瘦素对绝经后骨质疏松大鼠骨髓基质细胞生物学活性影响的实验研究

目的 观察人瘦素(hLEP)对去卵巢大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)生物学活性的影响.方法 将3月龄雌性SD大鼠双侧卵巢去除后构建绝经后骨质疏松模型.术后12周检测大鼠股骨骨密度以确定建模成功.以全骨髓法培养BMSCs,添加hELP (100 ng/mL)予以刺激,并与对照组比较.观察体外hLEP对去卵巢大鼠BMSCs细胞形态、生长情况以及碱性磷酸酶(ALP)变化的影响.结果 成功构建SD大鼠骨质疏松模型.成功分离培养了去卵巢大鼠BMSCs.经hLEP刺激7d后的BMSCs形态无明显改变,相对于对照组,实验组细胞保持较好的增殖能力,其ALP活性的表达有显著提高(P＜0.05).结论 去卵巢大鼠BMSCs经hLEP刺激后其成骨分化能力有显著增强.     

绿原酸通过降低骨髓间充质干细胞凋亡抗绝经后骨质疏松的机制研究

目的 探讨绿原酸对绝经后骨质疏松（PMOP）大鼠的影响及其机制。方法 采用卵巢切除术构建PMOP大鼠模型,将建模成功大鼠分为去卵巢（OVX）组、绿原酸组、绿原酸+SB203580组,各10只;同时设置10只假手术组。比较各组大鼠骨密度,股骨骨微结构,血清雌二醇、碱性磷酸酶（ALP）水平,骨髓间充质干细胞（BMSCs）凋亡率,BMSCs中Runt相关转录因子2(Runx2)、锌指转录因子（Osterix）、ALP mRNA水平,BMSCs中p-p38MAPK/p38MAPK、Caspase3蛋白水平。结果 OVX组大鼠股骨内骨小梁大量缺失,骨密度、骨小梁数量、血清雌二醇、ALP水平、BMSCs中Runx2、Osterix、ALP mRNA水平、BMSCs中p-p38MAPK/p38MAPK蛋白水平低于假手术组,差异有统计学意义（P<0.05）;OVX组股骨骨小梁分离度、BMSCs凋亡率、Caspase3蛋白水平高于假手术组,差异有统计学意义（P<0.05）。绿原酸组大鼠股骨骨小梁基本恢复,骨密度、骨小梁数量、血清雌二醇、ALP水平、BMSCs中Runx2、Osterix、AL...     

miR-21对绝经后骨质疏松骨髓间充质干细胞成骨能力影响的研究

目的 探讨miR-21对绝经后骨质疏松骨髓间充质干细胞（PMOP-hBMMSC）成骨能力影响.方法 分离培养正常人（H-hBMMSCs）和绝经后骨质疏松患者（PMOP-hBMMSCs）的骨髓间充质干细胞,并对两组细胞的成骨能力进行比较.转染上调PMOP-hBMMSCs中miR-21表达,观察分析其对成骨能力的影响.Real time RT-PCR和Western Blot比较miR-21在三组细胞间的表达差异,同时检测三组成骨标志性基因Runx2和Osterix的表达.结果 PMOP-hBMMSCs组中的miR-21表达水平、ALP的活性以及钙结节染色面积都高于PMOP组（P＜0.05）,与H-hBMMSCs正常对照组差异无统计学意义（P＞0.05）;RT-PCR和Western Blot结果显示成骨诱导7d后,转染后高表达Runx2和Osterix mRNA和蛋白水平均高于PMOP组（P＜0.05,P＜0.01）,与H-hBMMSCs正常对照组差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 转染miR-21后的PMOP-hBMMSCs成骨能力增强.     

骨髓间质干细胞移植对心肌梗死后创伤修复的影响

目的:探讨骨髓间质干细胞(MSC)移植对心肌梗死后创伤修复的影响,为临床MSC移植提供理论基础。方法:制备大鼠急性心肌梗死模型,分离培养同种异体MSC。术后第7天,心肌梗死区植入20μL用BrdU标记的MSC[(0.5~1.0)×105/μL]。3周后,免疫组化检测梗死区BrdU,对梗死范围、梗死区心室游离壁厚度和胶原容积分数进行图像分析,并进行统计学分析。结果:MSC移植后3周,梗死区可见大量BrdU染色阳性细胞。处理组梗死面积为(24.91±3.62)%,低于对照组的(40.41±4.55)%;梗死区心室游离壁厚度(2.45±0.39)mm,较对照组(1.65±0.41)mm增加;胶原容积分数(57.11±3.42)%,较对照组的(81.36±5.31)%减小,差别均有统计学意义。结论:MSC移植后可促进心肌梗死后创伤修复过程,改善梗死区结构,具有良好的临床应用价值。     

