杭州地区89例肺腺癌患者EGFR、KRAS与BRAF突变状态分析

目的分析杭州地区肺腺癌患者中EGFR、KRAS与BRAF基因的突变情况,并探讨其在肺腺癌个体化诊断和治疗中的临床应用价值。方法采用实时荧光定量PCR法检测患者肿瘤组织中EGFR、KRAS与BRAF突变情况。结果 89例肺腺癌患者中有47例存在EGFR基因突变,突变率为52.8%,19外显子和21外显子分别占突变总数的42.6%(20/47)和57.4%(27/47),20外显子T790M突变1例。KRAS突变率为3.3%(3/89),未检出BRAF突变。女性患者EGFR基因突变率(77.5%)高于男性患者(26.5%),不吸烟患者突变率(64.9%)高于吸烟患者(31.3%),差异均有统计学意义(P0.05)。结论在使用靶向治疗药物之前,应检测EGFR、KRAS和BRAF等基因的突变情况,依据基因突变结果制定个性化治疗方案。     

二代测序技术在肺腺癌相关基因突变状态检测中的应用

目的 探讨二代测序技术在肺腺癌相关基因突变状态检测中的应用效果,以期为临床诊断、预后和治疗提供参考价。方法 回顾性分析2019年12月—2021年3月本院收治的45例肺腺癌患者临床资料,45例患者均通过二代测序技术检测肺腺癌9种常见相关驱动基因(EGFR、MET、KRAS、HER2、BRAF、PIK3CA、ALK、ROS1、RET),分析基因检测结果。结果 45例患者中肺腺癌相关基因变异38例,其中组织检测变异占比82.05%(32/39),外周血检测变异占比44.44%(4/9),胸水检测变异占比50.00%(2/4);肺腺癌常见基因改变54个,平均1.20个; 39例初治患者共发现基因改变45个,平均1.15个; 6例治疗后(含放化疗及靶向治疗)患者共发现基因改变9个,平均1.50个; EGFR基因变异阳性率最高(48.15%),其次为MET(16.67%)和KRAS(11.11%)。结论 二代测序技术可作为分析肺腺癌基因突变的检测手段,EGFR突变频率较高,对肺腺癌的临床诊疗具有一定的指导意义。     

循环肿瘤DNA检测在晚期非小细胞肺癌中的应用

肺癌是目前最常见、死亡率最高的恶性肿瘤。其中非小细胞肺癌(NSCLC)关键致癌驱动因素为表皮生长因子受体(EGFR)基因突变,这种突变可以从表皮生长因子酪氨酸酶抑制剂(EGFR-TKI)治疗中受益。尽管早期临床获益,最终患者都会产生耐药性,这成了晚期NSCLC治疗的障碍。近年来,利用血浆循环肿瘤DNA(ctDNA)的液体活检,在晚期实体肿瘤患者的管理应用中正在迅速发展,并且ctDNA检测被美国食品和药物管理局(FDA)批准用于晚期NSCLC患者EGFR突变的检测。若将这种检测常规整合到肿瘤临床中,将是广大肿瘤患者的福音。     

