukin 4,IL-4）、干扰素γ（interferon γ,IFN-γ）的表达水平。结果 2B4抗体阻断前,HCV患者PBMCs中IFN-γ和IL-4分泌水平均较健康组高（均有P<0.05）,且HCV-F（-）组分泌IFN-γ水平高于HCV-F（+）组（F=1.908,P=0.020）,而IL-4分泌水平低于HCV-F（+）组（F=1.342,P=0.009）。2B4抗体阻断后,健康组中IFN-γ和IL-4水平较阻断前均无统计学意义（均有P>0.05）,CHP IFN-γ分泌水平较阻断前升高（F=1.214,P=0.003）,且HCV-F（-）组升高程度高于HCV-F（+）组（F=1.434,P=0.009）;而IL-4分泌水平较阻断前明显降低（F=1.505,P=0.015）,且HCV-F（-）组降低程度低于HCV-F（+）组（F=1.444,P=0.032）。结论 在慢性HCV感染中,F蛋白的信号调控机制与负性共刺激分子2B4具有相关性。     

冬凌草甲素抑制人卵巢癌细胞恶性行为及机制研究

目的 研究冬凌草甲素（Oridonin）对人卵巢癌（Human ovarian cancer）SKOV3 细胞迁移和侵袭能力的影响及其潜在的分子机制。方法 采用CCK-8 法检测不同浓度（0、5、10、20、40、80μmol/L）的冬凌草甲素作用SKOV3细胞24、48 和72h 后细胞活力的变化,计算半数抑制浓度（IC50）。采用Annexin V-FITC/PI 双染法检测SKOV3细胞凋亡。采用划痕修复实验检测SKOV3细胞的迁移能力,Transwell小室实验检测SKOV3的侵袭能力。Western blot检测SKOV3细胞上皮细胞间充质转化（EMT）蛋白［E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）］和Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路中β-catenin及下游靶分子原癌基因（C-myc）、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）蛋白的表达。结果 冬凌草甲素可抑制SKOV3 细胞活力,且具有时间-剂量依赖性,作用24、48 和72 h后IC50值为23.57、12.48和7.29μmol/L。与对照组比较,5、10和20μmol/L冬凌草甲素作用SKOV3细胞24h 后,细胞凋亡率明显升高,迁移率和侵袭率降低（P<0.05）。与对照组比较,5、10和20μmol/L冬凌草甲素可升高E-cadherin 蛋白表达（P<0.05）,降低Vimentin 表达（P<0.05）。与对照组比较,5、10和20 μmol/L冬凌草甲素可降低β-catenin、C-myc和Cyclin D1表达（P<0.05）。结论 冬凌草甲素具有抑制SKOV3细胞增殖、转移和侵袭能力的作用,该作用与其抑制Wnt/β-catenin 信号通路有关。     

苯并[a]芘的细胞毒性及诱导IL-1β和IL-8表达作用研究

目的 探讨不同浓度苯并[a]芘（BaP）对人肺癌（淋巴结转移）NCI-H292的细胞毒性及其对NCI-H292细胞炎性因子分泌的影响。方法 取对数期生长的NCI-H292细胞，分别以不同剂量BaP（0、4、8、16和32 μmol/L） 染毒24、48和72 h后，采用实时无标记细胞分析系统（RTCA）法检测细胞存活率，ELISA法检测细胞内白介素-1β（IL-1β）和白介素-8（IL-8）水平。本实验按照5×3析因设计。结果 与对照组相比，各剂量BaP染毒组在24、48和72 h时间点细胞存活率均显著降低（P<0.001），细胞存活率与染毒剂量之间呈高度负相关关系（r1=-0.986、-0.974和-0.993，P<0.01）；与同剂量组24 h时比较，各实验组在染毒48 h和72 h细胞存活率均显著升高（P<0.001）， 细胞存活率与染毒时间之间呈高度正相关关系（r2=0.958、0.996、0.994、0.999和1.000，P<0.01）。NCI-H292细胞内IL-1β水平在染毒剂量和染毒时间上有交互效应（P<0.001），在48 h和72 h时BaP高剂量（8~32 μmol/L）染毒组IL-1β水平均呈随着染毒剂量升高而降低（P<0.01），72 h时低剂量BaP染毒组IL-1β水平则呈随着染毒剂量升高而升高的剂量-效应关系（P<0.01）；同时，各实验组细胞IL-1β水平在24、48和72 h均呈随着染毒时间增加而上升的时间-效应关系（P<0.01）。NCI-H292细胞内IL-8水平在染毒剂量和染毒时间上有交互效应（P<0.01）： 在染毒72 h，BaP染毒剂量为0~16 μmol/L时IL-8水平呈随着染毒剂量升高而升高的剂量-效应关系（P<0.01）；4、8 μmol/L染毒组细胞IL-8水平在24、48和72 h呈随着染毒时间增加而上升的时间-效应关系（P<0.01）。结论 BaP染毒可引起NCI-H292细胞的存活率下降，且随着染毒剂量增加毒性作用增强；BaP可刺激NCI-H292细胞分泌IL-1β和IL-8，其可能在BaP致肺肿瘤炎症过程中发挥重要作用。     

