肝星状细胞和胰腺星状细胞的比较

肝星状细胞和胰腺星状细胞在各自纤维化疾病中都发挥着重要作用,两者在诸多方面存在相似之处。文章就两者的生物学特性、凋亡、信号转导通路方面进行总结和比较,以探讨它们之间的关系。     

原位循环灌流法分离大鼠肝星状细胞

目的：为深入探讨肝纤维化的细胞机制，探索经济、稳定的肝星状细胞分离和培养方法。方法：采用胶原酶原位循环灌流法分离大鼠肝星状细胞，１８％Ｎｙｃｏｄｅｎｚ密度梯度离心纯化星状细胞。结果：星状细胞的得率为１×１０７～３×１０７／肝，纯度为９０％，存活率为９６％。结论：原位循环灌流法是有效的大鼠肝星状细胞的分离和培养方法。     

人胰腺星状细胞分离方法改良

目的:探讨人胰腺星状细胞的两种新分离方法?方法:通过酶消化-密度梯度离心法进行静止态的人正常胰腺星状细胞的分离,分离获得的细胞在含10%FBS的DMEM/F12继续培养?通过组织块外植法获得激活态的人肿瘤相关胰腺星状细胞(CaPSCs),分离获得的细胞在含20%FBS的DMEM/F12继续培养?结果:通过方法改良,1 g人正常胰腺组织能够获得(0.5~5.0)×106个星状细胞,细胞活率约为90%?使用新的组织块外植法后,组织块不易掉落,细胞爬出时间显著缩短,约5~10 d即可获得CaPSCs?所有细胞贴壁良好,细胞倍增时间约为24 h?正常胰腺星状细胞(normal pancreatic stellate cells,NPSCs)培养早期形态符合典型静止态星状细胞特征,细胞为多边形或圆形,内含丰富脂滴,在荧光显微镜下可观察到320 nm激发波长下的蓝绿色自发荧光?NPSCs培养晚期和CaPSCs呈多触角状,胞内无脂滴,细胞增殖速度明显快于静止态细胞?激活态的细胞均表达α-SMA?Desmin?vimentin?GFAP等胰腺星状细胞特征性标记?结论:新的原代培养方法能够满足静止态和激活态两种状态胰腺星状细胞的分离培养,同时能够增加细胞得率?缩短分离培养时间,所获得细胞的活性和纯度符合进一步实验的要求,为胰腺星状细胞的相关研究提供了便利?     

大鼠肝星状细胞的分离、培养与鉴定

目的:改进大鼠肝星状细胞的分离、培养方法,提高其分离质量。方法:取成年雄性Wistar大鼠,用链蛋白酶、胶原酶体内门静脉灌注消化大鼠肝脏细胞,经Nycodenz密度梯度离心分离肝星状细胞。台盼蓝拒染实验鉴定细胞活力,Desmin免疫细胞化学染色鉴定细胞纯度。结果:肝星状细胞得率为2.8×107/肝。肝星状细胞存活率在90%以上。Desmin阳性细胞原代培养达90%以上,传代培养达95%以上。结论:改良大鼠肝星状细胞的分离、培养方法,有利于原代大鼠肝星状细胞的生物学研究。     

Activated pancreatic stellate cells can impair pancreatic islet function in mice

Background

Pancreatic or islet fibrosis is often associated with activated pancreatic stellate cells (PSCs). PSCs are considered not only to promote fibrosis, but also to be associated with glucose intolerance in some diseases. We therefore evaluated morphological and functional relationships between islets and PSCs in the normal mouse pancreas and transplanted islets.

Methods

Immunohistochemistry was used to map the presence of PSCs in the normal mouse pancreas and islets implanted under the renal capsule. We isolated and cultured mouse PSCs and characterized them morphologically by immunofluorescence staining. Furthermore, we measured their cytokine production and determined their effects on insulin release from simultaneously cultured islets.

Results

PSCs were scattered throughout the pancreas, with occasional cells within the islets, particularly in the islet capsule. In islet transplants they were found mainly in the graft periphery. Cultured PSCs became functionally activated and produced several cytokines. Throughout the culture period they linearly increased their production of interleukin-6 and mammalian keratinocyte-derived chemokine. PSC cytokine production was not affected by acute hyperglycemia. Syngeneic islets co-cultured with PSCs for 24–48 h increased their insulin release and lowered their insulin content. However, short-term insulin release in batch-type incubations was unaffected after 48 h of co-culture. Increased islet cell caspase-3 activation and a decreased islet cell replication were consistently observed after co-culture for 2 or 7 days.

Conclusion

Activated PSCs may contribute to impaired islet endocrine function seen in exocrine pancreatitis and in islet fibrosis associated with some cases of type 2 diabetes.     

