50例HBV基因分型及P区耐药突变分析

目的:调查温州乙型肝炎患者血清HBV基因分型和P区基因逆转录酶区(RT区)序列的突变情况。方法:选取50例接受核苷类似物治疗后的乙型肝炎患者作为研究对象,采用PCR产物直接测序法,并对扩增产物进行测序,将测序结果与GenBank中的标准序列进行比对分析,同时确定基因型。结果:在50例中C型44例,占88%,B型6例,占12%。存在位点突变者25例(50%)。其中检出以单位点rtM204I/V/S突变为主,9例,占36%,rtA181V/T突变4例,占16%,rtM204I/V/S+rtL180M突变5例,占20%,rtV214A,rtA181V/T+rtV173L,rtM204I/V/S+rtQ215H,rtM204I/V/S+rtL180M+rtV173L,rtM204I/V/S+rtL180M+rtV207I,rtM204I/V/S+rtL180M+rtT184A/G/I/S,rtM204I/V/S+rtL180M+rtT184A/G/I/S+rtA181V/T突变各占1例,占4%。结论:多数乙型肝炎患者在HBV P区可检出突变,突变形式多样,其中以rtM204I/V/S突变为主,应用DNA序列测定法分析HBV P区基因突变,获得的信息全面,对临床评估病情进展和实施抗病毒治疗有参考价值。     

NGS检测乙型肝炎病毒耐药基因突变情况及其临床意义

目的检测乙型肝炎患者的HBV YMDD突变情况,探究下一代测序技术(next generation sequencing,NGS)检测HBV耐药基因突变的可行性及患者性别与其YMDD突变的相关性,并为临床用药提供参考。方法运用NGS测序技术对收集的100例临床样本进行HBV YMDD突变的检测,并与临床检测金标准Sanger测序法的测序结果进行比对。结果运用NGS检测100例HBV样本,其中YMDD野生型88例,HBV YMDD耐药基因突变12例,与Sanger测序法的测序结果完全相符。结论本研究结果显示,NGS技术可用于HBV耐药基因突变检测,患者性别与HBV耐药突变无明显相关性。     

慢性乙型肝炎患者核苷(酸)类药物治疗后乙型肝炎病毒P区基因突变模式与基因型的关系

目的分析慢性乙型肝炎患者经核苷(酸)类药物治疗发生耐药后,乙型肝炎病毒(HBV)P区基因突变模式与基因型的关系。方法 2009年6月-2012年9月采用焦磷酸测序的方法,对97例核苷(酸)类药物治疗耐药后的慢性乙型肝炎患者HBV P区及基因分型测定,所有数据采用SPSS17.0软件进行分析。结果 97例患者的基因突变模式为9种,其中单个位点突变37例占38.1%,联合位点突变为60例占61.8%;B基因型22例占22.7%,C基因型74例占76.3%,B和C混合基因型有1例占1.0%,C基因以rtM204I+rtL180M突变为主,占32.4%,B基因以rtM204I突变模式为主,占54.6%;以rtM204I和rtM204I+rtL180M突变模式的B和C基因之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论应用核苷(酸)类药物治疗后引起的HBV P区基因突变,不同的基因型决定了与耐药相关变异出现模式。     

慢性乙型肝炎患者拉米夫定耐药模式及耐药后体内免疫环境的改变

目的 探讨慢性乙型肝炎患者发生拉米夫定耐药常见的模式及耐药后体内免疫环境的改变.方法 应用PCR及基因测序方法回顾性分析72例发生拉米夫定耐药患者血清HBVDNA多聚酶区基因变异模式,比较72例患者拉米夫定抗病毒6个月时及耐药后血清INF-γ、IL-2、IL-4因子水平与对照组细胞因子的水平差异.结果 拉米夫定耐药4种主要的突变模式分别为:单位点rtM204I突变,占34.7%(25/72);rtL180M+rtM204V,占30.56%(22/72);rtL180M+rtM204I,占16.67%(12/72);rtV173L+rtV180M+rtM204V,占12.5%(9/72);抗病毒6个月时,未变异组与对照组IL-2(P=0.20)、IFN-γ(P=0.14)、IL-4(P=0.119)水平差异无统计学意义.耐药组HBVDNA发生病毒变异后,IL-2、IFN-γ水平显著低于对照组(P<0.01),而IL-4水平则高于对照组(P<0.01),差异有统计学意义.结论 慢性乙型肝炎应用拉米夫定抗病毒治疗耐药模式主要是rtM204I突变及rtL180M、rtV173L 、rtM204V、rtM204I联合变异,发生耐药后慢性乙型肝炎患者体内免疫环境将从Th1优势应答转换为Th2优势应答.     

