P物质刺激下脊髓星形胶质细胞活化中磷酸化P38丝裂素活化蛋白激酶和c-fos的表达及作用

目的 观察P物质(substance P, SP)作用下,脊髓星形胶质细胞中P38丝裂素活化蛋白激酶的磷酸化(P-P38MAPK)和c-fos的表达,及P38MAPK磷酸化对炎性因子分泌的影响.方法 采用体外培养脊髓星形胶质细胞,施加SP刺激,分别采用Western blot和RT-PCR检测P38MAPK磷酸化和c-fos表达的变化,ELISA法检测SB203580阻断P38MAPK磷酸化对炎性因子TNF-α、IL-1β、NO分泌的影响.结果 在SP(10-7mol/L)刺激下,P38MAKP在15、30、45、60 min时均明显磷酸化,与对照组相比有显著性差异 (P＜0.05, P＜0.01),磷酸化高峰在45 min;SP(10-7 mol/L)作用下c-fos表达明显,30 min、1、3、6 h均显著高于对照组 (P＜0.05, P＜0.01),3 h达到高峰;SP(10-7 mol/L)刺激脊髓星形胶质细胞明显分泌炎性因子IL-1β、TNF-α和NO (P＜0.01), SB203580阻断P38MAKP信号通路后TNF-α和NO的分泌下降(P＜0.01),IL-1β的分泌在阻断前后无显著性差异(P＞0.05).结论 SP作用下脊髓星形胶质细胞中P38MAPK和 c-fos信号通路激活,P38MAPK磷酸化参与了SP作用下脊髓星形胶质细胞的活化及炎性因子的分泌,与星形胶质细胞在脊髓中枢对痛觉的调控有关.     

p38MAPK在体外培养脊髓星形胶质细胞P物质刺激活化中的作用

目的 观察体外培养脊髓星形胶质细胞P物质刺激活化过程中p38MAPK活性、TNF-Ot、NO水平及NOS活性的变化,探讨p38MAPK活性变化与脊髓星形胶质细胞活化的关系.方法 分离培养的SPF大鼠脊髓星形胶质细胞设正常对照组(止常组)、SP刺激组(SP组,10-7mol/L)、SB203580阻断p38MAPK组(SB组,10 umol/L)和sP刺激+SB203580阻断p38MAPK组(SP+SB组).WB法、RT-PCR法、ELISA法检测1,3,12,24 h和36 h时p38MAPK、p-p38(磷酸化p38MAPK)含量及GFAP mRNA、TNF-0、NO水平和NOS活性的变化.结果 脊髓星形胶质细胞GFAP阳性表达率大于95%.SP组脊髓星形胶质细胞总p38MAPK水平无显著变化,1 h后p-p38开始升高,3 h后GFAP mRNA水平显著增高,同时NO、NOS和TNF-a水平显著增高.用SB203580阻断p38MAPK通路后,sP+sB组较sP组p-p38、GFAP mRNA、NO、NOS、TNF-a水平显著降低.SB组总p38MAPK、p-p38、GFAP mRNA、NO、NOS、TNF-a水平无显著变化.结论 p38MAPK信号通路参与r脊髓星形胶质细胞P物质刺激活化过程,阻断p38MAPK信号通路可有效降低炎性因子水平.     

大鼠慢性前列腺痛模型中L5～S2脊髓背角GFAP、TNF-α和iNOS的表达

目的 观察大鼠前列腺痛模型中L5～S2脊髓背角胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和诱导型NO合成酶(iNOS)蛋白表达的变化.方法 取30只SPF雄性大鼠完全随机分为实验组和对照组(设0、6、12d 3个时相,分为5组,每组6只),通过前列腺完全弗氏佐剂(CFA)和生理盐水注射制作大鼠前列腺痛模型和对照组,分别提取L5～S2脊髓背角组织蛋白,Western印迹检测脊髓背角GFAP、TNF-α、iNOS的表达.结果 慢性前列腺痛大鼠中L5～S2脊髓背角中GFAP、TNF-α、iNOS表达在6d和12d组均明显高于各自正常对照组和0d组,差异有统计学意义(P＜0.01),GFAP 12d组高于6d组,差异有统计学意义(P＜0.05),iNOS的表达高峰在6d组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 慢性前列腺痛可以引起L5～S2脊髓星形胶质细胞活化和TNF-α分泌增多及iNOS活性增强,表明慢性前列腺痛可以导致L5～S2脊髓中枢继发性的炎性改变,可能与前列腺痛的持续和泛化有密切关系.     

