RNA干扰Akt对食管癌细胞株Eca109生物学特性的影响

目的:探讨RNA干扰沉默Akt对人食管鳞癌细胞体外增殖、迁移及血管生成拟态(VM)形成的影响.方法:应用倒置荧光显微镜观察Akt的干扰质粒转染食管癌细胞Eca109后绿色荧光蛋白的表达;采用Western blot方法检测Akt蛋白的表达;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测转染前后细胞增殖能力的变化;Transwell方法...     

VEGFR-3小干扰RNA对结肠癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的:研究血管内皮生长因子受体3(vascularendothelial growth factor receptor 3,VEGFR-3)小干扰RNA对结肠癌细胞移植瘤模型生长的影响.方法:构建VEGFR-3小干扰RNA表达载体.将结肠癌LoVo细胞注射入裸鼠皮下建造裸鼠移植瘤模型.将15只裸鼠结肠癌模型随机分成3组:实验组(pG-siRNA/VEGFR-3重组质粒)、阴性对照组(pG-HK重组质粒)与空白对照组.分别瘤体内注射相应的siRNA混合物或转染剂混合液,每3 d注射1次,共注射3次,观察肿瘤体积的变化;6 wk后处死裸鼠,肿瘤称取质量,并进行qRT-PCR和Western blot测定VEGFR-3 mRNA和蛋白的变化,通过免疫组织化学进行微淋巴管计数.结果:实验组移植瘤体积和质量明显小于阴性对照组和空白对照组,有显著的统计学意义(P<0.001).实验组抑制率为52.75%,与对照组相比,差异有显著(P<0.001).qRT-PCR和Western blot测定VEGFR-3 mRNA和蛋白的变化比较,实验组有明显降低(P<0.001).实验组淋巴管计数较对照组差异显著(P<0.05).结论:VEGFR-3 siRNA可以抑制裸鼠结肠癌细胞移植瘤的生长,并减少裸鼠移植瘤淋巴管生成,能有效抑制结肠癌细胞的生长.     

腺病毒介导生长抑素2型受体对裸鼠人胰腺癌移植瘤抑制作用的研究

目的构建表达生长抑素2型受体(SSTR2)的重组腺病毒,探讨其对裸鼠人胰腺癌移植瘤生长的影响及机制。方法2004-06-01—2005-12-10,在暨南大学生物工程学系采用位点特异性重组方法构建和包装携带人生长抑素2型受体和报告基因LacZ的重组腺病毒Ad-SSTR2和Ad-LacZ。建立裸鼠人胰腺癌移植瘤模型,分别于瘤内注射生理盐水(阴性对照组)、Ad-LacZ(报告基因对照组)和Ad-SSTR2(实验组),观察肿瘤大小和重量变化。通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹试验(Western blot)鉴定SSTR2在裸鼠肿瘤组织中的表达,Western blot测定信号传导通路蛋白ERK2和ras的表达情况。结果获得滴度分别为6.0×1012pfu/L和6.5×1012pfu/L的重组腺病毒Ad-SSTR2和Ad-LacZ。Ad-SSTR2转染裸鼠胰腺癌移植瘤后SSTR2 mRNA和蛋白都得到有效表达,实验组对移植瘤生长具有明显的抑制作用,抑制率为48.2%。与阴性对照组和报告基因对照组相比,实验组ERK2和ras蛋白的表达量明显减少(P<0.01)。结论腺病毒介导的生长抑素2型受体对裸鼠人胰腺癌移植瘤的生长具有抑制作用,其作用机制可能与信号传导通路蛋白ERK2和ras的表达下调有关,提示其有可能成为胰腺癌基因治疗的一种有效方法。     