大鼠肝星状细胞的简易分离法

目的在肝脏二步酶灌注法分离大鼠肝星状细胞的基础上,探讨一种简单易行且结果稳定的分离方法。方法采用大鼠肝脏二步酶灌注法对成年大鼠的肝脏进行消化,经密度梯度离心去杂质后得到肝星状细胞。台盼蓝拒染实验鉴定细胞活率,结蛋白(Desmin)免疫荧光鉴定肝星状细胞的纯度。结果肝星状细胞的得率为4.0×107以上,肝星状细胞纯度为96%左右,肝星状细胞存活率为(95.0±1.2)%。结论本实验采用的大鼠肝星状细胞的分离方法,结果稳定,细胞纯度较高,有利于进一步的生物学研究。     

改良的大鼠肝星状细胞分离方法

目的：探讨一种简便、高产的大鼠肝星状细胞（HSC）分离方法,为研究肝细胞相关实验提供细胞原材料。方法：应用悬浮缓冲液校正Nycodenz密度梯度分离液,使其浓度为11．3％（w／v）,采用单层一步梯度离心法分离HSC。采用台盼蓝染色排斥法鉴定细胞活率,desmin免疫细胞化学染色法鉴定HSCs纯度。结果：肝星状细胞得率每只大鼠约（4．0±0．5）×10^7个,细胞活力达到90％,细胞纯度达到95％。结论：本法简便、高产,是一种理想的分离肝星状细胞的方法,值得推广。     

FGF21对人胰腺癌细胞炎症环境中星状细胞活化的抑制及机制

目的:探讨成纤维细胞生长因子21(fibroblast growth factors 21,FGF21)对胰腺癌细胞炎症环境中星状细胞增殖和活化的影响及机制.方法:RT-qPCR检测胆囊收缩素(cholecystokinin,CCK)作用于人胰腺癌细胞(pancreatic cancer cells,PCC)后白细胞介素(interleukin,IL)-6及IL-8 mRNA的表达水平变化,确立适宜的时间建立炎症微环境.将PCC(Capan-1和MIA PaCa-2)CCK上清液和PCC(Capan-1和MIA PaCa-2)CCK+FGF21上清液作用于人胰腺星状细胞(pancreatic stellate cells,PSC).用CCK-8和Western blot分别检测各组上清液对胰腺星状细胞活性及其活化标志物α-平滑肌蛋白(α-smooth muscle protein,α-SMA)表达水平的影响.RT-qPCR和Western blot检测FGF21对CCK处理后的PCC EGR1和PDGFB mRNA及蛋白表达的影响.Western blot进一步检测AMPK抑制剂(compound C)加入PCC CCK组和PCC CCK+FGF21组后对AMPK-κB信号通路中p-AMPK和EGR1蛋白表达的影响.结果:CCK处理Capan-16 h与处理MIA PaCa-224 h的IL-8 mRNA表达量明显高于其他组(P＜0.05).PCC CCK+FGF21上清液组与PCC CCK上清液组相比,其PSC细胞增殖明显受抑制(P＜0.05),α-SMA蛋白表达明显降低(P＜0.001).FGF21干预PCC CCK后EGR1和PDGFB mRNA和蛋白表达均明显低于CCK组(P＜0.05).Compound C加入PCC CCK+FGF21组后,p-AMPK蛋白表达水平均降低(P＜0.01),EGR1蛋白表达水平均增高(P＜0.05).结论:FGF21可能通过抑制胰腺癌细胞炎症环境中星状细胞的增殖和活化来实现其对肿瘤的抑制作用,其机制可能与其激活炎症环境下胰腺癌细胞AMPK通路并下调EGR1的表达及减少PDGFB的表达有关.     

大鼠肝星状细胞的分离培养及鉴定

目的　研究肝损伤后细胞基质的沉积及纤维化形成机制 ,建立一套经济、简便、可靠的分离大鼠肝星状细胞的方法。方法　采用胶原酶、链霉蛋白酶循环灌流法分离大鼠的肝星状细胞 ,18%Nycodenz密度梯度离心纯化肝星状细胞 ,采用免疫组织化学方法鉴定Desmin阳性细胞的纯度。结果　每只鼠肝约获取 3 .6× 10 7个星状细胞 ,活率、纯度平均为 95 .4%、95 %。结论　本方法建立了有效的大鼠肝星状细胞的分离和培养方法。     

大鼠胰星状细胞体外分离培养的实验研究

目的体外分离培养胰星状细胞(PSC)以建立合适的体外模型,为进一步研究胰纤维化的分子发生机制打下实验基础。方法采用改良Apte MV酶消化法体外分离培养PSC,胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组化染色和荧光倒置显微镜观察自发绿色荧光对原代培养的PSC加以鉴定。结果PSC与肝星状细胞(HSC)具有相似的特征,细胞呈梭形或星形,细胞骨架蛋白GFAP染色阳性,由于胞质内含维生素A脂滴,在荧光倒置显微镜下于328nm波长处可见自发绿色荧光。结论改良酶消化法可用于体外分离培养PSC,PSC分离培养的成功为进一步研究PSC活化与抑制信号通路的分子机制提供了体外模型。