异丙酚对谷氨酸体外激活脊髓背角星形胶质细胞及相关炎性细胞因子的影响

目的观察不同浓度异丙酚对谷氨酸体外激活大鼠脊髓背角星形胶质细胞及促炎性细胞因子（TNF-α、IL-1β、IL-6）和抗炎性细胞因子IL-10变化的影响。方法取新生2~3d Wistar大鼠T11~L6脊髓背角星形胶质细胞原代纯化培养3周。将细胞随机分为7组：正常对照组（C组）加入Hanks液;乳剂对照组（L组）加入乳剂0.2ml/L;谷氨酸组（G组）加入谷氨酸至终浓度100μmol/L;异丙酚组（P组）加入异丙酚至终浓度250μmol/L;GP1、GP2、GP3组先加入谷氨酸至终浓度100μmol/L,10min后分别加入异丙酚至终浓度5、25、250μmol/L。加药后培养24h取各组培养孔上清液检测IL-1β、TNF-αI、L-6和IL-10含量,用神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）标记星形胶质细胞（免疫细胞化学法）,多媒体彩色病理图像分析系统检测阳性细胞面密度（AD）和平均光密度（AOD）。结果与C组比较,G组和GP1组细胞被激活增生肥大,AD和AOD均升高（P〈0.01）,其上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α含量上升（P〈0.01）,G组IL-10浓度无明显变化（P〉0.05）,GP1组IL-10浓度升高（分别与C组和G组比较P〈0.05）。与G组比较,GP2组和GP3组细胞激活被抑制,AD、AODI、L-1βI、L-6和TNF-α含量均低（其中GP2组P〈0.05,GP3组P〈0.01）,而IL-10含量均上调（P〈0.01）。结论异丙酚可抑制谷氨酸对体外培养的大鼠脊髓背角星形胶质细胞的激活作用,同时抑制星形胶质细胞分泌IL-1βI、L-6和TNF-α,增强IL-10的合成释放,其作用程度与剂量有关。     

鞘内注射AG-490对骨癌痛小鼠脊髓水平星形胶质细胞活化和热痛觉的影响

目的：探讨脊髓水平IL-6-酪氨酸激酶-2( Janus kinase 2,JAK2)信号通路调控星形胶质细胞活化的机制及其 对骨癌痛的影响。方法：将NCTC 2472纤维肉瘤细胞注入C3H/HeNCrlVr雄性小鼠股骨骨髓腔制作骨癌痛模型,以 不含纤维肉瘤细胞的等体积α-MEM培养基行骨髓腔内注射制作假手术模型。采用热缩足反射潜伏期(paw withdrawal latency,PWL)评估疼痛水平。取腰段脊髓组织(L3~L5水平),分别应用Real-time RT-PCR和Western印迹检测脊髓水平 星形胶质细胞中纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和JAK2 mRNA与蛋白表达变化。鞘内注射给予JAK2 拮抗剂AG-490,观察小鼠痛行为学及脊髓水平GFAP mRNA和蛋白表达的变化。结果：骨癌痛模型组小鼠术后10, 14,21 d的PWL均较假手术组显著缩短(P<0.05);骨癌痛模型组的脊髓组织GFAP和JAK2 mRNA和蛋白表达显著增加 (P<0.05);鞘内注射30或90 nmol AG-490可以显著缩短骨癌痛模型组小鼠PWL,同时可以抑制脊髓组织GFAP mRNA和 蛋白的表达(P<0.05)。结论：脊髓水平IL-6-JAK2信号通路可能在骨癌痛的维持中发挥重要作用;IL-6-JAK2信号转导通 路可能通过抑制星形胶质细胞的活化来发挥镇痛作用。     

