As2O3引起LoVo细胞内钙离子浓度增高及意义

目的　观察LoVo细胞株经As2 O3 作用后细胞内钙离子浓度的改变并探讨其意义。方法　应用流式细胞仪观察亚二倍体细胞峰并检测LoVo细胞内的钙离子浓度。应用光镜、电镜观察As2 O3 对LoVo细胞生长的抑制作用、凋亡细胞形态和线粒体形态。结果　①As2 O3 引起细胞内Ca2 +浓度升高 (P <0 .0 1) ,呈剂量依赖关系 (P<0 .0 1或 0 .0 5 ) ,在 2 .0 μmol/L组Ca2 +浓度最高 ;②在各时间段 ,对照组的Ca2 +浓度无变化 (P >0 .0 5 ) ,而经As2 O3 作用后Ca2 +浓度出现变化 (P <0 .0 1或 0 .0 5 ) ,在 2 0min时Ca2 +浓度均已增高 ,10h时增高最明显 ,至 2 4h ,0 .5 μmol/LCa2 +浓度回复到 2 0min时的水平 ,1.0和 2 .0 μmol/L组则低于 2 0min时的浓度 ;③As2 O3 抑制LoVo细胞生长 ;④LoVo细胞经As2 O3 作用后在光镜、电镜下出现细胞凋亡的形态学改变 ,并见线粒体肿大、嵴破坏或消失。流式细胞仪检测发现高浓度组凋亡细胞数高于对照组和低浓度组 (P <0 .0 1或 0 .0 5 )。结论　As2 O3 作用于LoVo细胞引起细胞内钙离子浓度增高 ,可能通过引起线粒体功能的改变而诱导细胞凋亡。     

衰老小鼠激活T细胞内原癌基因表达及钙离子浓度的变化

为了研究影响白细胞介素２基因诱导表达的因素和磷酯酰肌醒信息途径在Ｔ细胞衰老过程中的作用，作者用斑点杂交法检测了老龄小鼠Ｔ细胞原癌基因的表达，用［３Ｈ］－胸腺嘧啶核苷掺入，测定其增殖能力，同时用Ｆｕｒａ－２／ＡＭ荧光法测定其细胞内钙浓度的变化。结果表明：ｃ－ｆｏｓ的表达在老龄小鼠Ｔ细胞中受到抑制；老龄小鼠Ｔ细胞对伴刀豆球蛋白（ＣｏｎＡ）刺激的增殖力比幼龄小鼠低，佛波酯（ＰＭＡ）和离子霉素联合刺激不能使其增殖力恢复；经ＣｏｎＡ以及ＰＭＡ和离子霉素联合刺激以后，老龄小鼠Ｔ细胞胞内钙浓度比幼龄小鼠低。结果提示老龄小鼠Ｔ细胞中可能存在信息传递系统的变化。     

金钱鱼凋亡相关基因SaAR对NIH-3T3细胞凋亡的影响

OBJECTIVE: To observe the effects of Scatophagus argus apoptosis-related (SaAR) gene transfer on the apoptosis of NIH-3T3 cells. METHODS: A controlled observation of SaAR gene transfer (at different concentrations) into cultured NIH-3T3 cells via lipofectin was performed, and the rate of cell apoptosis was analyzed by flow cytometry. RESULTS: The rate of cell apoptosis was (6.37+/-0.0.56)% in the control group, and was (11.89+/-1.13) %, (18.25+/-1.86) % and (22.34+/-1.08) % respectively in pcDNA3-SaAR gene groups corresponding to pcDNA3-SaAR gene concentrations of 2, 3 and 4 microg/ml respectively. It was shown that SaAR gene significantly induced fibroblast apoptosis when the concentration was above 2 microg/ml (P<0.05), in a dose-dependent manner as compared with the control group (P<0.05). CONCLUSION: Transient transfection of SaAR gene can significantly induce apoptosis in NIH-3T3 cells.     

