E1A基因对人肺腺癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的 探讨E1A基因对人肺腺癌细胞增殖的抑制作用与细胞周期的关系及作用机制。方法 利用细胞增殖曲线和裸小鼠体内致瘤性实验研究E1A基因对人肺腺癌细胞增殖的影响,采用流式细胞术分析人肺腺癌细胞周期,以蛋白印迹方法分析P16、P21、P53和cyclin B1水平变化。结果 转染E1A基因后,人肺腺癌细胞（Anip973-E1A）生长缓慢,体内致瘤性降低。Anip973-E1A细胞周期出现明显的S期抑制和G2/M阻滞,周期调控蛋白P16、P21、P53水平无明显变化,但cyclin B1表达明显下降。结论 E1A基因能显著抑制人肺腺癌细胞的体内外增殖,降低周期蛋白cyclin B1的表达,使细胞周期阻滞于G2/M,这可能与A1A基因抑制作用有关。     

辛伐他汀对非小细胞肺癌细胞增殖和免疫逃逸的影响

目的观察辛伐他汀对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖和免疫逃逸的影响,并探讨其机制。方法用改进MTT法检测不同浓度辛伐他汀、RhoA siRNA处理后A549细胞的增殖情况;用Real-time RTPCR检测抗免疫逃逸相关因子即主要组织相容性复合体Ⅰ类（MHCⅠ,又称HLA-A）和肽转运蛋白（TAP1）的基因表达;用RhoA活性测定法观察RhoA活性变化;用Lipofectamine 2000转染siRNA。结果辛伐他汀能浓度依赖性（10～30μmol/L）地抑制A549细胞增殖,增强HLA-A和TAP1基因表达,抑制RhoA活性（P〈0.05或〈0.01）。用0.1μmol/L RhoA siRNA抑制RhoA活性后,也能显著抑制A549细胞增殖,增加HLA-A和TAP1基因表达（P〈0.01）。但RhoA siRNA联合应用辛伐他汀不能产生协同效应,而与单用RhoA siRNA的作用相似（P〉0.05）。结论辛伐他汀主要依赖于抑制A549细胞的RhoA活性,从而增加HLA-A和TAP1表达,减少免疫逃逸和细胞增殖。     

白藜芦醇对人肾癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的探讨白藜芦醇（Res）对人肾癌细胞786-0（以下简称肾癌细胞）增殖和周期的影响。方法分别采用12.5、25、50、100μmol/L的白藜芦醇（Res）作用于肾癌细胞24 h;并设空白对照组。流式细胞仪检测细胞细胞周期。结果各浓度Res对肾癌细胞增殖均具有明显的抑制作用,表现为G1期及G2期细胞比例明显降低,S期比例明显升高,与对照组比较,P均〈0.05。Res 12.5μmol/L与25、50及100μmol/L比较,P均〈0.05;但25μmol/L与50、100μmol/L比较,P〉0.05。12.5μmol/L的Res抑制作用明显,当浓度达到25μmol/L时,抑制作用达最强;而继续升高浓度不能提高抑制作用。结论 Res对人肾癌细胞增殖有抑制作用,且具有剂量依赖性。     

PI3K/Akt抑制剂对肺腺癌A549细胞增殖活性的影响

目的 研究磷脂酰肌醇-激酶特异性抑制剂LY294002对人肺腺癌A549细胞株体内外生长的影响,探讨其可能的作用机制.方法 采用MTT方法检测A549细胞增殖活力的改变,用流式细胞仪进行细胞周期分析;建立裸鼠肺癌移植瘤模型,观察LY294002对荷瘤小鼠肿瘤生长情况的影响及肿瘤抑制率.Western印迹检测小鼠肿瘤组织内p-Akt蛋白及Bcl-2蛋白的表达.结果 ①LY294002对A549细胞增殖有抑制作用,各浓度组与对照组相比差异均有统计学意义(均P＜0.01),并随着剂量的增加及时间的延长,抑制率增加.②经LY294002治疗后,对照组的瘤重为(773.33±32.04)mg,LY294002组的瘤重为(461.67±36.56)mg,抑瘤率达40.3%.③LY294002组的p-Akt蛋白及Bcl-2蛋白表达水平较对照组明显降低.结论 LY294002能抑制肺癌A549细胞的恶性增殖,呈明显的时间及剂量依赖性,并降低p-Akt蛋白及Bcl-2蛋白表达水平,诱导肺癌细胞凋亡可能是LY294002发挥抗癌作用的重要机制.     