地塞米松抑制星形胶质细胞P2Y_1受体表达及TNF-α分泌

目的观察不同浓度地塞米松对大鼠体外培养脊髓背角星形胶质细胞P2Y1受体表达及TNF-α分泌的影响。方法培养并纯化大鼠脊髓背角星形胶质细胞,地塞米松(终浓度分别为0.1、1、10μmol/L)处理24 h后,采用免疫组织化学染色观察P2Y1受体的表达,双抗夹心间接酶联免疫吸附法测定上清液中TNF-α含量。结果地塞米松(0.1、1、10μmol/L)作用24 h后,与对照组比较,脊髓背角星形胶质细胞P2Y1受体表达下调,并呈剂量依赖性(P<0.01),TNF-α分泌量亦呈剂量依赖性下降(P<0.01)。结论地塞米松能抑制体外培养大鼠脊髓背角星形胶质细胞P2Y1受体表达及TNF-α的分泌。     

异丙酚对缺氧复氧大鼠海马星形胶质细胞的影响

目的:观察异丙酚对缺氧复氧大鼠海马星形胶质细胞及其分泌促炎性细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)和抗炎性细胞因子IL-10变化的影响。方法:取新生2～3dWistar大鼠海马星形胶质细胞,原代纯化培养3周。将细胞分为正常对照组(Nor组),乳剂对照组(Nor-L组),缺氧6h后复氧24h组(Ano组),加异丙酚50μmol/L缺氧6h后复氧24h组(Pro1组)、加异丙酚500μmol/L缺氧6h后复氧24h组(Pro2组)。取各组培养孔上清液检测IL-1β、TNF-α、IL-6和IL-10含量,用神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫细胞化学法标记星形胶质细胞,用多媒体彩色病理图像分析系统检测阳性细胞平均光密度(AOD)。结果:与Nor组比较,Ano组细胞被激活增生肥大,AOD升高(P<0.01),其上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α含量上升(P<0.01),IL-10无明显变化(P>0.05)。与Ano组比较,Pro1组和Pro2组细胞激活被抑制,AOD、IL-1β、IL-6和TNF-α含量均降低(其中Pro1组P<0.05,Pro2组P<0.01),而IL-10含量均上调(P<0.01)。Nor组和Nor-L组比较无明显差异。结论:异丙酚可抑制缺氧复氧大鼠海马星形胶质细胞的激活作用,同时抑制星形胶质细胞分泌IL-1β、IL-6和TNF-α,增强IL-10的合成释放,其作用程度与剂量有关。     

双氢青蒿素抑制LPS诱导的小胶质细胞炎症反应

目的 观察双氢青蒿素(dih ydroartemisinin,DHA)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的BV-2小胶质细胞神经炎症反应的影响及其机制.方法 LPS诱导BV-2小胶质细胞活化建立炎症模型,用不同浓度DHA(0.5、1、2、4μmol/L)处理细胞,CCK-8检测细胞活性;选取lμmol/L DHA干预细胞,倒置相差显微镜下观察细胞形态的变化;RT-PCR检测iNOS、IL-1β、IL-6、TNF-α基因表达水平;ELISA检测培养基中IL-1β、IL-6、TNF-α的表达水平;Western blot检测NF-κB、IκBα及TLR4的蛋白表达.结果 低剂量的DHA(＜2μmol/L)对BV-2细胞活性无明显影响(P＞0.05),DHA可抑制LPS引起的BV-2细胞形态变化,DHA抑制活化的BV-2细胞iNOS、IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA的表达(P＜0.01),减少IL-1β、IL-6、TNF-α炎症因子释放(P＜0.01),明显降低TLR4的蛋白表达,减少细胞质内IκBα的表达,并抑制NF-κB向核内移位(P＜0.01).结论 DHA可能通过作用于TLR4/NF-κB通路,抑制LPS诱导的BV-2小胶质细胞NF-κB的激活,从而抑制炎症因子的产生,发挥抗炎作用.     

