喉鳞癌中FHIT基因第5,8外显子纯合性缺失及突变研究

目的探讨喉鳞癌(laryngealsquamouscellcarcinoma,LSCC)组织中脆性组氨酸三联体(FHIT)基因第5,8外显子纯合性缺失及突变的情况。方法分别采用外显子特异PCR及PCR-SSCP技术检测41例LSCC中FHIT基因第5,8外显子纯合性缺失及点突变。结果LSCC中,第5外显子纯合性缺失率为26.8%(11/41),且与患者TNM分期及淋巴结转移有关(P<0.05);第8外显子纯合性缺失率为29.3%(12/41),且与患者TNM分期、病理分级及淋巴结转移有关(P<0.05);FHIT基因第5,8外显子的纯合性缺失有明显的相关性(P<0.01);所有标本没有检测到第5,8外显子的点突变。结论LSCC中,FHIT基因第5,8外显子为其基因缺失的重要靶区,两者的纯合性缺失可作为检测LSCC生物学行为的重要标志。LSCC中,点突变可能不是FHIT基因失活的主要机制。     

分化型甲状腺癌组织中脆性组氨酸三联体基因外显子5、8纯合性缺失及突变检测

目的:探讨分化型甲状腺癌(DTC)组织中脆性组氨酸三联体 (FHIT)基因外显子5、8(E5、E8)纯合性缺失及突变情况.方法:分别采用外显子特异PCR及PCR-SSCP技术检测65例DTC组织及其相应非癌上皮(NCE)组织中FHIT基因E5、E8纯合性缺失及点突变.结果:甲状腺NCE组织中,E5、E8纯合性缺失率均为0;DTC中,E5纯合性缺失率为30.8%(20/65),且与患者淋巴结转移有关(P<0.05);E8纯合性缺失率为29.2%(19/65),且与患者TNM分期、病理分级及淋巴结转移有关(P<0.05).DTC组织中,FHIT基因E5、E8纯合性缺失的发生相关(χ2=23.212,P<0.01).所有标本未检测到E5、E8点突变.结论:FHIT基因E5、E8纯合性缺失可作为检测DTC生物学行为的重要标志.点突变可能不是DTC组织中FHIT基因失活的主要机制.     

胃癌组织中p16基因突变分析

目的 :探讨胃癌组织p16基因纯合缺失与突变的发生率及其临床意义。方法 :PCR方法扩增p16基因外显子 1(E1)及外显子 2 (E2 ) ,检测等位基因纯合子缺失 ;应用单链构象多态性 (SSCP)方法分析基因突变情况。结果 :2 0例胃癌组织中E1、E2纯合性缺失分别为 4例 (2 0 % )及 2例 (10 % ) ;SSCP未检出E1突变 ,E2有 2例出现泳动易位的异常单链 ,其中 1例 (Ⅲa期 ,低分化腺癌 )癌与癌旁组织均出现异常 ,2例异常标本均为进展期 ,LOH(+)胃癌。结论 :p16基因异常是胃癌发生发展中一重要事件 ,突变多见于外显子 2 ,可能与癌肿进展有关     

p16基因第二外显子纯合性缺失检测对肺癌所致胸液的临床价值

目的　探讨p16基因第二外显子纯合性缺失检测对肺癌所致胸腔积液的临床价值。方法　用PCR技术检测 31例肺癌胸液及 21例结核性胸腔积液中p16基因第二外显子纯合性缺失的情况,同时送检胸液脱落细胞学作为对照分析。结果　表明所检 21例结核性胸液无p16基因第二外显子纯合性缺失, 31例肺癌胸液标本中有 12例出现第二外显子纯合性缺失,缺失率为 38 7% ( 12 /31 )。同时 16例脱落细胞学检测阳性,阳性率为 51 62% (16 /31)。在 15例脱落细胞学阴性中,有 6例存在p16基因第二外显子纯合性缺失,两者联合检测阳性率提高至 70 97% (22 /31),明显高于单独检测(P<0 05)。另外,p16基因第二外显子纯合性缺失与肿瘤细胞的组织学类型、转移、预后相关。本组研究表明鳞癌出现p16基因第二外显子缺失的机率虽高于腺癌但差异无显著性;而有淋巴结转移者明显高于无淋巴结转移者(P<0 005)。同时,在 12例p16基因纯合性缺失的患者中有 9例已发生一处以上的肺外转移,预后极差。结论　检测胸液p16基因第二外显子纯合性缺失对肺癌胸腔积液的诊断有重要价值,且特异性高;与脱落细胞学联合检测,可补充和提高其诊断阳性率,对鉴别癌性和结核性胸腔积液及判断肺癌的预后有一定的参考意义。     