Survivin-siRNA对裸鼠前列腺癌生长的影响

目的研究survivin-siRNA对前列腺癌裸鼠移植瘤生长的作用，探讨survivin与前列腺癌发生、发展的关系。方法人前列腺癌细胞PC-3M荷瘤裸鼠18只随机分为3组：mock组（n=6），psi-scrambled组（n=6）和pSi-sur2组（n=6）。通过电子穿孔仪将质粒转入裸鼠移植瘤内，20d后处死动物，计算抑瘤率。利用Western blot检测survivin蛋白表达水平，免疫组化SP法检测增殖指数变化；TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡的变化。结果体内实验表明，pSi-sur2组与其他两对照组比较裸鼠移植瘤生长速度明显减慢（P〈0．01），肿瘤组织survivin蛋白表达及肿瘤增殖指数显著降低（P〈0．01），而肿瘤凋亡显著增加（P〈0．01）。结论通过RNA干扰技术抑制survivin的表达，在裸鼠体内可显著抑制前列腺癌生长。     

转染kiss-1基因对人食管癌EC9706细胞裸鼠移植瘤的抑制作用

目的:研究转染kiss-1基因对人食管癌EC9706细胞裸鼠皮下移植瘤的作用,探讨其在食管癌基因治疗中的可行性和特异性.方法:在食管癌细胞系EC9706中转染kiss-1基因,经G418筛选,建立稳定高表达Kiss-1蛋白的细胞系.稳定表达该基因的细胞为转染kiss-1基因组,转染空质粒细胞及未处理细胞为对照组,建立裸鼠荷瘤模型;监测肿瘤生长变化,HE染色观察肿瘤病理学变化,RT-PCR、Western blot方法检测kiaa-1 mRNA和蛋白变化.结果:转染kiss-1基因组肿瘤生长受到显著抑制:HE染色显示转染kiss-1基因组及转染空质粒纽肿瘤组织内坏死均较空白对照组多;RT-PCR、Western blot结果表明转染kiss-1基因组裸鼠肿瘤组织kiss-1 mRNA和蛋白表达均显著升高,三组间比较差异具有统计学意义(F=72.685,24.807,均P<0.05).结论:转染kiss-1基因能抑制人食管癌EC9706细胞裸鼠皮下移植瘤的形成,且能有效上调kiss-1 mRNA和蛋白的表达,可为食管癌的基因治疗提供新的靶点、开辟新的思路.     

沉默HIF-1α调控MAPK/ERK信号通路抑制NSCLC转移的分析

目的探讨HIF-1α在体内及体外对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞转移的影响及其作用机制。 方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测HIF-1α在癌旁正常组织、肺鳞癌组织(LUSC)、肺腺癌组织(LUAD)、A549细胞和HEB细胞中的表达量。上调HIF-1α表达后,通过MTT、细胞侵袭和Western blot实验检测过表达HIF-1α对A549细胞增殖、侵袭和EMT的影响。下调HIF-1α表达后,Western blot检测A549细胞ERK和p-ERK蛋白的表达量。THBQ激活MAPK/ERK通路后,分析A549细胞增殖、侵袭和EMT能力。将细胞株植入裸鼠体内,构建移植瘤模型,最后测量裸鼠移植瘤的体积和重量。 结果HIF-1α在NSCLC组织的表达水平明显高于癌旁正常组织(P<0.05)。A549细胞中HIF-1α表达水平明显高于HEB细胞(P<0.01),过能够促进A549细胞的增殖和侵袭,N-cadherin蛋白表达量明显上升,E-cadherin蛋白表达量明显下降。下调HIF-1α能够抑制A549细胞内MAPK/ERK通路,且抑制了A549细胞的增殖、侵袭和EMT。下调HIF-1α使裸鼠移植瘤的重量和体积明显减小。 结论沉默HIF-1α通过MAPK/ERK信号通路在体内及体外抑制NSCLC转移。     