HSV-1对星形胶质细胞炎性细胞因子表达的影响

目的：探讨单纯疱疹病毒1型（HSV-1）对星形胶质细胞内胞核转录因子kappa B（NF-κB）转录活性及炎性细胞因子肿瘤坏死因子α（ TNF-α）和白细胞介素10（ IL-10）表达的影响。方法 HSV-1感染星形胶质细胞,通过ELISA,Western blot等方法检测星形胶质细胞NF-κB,TNF-α,IL-10的表达;同时研究NF-κB通路抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸（ PDTC）对TNF-α,IL-10表达的影响。结果星形胶质细胞被HSV-1感染后,胞核内NF-κB蛋白表达明显增强,星形胶质细胞分泌的TNF-α,IL-10均上调,与对照组比较差异有显著性（P＜0．05）。PDTC可抑制NF-κB活化,导致核内NF-κB蛋白表达下调,使得细胞分泌TNF-α,IL-10降低,与HSV-1组比较差异显著（ P＜0．05）。结论被HSV-1感染的星形胶质细胞通过活化NF-κB,从而上调TNF-α,IL-10的表达。     

辛伐他汀对自发性高血压大鼠外周血单个核细胞白细胞介素-1β表达的影响

目的 研究不同剂量的辛伐他汀对血管紧张素Ⅱ (angiotensin Ⅱ,AngⅡ)刺激的自发性高血压大鼠(SHR)外周血单个核细胞白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)mRNA的表达及蛋白分泌的影响.方法 分离36只雄性SHR外周血单个核细胞,并随机分为6组(n=6):空白对照组(仅加入培养液),Ang Ⅱ(10-6 mol/L)组, Ang Ⅱ(10-6 mol/L)+DMSO组, Ang Ⅱ(10-6 mol/L)+辛伐他汀(1×10-6 mol/L)组, Ang Ⅱ(10-6 mol/L)+辛伐他汀(5×10-6 mol/L)组, Ang Ⅱ(10-6 mol/L)+辛伐他汀(10×10-6 mol/L)组,利用RT-PCR检测各组单个核细胞IL-1 βmRNA的表达, ELISA法检测各组单个核细胞IL-1β蛋白的分泌.结果 Ang Ⅱ(10-6 mol/L)组与空白对照组相比,IL-1β的mRNA表达及蛋白的分泌均明显升高(mRNA:P＜0.05,蛋白:P＜0.01),而辛伐他汀干预各组呈剂量依赖性抑制Ang Ⅱ刺激的IL-1β mRNA的表达及蛋白的分泌,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 辛伐他汀抑制Ang Ⅱ刺激的高血压外周血单个核细胞炎症因子IL-1β蛋白的分泌与抑制IL-1β基因的表达有关,且呈剂量依赖性.     

甲基苯丙胺对大鼠小胶质细胞的损伤及炎性相关基因表达的影响

目的：观察甲基苯丙胺(methamphetamine,Meth)对原代小胶质细胞的损伤及炎性相关基因表达的影响。方法：原代培养SD胎鼠小胶质细胞,利用MTT和原位末端转移酶标记技术(TUNEL)分别检测Meth引起小胶质细胞活力和凋亡的变化。采用实时荧光定量聚合酶链反应法(real-time PCR)观察Meth对小胶质细胞炎性相关因子mRNA表达的影响。ELISA及试剂盒法检测Meth作用后小胶质细胞白介素(interleukin,IL)-6、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的分泌改变。结果：MTT实验显示,Meth降低小胶质细胞活力,呈浓度依赖性,浓度为200 μmol/L时与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01)。TUNEL实验结果显示200 μmol/L Meth可引起细胞凋亡,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05)。q-PCR结果显示Meth作用于小胶质细胞24 h可降低IL-24、一氧化氮合酶3(nitric oxide synthase 3,NOS3)表达水平,上调Peli3、Sigma受体1(Sigma receptor 1,Sig1-R)、IL-1β、IL-6、Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)的表达水平,差异有统计学意义(P＜0.05)。此外,蛋白水平亦发现,Meth可促进IL-6和TNF-α的分泌。结论：Meth可降低小胶质细胞活力,诱导小胶质细胞凋亡,并引起IL-1β、IL-1R、IL-6、TLR4等炎性因子mRNA表达变化,促进IL-6和TNF-α的分泌,进而可能损伤中枢神经系统,产生神经毒性。     