细菌脂多糖对NIH3T3细胞增生、胞内游离钙及cAMP浓度的影响

目的 :探讨细菌脂多糖 (lipopolysaccharide,L PS)对 NIH 3T3细胞增生、胞内游离钙及 c AMP浓度的影响。　方法 :以中性红比色法检测细胞生长 ,酚试剂法检测细胞蛋白质合成 ,并动态检测 L PS对胞内游离钙和 c AMP浓度的影响。　结果 :1微量 L PS可促进细胞生长及蛋白质合成 ;2 L PS作用后 3～ 5 min可使胞内游离钙浓度升高 ,作用 1 m in后使 c AMP浓度升高 ,并保持较高水平。　结论 :胞内游离钙 ([Ca2 ]i)及 c AMP是 L PS对 NIH3T3细胞作用过程中重要的信使分子     

卵巢癌患者外周血调节性T细胞的变化及其临床意义

目的探讨卵巢癌患者外周血调节性T细胞(Treg)水平变化的意义及其临床意义。方法采用流式细胞术测定130例卵巢癌患者和50例体检健康女性的外周血中CD4~+、CD8~+、NK以及Treg等不同淋巴细胞亚群的比例,比较两组间的差异,分析卵巢癌不同临床病理因素患者Treg水平的差异,并比较手术和化疗患者手术前后或化疗前后Treg水平的变化。结果卵巢癌组外周血CD4~+、NK细胞比例以及CD4~+/CD8~+比值均明显低于正常对照组,而Treg细胞比例明显高于正常对照组;淋巴结转移卵巢癌患者其Treg水平高于淋巴结未转移,且在不同的FIGO分期中Ⅲ、Ⅳ期患者的Treg细胞比例要高于Ⅰ、Ⅱ期,差异均有统计学意义(均P<0.05);手术后Treg细胞比例较手术前明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);化疗后Treg细胞比例与化疗前的差异无统计学意义(P>0.05)。结论卵巢癌患者外周血Treg水平与卵巢癌的分期和进展有关,在卵巢癌预后判断以及疗效监测中有重要意义。     

流式细胞术检测γδT细胞内细胞因子的方法学探讨

目的:建立流式细胞术检测细胞内细胞因子的方法,对活化的γδT细胞内细胞因子进行检测分析.方法:用佛波醇酯(PMA)和离子霉素(IM)刺激活化外周血单个核细胞(PBMC),Brefeldin A(BFA)阻断细胞内分子的分泌,37℃、5%CO2培养5h后,流式细胞术检测细胞内细胞因子.结核分枝杆菌低分子多肽抗原(Mtb)活化PBMC,增殖培养10天后获得较高比例的γδT细胞,用PMA和IM活化γδT细胞,检测γδT细胞内的IL-2.结果:流式细胞术检测细胞内细胞因子的方法,对活化后γδT细胞内IL-2检测获得良好的结果,阳性率可达45.68%.结论:流式细胞术检测细胞内细胞因子,能很好地检测γδT细胞单个细胞水平上细胞因子的产生,是研究γδT细胞内细胞因子的一个较好的方法.     

用流式细胞术监测原位心脏移植病人术后的T细胞及亚群的变化

我院于 1998年 9月成功地进行了 1例扩张型心肌病患者的原位心脏移植手术 ,我们采用流式细胞术对术前、术后淋巴细胞、Ｔ细胞及其亚群进行了详细的监测。1　资料与方法1 1　临床资料患者 ,男 ,14岁 ,汉族 ,因扩张性心肌病入院 ,符合心脏移植条件。供者 ,男 ,2 8岁 ,脑死亡者。免疫抑制剂的使用状况 :术前 1ｄ :开始给病人服用环孢素Ａ和硫唑嘌呤剂量分别为 15 0ｍｇ/次、2次 /ｄ ,3 7 5ｍｇ/次、2次 /ｄ ;手术当日晨 :环孢素Ａ 15 0ｍｇ、硫唑嘌呤 3 7 5ｍｇ静滴 ;术后当晚 :同手术当日晨 ,另加甲基强的松龙 10 0 0ｍｇ分 2次静滴。以后 …     