重楼皂苷Ⅶ对耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞增殖的抑制作用

目的探讨重楼皂苷Ⅶ对耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞增殖的抑制作用。方法 MTT法测定重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞的细胞凋亡率及细胞周期时相分布的影响。结果重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞的增殖有明显抑制作用,抑制率随药物浓度增加而增高,具有明显的量-效关系(P<0.05)。同时发现,重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞作用48 h及72 h组与24 h组比较细胞增殖抑制率均明显提高(P<0.05),但72 h组与48 h组比较,无统计学意义(P>0.05)。流式细胞仪分析显示,浓度为50μmol/L及100μmol/L的重楼皂苷Ⅶ作用A549/DDP细胞24 h后,与阴性对照组比较早期凋亡细胞比例明显增高;且对细胞周期时相分布影响明显,细胞阻滞G2期。结论重楼皂苷Ⅶ对人肺腺癌A549/DDP细胞的增殖具有明显抑制作用,并呈明显的浓度依赖性,与时间有一定相关性。重楼皂苷Ⅶ可引起早期凋亡细胞比例明显增加,并明显影响A549/DDP细胞周期时相分布。     

紫杉醇和微小RNA对非小细胞肺癌的协同抑制作用

目的探讨表皮生长因子受体抑制性微小RNA和紫杉醇在非小细胞肺癌中的协抑制效应。方法人非小细胞肺癌细胞株A549和HCC827进行体外培养过程中,将miR-545前体转染入细胞,转染48 h后,以不同浓度的紫杉醇处理细胞72 h,以MTT法检测细胞生长抑制。结果紫杉醇对A549和HCC827非小细胞肺癌细胞的增殖均表现出显著的抑制作用。在0.1⁵.0 nmol/L的剂量区间内,抑制效应随剂量的增加表现出近乎线性的同步增加。miR-545对紫杉醇的细胞生长抑制作用具有增强效应,在HCC827中的增效(IC50减少41.6%)高于A549(IC50减少27.3%)。结论在非小细胞肺癌中,miR-545对紫杉醇生长抑制作用具有协同加强效应,为改善非小细胞肺癌化疗的耐药问题提供新的探索途径。     

槐耳清膏对人肺腺癌A549细胞增殖及周期的影响

目的研究槐耳清膏对人肺腺癌A549细胞增殖及周期的影响。方法制备浓度为0、3、6、9 mg/ml的槐耳清膏与人肺腺癌A549细胞作用后,采用流式细胞检测观察细胞凋亡率,并分析药物干预36 h对细胞周期和细胞凋亡率的影响。结果流式细胞术检测结果显示,槐耳清膏各浓度组均可发生细胞凋亡,与对照组相比差异显著(P0.05)。各浓度组可使人肺腺癌A549细胞G0/G1、S期细胞比例减少,G2/M期细胞比例增多。结论槐耳清膏能诱导人肺腺癌A549细胞增殖,可能与细胞被阻滞于G2/M期有关。     

大黄素对HSC-T6细胞增殖及细胞周期影响的研究

目的 研究大黄素干预对大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)增殖和细胞周期的影响，探讨其抗肝纤维化的具体机制。方法 应用大鼠肝星状细胞株伪传代培养，采用不同浓度大黄素进行干预，观察各组细胞在形态学、增殖程度、细胞周期、增殖细胞核抗原(PCNA)表达等多方面的变化。结果 ①5-15Mg／L浓度大黄素干预24h后，对T6细胞的增殖产生显著的抑制效应，同时免疫组化显示PCNA标记指数随着药物浓度的增高其表达阳性率反而逐渐降低。②大黄素同时能够对T6细胞的细胞周期产生阻滞作用，随着浓度的增高，C0／G1期细胞比例逐渐上升。结论 大黄素在体外对于HSC-T6的增殖具有明显的抑制作用，而这种作用可能是通过改变了T6细胞正常的细胞周期来实现的。     

