NS-398对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响

目的:探讨选择性环氧合酶II(COX-2)抑制剂NS-398对人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响。方法: 应用MTT法研究不同浓度NS-398对HepG2细胞增殖的影响,DNA梯状电泳(DNA ladder)检测凋亡的发生,流式细胞仪检测细胞周期的改变及凋亡百分率的变化,竞争性RT-PCR检测环氧合酶II COX-2 mRNA及抑凋亡基因bcl-2 mRNA表达的改变。结果: NS-398呈剂量依赖性抑制HepG2细胞增殖,并诱导其凋亡,细胞周期分析表明随着浓度增大S期细胞明显减少,有G₀/G₁期细胞累积现象,并伴有Bcl-2 mRNA表达的下调,而对COX-2 mRNA表达改变无明显影响,且COX-2表达改变与NS-398引起的HepG2细胞的增殖和凋亡均无相关性(相关系数分别为:r=0.056,P>0.05和r=0.119,P>0.05)。结论: NS-398能明显抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡,与细胞G₀/G₁期阻滞以及bcl-2基因表达下调有关,而非依赖于抑制COX-2基因的表达。     

反义PKCα对CNE-2Z细胞周期的影响

目的:观察蛋白激酶Cα亚型(PKCα)的反义寡核苷酸对鼻咽癌CNE-2Z细胞生长、细胞周期和cyclinE表达的影响。方法:脂质体法转染反义PKCα,MTT法测细胞生长,流式细胞仪检测细胞周期,免疫细胞化学及点印迹法检测cyclinE表达。结果:①随着反义PKCα的浓度增加,细胞生长指数逐渐降低(P＜0.01)。②反义PKCα使细胞G₁期百分比增高(P＜0.05)。③反义PKCα使细胞cyclinE的表达减弱,扫描定量反义PKCα组为对照组的66.5％±18.4％(P＜0.05)。结论:反义PKCα可通过抑制cyclinE表达、阻滞细胞于G₁期从而抑制CNE-2Z的生长。     

肿瘤坏死因子-α对肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在肝纤维化发病中的作用。方法:采用TNF-α对体外培养的HSC进行干预, 通过流式细胞术、电镜及TUNEL等方法, 对HSC的增殖与凋亡进行研究。结果:①流式细胞术显示:TNF-α各组的G₀/G₁期细胞比率明显高于对照组, 而S期细胞比率明显低于对照组, 各组的细胞增殖指数均明显低于对照组;在凋亡方面, TNF-α各组的HSC凋亡率明显高于对照组, TNF-α各组HSC中抗凋亡基因bcl-2的表达明显低于对照组, 而促凋亡基因bax的表达明显高于对照组。②TUNEL分析显示:TNF-α(2.0μg/L)组的HSC凋亡率为18.7%±2.5%, 而对照组为5.3%±1.2%, 两者之间有显著差异。结论:TNF-α能够阻止HSC从G₀/G₁期进入S期, 从而具有抑制HSC增殖的作用;TNF-α能够降低HSC中bcl-2的表达、提高bax的表达, 这可能与其促进HSC凋亡有关。     

2-脱氧-D-葡萄糖与奥沙利铂对人肝癌SMMC-7721细胞增殖及凋亡的影响

目的: 研究糖酵解抑制剂2-脱氧-D-葡萄糖(2-deoxy-D-glucose,2-DG)与奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)单独及联合应用对人肝癌细胞SMMC-7721增殖及凋亡的影响。方法: 将2-DG及L-OHP单药及联合用药作用于人肝癌细胞SMMC-7721,MTT法检测各组细胞的生长抑制率,并计算两药的协同作用q值,流式细胞仪检测各组细胞周期及凋亡情况,caspase-3试剂盒检测caspase-3活性。结果: 不同浓度的2-DG和L-OHP均可使肝癌细胞增殖受到抑制,并呈时间、浓度依赖性,两药合用后对细胞的增殖抑制作用明显增强(P<0.05)。2-DG可诱导细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G₂/M期;与L-OHP合用后细胞凋亡率更高,可阻滞细胞于G₂/M期和S期。Caspase-3活性在两药联合应用时明显增强。结论: 2-DG能有效抑制SMMC-7721细胞生长增殖,并诱导其凋亡;当其与L-OHP联合应用时能增强L-OHP的抗肿瘤作用,其机制可能与增加caspase-3活性有关。     