阿魏酸钠抑制脂多糖引起的星形胶质细胞IL-1β的表达

目的 研究阿魏酸钠(SF)对脂多糖(LPS)引起的培养星形胶质细胞(AC)白细胞介素-1β (IL-1β)表达的抑制作用及机制.方法 将培养星形胶质细胞分为对照组、LPS组、SF(50,100,200μmol·L-1)组.细胞成熟后分组给药处理,ELISA法测定培养液中IL-1β表达,Western蛋白印迹法检测细胞IL-13、磷酸化JNK1和磷酸化C-Jun蛋白表达.结果 星形胶质细胞在LPS (10 mg·L“)刺激下IL-1β的释放量、IL-1β蛋白以及磷酸化JNK1、磷酸化C-Jun蛋白表达水平较对照组明显增高(P＜0.01).应用SF(50,100,200 μmol·L-1)预处理6h明显降低培养液中IL-1β含量,抑制星形胶质细胞IL-1β、磷酸化JNK1和磷酸化C-Jun蛋白表达水平.结论 SF可能通过下调JNK信号通路抑制星形胶质细胞IL-1β表达.     

吗啡、纳洛酮对肿瘤坏死因子α刺激后的星形胶质细胞释放氨基酸的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激离体脊髓星形胶质细胞后兴奋性氨基酸(谷氨酸、天冬氨酸)的变化以及吗啡、纳洛酮干预后的影响.方法 体外培养星形胶质细胞,待细胞进入融合状态后随机分为8组:组1(不加任何药物);组2(10μg/L TNF-α);组3(10μg/L TNF-α 0.5μmol/L 吗啡);组4(10μg/LTNF-α 1.0 μmol/L 吗啡);组5(10μg/L TNF-α 2.0 μmol/L 吗啡);组6(10μg/L TNF-α 0.5μmol/L 纳洛酮);组7(10μg/L TNF-α 1.0μmol/L 纳洛酮);组8(10μg/L TNF-α 2.0μmol/L 纳洛酮).各组用新鲜Neurobasal/B27无血清培养液培养细胞,在相应组中加入上述终浓度的TNF-α、吗啡和纳洛酮,继续孵育30 min.用反相高效液相色谱分析方法测定各组上清液中兴奋性氨基酸含量.结果 组2兴奋性氨基酸含量明显高于组1,其差异有极显著性(P＜0.01).组3、组4和组5中兴奋性氨基酸的含量均低于组2,并且随着吗啡用量的增加而逐渐降低,组3与组2相比差异无显著性(P＞0.05),组4与组2相比差异有显著性(P＜0.05),组5与组2相比差异有极显著性(P＜0.01).组6和组7内兴奋性氨基酸的含量均低于组2,其差异有显著性(P＜0.05),组8兴奋性氨基酸含量明显低于组2,其差异有极显著性(P＜0.01).结论 TNF-α可明显促进脊髓星形胶质细胞释放谷氨酸和天冬氨酸;吗啡、纳洛酮能减少TNF-α刺激后脊髓星形胶质细胞释放谷氨酸、天冬氨酸.     

大麻素1型受体拮抗剂对激活态小胶质细胞的免疫调节功能研究

目的 观察大麻素1型受体拮抗剂SR141716A(SR1)对BV2小胶质细胞免疫调节功能的影响.方法 使用致炎因子干扰素-γ(IFN-γ)刺激激活BV2小胶质细胞,建立模拟EAE炎性环境的细胞模型,比较静息态BV2细胞组、激活态BV2细胞组和SR1干预组CB1R mRNA和蛋白的表达情况,用ELISA方法检测细胞因子和趋化因子的浓度,Griess试剂法检测一氧化氮(NO)浓度,MTT法检测细胞增殖率.结果 激活态的BV2小胶质细胞CB1R mRNA和蛋白的表达均高于静息态BV2细胞组(P＜0.05);大麻素1型受体拮抗剂SR1可降低激活态的BV2细胞CB1R mRNA和蛋白的表达(P ＜0.05);SR1可显著上调IFN-γ、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,增加BV2小胶质细胞NO的释放(P＜0.05),而显著下调IL-4、IL-17和MCP-1的浓度,对IL-10、IL-1β和CX3CL1无调节作用.SR1对IFN-γ活化的BV2小胶质细胞增殖无影响(P＞0.05).结论 CB1R参与了小胶质细胞介导的炎症反应,CB1R在调节细胞因子网络平衡和NO分泌中发挥了一定的作用.     