胃癌中p16基因缺失与突变的研究

目的 探讨胃癌组织中p16基因缺失与突变发生率及其临床意义. 方法 PCR方法扩增p16基因外显子1(E1)及外显子2(E2)、检测等位基因纯合子缺失;紫外分光光度计检测DNA纯度浓度;应用DNA测序方法分析基因突变情况. 结果 30例胃癌组织中E1、E2纯合性缺失分别为6例(20.0%)及3例(10.0%),9例标本中6例属于Ⅲ期低分化癌;所有标本未检出点突变. 结论 p16基因缺失是胃癌发生发展中一重要事件,对胃癌的诊断和治疗有重要意义.     

胃癌中抑癌基因FHIT外显子5纯合性的缺失与突变

目的 探讨候选的抑癌基因FHIT外显子5在胃癌中纯合性缺失与突变的情况。方法 用PCR方法研究外显子5的纯合性缺失,用PCR－SSCP研究外显子5的点突变。结果 在32例原发性胃癌中外显子5的纯合性缺合率为9．38％（3／32）,没发现外显子5存在点突变。结论ＦＨＩＴ外显子５的缺失在胃癌中不一定占主导地位。     

人喉癌组织中p15、p16基因缺失和STK15基因过表达的研究

目的 探讨p15、p16基因和STK(丝氨酸/苏氨酸激酶)15基因表达与喉癌发生、发展的关系。方法 自50例术前未经化疗和放疗的喉鳞状细胞癌患者的新鲜手术标本中,分别取癌组织和癌旁正常组织进行以下检测:(1)提取DNA,采用聚合酶链反应(PCR)技术,进行p15基因第二外显子(p15E2)和p16基因第二外显子(p16E2)纯合缺失研究;(2)提取RNA,反转录合成cDNA,以β-肌动蛋白基因为内对照进行PCR扩增,分析STK15基因表达的水平。同时检测人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞系STK15基因表达水平。结果 喉癌组织p15E2纯合缺失率为12％(6/50),p16E2纯合缺失率为14％(7/50),p15E2、p16E2共同缺失率为6％(3/50)。50例患者中34例(68％)癌组织STK15基因表达高于癌旁正常组织;全组患者癌组织STK15基因表达/β-肌动蛋白基因表达平均密度比值(ADV)为1.03±0.30,癌旁正常组织STK15基因表达/β-肌动蛋白基因表达ADV为0.89±0.22,其间差异有非常显著意义(t=4.333,P<0.01)。Hep-2细胞系中STK15基因表达高于内对照β-肌动蛋白基因。结论p15E2、p16E2纯合缺失和STK15基因过表达可能在喉癌的发生及恶性进展中发挥一定作用。     

非小细胞肺癌组织中脆性组氨酸三联体和PCNA的表达

目的:观察人非小细胞肺癌组织中脆性组氨酸三联体(FHIT)及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.方法:应用免疫组织化学(SP法)检测80例非小细胞肺癌和40例肺良性病变组织中FHIT和PCNA的表达.结果:非小细胞肺癌组织中FHIT表达阳性率(57.5%)低于肺良性病变组织(90.0%)(P＜0.01);腺癌组织中FHIT的表达阳性率高于鳞癌,且表达阳性率与鳞癌分化程度、淋巴结转移、TNM分期有关(P＜0.05);非小细胞肺癌组织中FHIT表达阳性率与患者是否有吸烟史有相关性(P＜0.05);非小细胞肺癌组织中PCNA表达阳性率(60.0%)高于肺良性病变组织(10.0%)(P＜0.01);FHIT表达阳性率与淋巴结转移、TNM分期有关(P＜0.05);非小细胞肺癌组织中FHIT和PCNA表达呈负相关(rs=-0.547,P＜0.01).结论:FHIT表达下调是肿瘤细胞增殖活跃的分子基础之一,FHIT与非小细胞肺癌的发生、发展关系密切.     