shRNA干扰STAT3基因表达对胃癌细胞MKN-45体内外生物学特性的影响

目的:研究shRNA干扰STAT3基因表达对胃癌细胞MKN-45体内外生物学特性的作用.方法:应用本实验室已构建并鉴定的STAT3基因的特异性小RNA干扰质粒(psiRNA-H1/STAT3),使用脂质体转染MKN-45细胞,实验分为对照组、psiRNA-H1转染组和psiRNA-H1/STAT3转染组3组.通过RT-PCR和Western blot检测STAT3特异性小RNA干扰基因对胃癌细胞STAT3基因mRNA和蛋白表达的影响;MTT比色法检测细胞的生长抑制率;流式细胞仪分析MKN-45细胞周期分布.用各组MKN-45细胞建立移植瘤裸鼠模型,筛选转染psiRNA-H1和psiRNA-H1/STAT3的MKN-45稳定细胞株观察裸鼠移植瘤的生长情况.结果: 成功转染重组体的MKN-45细胞中STAT3 mRNA和蛋白表达明显下降(0.612±0.074 vs 1.937±0.043,P<0.05;0.668±0.054 vs 2.005±0.064,P<0.01).G0/G=期细胞比例增高,另一方面S期细胞比例降低,细胞的增殖系数明显降低(25.42±3.48 vs 33.54±2.91,P<0.05).移植瘤裸鼠模型显示,psiRNA-H1/STAT3组瘤体在体积上明显减小(4.47 cm3±0.18 cm3 vs 13.65 cm3±5.64 cm3,P<0.05).结论:针对STAT3基因的特异性小RNA干扰质粒在体外能有效抑制人胃癌细胞系STAT3 mRNA和蛋白表达,细胞增殖能力减弱,在体内明显抑制肿瘤生长,为STAT3基因靶向治疗提供一定的实验依据.     

雄激素受体基因对前列腺癌移植瘤生长及PI3K/AKT信号通路的影响

目的探讨雄激素受体(AR)小片段发夹RNA(shRNA)质粒对前列腺癌移植瘤的作用及其机制。方法构建AR shRNA并制备重组质粒。使用BALB/C裸鼠构建前列腺癌细胞DU-145移植瘤模型并分为模型对照组、阳性对照组和实验组(n=10)。阳性对照组、实验组和模型对照组裸鼠分别尾静脉注射氟尿嘧啶(20 mg/kg)、AR shRNA质粒(2 mg/kg)及等体积生理盐水共10 d,测定各组裸鼠的肿瘤体积生长情况,开始给药后第4周处死裸鼠剥离肿瘤,采用RT-PCT测定移植瘤中AR mRNA表达水平,采用Western印迹测定磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)信号通路相关蛋白表达水平。结果给药3 d时实验组和模型对照组裸鼠肿瘤体积差异无统计学意义(P>0.05),实验组裸鼠在给药后1 w、2 w、3 w和4 w时肿瘤体积较模型对照组显著降低(P<0.05)。实验组裸鼠移植瘤AR mRNA表达水平较模型对照组显著降低(P<0.05)。p-AKT、p-GSK3β和p-雷帕霉素靶蛋白(mTOR)蛋白表达水平较模型对照组显著降低(P<0.05),AKT、GSK3β和mT OR蛋白表达较模型对照组显著升高(P<0.05)。结论 AR shRNA可抑制前列腺癌组织AR表达及PI3K/AKT信号通路相关蛋白磷酸化而发挥对前列腺癌移植瘤生长的抑制作用。     

富含半胱氨酸蛋白61RNA干扰质粒抑制血管平滑肌细胞的增殖

目的 观察富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61)RNA干扰质粒(pCyr61-shRNA)对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响.方法 构建Cyr61 RNA干扰质粒转染大鼠血管平滑肌细胞,采用半定量逆转录聚合酶链反应及Western blot检测Cyr61 RNA和蛋白表达;采用MTT法检测细胞增殖;3H-标记胸腺嘧啶掺入法检测细胞DNA含量.结果 测序证实成功构建Cyr61 RNA干扰质粒;转染pCyr61-shRNA组mRNA及蛋白表达均明显降低(P<0 01);pCyr61-shRNA组细胞数、吸光度值和DNA含量均明显降低(P<0 01).结论 Cyr61 RNA干扰质粒抑制大鼠血管平滑肌细胞的增殖.     