TLRs信号通路和炎症因子的表达与反复呼吸道感染的关系分析

目的 研究Toll样受体(TLRs)信号通路和炎症因子的表达与反复呼吸道感染的关系,为临床治疗提供监测靶点.方法 将汕头市龙湖区第二人民医院儿科2019年1-12月门诊收治的150例反复呼吸道感染患儿纳入研究,记作病例组,另取同期于本院进行体检的健康儿童150例作为对照组.比较病变组和对照组儿童TLRs信号通路和炎症相...     

3种抗氧化剂对亚砷酸钠染毒人膀胱上皮细胞血管内皮生长因子表达的拮抗作用研究

目的探讨抗氧化剂褪黑素(melatonin,MEL)、N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl cysteine,NAC)、维生素C(Vitamin,VC)对砷诱导人正常膀胱上皮(SV-HUC-1)细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的拮抗作用。方法将处于对数生长期的SV-HUC-1细胞暴露于含终浓度分别为0(对照)、0.5、1、2、4、8、10μmol/L亚砷酸钠的F12K完全培养基染毒24 h,或者含终浓度分别为4、10μmol/L亚砷酸钠的F12K完全培养基染毒0(对照)、4、12、24、48、72 h;联合暴露组在加入含终浓度分为4μmol/L亚砷酸钠的F12K完全培养基前30 min分别加入1%二甲基亚砜(DMSO)和抗氧化剂MEL、VC、NAC(终浓度分别为0.5、1、1 mmol/L),染毒24 h。分别采用Western blot法和RT-PCR法检测SV-HUC-1细胞VEGF蛋白和mRNA的表达水平。结果 10μmol/L亚砷酸钠染毒组SV-HUC-1细胞VEGF mRNA的表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);且随着亚砷酸钠染毒剂量的升高,SV-HUC-1细胞VEGF mRNA的表达水平呈上升趋势。与对照组比较,4μmol/L亚砷酸钠染毒12、24、48 h及10μmol/L亚砷酸钠染毒24和48 h后SV-HUC-1细胞VEGF mRNA的表达水平均升高,差异有统计学意义(P0.05);且随着亚砷酸钠染毒时间的延长,各剂量组SV-HUC-1细胞VEGF mRNA的表达水平均呈先上升后下降的趋势。与对照组比较,4μmol/L亚砷酸钠+DMSO染毒组SV-HUC-1细胞中VEGF蛋白的表达水平均增加,差异有统计学意义(P0.05)。与4μmol/L亚砷酸钠+DMSO染毒组比较,亚砷酸钠+NAC染毒组SV-HUC-1细胞中VEGF蛋白的表达水平较高,差异有统计学意义(P0.05);而亚砷酸钠与MEL和VC联合染毒组SV-HUC-1细胞中VEGF蛋白的表达水平无明显改变。结论砷能诱导人正常膀胱上皮细胞VEGF表达增加,NAC能增加VEGF表达。     

Spirulina and C-phycocyanin reduce cytotoxicity and inflammation-related genes expression of microglial cells

Abstract

Objective

Our aim was to investigate the effects of Spirulina on BV-2 microglial cell cytotoxicity and inflammatory genes expression.

Methods

BV-2 microglial cells were treated with lipopolysaccharide (LPS) (1 µg/ml) and various concentrations of Spirulina platensis water extract or its active component (C-phycocyanin (C-PC)) for 24 hours. Cytotoxicity (lactate dehydrogenase (LDH) release) and expression of inducible nitric oxide synthase (iNOS), cyclooxygenase-2 (COX-2), tumor necrosis factor-α (TNF-α), and interleukin-6 (IL-6) mRNAs were assayed.

Results

LPS increased LDH production and up-regulated expression of iNOS, COX-2, TNF-α, and IL-6 by BV-2 microglial cells. However, Spirulina platensis water extract and C-PC significantly reduced LPS-induced LDH release, and expression of iNOS, COX-2, TNF-α, and IL-6 mRNAs.

Conclusion

Spirulina can reduce the cytotoxicity and inhibit expression of inflammation-related genes of LPS-stimulated BV-2 microglial cells.     