骨髓间质干细胞移植对钙化主动脉功能及骨桥蛋白表达水平的影响

目的:研究骨髓间质干细胞(MSCs)对于大鼠血管尤其是大血管钙化的修复作用,探讨MSCs逆转血管钙化的可能性,寻找改善严重血管损伤的新途径.方法:选用8周龄健康Wister鼠作为研究对象,采用尼古丁与维生素D3联合干预方法制作血管钙化模型,检测干细胞移植对于组织钙含量、骨桥蛋白表达水平的影响,并对结果进行统计学分析.结果:MSCs干预组大鼠主动脉组织钙含量明显低于单纯造模组(P＜0.05),组织中钙容积分数与未干预组相比也明显降低;同时MSCs还能够明显抑制局部组织中骨桥蛋白的表达.结论:MSCs移植治疗可以通过抑制骨桥蛋白表达等途径调节钙在血管组织局部的沉积,改变血管中钙含量,从而有效地逆转血管钙化的过程,这种结构的变化同样伴有功能的改变.     

碱性成纤维细胞生长因子对骨髓间质干细胞的作用

骨髓中的细胞包括造血细胞和非造血细胞两大类,其中骨髓基质非造血细胞中含有间质干细胞(MesenchymalStemCells,MSCs)。骨髓间质干细胞具有自我增殖和多向分化的特性[1],在不同诱导条件下可分化成多种类型的结缔组织,如骨、软骨、骨骼肌、肌腱、韧带、真皮、脂肪和骨髓基质,也可分化成神经系统的神经元和神经胶质细胞等。近年来,骨髓间质干细胞被认为是组织工程的一种理想种子细胞,在骨、软骨、肌腱组织工程,中枢神经系统疾病及颅脑损伤修复、心肌重建、创面修复、协助重建造血、细胞和基因治疗等方面都已显示了良好的应用前景。国内外学…     

硝酸甘油促进人骨髓间质干细胞增殖分化实验研究

目的：探讨硝酸甘油（Nitroglycerin,NTG）对人骨髓间质干细胞（Human Bone Marrow—derived Mesenchymal StemCeHs,HBMSCs）的增殖及向成骨细胞分化的影响及其作用机制。方法：建立HBMSCs体外模型,诱导HBMSCs向成骨细胞分化。给予不同浓度的NTG,测定一氧化氮（NO）含量,考察不同浓度NTG对HBMSCs的NO生成的影响;用BrdU细胞增殖试剂盒测定反映细胞的增殖情况;测定细胞内碱性磷酸酶（ALP）活性与钙沉积量,反映不同浓度NTG对HBMSCs向成骨细胞分化的影响,探讨NO和ALP及钙沉积之间的关系;根据以上实验选出NTG最小有效浓度,再合用内皮型一氧化氮合酶（Endothelial nitric oxide synthase,eNOS）拮抗剂以及诱导型一氧化氮合酶（Induciable nitric oxide synthase,iNOS）拮抗荆探讨NTG作用于HBMSCs的机制是否与NOS有关。结果：NTG呈剂量依赖性的增加原代HBMSCs的增殖、NO含量、ALP活性及钙沉积量。NTG10μM对HBMSCs增殖及成骨型分化的诱导作用以及对HBMSCs的NO产量和NOS活性的影响不能被eNOS抑制剂L—NAME及iNOS拮抗剂1400w所阻滞。结论：NTG可通过NO途径促进HBMSCs的增殖及其向成骨细胞的分化,但其释放N0的效应并不依赖NOS。     

骨髓间质干细胞向心肌样细胞分化的研究

目的：诱导骨髓间质干细胞（BMSCs）向心肌样细胞分化,为 BMSCs 心肌再生移植治疗提供基础。方法取第5代的 BMSCs,5-氮杂胞苷诱导24 h,显微镜下进行形态学观察,3周后通过 RT - PCR 检测心肌蛋白 desmin 和αMHC 的表达。结果 BMSCs 经5-氮杂胞苷诱导后,细胞形态发生变化,出现肌管结构,RT - PC R 检测结蛋白（desmin ）和αMHC 的表达阳性。结论在体外成功诱导 BMSCs 分化成为心肌样细胞。     

小檗碱对大鼠骨髓间质干细胞成脂分化的抑制作用(英文)