华蟾素对人胰腺癌细胞BxPC3细胞增殖和细胞周期的影响

目的观察华蟾素（Cinobutacini）对人胰腺癌细胞株BxPC3的细胞增殖和细胞周期的影响并探讨其可能的作用机理。方法将不同浓度的华蟾素作用于人胰腺癌细胞株BxPC3,采用CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期的变化。结果华蟾素明显抑制人胰腺癌细胞株BxPC3的细胞增殖,其作用随华蟾素浓度增加而增强伊〈0．05）;流式细胞术检测细胞周期发现,华蟾素可使人胰腺癌细胞株BxPC3阻滞于的S期。结论华蟾素能明显抑制人胰腺癌细胞株BxPC3的细胞增殖,可使肿瘤细胞阻滞于细胞周期的S期,阻止其进入分裂期,这可能是抑制细胞增殖的作用机理之一。     

载紫杉醇超声微泡造影剂对人肝癌HepG2细胞周期及形态的影响

目的 探讨超声辐照紫杉醇微泡造影剂,对人肝癌细胞株HepG2细胞周期的影响和形态学变化.方法 体外培养人肝癌HepG2细胞,将细胞分4组,即空白对照组,紫杉醇组,超声空白微泡组,超声载紫杉醇微泡组.流式细胞仪检测不同处理组细胞周期分布,透射电镜观察不同处理组形态学变化. 结果 超声载紫杉醇微泡组细胞阻滞在G2/M期;超声载紫杉醇微泡能够诱导肿瘤细胞发生凋亡,并有凋亡小体形成.结论 超声辐照载紫杉醇微泡造影剂对人肝癌细胞株HepG2有明显阻滞作用,并诱导肿瘤细胞发生凋亡.     

小檗胺对人肺癌细胞增殖和凋亡能力的影响及其机制

目的 观察小檗胺对人肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响，并探究其可能的作用机制。方法 将A549细胞随机分为对照组和小檗胺组，小檗胺组分别加入10、20、40μmol/L小檗胺，对照组加入等体积培养基。分别于培养24、48、72 h后，采用MTT法检测各组细胞存活率；培养7 d后，采用平板克隆实验检测各组细胞克隆形成能力；培养48 h后，采用Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3表达水平，以及PI3K/AKT信号通路相关蛋白AKT、PI3K磷酸化水平。结果 小檗胺组经10、20、40μmol/L小檗胺处理24、48、72 h后，细胞存活率均较对照组降低，40μmol/L小檗胺处理48、72 h时，细胞存活率较24 h降低，20μmol/L小檗胺处理72 h与24、48 h相比，细胞存活率降低（P均<0.05）。10、20、40μmol/L小檗胺处理后的细胞克隆数和克隆形成率较对照组降低，其中20μmol/L处理后较10μmol/L降低，40μmol/L处理后较10、20μmol/L降低（P均<0.05）。小檗胺组经10、20、...     

多烯紫杉醇对非小细胞肺癌的抑制作用及其机制

本实验探讨多烯紫杉醇对离体和在体非小细胞肺癌(ＮＳＣＬＣ)的抑制作用及其机制。材料与方法　材料 :(1)Ｃ5 7ＢＬ/ 6小鼠 ,体重 (2 0± 2 )ｇ。(2 )多烯紫杉醇。 (3)ＳＰＣ Ａ1肺腺癌细胞系和Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞系。方法 :(1)将ＳＰＣ Ａ1肺腺癌细胞接种于培养皿内 ,贴壁后分别加入含不同浓度 (0 0 1～ 10ｎｍｏｌ/Ｌ)多烯紫杉醇的培养液 ,2 4ｈ后更换不含药物的ＲＰＭＩ16 4 0培养液培养 10ｄ ,计算不同浓度多烯紫杉醇作用后的存活分数。 (2 )将ＳＰＣ Ａ1肺腺癌细胞暴露于不同浓度 (0 0 1～ 10 0 0ｎｍｏｌ/Ｌ)多烯紫杉醇的培养液 2 4…     