白细胞介素-10抑制人肾系膜细胞环氧化酶-2表达及其催化的前列腺素E2释放的实验研究

目的:观察IL-10对IL-1β诱导的人系膜细胞(HMC)前列腺素E₂(PGE₂)释放及环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)基因和蛋白表达的影响。方法:应用放射免疫测定法检测HMC培养上清中PGE₂,应用RT-PCR和Westernblot分别检测COX-2mRNA和蛋白水平。结果:①IL-1β显著上调PGE₂释放及COX-2基因和蛋白的表达(P均＜0.01);②IL-10对基础状态下PGE₂释放及COX-2基因和蛋白表达无明显影响(P＞0.05);③IL-10可呈剂量依赖性地下调IL-1β诱导的PGE₂释放及COX-2mRNA和蛋白表达(P＜001)。结论:IL-10抑制IL-1β诱导的HMCPGE₂释放及COX-2表达,提示IL-10对HMC具有多方面抗炎作用。     

致癌性微小RNA-106a对正常胃黏膜上皮细胞和胃癌细胞生长的影响

目的: 探讨微小RNA-106a(miR-106a)是否具有致癌特性。方法: 用脂质体把miR-106a类似物转染到正常胃黏膜上皮细胞GES-1中,然后用MTT方法检测该细胞的增殖情况。用脂质体把miR-106a抑制剂转染到胃癌细胞MGC-803和SGC-7901中,然后分别用流式细胞术和Western印迹方法检测细胞周期分布和细胞周期相关蛋白表达的变化;最后观察裸鼠胃癌移植瘤的生长情况。结果: miR-106a类似物以剂量依赖方式促进正常胃黏膜上皮细胞的增殖。miR-106a抑制剂通过抑制细胞周期素依赖的蛋白激酶(CDK)1和CDK2的表达阻滞MGC-803细胞于G₀/G₁期和G₂/M期,而通过抑制CDK1的表达阻滞SGC-7901于G₂/M期。动物实验结果显示,miR-106a抑制剂以剂量依赖方式抑制肿瘤的生长。结论: miR-106a可能参与了胃癌的发生过程。     

Akt抑制剂perifosine抑制胃癌细胞增殖并诱导凋亡的实验研究

目的: 探讨新的Akt抑制剂perifosine对胃癌细胞增殖与凋亡的影响。方法: 采用MTT法检测perifosine对胃癌细胞SGC-7901细胞增殖的影响;流式细胞术分析细胞周期变化;AnnexinⅤ-FITC试剂盒检测细胞凋亡;免疫印迹法检测蛋白表达水平。结果: Perifosine能够抑制SGC-7901细胞的增殖,且抑制作用呈时间和剂量依赖性。胃癌细胞经perifosine处理后,细胞阻滞于G₂期,p21表达水平增加,而cyclin B1的表达受到抑制;凋亡诱导现象随着perifosine剂量的增加而增强。免疫印迹结果显示perifosine活化SGC-7901细胞内caspase-3﹑caspase-9及其底物多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP),促进凋亡诱导蛋白Bax的表达,并抑制Bcl-2的表达。结论: Perifosine对人胃癌细胞SGC-7901的生长具有显著的抑制作用,其凋亡诱导活性与调节caspase家族和Bcl-2家族蛋白的表达密切相关。     