短发夹RNA对胰腺癌细胞PANC-1突变型K-ras基因表达的影响

目的:研究短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对人胰腺癌细胞PANC-1中突变型K-ras基因表达的抑制作用.方法:构建特异性针对胰腺癌PANC-1细胞突变型K-ras基因的重组质粒pGensil-1-P1,阴性对照质粒pGensil-1-HK并采用脂质体介导的方法转染胰腺癌细胞.应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测K-ras基因mRNA和蛋白的表达,CCK-8方法测量细胞生长曲线.并建立人胰腺癌细胞PANC-1裸鼠皮下移植瘤模型,分别注射Pgenesil-1-P1、Pgenesil-1-HK质粒,动态观察并处死裸鼠计算肿瘤体积.结果:测序证实质粒表达载体构建成功,短发夹RNA(shRNA)使胰腺癌细胞PANC-1突变型K-ras基因的mRNA较未治疗组、阴性对照组相比明显减少(P=0.01);未治疗组、阴性对照组及治疗组的K-ras蛋白表达率分别为100%,99.0%±0.73%,39.9%±2.1%,前两组K-ras蛋白表达差异无统计学意义,治疗组较未治疗组K-ras蛋白表达下调了约60.1%;细胞生长受到明显抑制(P=0.02);经重组质粒治疗14 d后,裸鼠皮下移植瘤生长缓慢,相较于对照组瘤体明显缩小(P=0.03).结论:shRNA对特异性转染组的胰腺癌细胞的突变K-ras基因表达有抑制作用,使细胞以及裸鼠移植瘤的生长受到抑制.     

Raf-1对裸鼠人乳腺癌细胞移植瘤EMT的影响及其机制探讨

目的 观察原癌基因蛋白Raf-1对裸鼠人乳腺癌细胞移植瘤上皮间质转化(EMT)的影响,并探讨其可能的机制.方法 将20只裸鼠随机分成A、B组,每组10只,分别侧腹部皮下注射对数生长期的MCF-7和MCF-7Raf-1细胞2×106个,建立裸鼠移植瘤模型.12周后处死裸鼠,原代培养裸鼠移植瘤细胞.采用Western blot法检测EMT的上皮细胞标志物E-cadherin、β-catenin和间质标志物vimentin,以及AURKA、总正丝裂原活化蛋白激酶(tMAPK)及磷酸化MAPK(p-MAPK).采用AURKA抑制剂处理MCF-7Raf-1移植瘤细胞48、72 h,采用Western blot法检测E-caherin、β-catenin、vimentin蛋白.结果 肿瘤细胞移植后4、8、12周,B组移植瘤体积均大于A组(P均＜0.05);与A组比较,B组移植瘤细胞E-caherin、β-catenin蛋白相对表达量降低,vimentin、p-MAPK、AURKA蛋白相对表达量增加,P均＜0.05;与AURKA抑制剂处理前比较,B组处理后48、72 h移植瘤细胞E-caherin、β-catenin蛋白相对表达量增加,vimentin蛋白相对表达量降低,P均＜0.05.结论 Raf-1过表达使乳腺癌细胞增殖能力显著增强,导致了AURKA高表达,发展了EMT表型;针对MAPK和AURKA信号通路的分子靶向治疗,有助于抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭和转移.     

shRNA干扰技术沉默VEGF表达治疗血管内皮瘤的实验研究

目的构建血管内皮生长因子（VEGF）短发夹RNA真核表达质粒（shVEGF）,观察其对血管内皮瘤细胞系（EOMA）细胞体外增殖及动物实验的影响。方法构建真核表达质粒pGenesil-3-shVEGF并转染EOMA细胞,采用CCK-8法检测shVEGF对EOMA细胞增殖能力的影响。建立EOMA细胞裸鼠皮下移植瘤模型,分为对照组和shVEGF组,肿瘤出现后,隔日测量瘤体体积,并观察体积变化。结果转染48h后EOMA细胞增殖受到抑制。体内实验显示经shVEGF治疗后,裸鼠皮下移植瘤体生长缓慢,体积明显缩小。结论RNA干扰技术实现VEGF基因沉默,能明显抑制EOMA细胞增殖及体内肿瘤生长,提示shVEGF在血管内皮瘤、血管瘤等血管瘤样病变的生物治疗中可能有较好的应用前景。     