砷对Keap1抑制HaCaT细胞凋亡及抗氧化水平的影响

目的 基于抑制Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1（Kelch-like ECH-assoicated protein 1,Keap1）基因,研究砷对人永生化角质形成细胞凋亡及抗氧化水平的影响。方法 培养细胞72 h,分为5组:空白对照组、阴性对照（Keap1基因抑制未染砷）、Keap1基因抑制+低砷（2.9 μmol/L）、Keap1基因抑制+中砷（5.8 μmol/L）和Keap1基因抑制+高砷（29.0 μmol/L）组;用流式细胞仪检测细胞凋亡率;用实时荧光定量聚合酶链式反应检测核因子E2相关因子2（nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2）、Keap1 mRNA水平;采用酶联免疫吸附试验检测谷胱甘肽、血红素氧化酶、环氧化酶、S-腺苷甲硫氨酸与同型半胱氨酸蛋白水平。结果 Nrf2和Keap1 mRNA表达不全相等（均有P<0.05）;与阴性对照组相比,低砷组S-腺苷甲硫氨酸和同型半胱氨酸蛋白表达上调（均有P<0.05）,血红素氧化酶蛋白在低、中、高砷组均上调（均有P<0.05）,环氧化酶蛋白在中、高砷组上调（均有P<0.05）,谷胱甘肽蛋白在高砷组上调（F=7.24,P=0.001）。结论 基于Keap1基因抑制,砷暴露上调抗氧化酶活性,提高抗氧化水平,细胞凋亡下降;随着砷剂量增加,Nrf2表达下调,抗氧化水平失衡,细胞凋亡增加。     

肌醇六磷酸对溃疡性结肠炎大鼠保护作用的实验研究

目的 研究肌醇六磷酸（IP6）对溃疡性结肠炎大鼠的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法 48只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、柳氮磺吡啶组、IP6低、中、高剂量组,采用葡聚糖硫酸钠诱导法构建溃疡性结肠炎大鼠模型,相应组分别以肌醇六磷酸钠0.5g/kg bw、1.0g/kg bw和2.0g/kg bw,柳氮磺吡啶0.5g/kg bw灌胃,连续10天。评估疾病活动指数（DAI）和结肠组织宏观损伤评分,结肠组织病理学观察,并检测结肠组织超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）的活力,丙二醛（MDA）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素1β（IL-1β）的含量。结果 与模型组比较,柳氮磺吡啶组和IP6低、中、高剂量组DAI、结肠宏观损伤评分降低,差异有统计学意义（F=33.637,P<0.001;F=33.369,P<0.001）,组织病理学观察溃疡性结肠炎明显改善,且结肠组织中MDA、TNF-α和IL-1β含量均降低,差异有统计学意义（F=85.892,P<0.001;F=359.605,P<0.001;F=66.698,P<0.001）,IP6高剂量组SOD活力和GSH-Px活力最高,差异有统计学意义（F=7.073,P=0.001;F=40.812,P<0.001）,且随IP6剂量增加而升高。结论 IP6明显改善溃疡性结肠炎大鼠肠道病变,与IP6可抑制促炎因子,增强抗氧化作用有关。     

HMGB1 - TLR9 - MyD88 - TRAF6 - NF - κB信号通路在急性胰腺炎肠粘膜屏障损伤中的作用

目的 探讨雨蛙素和脂多糖诱导的小鼠重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis, SAP）模型中肠道粘膜屏障损伤的机制。方法 采用雨蛙素和脂多糖诱导小鼠SAP模型。将雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组和SAP组,每组12只。每组分为6 h和12 h两个时间点。HE染色观察胰腺及回肠病理学,ELISA法检测TNF - α、IL - 1β、IL - 6、DAO和EndoCAb的表达水平,Western blot检测HMGB1、TLR9、MyD88、TRAF6、NF - κB p65、p - NF - κB p65和occludin表达水平,TUNEL法检测肠上皮细胞凋亡情况。采用单因素方差分析比较不同处理组之间的结果,组间差异进一步采用LSD - t多重比较。结果 与对照组相比,SAP组血清中 IL - 1β、IL - 6、TNF - α、DAO 和EndoCAb水平升高（F = 104.50,P＜0.05;F = 140.36,P＜0.05;F = 328.21,P＜0.05;F = 372.23,P＜0.05;F = 80.67,P＜0.05）;HMGB1、TLR9、MyD88、TRAF6和p - NF - κB p65蛋白表达升高（F = 65.95,P＜0.05;F = 84.16,P＜0.05;F = 58.27,P＜0.05;F = 122.26,P＜0.05;F = 178.38,P＜0.05）,occludin的表达降低（F = 456.91,P＜0.05）、小鼠肠上皮细胞凋亡增加(F = 400.47,P＜0.05)。与12 h SAP组相比,6 h SAP组血清IL - 1β、IL - 6和TNF - α水平及p - NF - κB p65蛋白表达升高更明显(ｔ = 4.95,P＜0.05;ｔ = 4.57,P＜0.05;ｔ = 3.32,P＜0.05;ｔ =2.93,P＜0.05)。与6 h SAP组相比,12 h SAP组回肠组织中occludin水平降低更明显（ｔ = - 3.52,P＜0.05）,血清DAO、EndoCAb水平、HMGB1、TLR9、MyD88、TRAF6蛋白表达水平更高（ｔ=6.55,P＜0.05;ｔ = 4.96,P＜0.05;ｔ = 6.88,P＜0.05;ｔ = 8.52,P＜0.05;ｔ = 7.37,P＜0.05;ｔ = 7.78,P＜0.05）,肠上皮细胞出现细胞凋亡更明显 (ｔ = 3.10,P＜0.05)。结论 HMGB1 - TLR9 - MyD88 - TRAF6 - NF - κB信号通路可能参与了SAP肠粘膜屏障损伤。     