拉米夫定耐药慢性乙型肝炎患者HBV多聚酶区基因突变分析

目的 探讨拉米夫定(LAM)耐药慢性乙型肝炎(CHB)患者多聚酶区序列突变特点.方法 收集63例接受拉米夫定治疗且耐药的CHB患者的临床资料,采用PCR产物直接测序法检测HBVP基因多聚酶区序列耐药变异.结果 63例诊断为耐药的患者中,51例患者检测到LAM相关的HBV多聚酶区基因突变,其中rtM204V/I变异46例(73.0%),rtL180M变异25例(39.7%),rtV173L/M变异5例(7.9%),rtQ214E变异1例(1.6%),rtS213T变异2例(2.%)12,rtV207L/M/I变异2例(3.2%),rtA181T变异3例(4.8%),rtT184I/S/M变异1例(1.6%).结论 对拉米夫定治疗患者的耐药检测除HBV多聚酶区常见的rtLl80M和rtM204V/I位点变异外,还应考虑其他位点的耐药变异.     

杭州地区乙型肝炎病毒基因型和P区耐药突变模式的相关性研究

目的研究杭州地区乙型肝炎患者乙型肝炎病毒(HBV)基因型分布、P区耐药突变基因状况及两者的相关性。方法利用荧光定量PCR和DNA测序技术,对慢性乙型肝炎患者的血清标本进行HBV基因型及P区耐药突变位点检测。结果 217例慢性乙型肝炎患者中检出HBV基因B型59例,C型127例,D型2例,B+C混合型6例,B+D混合型1例。对拉米夫定、阿德福韦、恩替卡韦和替比夫定耐药数分别是39例、18例、25例和71例。突变基因以M204I、L180M和M204V最多。YMDD突变类型在B、C基因型中的分布差异无统计学意义(P0.05),而YMDD中的M204I、M204V发生在B、C基因型中的差异有统计学意义(P0.05)。结论杭州地区HBV基因型以B型和C型为主,HBV耐药突变以M204I、L180M和M204V多见。应根据基因分型和耐药突变情况对慢性乙型肝炎患者选择适合的治疗方案。     

建立一种HBV突变检测的蝎子实时荧光PCR新方法

目的为HBV突变检测建立一种有效、快速、简捷的蝎子实时荧光PCR新方法。方法同时用蝎子实时荧光PCR新方法和Sanger测序法对比:对157例HBV患者的血清的DNA进行HBV基因rtN236T突变检测,统计其符合率;通过对混有不同比例的HBV基因rtN236T突变核酸的样本进行对照检测来比较两者的灵敏度。结果在157例HBV患者的血清样本中,蝎子实时荧光PCR新方法检测到rtN236T突变的有69例,而Sanger测序法检测的有68例,其符合率为98.6%;蝎子实时荧光PCR新方法能检测出混有5%突变的样本,其灵敏度达5%,比Sanger测序法高。结论蝎子实时荧光PCR新方法能有效检测到HBV突变,且比Sanger测序法更为简单、快速、灵敏度高,适合临床应用。     

3种检测乙型肝炎病毒YMDD变异方法比较及结果分析

目的对检测乙型肝炎病毒(HBV)YMDD变异的3种方法进行比较并分析结果。方法对101例用拉米夫定治疗的HBV感染者,测定其治疗前HBV DNA水平,定期随访,分别以通用模板信号扩增(UT-PCR)、限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)和DNA测序法检测病毒YMDD变异。结果UT-PCR和PCR-RFLP的检测结果与DNA测序结果的符合率均为98.11%。按治疗前HBV DNA水平分为5×102~5×104拷贝/mL,5×104~5×106拷贝/mL,5×106~5×108拷贝/mL,>5×108拷贝/mL 4个组,YMDD变异率分别为10%,12.90%,32.43%和53.85%。YMDD突变后,HBV DNA水平显著降低,其中YVDD突变株的HBV DNA水平高于YIDD突变株(P<0.01)。结论UT-PCR法适合临床检测HBV YMDD变异。乙型肝炎患者用拉米夫定治疗时,病毒DNA水平越高,发生YMDD变异的几率越大。突变株的复制能力低于野生株,YVDD突变株复制能力强于YIDD突变株。     