PTEN基因在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨PTEN基因在喉鳞癌LSCC中的表达及临床意义。方法:采用免疫组化S-P法检测10例正常喉组织,20例癌旁组织和60例喉鳞癌组织中PTEN基因的表达情况。结果:PTEN在LSCC、癌旁喉组织及正常组织中阳性表达率分别为70.0%、95.0%、100.0%,差异有统计学意义(P<0.01)。LSCC组织中PTEN蛋白表达在TNM分期Ⅰ-Ⅱ期、高中分化癌、无转移、生存率>3年的患者中表达水平较Ⅲ-Ⅳ期、低分化和有转移、生存率<3年的患者高,差异有统计学意义(P<0.05)。PTEN基因表达与年龄、性别、肿瘤部位无关(P>0.05)。结论:PTEN基因的异常表达可能与喉鳞癌的发生、发展和预后有关。     

肿瘤转移抑制基因KAI1/CD82在喉鳞状细胞癌、喉鳞状上皮内瘤变中的表达及临床意义

目的 探讨喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma, LSCC)、喉鳞状上皮内瘤变(squamous intraepithelial neoplasia, SIN)中肿瘤转移抑制基因KAI1/CD82表达的临床意义.方法 采用免疫组织化学染色EnVision法检测26例LSCC, 34例喉SIN Ⅰ～Ⅲ级和10例正常喉组织中KAI1/CD82蛋白的表达和分布,并结合患者的临床病理资料对其结果进行对比分析.结果 LSCC中KAI1/CD82阴性、弱、中、强表达依次为57.7%(15/26),26.9%(7/26),15.4%(4/26),0%(0/26),与喉SIN组和正常喉组织组相比,KAI1/CD82在LSCC的表达存在显著下调(P=0.000 5).LSCC中KAI1/CD82表达与TNM分期、病理分级、颈淋巴结转移均无关(P>0.05).喉SIN中KAI1/CD82表达出现下调趋势,但与正常喉组织组相比差异无统计学意义(P>0.05).结论 KAI1/CD82表达的改变是LSCC发生、发展中的早期事件,喉SIN向LSCC转化过程中KAI1/CD82可能起非常重要的作用,KAI1/CD82可作为预测肿瘤转移潜能的指标之一.     

FHIT基因在结直肠癌组织中的异常表达

目的:探讨FHIT基因与结直肠癌发生之间的关系.方法:采用逆转录巢式酶链免疫反应,对41例结直肠癌组织及其配对的癌旁正常组织和25例良性腺瘤的FHIT基因进行检测.结果:在15例(38.9%)结直肠癌组织中检测到异常FHIT转录本,配对正常组织和良性腺瘤均未检测到异常转录本;测序证实异常转录本缺失3～5个FHIT外显子.异常FHIT转录本与结直肠癌患者的年龄、性别、肿瘤部位、大小、血清癌胚抗原(CEA)的水平、组织学类型均无相关性(P＞0.05);与分化程度、病理分期、淋巴转移、远处转移相关(P＜0.05).结论:异常FHIT转录本的表达是结直肠癌发生中的常见事件,FHIT基因异常与结直肠癌的发生发展有关.     

抑癌基因p53第5～8外显子突变与喉鳞癌关系的研究

为探讨抑癌基因ｐ５３基因突变与喉鳞癌之间的关系,应用聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染系统,检测６０例喉鳞癌新鲜组织中抑癌基因ｐ５３基因第５￣８外显子的突变情况。结果：６０例喉鳞癌组织中,发生４７例第５￣８外显子迁移率异常的ＳＳＣＰ区带,总的突变率为７８．３％。ＳＳＣＰ阳性病例在外显子５、６、７、８中的突变率由高到低依次为Ｅｘｏｎ５、Ｅｘｏｎ７、Ｅｘｏｎ８、Ｅｘｏｎ６。提示第     