G蛋白参与K物质对心肌细胞内游离钙离子浓度的影响

目的　观测 K物质对体外培养的乳鼠心肌细胞内游离钙离子浓度的影响 ,并探讨作用机制 .方法　应用钙离子荧光指示剂 Fluo- 3AM负载原代培养的大鼠心肌细胞 ,通过流式细胞仪检测心肌细胞内游离钙离子浓度 ([Ca2 + ]i)变化 ;分别应用速激肽受体拮抗剂 - DSP和抗水解 GDP类似物 -GDPβS,观察二者对 K物质诱导的 [Ca2 + ]i变化的影响 .结果　 SK能升高 [Ca2 + ]i,即由对照组的 173± 2 0 nmol· L- 1升高至 2 84± 2 0 nmol· L- 1 (P<0 .0 1) ,且在 1.78× 10 - 5～ 1.78×10 - 7mol· L- 1 浓度范围内存有剂量 -效应关系 ;DSP和GDPβS均可阻断 SK诱导的心肌细胞 [Ca2 + ]i升高的效应 .结论　SK可升高心肌细胞 [Ca2 + ]i,其作用有 G蛋白参与     

黄芪总苷诱导人白血病NB4细胞凋亡的研究

目的 研究黄芪总苷(TA)对体外培养的人早幼粒细胞白血病细胞株NB4凋亡的影响.方法 将不同浓度的TA(200、400、600、800 μg/ml)作用于NB4细胞,继续培养48 h,采用磷脂结合蛋白V(Annexin V)+碘化丙啶(PI)双染色法在流式细胞仪上检测细胞凋亡率.结果 TA作用于NB4细胞48 h后,各浓度组的凋亡率与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05).在200、400、600 μg/ml组凋亡率呈浓度依赖性增加,各组之间差异有统计学意义(P<0.05).在800 μg/ml组凋亡率增加不明显,与600 μg/ml组比较差异无统计学意义(P>0.05),但出现了大量的坏死细胞.结论 一定剂量范围内的TA可以诱导NB4细胞凋亡,具有体外抗白血病效应.     

钙通道在大鼠逼尿肌不稳定膀胱中的表达及变化

目的　探讨电压依赖钙通道与逼尿肌功能变化之间的关系。方法　根据膀胱压力容积测定结果将动物分为稳定组 ( 2 9只 )和不稳定组 ( 9只 ) ,其中稳定组分为BOO( 11只 )、SCI模型 ( 9只 )和对照组 ( 9只 ) ,通过RT PCR技术测定逼尿肌中L型和T型钙通道mRNA表达及变化。结果　正常大鼠中逼尿肌不稳定发生率为 2 4.3 %。L型和T型钙通道在逼尿肌中均有表达。正常对照组膀胱逼尿肌L型钙通道mRNA含量明显多于T型钙通道mRNA ,两者之比约 2 .1∶1;BOO组、SCI组和不稳定组中L和T型mRNA含量均有不同程度增加 ,T型钙通道mRNA增加更明显 (P <0 .0 1) ,两者比值明显缩小 ,分别为 1.5 3、1.41和 1.83。结论　钙通道的表达增加可能是导致平滑肌细胞自发性除极易化、兴奋性增高、引起逼尿肌不稳定的重要原因 ,其中T型钙通道起着重要的作用     

白藜芦醇促进Ca2+介导的线粒体Ca2+转运发生

目的为探讨白藜芦醇(Tesveratrol,Res)诱导细胞凋亡过程中线粒体的作用,Res对线粒体通透性的影响,研究了Res对线粒体通透性转变孔道及Ca2+诱导的线粒体内Ca2+释放(CICR)发生的影响.方法提取大鼠肝线粒体.通过紫外分光光度仪检测Res作用下线粒体的膨胀,借此测定线粒体PTP的开放状态;采用双波长双光束紫外分光光度仪检测Res作用下测试体系内Ca2+浓度的变化引起的D(λ)值的变化,以反映线粒体Ca2+的转运情况(即CICR).结果Res能促进Ca2+诱导的鼠肝线粒体PTP开放;并且Res可以加速Ca2+介导的线粒体Ca2+的转运(CICR);而Ca2+通道抑制剂trifluoperazine和钌红(RR)能分别部分或完全抑制Res的这种促进作用.结论Res能促进Ca2+诱导的鼠肝线粒体CICR过程.并且Res对PTP的作用依赖于Res对线粒体CICR的影响,Res促进线粒体膜的通透性可能是Res诱导细胞凋亡的一种途径.     