Tiam1基因沉默对胰腺癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响

目的研究沉默T淋巴瘤侵袭转移诱导因子(Tiam)1基因对胰腺癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响,并探讨其可能的分子机制。方法通过RNA干扰(RNAi)技术沉默胰腺癌BxPC-3细胞中Tiam1的表达,Western印迹实验检测其沉默效果;将转染处理过的胰腺癌细胞接种于裸鼠皮下,建立胰腺癌皮下移植瘤模型;观察肿瘤生长情况并绘制肿瘤生长曲线,裸鼠处死后,取瘤称重;苏木素-伊红(HE)染色法观察移植瘤组织病理学结构;免疫组织化学染色法(IHC)检测移植瘤组织增殖相关蛋白Ki-67,转移相关蛋白E-钙黏蛋白(cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、Slug的表达。结果 RNAi技术可有效沉默胰腺癌BxPC细胞中Tiam1的表达,并成功构建胰腺癌裸鼠移植瘤模型;与对照组比较,si-Tiam1组裸鼠肿瘤体积与质量均明显降低(P<0.05);HE染色结果显示,与对照组比较,si-Tiam1组中肿瘤组织出现细胞皱缩、片状坏死等病理性改变;IHC结果显示,与对照组相比,si-Tiam1组移植瘤组织中Ki-67、Vimentin、Slug的表达明显降低,而E-cadherin的表达明显升高。结论沉默Tiam1能有效抑制胰腺癌裸鼠移植瘤的生长,其机制可能与Ki-67、Vimentin、Slug表达的降低及E-cadherin的表达增强有关,提示Tiam1有可能成为胰腺癌基因治疗的新靶标。     

鼠双微粒体-2基因沉默对人肝癌HepG2细胞移植瘤生长的抑制作用

目的 构建鼠双微粒体-2基因(MDM2)靶向小分子干扰RNA (siRNA)质粒,研究其对人肝癌HepG2细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用,探讨其在肝癌基因治疗中的可行性.方法 构建MDM2的siRNA真核表达载体pSilencer-siRNA-MDM2 (siMDM2),建立裸鼠荷瘤模型,分别给予阴性对照质粒和siMDM2质粒处理.监测肿瘤生长变化,RT-PCR、Western blot方法检测MDM2及p53 mRNA和蛋白的表达变化.正态分布数据的组间比较用单因素方差分析及LSD检验.结果 裸鼠体内实验结果显示,转染siMDM2-1和siMDM2-2组与对照组相比,肿瘤增长受到明显抑制,抑瘤率分别为60.6％和54.6％.RT-PCR和Westem blot结果示MDM2的mRNA和蛋白质表达下调,而p53的mRNA和蛋白质表达上调.与空白组比较,转染siMDM2-1和siMDM2-2组的MDM2mRNA表达分别下调62.8％和61.5％,MDM2蛋白表达分别下调60.7％和59.5％;p53 mRNA表达分别上调47.1％和45.6％,p53蛋白表达分别上调45.9％和44.3％,差异均具有统计学意义(F值分别为75.099、47.860、17.676和235.770,P值均＜0.01).结论 siRNA沉默MDM2基因能抑制人肝癌HepG2细胞裸鼠皮下移植瘤的形成,可能与其在体内有效下调MDM2和上调p53的mRNA及蛋白质表达有关.     