HMBA对人舌癌Tca8113细胞增殖和KLF6及相关蛋白表达的影响

目的: 研究六亚甲基二乙酰胺(hexamethylene bisacetamide, HMBA)对人舌癌Tca8113细胞增殖和Kruppel样因子6(Kruppel-like factor 6, KLF6)及相关蛋白表达的影响。方法: HMBA处理Tca8113细胞后,观察细胞生长和细胞形态;流式细胞术观察细胞周期;RT-PCR检测KLF6 mRNA的表达;免疫细胞化学技术检测KLF6、p53、cyclin D1及c-Jun的蛋白表达。结果: HMBA处理后贴壁细胞的数量随浓度增加明显减少;MTT实验显示其生长抑制作用呈浓度/时间-效应关系;镜下观察显示处理后Tca8113细胞出现向正常细胞形态逆转演变的特征。流式细胞术检测结果显示,对照组Tca8113细胞G₁期比例为(52.00±0.02)%,S期为(34.00±0.08)%,G期为(14.00±0.10)%;HMBA处理后,随作用时间增加,G₁期细胞显著增加,S期细胞显著减少,G₂期细胞也减少,细胞明显被阻滞于G₁期(P<0.05);出现凋亡峰。 RT-PCR结果显示HMBA处理后KLF6 mRNA的表达上调(P<0.05); 免疫组化检测显示HMBA处理后KLF6和p53蛋白表达上调(P<0.05),cyclin D1和c-Jun表达下调(P<0.05)。结论: HMBA对Tca8113细胞增殖具有抑制作用;其作用机制一方面可能通过p53上调p21的表达和活性,另一方面可能通过上调表达的KLF6解除c-Jun对p21的抑制作用,下调cyclin D1,抑制CDK4/6和cyclin D1复合物活性,将Tca8113细胞阻滞于G₀/G₁期,诱导Tca8113细胞向正常细胞分化,恢复正常细胞的表型和功能,并促进细胞凋亡。     

SC58125对HepG-2细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨SC-58125对HepG-2细胞增殖和凋亡的作用及其分子机理。方法：应用细胞培养、MTT、TUNEL、流式细胞光度术、琼脂糖凝胶电泳及Western blot等方法研究SC-58125对HepG-2细胞增殖和凋亡的作用及其分子机理。结果：SC58125抑制HepG-2细胞的增殖、诱导其凋亡及引起G₀/G₁期阻滞，S期抑制。并使P33^cdk2、P34^cdc2、cyclinB₁、cyclinE、Mpm-2、Rb、PCNA 7种蛋白水平下降。结论：SC58125抑制HepG-2细胞的增殖及诱导其凋亡，可能与P33^cdk2、P34^cdc2、cyclinB₁、cyclinE、Mpm-2、Rb、PCNA 7种蛋白水平的下降有关。     

亚硒酸钠对子宫内膜癌细胞增殖能力的影响

目的: 研究亚硒酸钠(Na₂SeO₃)对子宫内膜癌细胞增殖能力的影响,并探讨其作用机制。方法: 用Na₂SeO₃作用于子宫内膜癌Ishikawa细胞和HEC-1A细胞,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞法测定Na₂SeO₃作用后细胞周期的变化及凋亡情况,Western blotting检测周期蛋白cyclin A的表达。结果: Na₂SeO₃对子宫内膜癌Ishikawa细胞和HEC-1A细胞的增殖均有抑制作用,抑制率在一定浓度范围内与Na₂SeO₃浓度呈正相关,对Ishikawa细胞作用48 h的IC₅₀为3.26 μmol/L,对HEC-1A细胞作用48 h的IC₅₀为4.77 μmol/L。Na₂SeO₃作用后两种细胞G₀/G₁期减少,S期细胞增多,G₂/M期细胞有所增加。作用48 h后两种细胞凋亡率增加。Na₂SeO₃使子宫内膜癌Ishikawa细胞和HEC-1A细胞的cyclin A表达增加。结论: 亚硒酸钠对子宫内膜癌Ishikawa细胞和HEC-1A细胞增殖有抑制作用,其作用机制与上调cyclin A表达,引起细胞周期阻滞和诱导凋亡有关。     