芯片电泳快速检测乙型肝炎病毒YMDD变异

目的利用芯片电泳高分辨力和分析快速的优点,建立一种基于芯片电泳的乙型肝炎病毒YMDD耐药性突变的检测方法。方法利用序列特异性PCR联合芯片电泳检测乙型肝炎病毒YMDD变异;将YVDD、YIDD标准质粒分别按梯度稀释108～100进行检测,将105拷贝/μl YVDD、YMDD质粒及YIDD、YMDD质粒分别按99∶1、50∶50、20∶80、10∶90、5∶95、1∶99混合检测,评价该方法的灵敏度;用芯片电泳法检测86份经拉米夫定治疗慢性乙型肝炎患者血清样品中YMDD突变情况,并将其结果与荧光定量PCR比较;两种方法结果不一致的标本进行DNA测序鉴定。结果芯片电泳法能够在3 min内实现HBV YMDD变异检测,标准YVDD、YIDD质粒的检测限均为101拷贝/μl;不同比例(V∶M或I∶M)的混合质粒,最小比例突变检测率YVDD为5.0%,YIDD为10.0%;在86份标本中,芯片电泳检出总变异65份,突变率为75.6%,其中YVDD变异32份、YIDD变异23份、YVDD+YIDD混合变异为10份,荧光定量PCR检出总变异62份,突变率为72.1%,其中YVDD变异30份、YIDD变异29份、YVDD+YIDD混合变异为3份,两种方法检测结果差异无统计学意义(Kappa=0.609);两种方法检测结果不一致的标本20份,经测序结果显示,YMDD野生株6份、YVDD变异7份、YVDD+YIDD混合变异7份。结论芯片电泳法检测YMDD变异具有简单、快速、灵敏度和准确度高的优点,适合于临床实验室开展乙型肝炎病毒YMDD变异的检测。     

TaqMan MGB双探针方法检测慢性乙型肝炎病毒YMDD变异的研究

目的探讨TaqMan MGB双探针方法检测慢性乙型肝炎病毒YMDD变异的可靠性。方法采用荧光定量PCR法检测HBV DNA含量,TaqMan MGB双探针方法和测序方法检测其YMDD变异,以测序方法为参考方法,评价TaqMan MGB双探针方法检测慢性乙型肝炎病毒YMDD变异的可靠性。结果246例HBV DNA阳性患者血清标本中,TaqMan MGB双探针方法阳性检出率为100%,100例正常对照全部为阴性;YMDD无突变106例,YMDD有突变(YIDD变异 YVDD变异)140例,与核酸测序方法比较,符合率为100%;该方法经过敏感度实验,最低检出下限为1×103拷贝/ml。结论TaqMan MGB双探针方法能便捷、灵敏、特异地检测YMDD基序变异情况,适用于临床检测慢性乙型肝炎患者拉米夫定治疗的YMDD基序变异。     

对医院护理管理队伍建设的几点思考

文章分析了当前医院护理管理队伍存在的主要问题：知识结构不合理；专业思想不纯正；接受继续教育不足：工作效能低下。提出了建设高素质护理管理人才队伍的思路：严格标准，搞好选才；加强思想教育和引导；加大培养力度；建立科学考评和激励机制；完善人才合理流动措施；合理编制，突出效率。     

医学科技成果信息资源网络开放利用的原则探析

医学科技成果信息资源网络开放利用，为资源的开放共享创造了良好条件，它使医学科技信息得到了高效传播和最大利用。网络开放利用医学科技成果信息资源，利用的主体和核心是其信息内容。信息内容是网络用户从中提取知识和所需资料的主要来源，同时也是信息破坏者发动攻击的主要目标之一，因而，信息内容的安全是信息安全的基本问题，主要包括信息内容的规范性、完整性与真实性、知识产权保护与利用的合理性等。要做好这些工作，应该遵循相应的原则和要求。     

政府公共财政支出分配公平性研究进展

政府公共财政支出是社会再分配的一种形式，其目的是促进社会公平。因此，政府的公共财政支出应该具有较强的目标针对性，应该向社会贫困人群倾斜，使其从中受益。本文通过查阅国内外政府公共财政支出分配公平性的相关文献资料。阐述了相关研究的进展情况，井着重探讨了政府公共财政支出分配公平性的内涵、研究范围、测算方法和研究意义。以及实际研究中存在的问题，最后提出我国政府公共财政支出分配公平性的研究方向和需要进一步完善的地方。     

长春新碱过量引起严重毒副反应1例的护理体会

报道1例霍奇金淋巴瘤患者因误用长春新碱（VCR）10mg一次性静脉推注后治疗护理情况。其出现间断性神志恍惚、眼睑闭合不全、言语不清、口腔黏膜糜烂、全身疼痛、麻痹性肠梗阻、尿潴留、手足麻木等症状,经积极解救,禁食,持续胃肠减压、胃管内注入麻油、开塞露、生理盐水灌肠,合理应用肠外营养,注重疼痛、心理护理,做好口腔、肛周护理,预防感染加重,患者病情得到控制好转出院。