MicroRNA-486-5p通过下调Neuropilin-2的表达抑制人大肠癌中微淋巴管的生成

目的:探讨过表达micro RNA-486-5p(mi R-486-5p)对人大肠癌细胞系SW620体内生长的作用及其作用机制的研究.方法:构建mi R-486-5p的过表达质粒,体外脂质体法瞬时转染人大肠癌细胞SW620;建立人大肠癌裸鼠皮下移植瘤模型,实验组每3 d瘤周注射mi R-486-5p过表达质粒,对照组注射等量的空白载体.每天观察肿瘤的生长情况并每3 d测量肿瘤的体积;实时荧光定量-PCR(Real-time PCR)检测各组肿瘤组织中mi R-486-5p的表达水平;免疫组织化学技术检测移植瘤内神经纤毛蛋白-2(neuropilin-2,NRP2)及微淋巴管的的分布情况;Western blot技术检测各组移植瘤中NRP2蛋白的表达.结果:转染后,实验组中mi R-486-5p的相对表达量较对照组提高12.57±2.31倍,过表达m i R-486-5p后实验组裸鼠皮下移植瘤的生长速度较对照组明显减缓(P0.05),瘤体质量明显减轻(P0.05).过表达mi R-486-5p可明显抑制NRP2蛋白的表达(P0.05),此外,mi R-486-5p组微淋巴管密度降低.结论:过表达mi R-486-5p可明显抑制大肠癌细胞的生长,抑制微淋巴管的生成,这可能与下调NRP2蛋白的表达有关.     

c-met siRNA转染对食管鳞癌细胞生物学特性的影响

[目的]讨论c-Met在食管鳞癌中的表达;构建针对人c-met基因的RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,观察其对高侵袭性食管鳞癌细胞c-met基因的沉默效应以及对细胞生物学行为的影响。[方法]培养食管鳞癌CE81T-4细胞株,构建c-met基因的RNAi慢病毒载体,用荧光定量RT-PCR与Western blotting检测其对c-met的干扰效率,用裸鼠移植瘤模型评估RNA干扰后细胞成瘤能力的影响,用裸鼠皮下食管肿瘤生长曲线、肿瘤组织的苏木精-伊红染色及Western blotting验证c-met表达情况。[结果]成功构建c-met基因的RNAi慢病毒载体,qRT-PCR与Western blotting实验显示其对食管鳞癌CE81T-4细胞c-met mRNA及蛋白的表达的抑制均较明显,裸鼠移植瘤实验显示RNA干扰后细胞的成瘤能力降低,裸鼠皮下食管肿瘤生长曲线、肿瘤组织的苏木精-伊红染色、Western blotting实验显示裸鼠移植瘤体内c-met的表达抑制较明显。[结论]c-metRNAi慢病毒载体能够抑制食管鳞癌CE81T-4细胞的侵袭及成瘤能力。     

阿司匹林对人胃癌细胞株的作用及机制探讨

目的 观察阿司匹林对人胃癌细胞株SGC7901生长及人胃癌裸鼠移植瘤生长的作用,并初步探讨其作用机制。方法 采用MTT法及流式细胞术检测不同浓度阿司匹林对胃癌细胞增殖及细胞周期的影响;Westem blot法检测阿司匹林对胃癌细胞COX-2、VEGF表达的影响;建立人胃癌裸鼠移植瘤模型,给予阿司匹林20天,观察肿瘤大小,免疫组化检测阿司匹林对肿瘤组织中COX-2、VEGF表达及MVD的影响。结果 阿司匹林对胃癌细胞的增殖具有抑制作用,且呈一定的时间、剂量依赖性;细胞周期分析表明阿司匹枳主要使细胞阻滞在G0/G1期;western blot检测表明阿司匹林能降低胃癌细胞COX-2、VEGF蛋白的表达;阿司匹林对裸鼠移植瘤的生长有抑制作用,免疫组化显示阿司匹林能降低移植瘤组织中(COX-2、VEGF的表达及MVD。结论 阿司匹林对胃癌细胞及裸鼠移植瘤均具有一定的抑制作用,其机制可能是通过对COX-2和VEGF等血管生成相关因子的抑制起作用。     