阻断泛素-蛋白酶体通路对食管癌细胞生长及端粒酶活性的影响

目的:研究阻断泛素-蛋白酶体通路对食管癌细胞生长及端粒酶活性的影响。方法: 将不同浓度的MG-132加入食管癌细胞株Eca9706,特异性阻断其泛素-蛋白酶体通路,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞生长抑制效应,显微镜下观察细胞形态变化,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期及凋亡,DNA片段分析进一步证实凋亡的存在,并对端粒酶的活性进行检测。结果: MG-132对食管癌细胞株Eca9706有显著的生长抑制作用,且呈现剂量与时间的依赖性,显微镜下可见明显的细胞病变,细胞变圆、变小、脱落,FCM显示MG-132作用于食管癌细胞后,G₁期比例增加,并有明显的亚二倍体凋亡峰,细胞DNA抽提电泳后发现凋亡特征性梯状条带,端粒酶的活性显著受抑制。结论: MG-132能显著抑制食管癌细胞株Eca9706的生长,并抑制端粒酶的活性,表明阻断泛素-蛋白酶体通路可能是治疗食管癌的新途径。     

尾叶香茶菜二萜类化合物B对小鼠前列腺癌细胞细胞周期的影响及其机制

目的：观察尾叶香茶菜二萜类化合物B(DB)对小鼠前列腺癌细胞株RM-1细胞周期的影响并分析其机制。方法：MTT法观察不同时间、不同剂量的DB对RM-1 细胞增殖率的影响；相差显微镜观察对RM-1细胞形态影响；流式细胞术分析细胞周期变化；RT-PCR和Western blotting分别观察DB作用后RM-1细胞p53、GRIM-19、STAT3 和细胞周期相关因子CHK1、CDK2 mRNA和蛋白水平的表达。结果：（1）MTT结果：DB可抑制RM-1 细胞的增殖，呈时间、剂量依赖性；（2）形态学观察和流式细胞术检测：经DB处理后的RM-1细胞出现生长抑制，细胞主要阻滞在G1期；（3）RT-PCR结果： DB (2 mg/L,4 mg/L,8 mg/L) 分别作用RM-1细胞12 h、24 h、48 h后，p53、CHK1、GRIM-19 mRNA的含量明显高于对照组，CDK2、STAT3 mRNA的含量明显低于对照组（P<0.05）；（4）Western blotting 结果：DB (2 mg/L,4 mg/L,8 mg/L) 分别作用RM-1细胞12 h、24 h、48 h后，P53、GRIM-19 蛋白表达水平高于对照组，而CDK2蛋白表达水平则低于对照组。结论：DB可抑制RM-1细胞增殖，其机制可能是与细胞周期相关基因p53的上调，CDK2表达下降有关，影响了G1期进入S期，同时GRIM-19-STAT3-CDK2途径可能也参与G1期阻滞的过程。     

Galectin-9调控SHH信号通路影响结直肠癌HT29细胞凋亡

目的:探讨半乳糖凝集素9(galectin-9)对结直肠癌细胞凋亡的影响及机制。方法:在结直肠癌细胞系HT29中分别转染galectin-9过表达载体pcDNA3.1-Galectin-9和对照载体pcDNA3.1,用real-time PCR和Western blot检测过表达效果。Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡变化,Western blot测定细胞中活化的caspase-3水平,以及SHH信号通路蛋白Smo、Gli1和SHH的表达变化。用SHH信号通路特异性抑制剂cyclopamine处理上调galectin-9表达的结直肠癌细胞,用上述方法检测细胞凋亡、细胞中活化的caspase-3水平,以及SHH信号通路蛋白Smo、Gli1和SHH的表达变化。结果:pcDNA3.1-Galectin-9可显著上调结直肠癌HT29细胞中galectin-9的mRNA和蛋白水平。上调galectin-9表达后的结直肠癌HT29细胞凋亡率升高,细胞中活化的caspase-3蛋白水平升高,同时细胞中SHH信号通路蛋白Smo、Gli1和SHH的表达水平降低(P0.05)。Cyclopamine处理可以进一步诱导上调galectin-9表达的结直肠癌HT29细胞凋亡,促进细胞中活化的caspase-3蛋白水平上调,降低细胞中SHH信号通路的激活水平(P0.05)。结论:Galectin-9通过抑制SHH信号通路诱导结直肠癌HT29细胞凋亡。     