抑癌基因p53第5～8外显子突变与喉鳞癌关系的研究

为探讨抑癌基因p53基因突变与喉鳞癌之间的关系,应用聚合酶链反应单链构象多态性分析（PCR－SSCP）银染系统,检测60例喉鳞癌新鲜组织中抑癌基因p53基因第5～8外显子的突变情况。结果：60例喉鳞癌组织中,发生47例第5～8外显子迁移率异常的SSCP区带,总的突变率为78.3%。SSCP阳性病例在外显子5、6、7、8中的突变率由高到低依次为Exon 5、Exon 7、Exon 8、Exon 6。提示第5、7外显子有可能是喉鳞癌发病相关的致癌因素选择性攻击的关键部位。     

喉鳞状细胞癌中PUMA、P53基因的表达及其临床意义

目的:研究PUMA、P53在喉鳞状细胞癌组织中表达,探讨PUMA在喉鳞癌发生发展中作用及与P53的关系。方法:采用免疫组织化学SP法检测40例喉癌组织以及16例癌旁组织中的PUMA和P53的表达情况。结果:PUMA在喉癌中的表达阳性率(62.5%)低于癌旁组织(87.5%),P<0.05,PUMA的表达与喉鳞癌患者的颈淋巴结转移及预后有关。P53在喉癌中的表达阳性率(65.0%)高于癌旁组织(0%),P<0.01,P53的表达与喉鳞癌患者的肿瘤分化程度、颈淋巴结转移及预后有关。PUMA与P53在喉鳞癌中的表达呈负相关关系。结论:PUMA可能是喉鳞癌的一个重要的预后标记物。P53的表达与肿瘤分化、淋巴结转移有关,可作为判断预后的一个有意义的指标。     

喉鳞癌组织中细胞周期素D1的表达

目的:检测喉鳞癌组织中细胞周期素D1(cyclinD1)的表达.方法:应用免疫组织化学SP法检测31例喉鳞癌组织(TNM分期:Ⅰ期2例,Ⅱ期10例,Ⅲ期15例,Ⅳ期4例.伴颈淋巴结转移13例,无转移18例.高分化16例,中分化7例,低分化8例)、17例癌旁正常黏膜组织中cyclinD1的表达.结果:喉鳞癌组织中cyclinD1蛋白阳性表达率为54.8%(17/31),高于正常喉黏膜组织(5.9%(1/17))(P＜0.05).喉鳞癌组织中cyclinD1蛋白阳性表达与淋巴结转移和临床病理分期有关(P均＜0.05),与患者年龄、性别及分化程度无关(P均＞0.05).结论:cyclinD1的异常表达与喉鳞癌的发生、发展密切相关,可能是影响喉鳞癌预后的重要分子学指标.     

多重PCR法检测喉癌组织中P16基因纯合缺失及异常甲基化

目的：采用多重ＰＣＲ法检测喉癌及癌旁组织中Ｐ１６ 基因纯合缺失和异常甲基化。方法：选用二对引物分别扩增Ｐ１６ 基因外显子１ 和２,分析有无纯合缺失,对未检出缺失的样品用甲基化敏感内切酶Ｓｍ ａＩ消化后,再扩增外显子１,分析有无Ｐ１６ 基因异常甲基化。结果：３９ 例喉癌组织标本中９ 例标本有Ｐ１６ 基因纯合缺失,缺失率为２３．０８％ （９／３９）。３０ 例未检测到Ｐ１６ 基因缺失的喉癌组织标本,有４ 例检出异常甲基化,检出率为１３．３３％ （４／３０）。３９ 例癌旁组织标本均未检测到Ｐ１６基因缺失或异常甲基化。结论：采用多重ＰＣＲ法可检测出Ｐ１６ 基因常见的纯合缺失和异常甲基化失活。研究表明,Ｐ１６ 基因失活可能在喉癌的发生发展中起重要作用     

广西壮族非小细胞肺癌患者FHIT基因表达的研究

目的 探讨广西壮族NSCLC患者中FHIT基因的表达情况,并分析其与临床病理因素的相互关系.方法 利用RT-PCR法检测56例广西壮族NSCLC患者组织和20例正常肺组织中FHIT的表达情况.结果 NSCLC癌组织中FHIT基因缺失率为69.6%(39/56),而正常肺组织中FHIT基因缺失率为0(0/20),两者比较...