帕瑞昔布钠对神经病理性疼痛大鼠脊髓背角胶质纤维酸性蛋白及脊髓炎性反应的影响

目的评价帕瑞昔布钠对神经病理性疼痛大鼠脊髓背角胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及脊髓炎性反应的影响。方法成年雄性SD大鼠42只,体重250～300 g,采用随机数字表法分为3组(n=14):假手术组(S组)、神经病理性痛组(CCI组)、帕瑞昔布钠组(P组)。CCI组和P组采用坐骨神经慢性压榨性损伤(CCI)法制备大鼠神经病理性疼痛模型;S组仅分离坐骨神经但不结扎;P组在术后经鼠尾静脉注射帕瑞昔布钠10 mg/(kg·d),连续3 d;S组、CCI组在相同时点经尾静脉注射等容量的生理盐水。于术前1 d、术后4、7、14 d测定热痛阈、机械痛阈。于术后14 d测定热痛阈和机械痛阈1 h后取L4-6脊髓组织,采用免疫组化SP法测定脊髓背角胶质纤维酸性蛋白表达;ELISA法检测脊髓中环氧合酶-2 (COX-2)、白细胞介素1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量。结果与S组比较,CCI组和P组术后4 d、7 d、14 d时热痛阈、机械痛阈明显缩短(P<0.05),术后14 d时脊髓背角GFAP表达明显增加(P<0.05),脊髓中COX-2、IL-1β及TNF-α含量升高(P... 更多     

P物质对培养脊髓星形胶质细胞谷氨酸代谢的影响

目的 观察P物质（SP）对脊髓星形胶质细胞兴奋性递质谷氨酸代谢的影响。方法 采用体外培养脊髓星形胶质细胞,施加SP刺激．分别采用^3H—Glutamate掺入和RT—PCR观察脊髓星形胶质细胞对谷氨酸摄取和转运体GLT-1表达的变化。结果 脊髓星形胶质细胞在SP的刺激下^,3H—Glu的摄取逐渐下降,10^-9mol／L与正常对照组差异有统计学意义（P〈0．05）．10^-8～10^-6mol／L组与正常对照组差异有统计学意义（P〈0．01）;脊髓星形胶质细胞GLT-1的表达在10^9-10^-8mol／L SP作用组和正常组差异无统计学意义（P〉0．05）,10^-2～10^-6 mol／L SP刺激组GLT-1表达值低于正常对照（P〈0．05、P〈0．01）。结论 高浓度的SP作用下脊髓星形胶质细胞GLT-1表达和谷氨酸掺入下降,表明周围慢性疼痛可能通过致病递质SP使脊髓星形胶质细胞对谷氨酸的摄入减少,神经间隙谷氨酸堆积而导致脊髓中枢继发的神经损害。     

氢化可的松对大鼠脊髓星形胶质细胞体外分泌TNF-α及释放EAAs的影响

目的观察氢化可的松对体外培养的大鼠脊髓星形胶质细胞分泌TNF-α及释放EAAs的影响.方法体外纯化培养大鼠脊髓星形胶质细胞,分为正常对照(C组),LPS终浓度为0.1 mg/L(L1组);LPS终浓度为1 mg/L(L2组);LPS终浓度为1 mg/L及氢化可的松终浓度为10-6mol/L(HC1组),LPS终浓度为1mg/L及氢化可的松终浓度为10-5mol/L(HC2组).分别孵育0,1和2h后取细胞培养液,应用酶联免疫分析方法(ELASA)检测上清液中TNF-α的浓度;用高效液相色谱仪测定各组培养细胞在0,1和2 h时谷氨酸(Glu)、天门冬氨酸(Asp)的释放量.结果在1,2 h时,与C组相比,L1、L2组TNF-α分泌量,Glu,Asp释放量均显著升高(P＜0.05);与L2组比较,HC1,HC2组的TNF-α分泌量降低(P＞0.05和P＜0.05),HC1,HC2组的Glu,Asp释放量降低(P＜0.05).结论氢化可的松在体外抑制脊髓灰质星形胶质细胞分泌TNF-α及释放EAAs,抑制程度与浓度相关.     