沉默肝癌衍生生长因子对大肠癌细胞增殖的抑制

目的:研究沉默肝癌衍生生长因子(hepatomaderived growth factor, HDGF)对人大肠癌lovo细胞增殖的影响.方法:将3 条HDGF的特异性小干扰RNA(HDGF-siRNA)通过脂质体介导瞬时转染入大肠癌lovo细胞, RT-PCR及Western blot 法分别检测HDGF mRNA和蛋白质表达受抑程度, 并筛选出1条沉默效率最高的siRNA用于后续试验; MTT法观察HDGF-siRNA对大肠癌细胞增殖生长的影响; Western blot法检测增殖细胞核抗原(PCNA)及ERK通路蛋白在转染前后大肠癌lovo细胞中表达含量的变化.结果:HDGF-siRNA转染能有效抑制大肠癌lovo细胞中HDGF的表达; 与空白及阴性对照组相比, RNA干扰组大肠癌lovo细胞增殖率明显降低(t=4.432,4.263, 均P<0.01)、PCNA和p-ERK1/2蛋白均明显下调(t=14.89,11.92,均P<0.01).结论:HDGF-siRNA不仅有效阻断HDGF在大肠癌lovo细胞的表达, 而且明显抑制大肠癌lovo细胞的增殖, 其作用机制可能与下调PCNA, 抑制ERK1/2蛋白活化有关.     

脑源性神经营养因子对人冠状动脉内皮细胞增殖和克隆的影响

目的探讨脑源性神经营养因子(BDNF)对人冠状动脉内皮细胞(human coronary artery ebditgekuak cells,HCAEC)功能的影响及其作用机制。方法将HCAEC分为2组,其中一组添加BDNF(50 ng/μL)作为实验组,另一组不做其他处理作为对照组。采用CCK8法和平板克隆形成实验分别检测2组细胞的增殖能力和克隆能力,采用Western blot检测2组细胞中PI3K/Akt/mTOR信号通路、ERK信号通路及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白水平。结果与对照组相比,实验组细胞的增殖能力和克隆能力均显著提高(P 0. 05)。Western blot结果表明,实验组细胞中的磷酸化Akt(p-Akt)和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)水平显著升高(P 0. 05),并且Wnt蛋白家族1(Wnt1)、跨膜受体卷曲蛋白1(Frizzled1)和胞浆调节散乱蛋白1(Dsh)的表达水平也明显增加(P 0. 05),磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK1/2)水平升高(P 0. 05)。结论BDNF促进了HCAEC的细胞增殖和克隆形成能力,PI3K/Akt/mTOR信号通路、ERK信号通路和Wnt/β-catenin信号通路可能参与其中。     

罗格列酮对人肝癌细胞HepG2裸鼠移植瘤的影响及机制

目的探讨罗格列酮对人肝癌Hep G2细胞裸鼠皮下移植瘤的影响和可能机制。方法建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为罗格列酮组及对照组。观察移植瘤生长情况,HE染色观察移植瘤细胞形态,流式细胞术(FCM)分析细胞周期及凋亡情况,Western印迹法检测移植瘤细胞中第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)、磷酸化蛋白激酶B(p Akt)、S期激酶相关蛋白2(Skp2)及细胞周期蛋白激酶抑制剂P27kip1蛋白的表达情况。结果研究结束时,罗格列酮组移植瘤体积与重量均明显小于对照组,体积抑制率为52.13%,重量抑制率为65.63%。罗格列酮组移植瘤细胞G0/G1期比例及凋亡率均显著高于对照组(P<0.05)。罗格列酮组移植瘤细胞PTEN及P27kip1蛋白的表达量明显高于对照组,p Akt及Skp2蛋白表达量明显低于对照组(P<0.05)。结论罗格列酮对人肝癌Hep G2细胞裸鼠移植瘤的生长有抑制作用,可引发移植瘤细胞G0/G1期阻滞并诱导其凋亡,其机制可能与罗格列酮上调PTEN蛋白的表达,抑制PI3K/Akt信号通路,下调Skp2蛋白,导致P27kip1蛋白水平升高有关。