Ca2+-CaM在M3R介导逼尿肌细胞收缩中作用的实验研究

目的探讨Ca2+-CaM在M3R介导逼尿肌细胞收缩中作用.方法将原代培养逼尿肌细胞分为实验组和对照组,接种于6孔培养板上培养,加入10-4mol/L carbachol 和methoctramine ,采用Ca2+浓度和CaM活性检测试剂盒分别测定Ca2+浓度和CaM活性.结果实验组中,[Ca2+]i和CaM的平均通道荧光对数值分别为(3.26±0.38)和(2.87±0.34),与对照组[分别为(2.06±0.12)、(2.14±0.24)]相比,均有显著性的升高(P<0.05).结论 Ca2+-CaM信号传导途径参与了M3R介导逼尿肌细胞收缩调节过程.     

Ca~(2+)在大鼠应激性胃粘膜损伤中作用的研究

目的 :探讨大鼠胃粘膜与急性胃粘膜损伤之间的关系。方法 :采用原子吸收光谱分析法 ,测定胃粘膜Ca2 +含量。结果 :胃粘膜损伤程度随应激时间延长而加重 ,胃粘膜Ca2 + 含量却下降 ,二者呈明显负相关 ,但是 ,CaCl2 预应激或应用钙通道阻断剂 ,可减轻胃粘膜损伤程度。结论 :Ca2 + 在急性胃粘膜损伤中有一定的作用。     

一氧化氮和Ca2+介导的细胞因子损伤大鼠胰岛细胞的研究

目的观察-氧化氮和Ca^2＋在白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子（TNF）和1-干扰素（IFN-1）诱导的胰岛细胞凋亡中的作用。方法应用体外单层培养的3-5d的Wistar大鼠胰岛细胞，分别检测IL-1β、TNF和IFN-1对胰岛细胞凋亡细胞百分率、[Ca^2＋]i含量以及培养液中基础和高糖刺激下胰岛素分泌量、NO含量及NOS活性以及DNA片段的影响。结果IL-1β、TNF和IFN-1联合可诱导胰岛细胞凋亡率明显增加及DNA片段化，基础和高糖刺激下胰岛素分泌量降低，同时胰岛细胞[Ca^2＋]i、NO含量和NOS活性亦明显升高（P〈0．01），且有时间和剂量依赖性。结论NO和Ca^2＋，可能是介导上述细胞因子引起胰岛细胞凋亡的重要途径。     

敲除Annexin A7基因的小鼠早期胚胎心肌细胞钙稳态正常

目的:研究Annexin A7在早期胚胎发育过程中对钙平衡调节的作用. 方法: 利用钙成像技术和膜片钳技术检测敲除Annexin A7小鼠的早期胚胎心肌细胞的钙平衡以及相应的离子通道的特性. 结果: 在胚胎心肌细胞发育的早期,敲除Annexin A7小鼠胚胎心肌细胞的静息钙(340/380荧光比例 0.78±0.02)、钙峰值(340/380荧光比例1.28±0.05)和正常细胞的值相似;动作电位(APD90 242.7±43.7 ms、最大去极化电位56.8±1.7 mV)以及L-型钙电流密度(14.1±2.5 pA/pF)和正常细胞的相似,并且钙电流能被碳酰胆碱减小(51.7±8)%,也和正常细胞相似. 结论: 敲除Annexin A7基因的小鼠早期胚胎心肌细胞具有正常的钙稳态以及正常的离子通道.     

心肌缺血再灌注损伤时细胞核被膜钙泵活性特征的研究

目的　研究心肌缺血再灌注损伤时Ca2 + 、ATP、ADP和AMP对细胞核被膜钙泵 (Ca2 + ATPase)活性的调节。方法　采用大鼠心肌缺血再灌注模型 ,密度梯度分离纯化细胞核 ,定磷法测定Ca2 + ATPase活性。结果　与正常大鼠相比 ,缺血再灌注损伤动物血浆MDA和FFA显著升高 (P <0 0 1) ;细胞核Ca2 + ATPase活性下降 ,对Ca2 + 亲和力降低 ;ADP、AMP对核Ca2 + ATPase活性的影响明显减弱 ;ATP对Ca2 + ATPase的作用在 [ATP]小于 1 0mmol L时 ,与正常细胞Ca2 + AT Pase活性无显著差异 ,浓度增至 2 0mmol L时 ,活性低于正常细胞 ,ATP浓度继续增加 ,核Ca2 + ATPase活性快速增加。结论　心肌缺血再灌注损伤时Ca2 + 、ATP、ADP、AMP对心肌细胞核Ca2 + ATPase活性的影响发生了明显改变 ,其病理生理意义值得进一步探讨。     