目的探讨小檗碱对大鼠骨髓间质干细胞成脂分化的影响及其机制。方法经分离纯化的大鼠骨髓间质干细胞,分为正常对照组,成脂分化诱导液(AIM)模型组及AIM+小檗碱0.1,0.3,1和3μmol·L-1组。倒置显微镜下观察细胞的形态特征,油红O染色检测脂肪细胞,以对硝基苯磷酸为底物检测碱性磷酸酶(ALP)活性,MTT法检测细胞存活率,RT-PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ),脂肪酸结合蛋白(aP2)和CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)mRNA表达。结果与正常对照组比较,AIM模型组细胞形成的脂肪细胞明显增加(P<0.01),ALP活性明显降低(P<0.01),PPAR,γaP2和C/EBPαmRNA表达明显增高(P<0.01)。与AIM组比较,AIM+小檗碱显著抑制骨髓间质干细胞成脂分化,小檗碱0.1,0.3,1和3μmol·L-1显著升高ALP活性,分别增加26%,54%,81%和122%;小檗碱3μmol·L-1显著下调PPARγmRNA(0.91±0.10vs1.34±0.06),(P<0.01),aP2 mRNA(1.05±0.10vs1.53±0.09)(P<0.01)和C/EBPαmRNA表达(1.24±0.06vs1.54±0.09)(P<0.01)。小檗碱对骨髓间质干细胞增殖无显著影响。结论小檗碱能够抑制骨髓间质干细胞成脂分化,该作用可能与其下调PPARγmRNA,aP2 mRNA和C/EBPαmRNA表达有关。     

脑缺血大鼠骨髓间质干细胞移植后脑内分布与迁移

目的观察骨髓间质干细胞移植后在脑缺血大鼠脑内的存活、分布及迁移情况。方法Fieoll-Paque分离液梯度离心分离大鼠骨髓间质干细胞（rat bone mesenchymal stem cells，rMSCs），经体外培养扩增并流式细胞术鉴定；线拴法制作大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）脑局灶缺血模型，Hoechst33342标记细胞，分别通过静脉移植及立体定向局部移植到大鼠缺血侧纹状体。经过1、3、5周处死大鼠，取脑组织切片，在倒置荧光显微镜下观察细胞在脑内的存活、分布及迁移情况。结果应用梯度离心方法可以分离得到rMSCs，经过体外扩增可得到足够细胞数量用于移植，流式细胞术检测CD34、CD45表达阴性，CD29、CD90表达阳性。大鼠脑缺血后，无论静脉还是局部移植，rMSCs在脑内均能较长时间存活，移植细胞与宿主有很好组织相容性。静脉移植的细胞集中于脑缺血灶及其周围，缺血灶对侧脑组织移植的细胞较少（P〈0．05）；局部移植的细胞随着时间的推移向缺血灶不断迁移，分布在两侧大脑的差别都具有统计学意义（P〈0．05）。结论rMSCs通过静脉及立体定向两条途径进行移植后，能够在宿主缺血的脑中存活，向损伤部位迁移。rMSCs的这种迁移现象很可能与缺血灶的细胞信号改变有关，在临床上具有很大的潜在价值。     

促大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的研究

目的探讨成年大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）的体外培养和向神经元样细胞分化的方法。方法通过梯度分离获得成年大鼠MSCs,在细胞因子和氧化剂作用下对其诱导分化为神经元样细胞,免疫细胞化学方法检测神经元特异性烯醇化酶（NSE）、神经丝蛋白（NF）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和神经巢蛋白（Nestin）的表达情况,流式细胞仪检测分析诱导率。结果BMSCs被转化神经元样细胞并表达Nestin。应用碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、叔丁基对羟基茴香醚（BHA）所获得的神经元样细胞诱导率高（49.7%）。结论bFGF、BHA能促进大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞。     

体外诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的机制研究

目的体外诱导成人骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经元样细胞分化,并探讨分化过程中多效蛋白(PTN)mRNA的表达,以了解MSCs向神经元样细胞分化的特性和机制。方法密度梯度离心加贴壁培养法分离成人MSCs,原代和传代培养。取第6代MSCs设对照和试验组进行诱导,诱导后30 min至3 d,观察细胞形态并计数。免疫细胞化学法和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定分化后细胞神经细胞特异性表面标志神经元烯醇化酶(NSE)、微管相关蛋白(MAP)-2,胶原酸性蛋白(GFAP)和诱导前、诱导后12 h PTN mRNA的表达。结果接种24 h后MSCs开始贴壁,呈圆形或椭圆形。3 d后可见梭状细胞呈集落状生长,10～14 d融合。第5～6代时呈现较均一的成纤维细胞样形态。诱导后胞体向胞核收缩;出现双极及多极细胞。12 h变形细胞增多,细长突起相互连接。24 h后变形细胞增多不明显。诱导后12 h大部分细胞表达NSE(64.79±0.07)%、MAP-2(60.05±0.09)%,未检测到GFAP的表达,RT-PCR半定量检测有NSE mRNA的表达(0.66±0.15)。实验组诱导后12 h细胞有PTN mRNA的表达(0.689±0.017)。结论建立了稳定的成人MSCs培养增殖体系,MSCs可体外诱导分化为神经元样细胞,在分化过程中有外观形态变化和特异性标志物NSE和MAP-2的表达,同时有PTN mRNA的表达,提示PTN可能参与调控了MSCs向神经元样细胞的分化。     