miR-496过表达抑制结肠癌细胞生长和转移

目的:研究miR-496过表达对结肠癌细胞生长和转移的影响及其分子机制。方法:运用生物信息学软件筛选miR-496靶向相互作用蛋白;real-time PCR和Western blot法测定结肠癌细胞系HT29、HCT116、SW480以及正常结肠上皮细胞NCM460中miR-496、CTNNB1 mRNA和β-catenin蛋白的表达;运用Lipofectamine 2000将miR-496 mimics转染HT29、HCT116和SW480细胞,分别命名为HT29-miR-496 mimics、HCT116-miR-496 mimics和SW480-miR-496 mimics细胞,转染scramble为阴性对照;运用MTT法、乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒法、克隆形成实验和Transwell分别测定细胞活力、LDH漏出率、克隆形成能力和转移能力;萤光素酶报告基因实验测定miR-496启动子活性;Western blot法测定β-catenin、真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1(4E-BP1)、p-4E-BP1、低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP6)、p-LRP6、MMP-7、MMP-9、MMP-13以及TIMP-2的蛋白水平。结果:miR-496与β-catenin内源性相互作用;miR-496在HT29、HCT116和SW480细胞中低表达,而在NCM460高表达;β-catenin在HT29、HCT116和SW480细胞中高表达,而在NCM460低表达;培养24 h、48 h、72 h、96 h的HT29-miR-496 mimics、HCT116-miR-496 mimics和SW480-miR-496 mimics细胞活力、LDH漏出率、克隆形成率和转移的细胞数均显著低于对照组(P0.05);萤光素酶报告基因实验结果显示转染miR-496 mimics细胞中的miR-496启动子活性明显增加(P0.05),分别是对照组的1.75倍、2.04倍和1.61倍。Western blot实验结果显示miR-496过表达抑制β-catenin蛋白表达,p-4E-BP1和p-LRP6的蛋白水平降低;siRNA或miR-496过表达介导的β-catenin表达下调能显著抑制MMP-7和MMP-9的表达,促进TIMP-2的表达。结论:miR-496在结肠癌细胞中低表达,在正常结肠上皮细胞中高表达;miR-496过表达抑制结肠癌细胞的生长和转移,其机制是通过抑制Wnt/β-catenin通路进一步抑制MMP-7和MMP-9表达,促进TIMP-2表达,从而抑制结肠癌细胞的恶性表型。     

端粒酶RNA反义核酸降低鼻咽癌细胞p53蛋白表达水平

目的:研究端粒酶活性抑制后鼻咽癌细胞p53蛋白表达水平的变化。方法:脂质体介导端粒酶反义寡核苷酸转染鼻咽癌CNE1和CNE2Z细胞株,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫组化法检测端粒酶逆转录酶(hTRT)和p53蛋白表达水平。结果:端粒酶RNA反义寡核苷酸可抑制CNE1和CNE2Z细胞的增殖并呈剂量依赖性,流式细胞仪检测出现凋亡峰,反义寡核苷酸组hTRT和p53蛋白表达水平显著低于其它处理组及空白对照组(P＜0.01)。结论:端粒酶RNA反义寡核苷酸抑制鼻咽癌细胞端粒酶活性后可降低p53蛋白表达水平。     

TNF相关凋亡诱导配体对肝癌细胞系生物学活性的影响

 目的：探讨新型凋亡分子TNF相关凋亡诱导配体(TRAIL)对人肝癌细胞系的作用及生物学活性的影响。 方法： 免疫细胞化学法检测HepG2细胞表面膜结合型TRAIL的表达，ELISA法检测HepG2细胞分泌型TRAIL的表达。MTT和TUNEL法分别进行细胞毒实验和凋亡的检测。HepG2细胞内端粒酶的活性由TRAP-PCR法检测，端粒酶催化亚单位hTERT的表达由流式细胞术进行检测。 结果： HepG2肝癌细胞系表面组成性表达TRAIL分子，并有适量的sTRAIL呈分泌表达。细胞毒实验显示TRAIL能够显著抑制肝癌细胞的生长，TUNEL检测结果显示TRAIL具有诱导肝癌细胞凋亡的效应。端粒酶的活性检测显示，TRAIL能够有效抑制肝癌细胞系内端粒酶的活性以及端粒酶催化亚单位的表达。 结论： TRAIL是一个有效的抑癌分子，能够通过诱导细胞凋亡、抑制端粒酶活性等途径控制肿瘤细胞的生长和进一步杀伤肿瘤细胞。     