Ca2+在严重烧伤早期心肌线粒体呼吸功能损害中的作用及其机制研究

目的 探讨Ca^2 在严重烧伤早期心肌线粒体呼吸功能损害中的作用及其机制。方法 复制30％TBSAⅢ度烧伤大鼠模型，取正常及伤后1、3、6、12、24h大鼠心肌分离线粒体，测其Ca^2 浓度（[Ca^2 ]m）、线粒体PLA2（mPLA2)、一氧化氮合酶(mtNOS）、F0F1－ATPase和细胞色素c氧化酶活性，同时观察心肌线粒体呼吸功能变化。结果 ①伤后1h[Ca^2 ]m与线粒体呼吸控制率（RCR）均明显升高，且RCR与[Ca^2 ]m呈显著正相关；伤后3、6、12、24h心肌[Ca^2 ]m、mtPLA2及mtNOS活性均显著高于正常组，但线粒体呼吸功能反而下降，RCR与[Ca^2 ]m呈明显负相关，mtNOS、mtPLA2活性与[Ca^2 ]m呈明显正相关。②伤后1h线粒体F0F1－ATPase合成活性明显升高，但3、6、12、24h其合成活性与细胞色素c氧化酶活性均显著低于正常组；F0F1－ATPase水解活性除伤后3h显著升高外，其余各时相点均明显低于正常对照组。结论 [Ca^2 ]m改变是烧伤后心肌线粒体呼吸功能变化的重要原因，烧伤初始[Ca^2 ]m适度升高，促进线粒体呼吸功能加强；烧伤后续阶段Ca^2 严重超载激活mtPLA2、mtNOS在线粒体呼吸功能损害中起重要作用。     

Ca2+在紫外线诱导成纤维细胞凋亡中的作用

目的了解细胞内外钙离子浓度对紫外线(UVB)辐射诱导成纤维细胞(NIH3T3)凋亡作用的影响.方法 UVB照射成纤维细胞10 min,培养12 h后,用流式细胞仪测定凋亡率. 结果 UVB照射组比UVB不照射组凋亡率有明显增加;UVB照射组内各组间凋亡率因细胞内外Ca2+浓度不同存在明显差异. 结论 UVB辐射诱导成纤维细胞发生凋亡与胞内外Ca2+浓度有关,Ca2+参与了凋亡的信号转导.UVB诱导成纤维细胞发生的凋亡,主要通过Ca2+转导凋亡信号这一途径,还反映出胞浆Ca2+升高既来源于胞内钙池,又来源于胞外游离Ca2+.     

D-AP5 blocks the increase of intracellular free Ca2+ induced by glutamate in isolated cochlear IHCs

Objective To investigate the effect of D-AP5 (D-2-amino-5-phosphonopentanoate, a spec ific NMDA-antagonist) on the increase of intracellular free Ca(2+) concent ration (［Ca(2+)］(i)) induced by glutamate in isolated cochlear inner hair cells (IHCs), and to detect the autoreceptors of the IHC membrane. Methods When a laser scanning confocal microscope (LSCM) was used, the exogenous glutama te (Glu) -induced changes in ［Ca(2+)］(i) of isolated IHCs and OHCs of guinea pig c ochlea were observed with fluo-3, a fluorescent probe for ［Ca(2+)］(i).A fter D-AP5 or CNQX (6--cyano--7--nitroguinoxaline--2, 3--dione, a sp ecific AMPA- antagonist) was administrated, the exogenous glutamate (Glu)-indu ced changes in ［Ca(2+)］(i) of isolated IHCs were recorded.Results In the presence of a low concentration Glu (3. 85 μmol/L), there was an inc rease of ［Ca(2+)］(i) in IHCs, whereas there was no change in OHCs.W hen 50 μmol/L of D-AP5 was administrated in advance, Glu did not induce a corresponding increase in ［Ca(2+)］(i) in IHCs, and 50 μmol/L of CNQX did not completely block the increase of ［Ca(2+)］(i) in IHCs.Conclusions These results suggest that the autoreceptors existing in the IHC membrane are m ainly of NMDA type, while there are relatively few AMPA receptors.Exogenou s Glu is capable of increasing ［Ca(2+)］(i) in IHCs by acting on the NMDA autoreceptor of IHCs in a positive feedback manner.