不同浓度地塞米松对人骨髓间充质干细胞体外增殖及凋亡的影响

目的观察地塞米松对体外培养人骨髓间充质干细胞增殖及凋亡的影响。方法利用1.073g/mLPercoll分离液以梯度密度分离法获取人骨髓间充质干细胞（hMSCs）,进行体外培养。成骨诱导组细胞用地塞米松、抗坏血酸和β-甘油磷酸钠处理,分别进行ALP染色和矿化结节染色。实验组细胞分别以10^-9mol/L、10^-8mol/L、10^-7mol/L和10^-6mol/L地塞米松加以干预,MTT法检测各组细胞的增殖率;流式细胞仪定量分析hMSCs的凋亡率。结果成骨诱导组细胞ALP染色和矿化结节染色均为阳性,对照组为阴性;低浓度（10^-9mol/L）地塞米松对细胞的体外增殖无明显影响（P〉0.05）,10^-8mol/L及以上浓度地塞米松可明显抑制细胞的增殖（P〈0.01）;hMSCs凋亡率随地塞米松浓度的增加而升高（P〈0.01）。结论地塞米松、抗坏血酸和β-甘油磷酸钠可促使hMSCs成骨分化,10^-8mol/L及以上浓度的地塞米松可明显抑制细胞的增殖,地塞米松能促进体外培养的人骨髓间充质干细胞凋亡。     

褪黑素对大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的影响

目的探讨褪黑素(MT)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成脂分化的影响,以及MT的作用机制。方法取大鼠骨髓分离培养BMSCs,经传代脂向分化,分组进行干预。对照组为单纯脂向分化(模型)组;实验A组用MT进行干预;实验B组用MT和其受体拮抗剂2-苯基-N-乙酰色胺(LZD)共同干预。检测脂肪细胞的比例来比较各组的脂化程度,并应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测各组细胞中成脂转录因子过氧化物酶体增殖体激活受体γ(PPARγ)mRNA的表达。结果实验A组脂化程度明显低于对照组和实验B组(P<0.05)。结论MT能抑制BMSCs向成脂方向分化,并通过其受体机制起作用。这可能与骨质疏松的病因学有关。     

二苯乙烯苷对骨髓间充质干细胞增殖和分化的影响及其机制研究

目的：探究二苯乙烯苷（TSG）对体外骨髓间充质干细胞（BMSCs）增殖和分化的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法：利用全骨髓培养法从1月龄SD大鼠中提取BMSCs进行体外培养,然后给予药物干预。采用MTT法检测药物对BMSCs体外增殖的影响;PNPP法检测碱性磷酸酶（ALP）活性;ELISA法检测细胞培养上清液中骨钙素（OCN）含量;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）观察Col1a1、Runx2和β-catenin的mRNA表达情况。结果：TSG在1×10^-6,1×10^-5,1×10^-4 mol·L^-1浓度下对BMSCs的增殖有明显的促进作用;经1×10^-6,1×10^-5,1×10^-4 mol·L^-1 TSG处理3 d后,BMSCs中ALP的表达增加;经1×10^-6,1×10^-5,1×10^-4 mol·L^-1 TSG处理7 d后,OCN表达也明显升高;此外,与对照组相比,经Wnt3a和TSG处理后,BMSCs中Col1a1、Runx2和β-catenin的mRNA表达上调。结论：TSG能在一定程度上促进BMSCs的增殖和成骨分化能力,其机制可能与提高Col1a1、Runx2和β-catenin相关成骨分化基因的表达有关。     