X射线对小胶质细胞M1和M2型极化的影响

目的 探讨X射线对小鼠小胶质BV-2细胞极化的影响.方法 取对数生长期BV-2细胞随机分为假照射组(Sham)和10 Gy照射组,后者给予X射线单次照射,剂量为1.28 Gy/min,照射时间7 min 49 s.于照射后1、3、6、24h和48 h,光镜下观察并分析BV-2细胞活化率;HE染色及Iba-1免疫荧光染色...     

婴幼儿呼吸道合胞病毒肺炎外周血单核细胞miR-146a和miR-155的表达及与炎症反应关系

目的 探讨婴幼儿呼吸道合胞病毒(RSV)肺炎外周血单核细胞(PBMCs)miR-146a和miR-155的表达及与炎症反应关系。方法 选取2017年1月－2019年1月三峡大学第三临床医学院葛洲坝集团中心医院收治的84例RSV肺炎患儿作为研究组,根据病情严重程度分为轻度组和重度组。选取同期体检健康婴幼儿80例作为对照组,采集受试者外周血并分离单核细胞,采用实时荧光定量PCR检测单核细胞中miR-146a和miR-155水平,采用酶联免疫吸附法检测血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)水平,Pearson法分析两组受试者miR-146a、miR-155水平与炎症因子水平的相关性。结果 重度组患儿PBMCs中miR-146a水平明显低于轻度组与对照组(F=31.907,P＜0.05),轻度组与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);重度组患儿PBMCs中miR-155水平显著高于轻度组、对照组(F=143.127,P＜0.05),轻度组高于对照组(P＜0.05);研究组患儿血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8水平均高于对照组(t=36.627、39.350、22.743、10.617,P＜0.05)。RSV肺炎患儿miR-146a与TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8表达呈负相关(r=-0.473、-0.502、-0.396、-0.337,P＜0.05),miR-155与TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8表达呈正相关(r=0.451、0.394、0.359、0.382,P＜0.05)。结论 RSV肺炎患儿PBMCs中miR-146a低表达,miR-155高表达,并与患儿疾病严重程度及炎症反应相关。     

黄绿青霉素对肿瘤坏死因子α诱导的血管内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1和白细胞介素的影响

目的观察黄绿青霉素(CIT)对血管内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素1β(IL-lβ)、IL-6和IL-8等细胞因子的影响,以及CIT上调肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的内皮细胞表达MCP-1、IL-lβ、IL-6和IL-8的作用。方法体外原代培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),选择第5～6代进行试验,待细胞融合80%后随机分组,加入TNF-α(10μg/L)、CIT(2μmol/L)建立TNF-α组、CIT组、TNF-α+CIT联合处理组和空白对照组,处理时间24h。用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液IL-lβ、IL-6、IL-8及MCP-1的含量;免疫荧光染色法测定细胞核转录因子κB(NF-κB)的激活表达;RT-PCR检测各组MCP-1 mRNA表达。结果在TNF-α组和TNF-α+CIT组,细胞上清液IL-lβ、IL-6、IL-8、MCP-1浓度,细胞MCP-1 mRNA表达量,NF-κB P65蛋白表达量均高于空白对照组(P<0.05);且TNF-α+CIT组均高于TNF-α组(P<0.05)。结论 CIT可明显上调TNF-α诱导的内皮细胞MCP-1、IL-lβ、IL-6、IL-8表达和NF-κB的激活。