Medroxyprogesterone acetate inhibits proliferation of colon cancer cell lines by modulating cell cycle-related protein expression

OBJECTIVE: To investigate the effects of medroxyprogesterone acetate on colon cancer cells in vitro. DESIGN: HT29 and HCT116 human colon cancer cell lines were used in this study. Cell growth and WST-1 assays were performed to investigate the antiproliferative effect of medroxyprogesterone acetate. Cell cycle analysis was performed to investigate the effects of medroxyprogesterone acetate on cell cycle distribution. Western blot, immunoprecipitation, and a cyclin-dependent kinase assay were performed to investigate changes in the levels of cell cycle proteins. RESULTS: Medroxyprogesterone acetate inhibited proliferation of the cancer cells by inducing accumulation in the G0/G1 fraction. Medroxyprogesterone acetate decreased expression of cyclin E, increased expression of p21(WAF1/CIP1), and enhanced interaction of p21(WAF1/CIP1) with cyclin-dependent kinase 2, eventually inhibiting its activity. CONCLUSIONS: Medroxyprogesterone acetate exerts its antiproliferative effect by modulating cell cycle-related protein expression and cyclin-dependent kinase 2 activity. These results should help to elucidate the protective effect of medroxyprogesterone acetate on colon cancer risk.     

Inhibition of ovarian cancer proliferation and invasion by pachymic acid

To determine the effect of pachymic acid (PA) on proliferation, cell cycle, and invasion in human ovarian carcinoma cell lines HO-8910 and explore some possible mechanisms, HO-8910 cells was treated with different concentrations of PA (0.5, 1, 2 μM). CCK-8 assay, propidium iodide staining, was applied to measuring the growth inhibiting rates of HO-8910 cells. Cell cycle was measured by flow cytometry. In addition, the activity of PA against HO-8910 cells invasion was evaluated in transwell assay. Western blot detected the proteins expression of E-cadherin, β-catenin and COX-2 of different groups treated with PA in different concentrations (0.5, 1, 2 μM) for 48 h. Our results showed that PA could effectively inhibit the in vitro growth of HO-8910 cells in dose-dependent manners in 72 h, suppressed migration and invasion of HO-8910 cells in concentration-dependent manners at 24 h, caused the increased accumulation of G1 phase cells, and caused down-regulation of β-catenin and COX-2 and up-regulation of E-cadherin expression level. Taken together, it could conclude that PA might inhibit proliferation and invasion of ovarian carcinoma cell through decreasing β-catenin and COX-2 expression and increasing E-cadherin exprssion.     

非甾体类抗炎药对结肠癌细胞NAG-1 基因表达的诱导

研究非甾体类抗炎药(Non-steroidal anti-inflammatory drug,NSAID)对结肠癌细胞生长的影响及NSAID活化基因-1(NAG-1)的诱导作用。体外培养HT-29、SW480及LS174-T三种结肠癌细胞,分别加入不同浓度的aspirin、celecoxib及meloxicam作用于HT-29及SW480细胞,采用MTT法检测结肠癌细胞增殖;蛋白质印迹技术检测三种结肠癌细胞COX-2的表达;采用半定量RT-PCR技术分析NSAID对三种结肠癌细胞NAG-1基因表达的影响。aspirin、celecoxib及meloxicam均能有效抑制体外培养的HT-29、SW480结肠癌细胞生长,并具有良好的量-效关系。Western blot表明,HT-29细胞表达COX-2,而SW480细胞不表达COX-2。三种结肠癌细胞均表达NAG-1基因mRNA,其中LS174-T细胞NAG-1基础水平较低;NSAID能不同程度上调结肠癌细胞NAG-1基因表达。NSAID能有效抑制结肠癌细胞生长,这种作用可能部分通过诱导结肠癌细胞NAG-1基因表达实现,NAG-1基因表达不受肿瘤细胞是否表达COX-2的影响。