氟伐他汀调控 Sirt3对过氧化氢诱导的骨髓间充质干细胞增殖凋亡的影响

目的 探讨氟伐他汀对过氧化氢诱导的骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖凋亡的影响及作用机制.方法 用400μmol/L的过氧化氢处理BMSCs作为模型组;BMSCs用400μmol/L的过氧化氢培养的同时分别加入0.01、0.1、1μmol/L氟伐他汀作为干预组;未添加任何物质正常培养的细胞作为正常组;将si-NC、si-Sirt3转染至BMSCs中再用400μmol/L的过氧化氢、0.1μmol/L氟伐他汀处理作为干预组2+si-NC组、干预组2+si-Sirt3组.蛋白质印迹(Western Blotting)法检测Sirt3蛋白表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡.结果 与正常组相比,模型组BMSCs细胞存活率降低[(41.57±4.32)％比(100.40±10.23)％],细胞凋亡率升高[(38.57±4.04)％比(8.28±0.92)％],Sirt3表达水平降低[(0.31±0.03)比(1.01±0.10)],均差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,氟伐他汀干预组细胞存活率明显升高细胞凋亡率降低,Sirt3表达水平升高,均差异有统计学意义(P<0.05).提示抑制Sirt3能逆转氟伐他汀对过氧化氢诱导的BMSCs细胞增殖抑制和凋亡促进作用.结论 氟伐他汀能抑制过氧化氢诱导的BMSCs细胞凋亡,其机制可能与上调Sirt3有关.     

正常人骨髓间充质干细胞体外对K562细胞生长及分化抗原表达的影响

目的 探索正常人骨髓间充质干细胞(MSCs)对K562细胞增殖及表面分化抗原表达的影响.方法 分别将K562细胞悬浮培养及与MSCs黏附培养,绘制K562细胞生长曲线;用流式细胞术检测K562细胞周期及表面分化抗原的表达.结果 与悬浮培养比较,与MSCs黏附培养的K562细胞增殖受抑,G0/G1期细胞增加(P<0.05),G2/M期细胞增加(P<0.05),而S期细胞减少(P<0.05);但悬浮培养与黏附培养在细胞分化抗原的表达上没有明显的影响.结论 K562细胞与MSCs黏附培养可以抑制K562细胞的生长,但对其分化没有明显的影响.     

诱导人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化

目的探讨人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)向成骨细胞诱导分化的能力。方法选用不同代次的MSCs,使用条件培养基,观察细胞的形态变化,采用细胞化学和免疫组化的方法检测碱性磷酸酶、钙盐沉积及Ⅰ型胶原的表达。结果MSCs在条件培养基中,15d后可见细胞变为多边形,碱性磷酸酶和Ⅰ型胶原染色阳性,形成钙结节,表现成骨细胞分化特点。结论在一定培养条件下成功诱导人MSCs向成骨细胞分化。在骨组织工程学方面MSCs作为种子细胞具有潜在的应用价值。     

Effect of lead on proliferation and neural differentiation of mouse bone marrow-mesenchymal stem cells

Bone marrow-mesenchymal stem cells (MSCs) are considered to be an ideal source of stem cells for assessing the effects of environmental toxins on the proliferation, multipotency and differentiation of adult stem cells. The aim of this study was to investigate the effect of lead on the proliferation and neuronal differentiation of murine MSCs. MTT assay used in this study revealed that while the proliferation of MSCs is sensitive to higher than 10 μM lead, a 50% reduction in the rate of their proliferation can be achieved in the presence of 60 μM lead. The results of immunocytochemistry and RT–PCR showed that β-mercaptoethanol induced-neuronal differentiation is also reduced after the treatment of MSCs by 60 μM lead. Furthermore, the comet assay analysis of MSCs showed a substantial increase in DNA damage in the lead treated cells compared to the control. In conclusion our results revealed for the first time that lead is not only cytotoxic to the survival and proliferation of MSCs but also inhibits their differentiation to neurons in a dose-dependant manner. Therefore, MSCs appear to be an alternative method for assessing the cytotoxic effects of such environmental hazards.     

人骨髓间充质干细胞对再生障碍性贫血患者T细胞活化的影响

目的探讨人骨髓间充质千细胞在体外对再生障碍性贫血患者T细胞活化的影响。方法从人骨髓分离培养间充质干细胞，用尼龙棉柱分离T淋巴细胞，分别以不同数量间充质干细胞加入到植物血凝素刺激的再生障碍性贫血患者T淋巴细胞活化体系中，通过流式细胞仪获取数据，计算CD3^＋CD25^＋和CD3^＋CD38^＋T细胞的表达率。结果当间充质干细胞为1×10^4／孔时，与单独培养的再生障碍性贫血患者T淋巴细胞（对照组）相比，间充质干细胞对再生障碍性贫血患者T淋巴细胞CD25及CD38的表达呈明显抑制作用，差异有统计学意义（P〈0．01）。当间充质干细胞为1×10^3／孔时，与对照组相比无统计学意义。结论间充质干细胞在体外抑制再生障碍性贫血患者T细胞的活化，且这种抑制作用具有数量依赖性。