辛伐他汀抑制血管平滑肌细胞增殖及对PTEN、p27蛋白表达的影响

目的：观察辛伐他汀（simvastatin）对血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的抑制作用及其对细胞周期和周期蛋白依赖性激酶抑制物p21、p27，细胞G1－S期转换重要调节基因PTEN、c-myc蛋白表达的影响，并进一步观察simvastatin是否通过抑制脂质代谢的中间产物－甲羟戊酸的合成而上调PTEN、p27蛋白的表达及PTEN和p27是否存在上下游关系。方法：[^3H]－胸腺嘧啶核苷酸（[^3H]-TdR）掺入测定VSMC DNA合成，流式细胞仪检测细胞周期情况，Western印迹杂交法检测p21、p27及PTEN、c-myc蛋白表达，人工合成PTEN反义寡核苷酸，并以正义寡核苷酸为对照，以脂质体介导转染细胞，以Western印迹杂交流检测转染效率并观测其对PTEN、p27蛋白表达的影响。结果：simvastatin以剂量依赖关系抑制血清诱导的VSMC[^3H]-胸腺嘧啶核苷酸掺入，使G0／G1期细胞比例明显增多，S期细胞比例显减少，并上调p27及信号通路中常位于p27上游的PTEN的蛋白表达，但不影响p21、c-myc蛋白表达，PTEN反义寡核苷酸下调PTEN蛋白的表达后并不影响p27蛋白表达，200μmol/L甲羟戊酸能显抑simvastatin诱导的PTEN、p27蛋白表达升高。结论：simvastatin能抑制VSMC增殖，使细胞周期停滞于G0／G1期，这一过程可能通过不同的信号途径分别上调PTEN、p27这两个调控G1－S周期转换的基因而实现，而非通过PTEN－p27这一经典通路，simvastatin对PTEN、p27的调节与其抑制甲羟戊酸的合成有关。     

姜黄素对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨姜黄素对肝癌细胞（QGY）细胞增殖和细胞周期的调控及细胞凋亡的影响。方法 采用MTT法测定姜黄素在不同浓度，不同时间对QGY的抑制作用，流式细胞仪分析细胞周期分布，透射电镜观察细胞的超微结构变化。结果 姜黄素可抑制QGY的抑制作用。流式细胞仪分析细胞周期分布，透射电镜观察细胞的超微结构变化。结果 姜黄素可抑制QGY细胞的生长，其抑瘤率与药物浓度和作用时间呈依赖关系，72h的中效浓度（IC50）为49.50μmol/L，流式细胞仪分析证实姜黄素能使QGY细胞聚积在S期，电镜观察发现姜黄素可导致细胞变性。坏死，诱导细胞凋亡。结论 姜黄素可干扰QGY细胞的周期分布，具有细胞毒作用。抗增殖，诱导细胞凋亡的作用。     

曲古菌素A对人胃癌细胞增殖和细胞周期的作用

目的 观察曲古菌素A(TSA)对人胃癌细胞株SGC-7901细胞增殖及细胞周期的影响,探讨其可能的机制.方法 TSA干预人胃癌SGC-7901细胞24 h后.采用四甲基偶氮唑盐法检测其对细胞增殖的影响,流式细胞技术检测细胞周期,实时PCR检测细胞周期素D1和p21 mRNA的表达情况.结果 经TSA干预24 h后,人胃癌SGC-7901细胞增殖受抑制,TSA 0.1、0.5和2.0μmol/L组抑制率分别为3.52%±6.11%、13.29%±4.13%和14.24%±2.80%;同时TSA 0.5μmol/L组(71.26%±0.51%)和TSA 2.0μmol/L组(71.03%±0.12%)的G0/Gl期细胞比例明显高于对照组(51.12%±1.17%);TSA 0.5μmol/L组(13.55%±0.44%)和TSA 2.0 μmol/L组(10.63%±0.63%)的S期细胞比例明显低于对照组(34.60%±0.60%).出现G0/G1细胞周期阻滞.TSA干预后细胞周期相关基因细胞周期素D1 mRNA表达下调和p21 mRNA表达上调.结论 TSA通过调控细胞周期相关基因细胞周期素D1和p21的表达,抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖,引起G0/G1期细胞周期阻滞,最终影响肿瘤细胞的生长.     