循环肿瘤DNA与转移性结直肠癌靶向治疗及耐药机制的相关研究

目的 探讨转移性结直肠癌(metastatic colorectal cancer,mCRC)耐药相关的点突变,明确循环肿瘤DNA(circulating tumour DNA,ctDNA)能否作为mCRC检测和耐药相关的突变分子标志物以及mCRC可能的耐药机制。 方法 通过对连续抗表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)单抗药物治疗的mCRC患者多阶段ctDNA进行KRAS、BRAF和PIK3CA基因点突变动态监测,构建药物作用下的肿瘤基因突变谱变化,筛选耐药相关点突变;培养相应点突变细胞系后,通过体外细胞增殖试验(MTS法)分析细胞系的耐药程度,实时荧光定量PCR( real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测药物作用对突变丰度的影响。 结果 通过临床数据分析,筛选出可能与mCRC耐药相关的点突变KRAS(G12D)、PIK3CA(H1047R)和BRAF(V600E),并纳入后续研究。选择NCI-H747、SW948和SW1417细胞系分别作为KRAS(G12D)、PIK3CA(H1047R)和BRAF(V600E)点突变的细胞系,并选用C2BBe1野生型细胞系作为本底细胞。MTS半数抑制浓度即IC₅₀测定发现,野生型细胞系对西妥昔单抗和帕尼单抗敏感性均较突变细胞高;经与本底细胞稀释后,西妥昔单抗组和帕尼单抗组在培养3 d后突变基因相对水平均比不加药组高,不加药组均比基线组高。 结论 ctDNA检测能够发现与耐药相关的点突变;KRAS(G12D)、PIK3CA(H1047R)和BRAF(V600E)点突变可提高转移性结直肠癌细胞生长速度,并与西妥昔单抗和帕尼单抗耐药相关。     

肺癌患者EGFR及KRAS基因突变检测方法的建立和临床应用

目的本研究拟在评估二代测序(next generation sequencing,NGS)技术在肺癌临床分子诊断中应用的可行性。方法本研究选取108例肺癌石蜡包埋样本(formalin fixed paraffin embedded,FFPE),同时进行一代测序(sanger sequencing)和NGS检测样本中EGFR和KRAS基因的突变情况。结果在108例肺癌样本中,一代测序检出突变在二代测序中均检出,另外NGS还检测出目标区域外其他突变。结论 NGS的检测准确性可达到100%。NGS可以应用于肺癌临床分子诊断,同时NGS能给临床提供更详细的基因突变信息,为分子靶向治疗提供依据,更具有市场潜力及应用前景。     

人工神经网络分析预测非小细胞肺癌患者EGFR基因突变的模型建立及其关联因素分析

目的应用人工神经网络法(ANN)建立预测非小细胞肺癌(NSCLC)患者EGFR基因突变模型及分析其关联因素,为NSCLC治疗提供数据。方法采用扩增阻滞突变系统检测434例NSCLC患者样本的EGFR基因外显子19缺失、外显子20 T790M突变、外显子21 L858R突变,应用ANN建立NSCLC患者EGFR基因突变预测模型及分析其关联因素。结果显示434例NSCLC患者EGFR基因外显子19、20、21总突变率为42.6%,其中腺癌EGFR基因突变率明显高于鳞癌、大细胞癌,女性突变率明显高于男性。最终ANN预测模型变量包括吸烟、吸烟指数、病理类型、胸水CEA、性别、血液CEA,该模型曲线下面积、灵敏度、特异度分别为0.806、64.00%、73.50%。进一步分析显示较高胸水CEA、腺癌、吸烟人群、高血液CEA水平、高吸烟指数、女性肺癌患者更易发生EGFR突变。结论 NSCLC患者EGFR基因突变率较高;本研究建立了ANN预测NSCLC患者EGFR突变预测模型,具有较好的诊断效能。     

豫西南地区结直肠癌患者EGFR、KRAS、BRAF基因突变与临床病理特征的关系

目的探讨豫西南地区结直肠癌患者表皮生长因子受体(EGFR)、Kirsten鼠肉瘤病毒癌基因(KRAS)、B-Raf原癌基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(BRAF)基因突变与临床病理特征的关系,为结直肠癌的精准医学及靶向治疗提供依据。方法选取2014年6月—2016年12月收治的结直肠癌手术切除患者268例,采用荧光定量PCR法检测EGFR基因18、19、20、21号外显子及KRAS基因12、13位密码子和BRAF基因15号外显子突变情况,比较不同临床病理特征的EGFR、KRAS、BRAF基因突变情况。结果豫西南地区结直肠癌患者EGFR、KRAS、BRAF基因突变频率分别为30%、30%、18.6%,EGFR基因突变类型为4种,以19-Del和L858R最常见,KRAS基因突变类型主要为Gly12Asp,BRAF基因突变类型主要为V600E。EGFR、KRAS基因在男性、年龄≥60岁患者中突变率均高于女性、年龄60岁患者(均P0.05),不同肿瘤部位、浸润深度及淋巴结转移的EGFR、KRAS、BRAF基因突变率比较,差异均无统计学意义(均P0.05)。结论豫西南地区结直肠癌患者中,EGFR、KRAS基因突变与性别、年龄有关,BRAF基因突变与患者性别、年龄无关,EGFR、KRAS、BRAF基因突变与肿瘤部位、浸润深度及淋巴结转移均无关。     