流感病毒感染神经胶质细胞条件培养上清对星形胶质细胞的免疫生物学影响

目的 利用人流感病毒H1N1和H3N2感染小鼠星形胶质细胞获得条件培养上清刺激正常星形胶质细胞,研究人流感病毒感染星形胶质细胞后释放的细胞因子,是否会诱导正常胶质细胞的免疫病理学变化.方法 从新生小鼠大脑皮质分离纯化星形胶质细胞,经纯度鉴定后,用人流感病毒H1N1和H3N2体外感染,分别于感染早期(6 h)和感染中晚期(24 h)收获条件培养上清,刺激正常星形胶质细胞,CCK-8法检测细胞存活率,Western blotting法检测星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达状况,ELISA法检测细胞不同时间分泌的炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平变化.结果 流感病毒感染星形胶质细胞的条件培养上清,可显著抑制正常胶质细胞的活性,诱导GFAP蛋白表达的上调,而炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6在不同时间点的蛋白表达水平发生不同程度改变,总体呈下降趋势.结论 体外实验中,人流感病毒感染星形胶质细胞后释放的细胞因子会诱导正常胶质细胞发生较为明显的免疫病理学变化,但未见明显的细胞因子级联现象.     

姜黄素对LPS诱导的星形胶质细胞炎性反应的抑制作用

目的：探讨脂多糖(LPS)诱导星形胶质细胞产生炎性反应及姜黄素对它的抑制作用。方法在2015年3月—2015年7月期间,分离培养了10只新生1~2 d的昆明小鼠大脑皮质星形胶质细胞,培养10 d后传代分组,实验分PBS对照组(n=6)、LPS刺激组(n=6)、LPS联合姜黄素干预组(n=6)。 ELISA检测炎性因子IL-6、IL-1β和TNF-α的释放。结果与PBS组的IL-6(873.82±20.28)、IL-1β(680.62±10.35)和TNF-α(492.73±8.56)比较,LPS刺激组IL-6(1132.42±78.09)、IL-1β(821.87±14.33)和TNF-α(559.32±9.6)的分泌增加(P<0.05);姜黄素能显著抑制 LPS 诱导的IL-6(1014.79±52.08)、IL-1β(738.84±7.33)和 TNF-α(476.7±10.38)的分泌,与 LPS 组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论姜黄素能抑制LPS激活星形胶质细胞所致的炎性反应。     

乌司他丁通过抑制Wnt/β-Catenin信号通路活性减轻糖尿病大鼠神经病变性疼痛

目的 探讨乌司他丁减轻糖尿病大鼠神经病变性疼痛（DNP）的效应及相关信号通路。方法 将36只SD大鼠随机分为对照组（Con组）、DNP模型组（DNP组）、乌司他丁治疗组（ULI组）,分别采取不同的干预措施。对大鼠进行机械缩足反射阈值（MWT）测试和热缩足反射潜伏期（TWL）测试。分批处死大鼠,解剖分离L3～5脊髓,采用Western Blot检测Wnt 10a蛋白、β-catenin蛋白的表达水平。采用ELISA法检测瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1(IL-1)等炎性因子的表达水平。结果 (1)DNP组各时间点的MWT和TWL值均显著低于Con组。与Con组相比,ULI组的WMT值及TWL值更高（P <0.05）。Western Blot检测显示,与Con组相比,DNP组大鼠脊髓Wnt 10a蛋白和β-catenin蛋白的表达水平增加（P <0.05）,ULI组Wnt 10a和β-catenin蛋白表达水平显著降低（P <0.05）。(2)与Con组相比,DNP组脊髓星形胶质细胞明显激活,Wnt 10a和β-catenin表达增强。ULI组星形胶质细胞的激活受到抑制,Wnt 10a和β-catenin的表达也受到抑制。(3)ELISA检测显示,在注射链脲佐菌素后第39、42、45天,由Wnt 10a/β-catenin信号通路激活的TNF-α和IL-1β水平显著升高,经乌司他丁干预后,显著降低了TNF-α和IL-1β水平。结论 乌司他丁可通过抑制炎症和星形胶质细胞的激活减轻大鼠DNP症状,这可能是通过Wnt 10a/β-catenin信号通路实现的。