辛伐他汀对大鼠平滑肌祖细胞和内皮祖细胞增殖的影响

目的 观察辛伐他汀对平滑肌祖细胞(SPC)和内皮祖细胞(EPC)增殖的影响,筛选新一代包被洗脱支架药物. 方法 采用密度梯度离心法从大鼠骨髓获取单个核细胞,将其接种在纤维连接素包被培养板,加入小同浓度辛伐他汀(0.01～10.00μmol/L)培养6～48 h后,平滑肌肌动脉蛋白免疫荧光染色鉴定骨髓源性SPC,激光共聚焦显微镜鉴定异硫氰酸荧光素结合的植物凝集素(FITC-UEA-I)和DiI结合的乙酰化低密度脂蛋白(DiI-acLDL)双染阳性细胞为正在分化的EPC,并在倒置荧光显微镜下计数. 结果 辛伐他汀显著抑制骨髓源SPC增殖,0.01μmol/L辛伐他汀作用24 h,SPC数量减少了(5.8±3.1)%(对照组与0.01μmol/L辛伐他汀组分别为4070±184与3833±126,P<0.05).辛伐他汀可促进EPC增殖,其促进作用随辛伐他汀浓度增加及作用时间延长而增加,1.00μmol/L辛伐他汀作用24 h EPC数量增加(2.0±0.1)倍(对照组与1 μmol/L辛伐他汀组分别为1249±146与3762±138,P<0.01). 结论 辛伐他汀抑制SPC增殖,促进EPC增殖,局部应用有抑制再狭窄和促进损伤血管再内皮化可能.     

多西紫杉醇或紫杉醇联合顺铂治疗老年晚期非小细胞肺癌的疗效比较

目的探讨多西紫杉醇或紫杉醇联合顺铂治疗老年晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的临床疗效及安全性。方法将86例晚期NSCLC患者按照化疗方法随机分为对照组(n=44)与实验组(n=42)。对照组采用紫杉醇联合顺铂进行治疗(紫杉醇150 mg/m~2,静脉滴注3 h,第1天,顺铂75 mg/m~2,静脉滴注第2,3天),实验组采用多西紫杉醇联合顺铂进行治疗(多西紫杉醇75 mg/m~2,静脉滴注1 h,第1天,顺铂75 mg/m~2,静脉滴注第2,3天),两组患者化疗2~4个周期。比较两组临床总有效率、中位生存时间及不良反应发生率。结果实验组和对照组客观有效27.27%和30.95%,两组无统计学差异(P>0.05);实验组中位生存时间(11.8个月)明显高于对照组(8.9个月,P<0.05);两组不良反应(中性粒细胞、血小板减少、血红蛋白减少、过敏、发热、感染、脱发、肝功能受损、肾功能受损、恶心呕吐、腹泻及感觉神经毒性)发生率均无统计学差异(P>0.05)。结论多西紫杉醇联合顺铂组患者远期疗效优于紫杉醇组。     

多烯紫杉醇对人食管癌EC-109细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨多烯紫杉醇对食管癌EC-109细胞株增殖、凋亡的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法检测多烯紫杉醇对EC-109细胞生长的抑制作用,采用流式细胞仪技术检测多烯紫杉醇对EC-109细胞周期和细胞凋亡的影响,Western印迹法测定多烯紫杉醇对EC-109细胞蛋白激酶B(Akt)-1蛋白表达的影响。结果多烯紫杉醇各浓度组A值均低于阴性对照组(P0.05);各浓度组的早、晚期凋亡率与阴性对照组比较均增高(P0.05),除0.01 nmol/L组外,各组随着浓度的增高其早、晚期的凋亡率也升高;低浓度(0.01 nmol/L)多烯紫杉醇处理的细胞阻断G2/M期短暂、不完全,而高浓度(10 nmol/L)多烯紫杉醇对食管癌细胞的G2/M期阻断较低浓度的完全、持久;多烯紫杉醇各浓度组处理的EC-109细胞Akt-1蛋白条带灰度值与空白对照组比较显著减弱,说明对其表达具有明显抑制作用,其中10 nmol/L组最强,抑制率为85%,0.01 nmol/L较弱。结论多烯紫杉醇对人食管癌EC-109细胞的生长有明显的抑制作用,使细胞分裂阻滞于G2/M期,并诱导肿瘤细胞凋亡。     

甲基汞对人类小细胞肺癌NCI-H446细胞周期的影响

目的 研究氯化甲基汞(MMC)对小细胞肺癌NCI-H446细胞周期的影响.方法 采用流式细胞仪检测了MMC对NCI-H446细胞细胞周期的作用,并与目前最常用的化疗药顺铂(DDP)和同样具有剧毒的三氧化二砷(As2O3)做比较.结果 MMC、DDP能使NCI-H446细胞表现为G0/G1期细胞数剂量依赖性明显增加,S期细胞数呈剂量依赖性明显减少;As2O3组细胞表现为明显的G2/M期剂量依赖性增加,S期细胞数剂量依赖性减少.结论 MMC、As2O3、DDP均能诱导小细胞肺癌细胞株的细胞周期阻滞,但阻滞作用发生在细胞周期的不同时相.