非小细胞肺癌EGFR基因突变与靶向治疗研究进展

肺癌男性发病率为第一位,女性发病率第二位,死亡率第一位。肺癌病理类型中80%为非小细胞肺癌(NSCLC),此类患者确诊时大多为晚期或局部晚期,丧失手术机会而采用放化疗等非根治性治疗。但以铂类为基础联合第三代化疗药物虽然能够延长患者生存期,但多数患者接受3个周期以上化疗后产生耐药。近年来随着分子生物学技术及靶向药物研发的进展,肺癌靶向治疗取得了长足的进步。以小分子酪氨酸激酶抑制剂为主靶向治疗能明显延长表皮生长因子受体(EGFR)存在19和21外显子突变的患者。EGFR基因19、21外显子突变,被认为是肺癌靶向治疗效果预测的重要分子标记。近年来随着肺癌靶向治疗的不断研究,EGFR基因突变状态与靶向药物疗效的关系得到了广泛的关注。本文对几年来关于NSCLC EGFR基因突变及靶向药物治疗研究的相关文献进行综述,以期为临床NSCLC的治疗提供参考。     

非小细胞肺癌患者EGFR基因突变与ERCC1基因表达水平间的关联

目的:探讨EGFR基因发生突变的非小细胞肺癌(NSCLC)患者对铂类药物响应率较高的原因。方法:采用实时荧光定量PCR技术检测50例NSCLC患者福尔马林固定、石蜡包埋(FFPE)样本EGFR基因突变以及ERCC1基因表达水平。结果:12/50(24.0%)的NSCLC患者癌组织中检测出EGFR基因激活突变,且在女性、腺癌、无吸烟史患者中的突变比例较高,分别为33.3%、28.1%、39.1%;未检测到耐药突变。ERCC1表达量的中位值为42.9(范围为7.5～124.8)。EGFR基因发生突变患者的癌组织中ERCC1基因表达水平显著低于EGFR基因为野生型的患者(P<0.01),但ERCC1基因表达水平在不同类型EGFR基因突变患者间无显著性差异(P>0.05)。结论:NSCLC患者癌组织中EGFR基因突变与ERCC1基因表达水平之间的关系,可能是EGFR基因突变患者对铂类药物化疗响应率较高的原因之一。     

武汉地区非小细胞肺癌EGFR基因突变相关性研究

目的调查武汉地区非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR)基因型分布特点,探究肺癌组织EGFR基因突变与患者吸烟习惯、肿瘤病理学类型、肿瘤分化程度以及淋巴结转移与否的相关性。方法收集185例NSCLC患者石蜡组织切片,采用常规聚合酶链反应(PCR)方法检测EGFR基因18、19、20、21四个外显子,DNA测序分析确定EGFR基因突变类型。结果 185例NSCLC患者中,男性EGFR突变率为7.3%,明显低于女性的17.8%,差异有统计学意义(P0.05);吸烟患者FGFR基因突变率为7.7%,明显低于不吸烟者的20.0%,差异有统计学意义(P0.01),其中腺癌EGFR突变率为15.3%(18/118),腺鳞癌突变率为10.0%(3/30),鳞癌突变率为5.4%(2/37);共检测出7种类型突变,分别为Gln787Gln、Leu858Arg、E746-A750del、S752-I759del、A750-I759del、Gly719Ser、Ser768Ile。结论武汉地区NSCLC EGFR基因的突变形式主要为点突变及缺失突变。EGFR基因突变与患者性别有关,与肿瘤病理学类型、肿瘤分化程度和淋巴结转移与否无明显关系。